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Buacutesqueda de alternativas para el control de Fusarium graminearum en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum)
Mario Andreacutes Herrera Deacutefaz
Departamento de Fisiologiacutea Vegetal
Tutores Dra Mariacutea Isabel Trillas
Dr Guillem Segarra
3 de Septiembre del 2013
Maacutester en Agrobiologiacutea Ambiental
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Buacutesqueda de alternativas para el control de Fusarium graminearum en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum)
Departamento de Fisiologiacutea Vegetal
Mario Andreacutes Herrera Deacutefaz
Tutores
Dra Mariacutea Isabel Trillas Dr Guillem Segarra
3 de Septiembre del 2013
Maacutester en Agrobiologiacutea Ambiental
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AGRADECIMIENTOS
A mi padre Mario Herrera a mi madre Cumandaacute Deacutefaz y a mis hermanas Melissa y
Carina quienes me han ensantildeado grandes valores morales y han confiado en miacute en
todo momento
A la Dra Mariacutea Isabel Trillas quien ha sido parte fundamental en la realizacioacuten de este
trabajo y ante todo una gran guiacutea
Al Dr Guillem Segarra por su apoyo en el transcurso del proyecto y a la Dra Lluisa
Moysset por su constante colaboracioacuten desde el inicio del Maacutester
Al gobierno del Ecuador que mediante la Secretariacutea Nacional de Educacioacuten Superior
Ciencia Tecnologiacutea e Innovacioacuten me otorgoacute la beca con la cual pude realizar este
trabajo y a la Generalitat de Catalunya por el Proyecto AGEC (00041) Ajuts per
incentivar la recerca aplicada en materia de produccioacuten agroalimentaria (AGEC 2012)
del que este trabajo formoacute parte
A Agromoneros SA (Zaragoza) por facilitar las semillas utilizadas en este trabajo
Finalmente quisiera agradecer de manera muy especial a cada una de las personas
que han vivido conmigo la realizacioacuten de este trabajo a quienes agradezco desde lo
maacutes profundo de mi corazoacuten por haberme brindado todo el apoyo aacutenimo
comprensioacuten pero sobre todo su carintildeo y amistad
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Abstract
Durum wheat (Triticum durum) is the second most produced and marketed wheat species after
wheat (Triticum aestivum L) and as other cereals can be infected by a variety of fungal
pathogens including Fusarium graminearum Schwabe Chemical control has proved to be
efficient but because its use is increasingly conditioned by the different regulatory bodies it is
important to seek control alternatives such as use of suppressive compost and biological control
agents This study tuned up the necessary conditions to generate root rot caused by F
graminearum The medium Naumlhrstoffarmer Spezieller (SNA) was better than carnation leaf agar
(CLA) to reach high macroconidia concentration necessary to obtain plant disease Both liquid
and soil inoculum was effective to produce the disease Additionally we evaluated the behavior
of compost made from olive oil waste (alperujo) and the biocontrol agent Trichoderma
asperellum strain T34 in two varieties of durum wheat (Duroi and Regallo) The compost
showed no suppressive effect for the disease in the two varieties of wheat studied T
asperellum strain T34 was effective against the disease in the variety Duroi (lowest dose of
inoculum) and showed an intermediate effect on variety Regallo (same dose of inoculum) With
the obtained results it was determined that the most sensitive variety to the isolate of the
pathogen used was Regallo Further studies are needed to strength obtained data and also to
evaluate compost from other residues as well as different concentrations and approaches of
the biocontrol agent
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Iacutendice
Abstract helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 4
1 Introduccioacuten y Objetivos helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Materiales y Meacutetodoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
21 Material vegetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
22 Preparacioacuten del inoacuteculo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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23 Evaluacioacuten de compost como sustrato en el crecimiento de trigohelliphelliphellip
24 Puesta a punto del ensayo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearumhelliphelliphellip
26 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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3 Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato en el crecimiento de
trigohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del
patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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4 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
5 Bibliografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26
6 Anexoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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1 Introduccioacuten y Objetivos
El trigo duro (Triticum durum) es una planta monocotiledoacutenea de la familia Gramineae
y es la segunda especie de trigo maacutes producida y comercializada despueacutes del trigo
blando (Triticum aestivum L) (CFIA 2012) A nivel mundial el promedio de trigo duro
sembrado anualmente es aproximadamente 18 millones de hectaacutereas con una
produccioacuten promedio de 30 millones de toneladas meacutetricas al antildeo siendo la Unioacuten
Europea (principalmente Italia Espantildea y Grecia) el mayor productor de trigo duro con
una produccioacuten anual promedio de 8 millones de toneladas meacutetricas (IGC 2002) En
Espantildea se sembraron en la campantildea 2008-2009 maacutes de 528000 hectaacutereas de trigo
duro seguacuten el Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino con maacutes de 109
millones de kilogramos de semilla certificada de produccioacuten nacional correspondiente
a maacutes de 80 variedades diferentes (Ortega Molina 2009)
Las especies del geacutenero Fusarium son un grupo diverso de hongos que causan dantildeos
a cereales y otros cultivos mediante la pudricioacuten de semillas raiacuteces plaacutentulas tallos
basales y espigas y dentro de estas especies Fusarium graminearum Schwabe
(teleomorfo Gibberella zeae) es uno de los principales patoacutegenos de cereales a nivel
mundial ya que causa la fusariosis de la espiga y en cereales la pudricioacuten de la raiacutez
(Paulitz et al 2002 Wang et al 2006) F graminearum puede sobrevivir como
micelio ascosporas macroconidias y clamidosporas en el suelo y tiene un amplio
rango de hospederos dentro de las gramineaceas y aparentemente son los restos de
cultivos (principalmente trigo maiacutez y arroz) que quedan en el suelo la principal fuente
de inoacuteculo del patoacutegeno (Saharan et al 2004) Cuando este hongo patoacutegeno afecta
las semillas se produce una reduccioacuten en la germinacioacuten y las plaacutentulas son poco
vigorosas (Gilbert et al 1997) F graminearum es un componente del complejo de
patoacutegenos que causan la pudricioacuten de la raiacutez en cereales en suelos secos (dryland
root rot) esta enfermedad ocurre bajo el suelo y por lo tanto su evaluacioacuten anual es
complicada debido a diferencias en locacioacuten manejo y factores climaacuteticos (Bailey et
al 1989) Esta enfermedad ha sido descrita en la mayor parte de zonas donde se
cultiva cereales y se ha reportado peacuterdidas de entre 3 y 50 de la produccioacuten estas
peacuterdidas han sido documentadas y registradas en varias partes del mundo incluyendo
Europa Ameacuterica y zonas marginales de produccioacuten de cereales como el Oeste de
Asia Norte de Aacutefrica Australia y Canadaacute (Hekimhan et al 2004) Adicionalmente
cuando afecta a las espigas del trigo este hongo es capaz de producir micotoxinas
que ademaacutes de causar una reduccioacuten de la calidad de los granos que conllevan
grandes peacuterdidas econoacutemicas tambieacuten pueden producir intoxicacioacuten en humanos y
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animales por lo que el seguimiento y control de la enfermedad es de intereacutes para
productores y procesadores de cereales (Bhaskara Reddy et al 1999)
Generalmente el control quiacutemico de la enfermedad se hace con fungicidas algunos de
estos productos son nocivos para el medio ambiente como por ejemplo el bromuro de
metilo que ha demostrado ser eficiente en la reduccioacuten de varias especies de
Fusarium y de otros patoacutegenos en el suelo sin embargo su utilizacioacuten ha sido
prohibida en varios paiacuteses debido al dantildeo que este compuesto causaba a la capa de
ozono (Ma et al 2001) En los uacuteltimos antildeos se ha utilizado el metil tiofanato este
compuesto es un fungicida sisteacutemico que actuacutea sobre un amplio rango de
enfermedades fuacutengicas incluyendo la pudricioacuten de la raiacutez causada por Fusarium
(Briggs et al 2002) Este fungicida estaacute autorizado por la Unioacuten Europea y al igual que
los demaacutes pesticidas autorizados su uso estaacute condicionado por la directiva
