BILIRRUBINA
La bilirrubina IX es un pigmento biliar amarillo anaranjado que
proviene de la degradacin enzimtica de la protoporfirina IX,
mecanismo ejemplificado en la siguiente figura:
La estructura de la bilirrubina fue determinada en 1942 por
cristalografa de rayos X, dicha molcula tiene como propiedades: Ser
insoluble en agua. Ser soluble en una variedad de solventes
orgnicos. Podemos observarla como una estructura linear
tetrapirrlica.
Pero esta estructura no hace predecible la condicin de
liposolubilidad, ya que las dos molculas de cido propinico haran a
la molcula altamente polar y por lo tanto hidrosoluble. Los
estudios antes mencionados confirmaron la estructura asignada a la
bilirrubina, as como dos rasgos estructurales adicionales:
Conformacin trans para los dobles enlaces C4 - C5 y C15 - C16. Una
estructura envuelta hacia adentro por formacin de puentes de
hidrgeno que involucra a los carboxilos del cido propinico con los
nitrgenos del anillo pirrlico.
La molcula de bilirrubina en estado cristalino no es por lo
tanto un tetrapirrol lineal, toma la forma de una "teja lomada",
estando ese "lomo" a lo largo de la lnea de los C 8, 10 y 12, en
esta configuracin los anillos A y B estn en un plano y los C y D en
otro, siendo el ngulo de 98. La conformacin de la bilirrubina en
solucin acuosa a pH 7,4 no se conoce, pero la formacin de una
estructura con puentes de hidrgeno en dicho medio explicara algunas
de las propiedades nicas de la bilirrubina.
Cuando la bilirrubina se expone a la luz pasa a conformacin cis,
lo cual no permite las uniones internas de hidrgeno y se genera una
forma ms hidrosoluble y por lo tanto ms rpidamente
excretable.METODOLOGA
Los mtodos ms ampliamente utilizados son los basados en la diazo
reaccin de Ehrlich descripta en 1883; el cido sulfanlico diazotado
reacciona con la bilirrubina para producir dos azopirroles que son
rojo-prpura a pH neutro o azules a pH alto o bajo.
El mtodo de Jendrassik-Grf descripto en 1938 y luego modificado
por Doumas y colaboradores (1985) da resultados para la bilirrubina
srica que pueden ser comparados con el mtodo de Lauff, actual mtodo
de referencia, que utiliza HPLC; contra el cual es posible comparar
la exactitud de los ensayos de bilirrubina, de rutina, en los
laboratorios. Material de muestra: Uso de suero o plasma
heparinizado. Evitar la lipemia, obtener la muestra en ayunas. La
bilirrubina sufre foto-oxidacin por exposicin a la luz blanca o UV.
La sensibilidad a la luz es temperatura dependiente. Para lograr
ptima estabilidad se aconseja dejar las muestras en la oscuridad y
a temperatura ambiente.