91414EEC (European Commission 2005) Esta directiva establece que los Estados
Miembros deben minimizar el uso de pesticidas y desarrollar planes de accioacuten nacional
dirigidos a la implementacioacuten del Manejo Integrado de Plagas (MIP) con la finalidad de
incluir objetivos medidas y calendarios para reducir los peligros y riesgos producidos
por los pesticidas asiacute como la dependencia hacia estos tambieacuten especifica que los
Estados Miembro tienen como fecha liacutemite Enero del 2014 implementar los principios
del MIP (European Commission 2009) Utilizar alternativas al control quiacutemico como el
uso de composts supresivos yo agentes de control bioloacutegico ha sido un componente
esencial en el desarrollo del MIP ya que si se comprueba su efectividad estas
alternativas pueden ser implementadas en el manejo de plagas y enfermedades (Orr
2009)
El control bioloacutegico supone el uso de agentes microbioloacutegicos (por ejemplo
microorganismos del suelo) o substancias sin modificar obtenidas del suelo para
controlar patoacutegenos de plantas y por ser respetuoso con el medio ambiente la salud y
rentable econoacutemicamente estaacute dentro de los componentes de los programas de
manejo de enfermedades (Henkes et al 2011 Mao et al 1997) Especies fuacutengicas
pertenecientes al geacutenero Trichoderma han demostrado ser potenciales agentes de
control bioloacutegico ante varias enfermedades en plantas (Howell 2003) La efectividad
en el control de las enfermedades se da por varias viacuteas como competencia por
nutrientes con otros microorganismos del suelo produccioacuten de antibioacuteticos y enzimas
de lisis que parasitan o inhiben el crecimiento de otros hongos y maacutes recientemente
se ha demostrado que algunas especies de Trichoderma colonizan las raiacuteces de las
plantas mejoran el crecimiento y la captacioacuten de nutrientes y sisteacutemicamente elevan la
resistencia a patoacutegenos en varias especies de plantas (Trillas y Segarra 2009)
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Adicionalmente en el contexto de control bioloacutegico en los uacuteltimos antildeos se ha
incrementado el intereacutes por conocer el papel que cumplen los compost en el control de
patoacutegenos (Pharand et al 2002) Varios estudios han reportado el efecto supresor
que tienen los composts en el control de varios patoacutegenos de plantas incluyendo
especies de Fusarium este efecto estaacute relacionado con las caracteriacutesticas bioloacutegicas y
fiacutesico-quiacutemicas que tienen los composts (Huang et al 2012)
El objetivo general de este estudio fue evaluar alternativas al control quiacutemico de la
pudricioacuten de la raiacutez producida por Fusarium graminearum en plaacutentulas de dos
variedades de trigo duro Los objetivos especiacuteficos fueron i) la puesta a punto de un
ensayo en fitotroacuten (caacutemara de cultivo en condiciones controladas) ii) evaluar la
supresividad natural de un compost formulado a base de alperujo iii) evaluar el papel
del agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum cepa T34
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
2
Buacutesqueda de alternativas para el control de Fusarium graminearum en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum)
Departamento de Fisiologiacutea Vegetal
Mario Andreacutes Herrera Deacutefaz
Tutores
Dra Mariacutea Isabel Trillas Dr Guillem Segarra
3 de Septiembre del 2013
Maacutester en Agrobiologiacutea Ambiental
3
AGRADECIMIENTOS
A mi padre Mario Herrera a mi madre Cumandaacute Deacutefaz y a mis hermanas Melissa y
Carina quienes me han ensantildeado grandes valores morales y han confiado en miacute en
todo momento
A la Dra Mariacutea Isabel Trillas quien ha sido parte fundamental en la realizacioacuten de este
trabajo y ante todo una gran guiacutea
Al Dr Guillem Segarra por su apoyo en el transcurso del proyecto y a la Dra Lluisa
Moysset por su constante colaboracioacuten desde el inicio del Maacutester
Al gobierno del Ecuador que mediante la Secretariacutea Nacional de Educacioacuten Superior
Ciencia Tecnologiacutea e Innovacioacuten me otorgoacute la beca con la cual pude realizar este
trabajo y a la Generalitat de Catalunya por el Proyecto AGEC (00041) Ajuts per
incentivar la recerca aplicada en materia de produccioacuten agroalimentaria (AGEC 2012)
del que este trabajo formoacute parte
A Agromoneros SA (Zaragoza) por facilitar las semillas utilizadas en este trabajo
Finalmente quisiera agradecer de manera muy especial a cada una de las personas
que han vivido conmigo la realizacioacuten de este trabajo a quienes agradezco desde lo
maacutes profundo de mi corazoacuten por haberme brindado todo el apoyo aacutenimo
comprensioacuten pero sobre todo su carintildeo y amistad
4
Abstract
Durum wheat (Triticum durum) is the second most produced and marketed wheat species after
wheat (Triticum aestivum L) and as other cereals can be infected by a variety of fungal
pathogens including Fusarium graminearum Schwabe Chemical control has proved to be
efficient but because its use is increasingly conditioned by the different regulatory bodies it is
important to seek control alternatives such as use of suppressive compost and biological control
agents This study tuned up the necessary conditions to generate root rot caused by F
graminearum The medium Naumlhrstoffarmer Spezieller (SNA) was better than carnation leaf agar
(CLA) to reach high macroconidia concentration necessary to obtain plant disease Both liquid
and soil inoculum was effective to produce the disease Additionally we evaluated the behavior
of compost made from olive oil waste (alperujo) and the biocontrol agent Trichoderma
asperellum strain T34 in two varieties of durum wheat (Duroi and Regallo) The compost
showed no suppressive effect for the disease in the two varieties of wheat studied T
asperellum strain T34 was effective against the disease in the variety Duroi (lowest dose of
inoculum) and showed an intermediate effect on variety Regallo (same dose of inoculum) With
the obtained results it was determined that the most sensitive variety to the isolate of the
pathogen used was Regallo Further studies are needed to strength obtained data and also to
evaluate compost from other residues as well as different concentrations and approaches of
the biocontrol agent
5
Iacutendice
Abstract helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 4
1 Introduccioacuten y Objetivos helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Materiales y Meacutetodoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
21 Material vegetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
22 Preparacioacuten del inoacuteculo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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23 Evaluacioacuten de compost como sustrato en el crecimiento de trigohelliphelliphellip
24 Puesta a punto del ensayo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearumhelliphelliphellip
26 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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3 Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato en el crecimiento de
trigohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del
patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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4 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
5 Bibliografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26
6 Anexoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
30
6
1 Introduccioacuten y Objetivos
El trigo duro (Triticum durum) es una planta monocotiledoacutenea de la familia Gramineae
y es la segunda especie de trigo maacutes producida y comercializada despueacutes del trigo
blando (Triticum aestivum L) (CFIA 2012) A nivel mundial el promedio de trigo duro
sembrado anualmente es aproximadamente 18 millones de hectaacutereas con una
produccioacuten promedio de 30 millones de toneladas meacutetricas al antildeo siendo la Unioacuten
Europea (principalmente Italia Espantildea y Grecia) el mayor productor de trigo duro con
una produccioacuten anual promedio de 8 millones de toneladas meacutetricas (IGC 2002) En
Espantildea se sembraron en la campantildea 2008-2009 maacutes de 528000 hectaacutereas de trigo
duro seguacuten el Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino con maacutes de 109
millones de kilogramos de semilla certificada de produccioacuten nacional correspondiente
a maacutes de 80 variedades diferentes (Ortega Molina 2009)
Las especies del geacutenero Fusarium son un grupo diverso de hongos que causan dantildeos
a cereales y otros cultivos mediante la pudricioacuten de semillas raiacuteces plaacutentulas tallos
basales y espigas y dentro de estas especies Fusarium graminearum Schwabe
(teleomorfo Gibberella zeae) es uno de los principales patoacutegenos de cereales a nivel
mundial ya que causa la fusariosis de la espiga y en cereales la pudricioacuten de la raiacutez
(Paulitz et al 2002 Wang et al 2006) F graminearum puede sobrevivir como
micelio ascosporas macroconidias y clamidosporas en el suelo y tiene un amplio
rango de hospederos dentro de las gramineaceas y aparentemente son los restos de
cultivos (principalmente trigo maiacutez y arroz) que quedan en el suelo la principal fuente
de inoacuteculo del patoacutegeno (Saharan et al 2004) Cuando este hongo patoacutegeno afecta
las semillas se produce una reduccioacuten en la germinacioacuten y las plaacutentulas son poco
vigorosas (Gilbert et al 1997) F graminearum es un componente del complejo de
patoacutegenos que causan la pudricioacuten de la raiacutez en cereales en suelos secos (dryland
root rot) esta enfermedad ocurre bajo el suelo y por lo tanto su evaluacioacuten anual es
complicada debido a diferencias en locacioacuten manejo y factores climaacuteticos (Bailey et
al 1989) Esta enfermedad ha sido descrita en la mayor parte de zonas donde se
cultiva cereales y se ha reportado peacuterdidas de entre 3 y 50 de la produccioacuten estas
peacuterdidas han sido documentadas y registradas en varias partes del mundo incluyendo
Europa Ameacuterica y zonas marginales de produccioacuten de cereales como el Oeste de
Asia Norte de Aacutefrica Australia y Canadaacute (Hekimhan et al 2004) Adicionalmente
cuando afecta a las espigas del trigo este hongo es capaz de producir micotoxinas
que ademaacutes de causar una reduccioacuten de la calidad de los granos que conllevan
grandes peacuterdidas econoacutemicas tambieacuten pueden producir intoxicacioacuten en humanos y
7
animales por lo que el seguimiento y control de la enfermedad es de intereacutes para
productores y procesadores de cereales (Bhaskara Reddy et al 1999)
Generalmente el control quiacutemico de la enfermedad se hace con fungicidas algunos de
estos productos son nocivos para el medio ambiente como por ejemplo el bromuro de
metilo que ha demostrado ser eficiente en la reduccioacuten de varias especies de
Fusarium y de otros patoacutegenos en el suelo sin embargo su utilizacioacuten ha sido
prohibida en varios paiacuteses debido al dantildeo que este compuesto causaba a la capa de
ozono (Ma et al 2001) En los uacuteltimos antildeos se ha utilizado el metil tiofanato este
compuesto es un fungicida sisteacutemico que actuacutea sobre un amplio rango de
enfermedades fuacutengicas incluyendo la pudricioacuten de la raiacutez causada por Fusarium
(Briggs et al 2002) Este fungicida estaacute autorizado por la Unioacuten Europea y al igual que
los demaacutes pesticidas autorizados su uso estaacute condicionado por la directiva
91414EEC (European Commission 2005) Esta directiva establece que los Estados
Miembros deben minimizar el uso de pesticidas y desarrollar planes de accioacuten nacional
dirigidos a la implementacioacuten del Manejo Integrado de Plagas (MIP) con la finalidad de
incluir objetivos medidas y calendarios para reducir los peligros y riesgos producidos
por los pesticidas asiacute como la dependencia hacia estos tambieacuten especifica que los
Estados Miembro tienen como fecha liacutemite Enero del 2014 implementar los principios
del MIP (European Commission 2009) Utilizar alternativas al control quiacutemico como el
uso de composts supresivos yo agentes de control bioloacutegico ha sido un componente
esencial en el desarrollo del MIP ya que si se comprueba su efectividad estas
alternativas pueden ser implementadas en el manejo de plagas y enfermedades (Orr
2009)
El control bioloacutegico supone el uso de agentes microbioloacutegicos (por ejemplo
microorganismos del suelo) o substancias sin modificar obtenidas del suelo para
controlar patoacutegenos de plantas y por ser respetuoso con el medio ambiente la salud y
rentable econoacutemicamente estaacute dentro de los componentes de los programas de
manejo de enfermedades (Henkes et al 2011 Mao et al 1997) Especies fuacutengicas
pertenecientes al geacutenero Trichoderma han demostrado ser potenciales agentes de
control bioloacutegico ante varias enfermedades en plantas (Howell 2003) La efectividad
en el control de las enfermedades se da por varias viacuteas como competencia por
nutrientes con otros microorganismos del suelo produccioacuten de antibioacuteticos y enzimas
de lisis que parasitan o inhiben el crecimiento de otros hongos y maacutes recientemente
se ha demostrado que algunas especies de Trichoderma colonizan las raiacuteces de las
plantas mejoran el crecimiento y la captacioacuten de nutrientes y sisteacutemicamente elevan la
resistencia a patoacutegenos en varias especies de plantas (Trillas y Segarra 2009)
8
Adicionalmente en el contexto de control bioloacutegico en los uacuteltimos antildeos se ha
incrementado el intereacutes por conocer el papel que cumplen los compost en el control de
patoacutegenos (Pharand et al 2002) Varios estudios han reportado el efecto supresor
que tienen los composts en el control de varios patoacutegenos de plantas incluyendo
especies de Fusarium este efecto estaacute relacionado con las caracteriacutesticas bioloacutegicas y
fiacutesico-quiacutemicas que tienen los composts (Huang et al 2012)
El objetivo general de este estudio fue evaluar alternativas al control quiacutemico de la
pudricioacuten de la raiacutez producida por Fusarium graminearum en plaacutentulas de dos
variedades de trigo duro Los objetivos especiacuteficos fueron i) la puesta a punto de un
ensayo en fitotroacuten (caacutemara de cultivo en condiciones controladas) ii) evaluar la
supresividad natural de un compost formulado a base de alperujo iii) evaluar el papel
del agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum cepa T34
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
3
AGRADECIMIENTOS
A mi padre Mario Herrera a mi madre Cumandaacute Deacutefaz y a mis hermanas Melissa y
Carina quienes me han ensantildeado grandes valores morales y han confiado en miacute en
todo momento
A la Dra Mariacutea Isabel Trillas quien ha sido parte fundamental en la realizacioacuten de este
trabajo y ante todo una gran guiacutea
Al Dr Guillem Segarra por su apoyo en el transcurso del proyecto y a la Dra Lluisa
Moysset por su constante colaboracioacuten desde el inicio del Maacutester
Al gobierno del Ecuador que mediante la Secretariacutea Nacional de Educacioacuten Superior
Ciencia Tecnologiacutea e Innovacioacuten me otorgoacute la beca con la cual pude realizar este
trabajo y a la Generalitat de Catalunya por el Proyecto AGEC (00041) Ajuts per
incentivar la recerca aplicada en materia de produccioacuten agroalimentaria (AGEC 2012)
del que este trabajo formoacute parte
A Agromoneros SA (Zaragoza) por facilitar las semillas utilizadas en este trabajo
Finalmente quisiera agradecer de manera muy especial a cada una de las personas
que han vivido conmigo la realizacioacuten de este trabajo a quienes agradezco desde lo
maacutes profundo de mi corazoacuten por haberme brindado todo el apoyo aacutenimo
comprensioacuten pero sobre todo su carintildeo y amistad
4
Abstract
Durum wheat (Triticum durum) is the second most produced and marketed wheat species after
wheat (Triticum aestivum L) and as other cereals can be infected by a variety of fungal
pathogens including Fusarium graminearum Schwabe Chemical control has proved to be
efficient but because its use is increasingly conditioned by the different regulatory bodies it is
important to seek control alternatives such as use of suppressive compost and biological control
agents This study tuned up the necessary conditions to generate root rot caused by F
graminearum The medium Naumlhrstoffarmer Spezieller (SNA) was better than carnation leaf agar
(CLA) to reach high macroconidia concentration necessary to obtain plant disease Both liquid
and soil inoculum was effective to produce the disease Additionally we evaluated the behavior
of compost made from olive oil waste (alperujo) and the biocontrol agent Trichoderma
asperellum strain T34 in two varieties of durum wheat (Duroi and Regallo) The compost
showed no suppressive effect for the disease in the two varieties of wheat studied T
asperellum strain T34 was effective against the disease in the variety Duroi (lowest dose of
inoculum) and showed an intermediate effect on variety Regallo (same dose of inoculum) With
the obtained results it was determined that the most sensitive variety to the isolate of the
pathogen used was Regallo Further studies are needed to strength obtained data and also to
evaluate compost from other residues as well as different concentrations and approaches of
the biocontrol agent
5
Iacutendice
Abstract helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 4
1 Introduccioacuten y Objetivos helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Materiales y Meacutetodoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
21 Material vegetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
22 Preparacioacuten del inoacuteculo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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23 Evaluacioacuten de compost como sustrato en el crecimiento de trigohelliphelliphellip
24 Puesta a punto del ensayo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearumhelliphelliphellip
26 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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3 Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
13
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32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato en el crecimiento de
trigohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del
patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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4 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
5 Bibliografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26
6 Anexoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
30
6
1 Introduccioacuten y Objetivos
El trigo duro (Triticum durum) es una planta monocotiledoacutenea de la familia Gramineae
y es la segunda especie de trigo maacutes producida y comercializada despueacutes del trigo
blando (Triticum aestivum L) (CFIA 2012) A nivel mundial el promedio de trigo duro
sembrado anualmente es aproximadamente 18 millones de hectaacutereas con una
produccioacuten promedio de 30 millones de toneladas meacutetricas al antildeo siendo la Unioacuten
Europea (principalmente Italia Espantildea y Grecia) el mayor productor de trigo duro con
una produccioacuten anual promedio de 8 millones de toneladas meacutetricas (IGC 2002) En
Espantildea se sembraron en la campantildea 2008-2009 maacutes de 528000 hectaacutereas de trigo
duro seguacuten el Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino con maacutes de 109
millones de kilogramos de semilla certificada de produccioacuten nacional correspondiente
a maacutes de 80 variedades diferentes (Ortega Molina 2009)
Las especies del geacutenero Fusarium son un grupo diverso de hongos que causan dantildeos
a cereales y otros cultivos mediante la pudricioacuten de semillas raiacuteces plaacutentulas tallos
basales y espigas y dentro de estas especies Fusarium graminearum Schwabe
(teleomorfo Gibberella zeae) es uno de los principales patoacutegenos de cereales a nivel
mundial ya que causa la fusariosis de la espiga y en cereales la pudricioacuten de la raiacutez
(Paulitz et al 2002 Wang et al 2006) F graminearum puede sobrevivir como
micelio ascosporas macroconidias y clamidosporas en el suelo y tiene un amplio
rango de hospederos dentro de las gramineaceas y aparentemente son los restos de
cultivos (principalmente trigo maiacutez y arroz) que quedan en el suelo la principal fuente
de inoacuteculo del patoacutegeno (Saharan et al 2004) Cuando este hongo patoacutegeno afecta
las semillas se produce una reduccioacuten en la germinacioacuten y las plaacutentulas son poco
vigorosas (Gilbert et al 1997) F graminearum es un componente del complejo de
patoacutegenos que causan la pudricioacuten de la raiacutez en cereales en suelos secos (dryland
root rot) esta enfermedad ocurre bajo el suelo y por lo tanto su evaluacioacuten anual es
complicada debido a diferencias en locacioacuten manejo y factores climaacuteticos (Bailey et
al 1989) Esta enfermedad ha sido descrita en la mayor parte de zonas donde se
cultiva cereales y se ha reportado peacuterdidas de entre 3 y 50 de la produccioacuten estas
peacuterdidas han sido documentadas y registradas en varias partes del mundo incluyendo
Europa Ameacuterica y zonas marginales de produccioacuten de cereales como el Oeste de
Asia Norte de Aacutefrica Australia y Canadaacute (Hekimhan et al 2004) Adicionalmente
cuando afecta a las espigas del trigo este hongo es capaz de producir micotoxinas
que ademaacutes de causar una reduccioacuten de la calidad de los granos que conllevan
grandes peacuterdidas econoacutemicas tambieacuten pueden producir intoxicacioacuten en humanos y
7
animales por lo que el seguimiento y control de la enfermedad es de intereacutes para
productores y procesadores de cereales (Bhaskara Reddy et al 1999)
Generalmente el control quiacutemico de la enfermedad se hace con fungicidas algunos de
estos productos son nocivos para el medio ambiente como por ejemplo el bromuro de
metilo que ha demostrado ser eficiente en la reduccioacuten de varias especies de
Fusarium y de otros patoacutegenos en el suelo sin embargo su utilizacioacuten ha sido
prohibida en varios paiacuteses debido al dantildeo que este compuesto causaba a la capa de
ozono (Ma et al 2001) En los uacuteltimos antildeos se ha utilizado el metil tiofanato este
compuesto es un fungicida sisteacutemico que actuacutea sobre un amplio rango de
enfermedades fuacutengicas incluyendo la pudricioacuten de la raiacutez causada por Fusarium
(Briggs et al 2002) Este fungicida estaacute autorizado por la Unioacuten Europea y al igual que
los demaacutes pesticidas autorizados su uso estaacute condicionado por la directiva
91414EEC (European Commission 2005) Esta directiva establece que los Estados
Miembros deben minimizar el uso de pesticidas y desarrollar planes de accioacuten nacional
dirigidos a la implementacioacuten del Manejo Integrado de Plagas (MIP) con la finalidad de
incluir objetivos medidas y calendarios para reducir los peligros y riesgos producidos
por los pesticidas asiacute como la dependencia hacia estos tambieacuten especifica que los
Estados Miembro tienen como fecha liacutemite Enero del 2014 implementar los principios
del MIP (European Commission 2009) Utilizar alternativas al control quiacutemico como el
uso de composts supresivos yo agentes de control bioloacutegico ha sido un componente
esencial en el desarrollo del MIP ya que si se comprueba su efectividad estas
alternativas pueden ser implementadas en el manejo de plagas y enfermedades (Orr
2009)
El control bioloacutegico supone el uso de agentes microbioloacutegicos (por ejemplo
microorganismos del suelo) o substancias sin modificar obtenidas del suelo para
controlar patoacutegenos de plantas y por ser respetuoso con el medio ambiente la salud y
rentable econoacutemicamente estaacute dentro de los componentes de los programas de
manejo de enfermedades (Henkes et al 2011 Mao et al 1997) Especies fuacutengicas
pertenecientes al geacutenero Trichoderma han demostrado ser potenciales agentes de
control bioloacutegico ante varias enfermedades en plantas (Howell 2003) La efectividad
en el control de las enfermedades se da por varias viacuteas como competencia por
nutrientes con otros microorganismos del suelo produccioacuten de antibioacuteticos y enzimas
de lisis que parasitan o inhiben el crecimiento de otros hongos y maacutes recientemente
se ha demostrado que algunas especies de Trichoderma colonizan las raiacuteces de las
plantas mejoran el crecimiento y la captacioacuten de nutrientes y sisteacutemicamente elevan la
resistencia a patoacutegenos en varias especies de plantas (Trillas y Segarra 2009)
8
Adicionalmente en el contexto de control bioloacutegico en los uacuteltimos antildeos se ha
incrementado el intereacutes por conocer el papel que cumplen los compost en el control de
patoacutegenos (Pharand et al 2002) Varios estudios han reportado el efecto supresor
que tienen los composts en el control de varios patoacutegenos de plantas incluyendo
especies de Fusarium este efecto estaacute relacionado con las caracteriacutesticas bioloacutegicas y
fiacutesico-quiacutemicas que tienen los composts (Huang et al 2012)
El objetivo general de este estudio fue evaluar alternativas al control quiacutemico de la
pudricioacuten de la raiacutez producida por Fusarium graminearum en plaacutentulas de dos
variedades de trigo duro Los objetivos especiacuteficos fueron i) la puesta a punto de un
ensayo en fitotroacuten (caacutemara de cultivo en condiciones controladas) ii) evaluar la
supresividad natural de un compost formulado a base de alperujo iii) evaluar el papel
del agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum cepa T34
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
4
Abstract
Durum wheat (Triticum durum) is the second most produced and marketed wheat species after
wheat (Triticum aestivum L) and as other cereals can be infected by a variety of fungal
pathogens including Fusarium graminearum Schwabe Chemical control has proved to be
efficient but because its use is increasingly conditioned by the different regulatory bodies it is
important to seek control alternatives such as use of suppressive compost and biological control
agents This study tuned up the necessary conditions to generate root rot caused by F
graminearum The medium Naumlhrstoffarmer Spezieller (SNA) was better than carnation leaf agar
(CLA) to reach high macroconidia concentration necessary to obtain plant disease Both liquid
and soil inoculum was effective to produce the disease Additionally we evaluated the behavior
of compost made from olive oil waste (alperujo) and the biocontrol agent Trichoderma
asperellum strain T34 in two varieties of durum wheat (Duroi and Regallo) The compost
showed no suppressive effect for the disease in the two varieties of wheat studied T
asperellum strain T34 was effective against the disease in the variety Duroi (lowest dose of
inoculum) and showed an intermediate effect on variety Regallo (same dose of inoculum) With
the obtained results it was determined that the most sensitive variety to the isolate of the
pathogen used was Regallo Further studies are needed to strength obtained data and also to
evaluate compost from other residues as well as different concentrations and approaches of
the biocontrol agent
5
Iacutendice
Abstract helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 4
1 Introduccioacuten y Objetivos helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Materiales y Meacutetodoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
21 Material vegetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
22 Preparacioacuten del inoacuteculo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
6
9
9
9
23 Evaluacioacuten de compost como sustrato en el crecimiento de trigohelliphelliphellip
24 Puesta a punto del ensayo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
9
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25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearumhelliphelliphellip
26 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
11
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3 Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
13
13
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato en el crecimiento de
trigohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del
patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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4 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
5 Bibliografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26
6 Anexoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
30
6
1 Introduccioacuten y Objetivos
El trigo duro (Triticum durum) es una planta monocotiledoacutenea de la familia Gramineae
y es la segunda especie de trigo maacutes producida y comercializada despueacutes del trigo
blando (Triticum aestivum L) (CFIA 2012) A nivel mundial el promedio de trigo duro
sembrado anualmente es aproximadamente 18 millones de hectaacutereas con una
produccioacuten promedio de 30 millones de toneladas meacutetricas al antildeo siendo la Unioacuten
Europea (principalmente Italia Espantildea y Grecia) el mayor productor de trigo duro con
una produccioacuten anual promedio de 8 millones de toneladas meacutetricas (IGC 2002) En
Espantildea se sembraron en la campantildea 2008-2009 maacutes de 528000 hectaacutereas de trigo
duro seguacuten el Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino con maacutes de 109
millones de kilogramos de semilla certificada de produccioacuten nacional correspondiente
a maacutes de 80 variedades diferentes (Ortega Molina 2009)
Las especies del geacutenero Fusarium son un grupo diverso de hongos que causan dantildeos
a cereales y otros cultivos mediante la pudricioacuten de semillas raiacuteces plaacutentulas tallos
basales y espigas y dentro de estas especies Fusarium graminearum Schwabe
(teleomorfo Gibberella zeae) es uno de los principales patoacutegenos de cereales a nivel
mundial ya que causa la fusariosis de la espiga y en cereales la pudricioacuten de la raiacutez
(Paulitz et al 2002 Wang et al 2006) F graminearum puede sobrevivir como
micelio ascosporas macroconidias y clamidosporas en el suelo y tiene un amplio
rango de hospederos dentro de las gramineaceas y aparentemente son los restos de
cultivos (principalmente trigo maiacutez y arroz) que quedan en el suelo la principal fuente
de inoacuteculo del patoacutegeno (Saharan et al 2004) Cuando este hongo patoacutegeno afecta
las semillas se produce una reduccioacuten en la germinacioacuten y las plaacutentulas son poco
vigorosas (Gilbert et al 1997) F graminearum es un componente del complejo de
patoacutegenos que causan la pudricioacuten de la raiacutez en cereales en suelos secos (dryland
root rot) esta enfermedad ocurre bajo el suelo y por lo tanto su evaluacioacuten anual es
complicada debido a diferencias en locacioacuten manejo y factores climaacuteticos (Bailey et
al 1989) Esta enfermedad ha sido descrita en la mayor parte de zonas donde se
cultiva cereales y se ha reportado peacuterdidas de entre 3 y 50 de la produccioacuten estas
peacuterdidas han sido documentadas y registradas en varias partes del mundo incluyendo
Europa Ameacuterica y zonas marginales de produccioacuten de cereales como el Oeste de
Asia Norte de Aacutefrica Australia y Canadaacute (Hekimhan et al 2004) Adicionalmente
cuando afecta a las espigas del trigo este hongo es capaz de producir micotoxinas
que ademaacutes de causar una reduccioacuten de la calidad de los granos que conllevan
grandes peacuterdidas econoacutemicas tambieacuten pueden producir intoxicacioacuten en humanos y
7
animales por lo que el seguimiento y control de la enfermedad es de intereacutes para
productores y procesadores de cereales (Bhaskara Reddy et al 1999)
Generalmente el control quiacutemico de la enfermedad se hace con fungicidas algunos de
estos productos son nocivos para el medio ambiente como por ejemplo el bromuro de
metilo que ha demostrado ser eficiente en la reduccioacuten de varias especies de
Fusarium y de otros patoacutegenos en el suelo sin embargo su utilizacioacuten ha sido
prohibida en varios paiacuteses debido al dantildeo que este compuesto causaba a la capa de
ozono (Ma et al 2001) En los uacuteltimos antildeos se ha utilizado el metil tiofanato este
compuesto es un fungicida sisteacutemico que actuacutea sobre un amplio rango de
enfermedades fuacutengicas incluyendo la pudricioacuten de la raiacutez causada por Fusarium
(Briggs et al 2002) Este fungicida estaacute autorizado por la Unioacuten Europea y al igual que
los demaacutes pesticidas autorizados su uso estaacute condicionado por la directiva
91414EEC (European Commission 2005) Esta directiva establece que los Estados
Miembros deben minimizar el uso de pesticidas y desarrollar planes de accioacuten nacional
dirigidos a la implementacioacuten del Manejo Integrado de Plagas (MIP) con la finalidad de
incluir objetivos medidas y calendarios para reducir los peligros y riesgos producidos
por los pesticidas asiacute como la dependencia hacia estos tambieacuten especifica que los
Estados Miembro tienen como fecha liacutemite Enero del 2014 implementar los principios
del MIP (European Commission 2009) Utilizar alternativas al control quiacutemico como el
uso de composts supresivos yo agentes de control bioloacutegico ha sido un componente
esencial en el desarrollo del MIP ya que si se comprueba su efectividad estas
alternativas pueden ser implementadas en el manejo de plagas y enfermedades (Orr
2009)
El control bioloacutegico supone el uso de agentes microbioloacutegicos (por ejemplo
microorganismos del suelo) o substancias sin modificar obtenidas del suelo para
controlar patoacutegenos de plantas y por ser respetuoso con el medio ambiente la salud y
rentable econoacutemicamente estaacute dentro de los componentes de los programas de
manejo de enfermedades (Henkes et al 2011 Mao et al 1997) Especies fuacutengicas
pertenecientes al geacutenero Trichoderma han demostrado ser potenciales agentes de
control bioloacutegico ante varias enfermedades en plantas (Howell 2003) La efectividad
en el control de las enfermedades se da por varias viacuteas como competencia por
nutrientes con otros microorganismos del suelo produccioacuten de antibioacuteticos y enzimas
de lisis que parasitan o inhiben el crecimiento de otros hongos y maacutes recientemente
se ha demostrado que algunas especies de Trichoderma colonizan las raiacuteces de las
plantas mejoran el crecimiento y la captacioacuten de nutrientes y sisteacutemicamente elevan la
resistencia a patoacutegenos en varias especies de plantas (Trillas y Segarra 2009)
8
Adicionalmente en el contexto de control bioloacutegico en los uacuteltimos antildeos se ha
incrementado el intereacutes por conocer el papel que cumplen los compost en el control de
patoacutegenos (Pharand et al 2002) Varios estudios han reportado el efecto supresor
que tienen los composts en el control de varios patoacutegenos de plantas incluyendo
especies de Fusarium este efecto estaacute relacionado con las caracteriacutesticas bioloacutegicas y
fiacutesico-quiacutemicas que tienen los composts (Huang et al 2012)
El objetivo general de este estudio fue evaluar alternativas al control quiacutemico de la
pudricioacuten de la raiacutez producida por Fusarium graminearum en plaacutentulas de dos
variedades de trigo duro Los objetivos especiacuteficos fueron i) la puesta a punto de un
ensayo en fitotroacuten (caacutemara de cultivo en condiciones controladas) ii) evaluar la
supresividad natural de un compost formulado a base de alperujo iii) evaluar el papel
del agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum cepa T34
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
5
Iacutendice
Abstract helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 4
1 Introduccioacuten y Objetivos helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
2 Materiales y Meacutetodoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
21 Material vegetalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
22 Preparacioacuten del inoacuteculo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
6
9
9
9
23 Evaluacioacuten de compost como sustrato en el crecimiento de trigohelliphelliphellip
24 Puesta a punto del ensayo de F graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
9
10
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearumhelliphelliphellip
26 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
11
12
3 Resultados y discusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
13
13
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato en el crecimiento de
trigohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del
patoacutegenohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearumhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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15
19
4 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
5 Bibliografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26
6 Anexoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
30
6
1 Introduccioacuten y Objetivos
El trigo duro (Triticum durum) es una planta monocotiledoacutenea de la familia Gramineae
y es la segunda especie de trigo maacutes producida y comercializada despueacutes del trigo
blando (Triticum aestivum L) (CFIA 2012) A nivel mundial el promedio de trigo duro
sembrado anualmente es aproximadamente 18 millones de hectaacutereas con una
produccioacuten promedio de 30 millones de toneladas meacutetricas al antildeo siendo la Unioacuten
Europea (principalmente Italia Espantildea y Grecia) el mayor productor de trigo duro con
una produccioacuten anual promedio de 8 millones de toneladas meacutetricas (IGC 2002) En
Espantildea se sembraron en la campantildea 2008-2009 maacutes de 528000 hectaacutereas de trigo
duro seguacuten el Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino con maacutes de 109
millones de kilogramos de semilla certificada de produccioacuten nacional correspondiente
a maacutes de 80 variedades diferentes (Ortega Molina 2009)
Las especies del geacutenero Fusarium son un grupo diverso de hongos que causan dantildeos
a cereales y otros cultivos mediante la pudricioacuten de semillas raiacuteces plaacutentulas tallos
basales y espigas y dentro de estas especies Fusarium graminearum Schwabe
(teleomorfo Gibberella zeae) es uno de los principales patoacutegenos de cereales a nivel
mundial ya que causa la fusariosis de la espiga y en cereales la pudricioacuten de la raiacutez
(Paulitz et al 2002 Wang et al 2006) F graminearum puede sobrevivir como
micelio ascosporas macroconidias y clamidosporas en el suelo y tiene un amplio
rango de hospederos dentro de las gramineaceas y aparentemente son los restos de
cultivos (principalmente trigo maiacutez y arroz) que quedan en el suelo la principal fuente
de inoacuteculo del patoacutegeno (Saharan et al 2004) Cuando este hongo patoacutegeno afecta
las semillas se produce una reduccioacuten en la germinacioacuten y las plaacutentulas son poco
vigorosas (Gilbert et al 1997) F graminearum es un componente del complejo de
patoacutegenos que causan la pudricioacuten de la raiacutez en cereales en suelos secos (dryland
root rot) esta enfermedad ocurre bajo el suelo y por lo tanto su evaluacioacuten anual es
complicada debido a diferencias en locacioacuten manejo y factores climaacuteticos (Bailey et
al 1989) Esta enfermedad ha sido descrita en la mayor parte de zonas donde se
cultiva cereales y se ha reportado peacuterdidas de entre 3 y 50 de la produccioacuten estas
peacuterdidas han sido documentadas y registradas en varias partes del mundo incluyendo
Europa Ameacuterica y zonas marginales de produccioacuten de cereales como el Oeste de
Asia Norte de Aacutefrica Australia y Canadaacute (Hekimhan et al 2004) Adicionalmente
cuando afecta a las espigas del trigo este hongo es capaz de producir micotoxinas
que ademaacutes de causar una reduccioacuten de la calidad de los granos que conllevan
grandes peacuterdidas econoacutemicas tambieacuten pueden producir intoxicacioacuten en humanos y
7
animales por lo que el seguimiento y control de la enfermedad es de intereacutes para
productores y procesadores de cereales (Bhaskara Reddy et al 1999)
Generalmente el control quiacutemico de la enfermedad se hace con fungicidas algunos de
estos productos son nocivos para el medio ambiente como por ejemplo el bromuro de
metilo que ha demostrado ser eficiente en la reduccioacuten de varias especies de
Fusarium y de otros patoacutegenos en el suelo sin embargo su utilizacioacuten ha sido
prohibida en varios paiacuteses debido al dantildeo que este compuesto causaba a la capa de
ozono (Ma et al 2001) En los uacuteltimos antildeos se ha utilizado el metil tiofanato este
compuesto es un fungicida sisteacutemico que actuacutea sobre un amplio rango de
enfermedades fuacutengicas incluyendo la pudricioacuten de la raiacutez causada por Fusarium
(Briggs et al 2002) Este fungicida estaacute autorizado por la Unioacuten Europea y al igual que
los demaacutes pesticidas autorizados su uso estaacute condicionado por la directiva
91414EEC (European Commission 2005) Esta directiva establece que los Estados
Miembros deben minimizar el uso de pesticidas y desarrollar planes de accioacuten nacional
dirigidos a la implementacioacuten del Manejo Integrado de Plagas (MIP) con la finalidad de
incluir objetivos medidas y calendarios para reducir los peligros y riesgos producidos
por los pesticidas asiacute como la dependencia hacia estos tambieacuten especifica que los
Estados Miembro tienen como fecha liacutemite Enero del 2014 implementar los principios
del MIP (European Commission 2009) Utilizar alternativas al control quiacutemico como el
uso de composts supresivos yo agentes de control bioloacutegico ha sido un componente
esencial en el desarrollo del MIP ya que si se comprueba su efectividad estas
alternativas pueden ser implementadas en el manejo de plagas y enfermedades (Orr
2009)
El control bioloacutegico supone el uso de agentes microbioloacutegicos (por ejemplo
microorganismos del suelo) o substancias sin modificar obtenidas del suelo para
controlar patoacutegenos de plantas y por ser respetuoso con el medio ambiente la salud y
rentable econoacutemicamente estaacute dentro de los componentes de los programas de
manejo de enfermedades (Henkes et al 2011 Mao et al 1997) Especies fuacutengicas
pertenecientes al geacutenero Trichoderma han demostrado ser potenciales agentes de
control bioloacutegico ante varias enfermedades en plantas (Howell 2003) La efectividad
en el control de las enfermedades se da por varias viacuteas como competencia por
nutrientes con otros microorganismos del suelo produccioacuten de antibioacuteticos y enzimas
de lisis que parasitan o inhiben el crecimiento de otros hongos y maacutes recientemente
se ha demostrado que algunas especies de Trichoderma colonizan las raiacuteces de las
plantas mejoran el crecimiento y la captacioacuten de nutrientes y sisteacutemicamente elevan la
resistencia a patoacutegenos en varias especies de plantas (Trillas y Segarra 2009)
8
Adicionalmente en el contexto de control bioloacutegico en los uacuteltimos antildeos se ha
incrementado el intereacutes por conocer el papel que cumplen los compost en el control de
patoacutegenos (Pharand et al 2002) Varios estudios han reportado el efecto supresor
que tienen los composts en el control de varios patoacutegenos de plantas incluyendo
especies de Fusarium este efecto estaacute relacionado con las caracteriacutesticas bioloacutegicas y
fiacutesico-quiacutemicas que tienen los composts (Huang et al 2012)
El objetivo general de este estudio fue evaluar alternativas al control quiacutemico de la
pudricioacuten de la raiacutez producida por Fusarium graminearum en plaacutentulas de dos
variedades de trigo duro Los objetivos especiacuteficos fueron i) la puesta a punto de un
ensayo en fitotroacuten (caacutemara de cultivo en condiciones controladas) ii) evaluar la
supresividad natural de un compost formulado a base de alperujo iii) evaluar el papel
del agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum cepa T34
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
6
1 Introduccioacuten y Objetivos
El trigo duro (Triticum durum) es una planta monocotiledoacutenea de la familia Gramineae
y es la segunda especie de trigo maacutes producida y comercializada despueacutes del trigo
blando (Triticum aestivum L) (CFIA 2012) A nivel mundial el promedio de trigo duro
sembrado anualmente es aproximadamente 18 millones de hectaacutereas con una
produccioacuten promedio de 30 millones de toneladas meacutetricas al antildeo siendo la Unioacuten
Europea (principalmente Italia Espantildea y Grecia) el mayor productor de trigo duro con
una produccioacuten anual promedio de 8 millones de toneladas meacutetricas (IGC 2002) En
Espantildea se sembraron en la campantildea 2008-2009 maacutes de 528000 hectaacutereas de trigo
duro seguacuten el Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino con maacutes de 109
millones de kilogramos de semilla certificada de produccioacuten nacional correspondiente
a maacutes de 80 variedades diferentes (Ortega Molina 2009)
Las especies del geacutenero Fusarium son un grupo diverso de hongos que causan dantildeos
a cereales y otros cultivos mediante la pudricioacuten de semillas raiacuteces plaacutentulas tallos
basales y espigas y dentro de estas especies Fusarium graminearum Schwabe
(teleomorfo Gibberella zeae) es uno de los principales patoacutegenos de cereales a nivel
mundial ya que causa la fusariosis de la espiga y en cereales la pudricioacuten de la raiacutez
(Paulitz et al 2002 Wang et al 2006) F graminearum puede sobrevivir como
micelio ascosporas macroconidias y clamidosporas en el suelo y tiene un amplio
rango de hospederos dentro de las gramineaceas y aparentemente son los restos de
cultivos (principalmente trigo maiacutez y arroz) que quedan en el suelo la principal fuente
de inoacuteculo del patoacutegeno (Saharan et al 2004) Cuando este hongo patoacutegeno afecta
las semillas se produce una reduccioacuten en la germinacioacuten y las plaacutentulas son poco
vigorosas (Gilbert et al 1997) F graminearum es un componente del complejo de
patoacutegenos que causan la pudricioacuten de la raiacutez en cereales en suelos secos (dryland
root rot) esta enfermedad ocurre bajo el suelo y por lo tanto su evaluacioacuten anual es
complicada debido a diferencias en locacioacuten manejo y factores climaacuteticos (Bailey et
al 1989) Esta enfermedad ha sido descrita en la mayor parte de zonas donde se
cultiva cereales y se ha reportado peacuterdidas de entre 3 y 50 de la produccioacuten estas
peacuterdidas han sido documentadas y registradas en varias partes del mundo incluyendo
Europa Ameacuterica y zonas marginales de produccioacuten de cereales como el Oeste de
Asia Norte de Aacutefrica Australia y Canadaacute (Hekimhan et al 2004) Adicionalmente
cuando afecta a las espigas del trigo este hongo es capaz de producir micotoxinas
que ademaacutes de causar una reduccioacuten de la calidad de los granos que conllevan
grandes peacuterdidas econoacutemicas tambieacuten pueden producir intoxicacioacuten en humanos y
7
animales por lo que el seguimiento y control de la enfermedad es de intereacutes para
productores y procesadores de cereales (Bhaskara Reddy et al 1999)
Generalmente el control quiacutemico de la enfermedad se hace con fungicidas algunos de
estos productos son nocivos para el medio ambiente como por ejemplo el bromuro de
metilo que ha demostrado ser eficiente en la reduccioacuten de varias especies de
Fusarium y de otros patoacutegenos en el suelo sin embargo su utilizacioacuten ha sido
prohibida en varios paiacuteses debido al dantildeo que este compuesto causaba a la capa de
ozono (Ma et al 2001) En los uacuteltimos antildeos se ha utilizado el metil tiofanato este
compuesto es un fungicida sisteacutemico que actuacutea sobre un amplio rango de
enfermedades fuacutengicas incluyendo la pudricioacuten de la raiacutez causada por Fusarium
(Briggs et al 2002) Este fungicida estaacute autorizado por la Unioacuten Europea y al igual que
los demaacutes pesticidas autorizados su uso estaacute condicionado por la directiva
91414EEC (European Commission 2005) Esta directiva establece que los Estados
Miembros deben minimizar el uso de pesticidas y desarrollar planes de accioacuten nacional
dirigidos a la implementacioacuten del Manejo Integrado de Plagas (MIP) con la finalidad de
incluir objetivos medidas y calendarios para reducir los peligros y riesgos producidos
por los pesticidas asiacute como la dependencia hacia estos tambieacuten especifica que los
Estados Miembro tienen como fecha liacutemite Enero del 2014 implementar los principios
del MIP (European Commission 2009) Utilizar alternativas al control quiacutemico como el
uso de composts supresivos yo agentes de control bioloacutegico ha sido un componente
esencial en el desarrollo del MIP ya que si se comprueba su efectividad estas
alternativas pueden ser implementadas en el manejo de plagas y enfermedades (Orr
2009)
El control bioloacutegico supone el uso de agentes microbioloacutegicos (por ejemplo
microorganismos del suelo) o substancias sin modificar obtenidas del suelo para
controlar patoacutegenos de plantas y por ser respetuoso con el medio ambiente la salud y
rentable econoacutemicamente estaacute dentro de los componentes de los programas de
manejo de enfermedades (Henkes et al 2011 Mao et al 1997) Especies fuacutengicas
pertenecientes al geacutenero Trichoderma han demostrado ser potenciales agentes de
control bioloacutegico ante varias enfermedades en plantas (Howell 2003) La efectividad
en el control de las enfermedades se da por varias viacuteas como competencia por
nutrientes con otros microorganismos del suelo produccioacuten de antibioacuteticos y enzimas
de lisis que parasitan o inhiben el crecimiento de otros hongos y maacutes recientemente
se ha demostrado que algunas especies de Trichoderma colonizan las raiacuteces de las
plantas mejoran el crecimiento y la captacioacuten de nutrientes y sisteacutemicamente elevan la
resistencia a patoacutegenos en varias especies de plantas (Trillas y Segarra 2009)
8
Adicionalmente en el contexto de control bioloacutegico en los uacuteltimos antildeos se ha
incrementado el intereacutes por conocer el papel que cumplen los compost en el control de
patoacutegenos (Pharand et al 2002) Varios estudios han reportado el efecto supresor
que tienen los composts en el control de varios patoacutegenos de plantas incluyendo
especies de Fusarium este efecto estaacute relacionado con las caracteriacutesticas bioloacutegicas y
fiacutesico-quiacutemicas que tienen los composts (Huang et al 2012)
El objetivo general de este estudio fue evaluar alternativas al control quiacutemico de la
pudricioacuten de la raiacutez producida por Fusarium graminearum en plaacutentulas de dos
variedades de trigo duro Los objetivos especiacuteficos fueron i) la puesta a punto de un
ensayo en fitotroacuten (caacutemara de cultivo en condiciones controladas) ii) evaluar la
supresividad natural de un compost formulado a base de alperujo iii) evaluar el papel
del agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum cepa T34
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
7
animales por lo que el seguimiento y control de la enfermedad es de intereacutes para
productores y procesadores de cereales (Bhaskara Reddy et al 1999)
Generalmente el control quiacutemico de la enfermedad se hace con fungicidas algunos de
estos productos son nocivos para el medio ambiente como por ejemplo el bromuro de
metilo que ha demostrado ser eficiente en la reduccioacuten de varias especies de
Fusarium y de otros patoacutegenos en el suelo sin embargo su utilizacioacuten ha sido
prohibida en varios paiacuteses debido al dantildeo que este compuesto causaba a la capa de
ozono (Ma et al 2001) En los uacuteltimos antildeos se ha utilizado el metil tiofanato este
compuesto es un fungicida sisteacutemico que actuacutea sobre un amplio rango de
enfermedades fuacutengicas incluyendo la pudricioacuten de la raiacutez causada por Fusarium
(Briggs et al 2002) Este fungicida estaacute autorizado por la Unioacuten Europea y al igual que
los demaacutes pesticidas autorizados su uso estaacute condicionado por la directiva
91414EEC (European Commission 2005) Esta directiva establece que los Estados
Miembros deben minimizar el uso de pesticidas y desarrollar planes de accioacuten nacional
dirigidos a la implementacioacuten del Manejo Integrado de Plagas (MIP) con la finalidad de
incluir objetivos medidas y calendarios para reducir los peligros y riesgos producidos
por los pesticidas asiacute como la dependencia hacia estos tambieacuten especifica que los
Estados Miembro tienen como fecha liacutemite Enero del 2014 implementar los principios
del MIP (European Commission 2009) Utilizar alternativas al control quiacutemico como el
uso de composts supresivos yo agentes de control bioloacutegico ha sido un componente
esencial en el desarrollo del MIP ya que si se comprueba su efectividad estas
alternativas pueden ser implementadas en el manejo de plagas y enfermedades (Orr
2009)
El control bioloacutegico supone el uso de agentes microbioloacutegicos (por ejemplo
microorganismos del suelo) o substancias sin modificar obtenidas del suelo para
controlar patoacutegenos de plantas y por ser respetuoso con el medio ambiente la salud y
rentable econoacutemicamente estaacute dentro de los componentes de los programas de
manejo de enfermedades (Henkes et al 2011 Mao et al 1997) Especies fuacutengicas
pertenecientes al geacutenero Trichoderma han demostrado ser potenciales agentes de
control bioloacutegico ante varias enfermedades en plantas (Howell 2003) La efectividad
en el control de las enfermedades se da por varias viacuteas como competencia por
nutrientes con otros microorganismos del suelo produccioacuten de antibioacuteticos y enzimas
de lisis que parasitan o inhiben el crecimiento de otros hongos y maacutes recientemente
se ha demostrado que algunas especies de Trichoderma colonizan las raiacuteces de las
plantas mejoran el crecimiento y la captacioacuten de nutrientes y sisteacutemicamente elevan la
resistencia a patoacutegenos en varias especies de plantas (Trillas y Segarra 2009)
8
Adicionalmente en el contexto de control bioloacutegico en los uacuteltimos antildeos se ha
incrementado el intereacutes por conocer el papel que cumplen los compost en el control de
patoacutegenos (Pharand et al 2002) Varios estudios han reportado el efecto supresor
que tienen los composts en el control de varios patoacutegenos de plantas incluyendo
especies de Fusarium este efecto estaacute relacionado con las caracteriacutesticas bioloacutegicas y
fiacutesico-quiacutemicas que tienen los composts (Huang et al 2012)
El objetivo general de este estudio fue evaluar alternativas al control quiacutemico de la
pudricioacuten de la raiacutez producida por Fusarium graminearum en plaacutentulas de dos
variedades de trigo duro Los objetivos especiacuteficos fueron i) la puesta a punto de un
ensayo en fitotroacuten (caacutemara de cultivo en condiciones controladas) ii) evaluar la
supresividad natural de un compost formulado a base de alperujo iii) evaluar el papel
del agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum cepa T34
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
8
Adicionalmente en el contexto de control bioloacutegico en los uacuteltimos antildeos se ha
incrementado el intereacutes por conocer el papel que cumplen los compost en el control de
patoacutegenos (Pharand et al 2002) Varios estudios han reportado el efecto supresor
que tienen los composts en el control de varios patoacutegenos de plantas incluyendo
especies de Fusarium este efecto estaacute relacionado con las caracteriacutesticas bioloacutegicas y
fiacutesico-quiacutemicas que tienen los composts (Huang et al 2012)
El objetivo general de este estudio fue evaluar alternativas al control quiacutemico de la
pudricioacuten de la raiacutez producida por Fusarium graminearum en plaacutentulas de dos
variedades de trigo duro Los objetivos especiacuteficos fueron i) la puesta a punto de un
ensayo en fitotroacuten (caacutemara de cultivo en condiciones controladas) ii) evaluar la
supresividad natural de un compost formulado a base de alperujo iii) evaluar el papel
del agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum cepa T34
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
9
2 Materiales y Meacutetodos
21 Material Vegetal
Para la realizacioacuten de los ensayos se utilizaron semillas de trigo duro Triticum durum
Desf Se evaluaron dos variedades Duroi y Regallo facilitadas por Agromonegros SA
(Zaragoza) con el fin de evaluar diferente sensibilidad a la enfermedad Las semillas
utilizadas para los ensayos no fueron tratadas con fungicidas quiacutemicos y ademaacutes
fueron previamente esterilizadas Las semillas germinaron a 4ordmC durante 14 diacuteas
(ANEXO 1)
22 Inoacuteculo del patoacutegeno F graminearum
Se utilizoacute una cepa de F graminearum aislada de semillas enfermas procedentes de
Francia Para la obtencioacuten de macroconidias (fuente de inoculo) se utilizaron diferentes
metodologiacuteas el medio agar con fragmentos (05 x 05 cm) de hoja clavel esteril (CLA)
y tambieacuten se evaluoacute el medio agar Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) (Leslie amp
Summerell 2006) al que se antildeadiacutean fragmentos de papel esteacuteril (05 x 05 cm) Para la
determinacioacuten del nuacutemero de macroconidias se realizoacute un contaje semanal de las
placas de CLA y SNA con la ayuda de un microscopio y una caacutemara de contaje de
Neubauer
Ademaacutes se preparoacute inoacuteculo suelo para ello se tomo 2 kg de suelo de una parcela de
los Campos Experimentales de la Facultad de Biologiacutea (UB) este suelo fue tamizado y
esterilizado durante 60 minutos en un autoclave tres diacuteas consecutivos El tercer diacutea
se agregaron al suelo varios trozos de patata y posteriormente al suelo esteacuteril se
inoculoacute el patoacutegeno a partir de fragmentos procedente de placas de SNA previamente
preparadas en las que el patoacutegeno habiacutea crecido durante una semana El inoacuteculo de
suelo se dejoacute incubar a temperatura ambiente durante dos semanas posteriormente
se secoacute de forma esteacuteril (cabina de flujo laminar) 14 horas y posteriormente el inoacuteculo
se homogenizoacute al pasarse por un tamiz de 02 cm de poro en condiciones esteacuteriles y
se conservoacute en nevera a 4ordmC
23 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo
Se efectuoacute un ensayo preliminar en donde se estudiaron diversos composts de
alperujo (residuo de la fabricacioacuten del aceite de oliva) En la Tabla 1 se detallan las
denominaciones procedencias y caracteriacutesticas de los composts de alperujo Este
estudio se efectuoacute con el objetivo de seleccionar un compost que no afectase el
crecimiento de las semillas pre-germinadas de trigo para posteriormente evaluar su
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
10
papel como potencial sustrato supresor de la enfermedad Para el ensayo se usaron
los compost puros (100) y dos mezclas con turba compostturba 31 vv (75
compost) y compostturba 11 vv (50 compost) Se colocoacute una semilla pre-
germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40 ml Se realizaron diez
repeticiones para cada compost puro y para cada mezcla de compost con turba
Tabla 1 Denominacioacuten procedencia y materias primas de los tres compost evaluados
Nomenclatura Nombre Procedencia Materias primas
Compost 2 Oro del desierto
Tabernes (Almeriacutea) Secreto industrial
Compost 3 Valdeolivo Jaeacuten 1051 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
Compost 4 Orobaena Baena (Coacuterdoba) 2751 vv (alperujohojas de la limpieza de aceitunaheces ovinas)
24 Puesta a punto ensayo de F graminearum
Como sustrato de cultivo se utilizoacute turba (Tref Go Jiffy Products Espantildea SLU Puerto
Lumbreras Murcia) inoculada con F graminearum proveniente de dos fuentes de
inoculo i) macroconidias (obtenidas con el medio CLA o SNA) con las que se
evaluaron dos densidades (104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y ii) inoacuteculo suelo
con el que se evaluaron cinco densidades 05 1 2 5 y 10 g (estas densidades en
porcentaje representan 125 25 5 125 y 25 respectivamente)
Se colocoacute una semilla pre-germinada de cada variedad de trigo duro en alveolos de 40
ml Se realizaron diez repeticiones para cada inoacuteculo Los alveacuteolos fueron colocados
en una caacutemara de crecimiento de condiciones controladas (25 plusmn 1ordm C 16 h de luz a
200 μmol m-2 s-1) e irrigados diariamente con agua destilada La enfermedad fue
evaluada a partir de los 7 diacuteas desde el inicio del ensayo y se utilizoacute como criterio de
evaluacioacuten la siguiente escala 0 = plaacutentula sana 1 = plaacutentula enferma y 2 = plaacutentula
muerta el criterio de evaluacioacuten de la enfermedad se muestra en la Figura 1 El iacutendice
de severidad de la enfermedad fue calculado mediante la foacutermula [suma(criterio de
evaluacioacuten x nuacutemero de plaacutentulas dentro del criterio)] (Nuacutemero total de plaacutentulas) La
evaluacioacuten se hizo cada dos diacuteas durante 20 diacuteas Al final de la evaluacioacuten se tomaron
medidas de peso fresco y altura de la parte aacuterea Como controles se usaron semillas
pre-germinadas plantadas en turba
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
11
Figura 1 Evaluacioacuten de la
enfermedad de F graminearum
en plaacutentulas de trigo duro
Iacutendice de severidad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentula centro
1 = enferma y plaacutentula derecha 2 =
muerta
Incidencia de enfermedad plaacutentula
izquierda 0 = sana plaacutentulas centro
y derecha 1 = enfermas
El disentildeo experimental para la evaluacioacuten de las diferentes dosis y tipos de inoacuteculo
consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento y cultivar de trigo (1 plaacutentula por alveolo) Los
tratamientos fueron tratamiento control (sin patoacutegeno) tratamiento dosis de
macroconidias (2 dosis 104 y 105 macroconidias ml-1 de sustrato) y tratamiento dosis
de suelo (5 dosis 05 1 2 5 y 10 g de inoacuteculo por alveolo)
Se utilizoacute la turba porque es un substrato de cultivo ampliamente utilizado por sus
excelentes propiedades fiacutesicas pero se considera un material conductor de
enfermedad (Cotxarrera et al 2002 Borrero et al 2006)
25 Control de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para este ensayo se utilizaron como sustratos turba (estaacutendar) y el compost 3
elaborado a base de alperujo como potencial sustrato supresor de la enfermedad
Como fuente de inoacuteculo se usoacute suelo inoculado (ver apartado 22) con F
graminearum Para el control de la enfermedad se utilizoacute el fungicida metil-tiofanato
(Topsin 70 WG Bayer) y como agente de control bioloacutegico Trichoderma asperellum
cepa T34 a la concentracioacuten de 104 ufc ml-1 sustrato El fungicida quiacutemico se aplicoacute en
el sustrato de acuerdo a las indicaciones del fabricante (1 mgml) y se antildeadieron 18
ml por alveolo
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
12
El disentildeo experimental consistioacute en 10 plaacutentulas por tratamiento se utilizaron dos
cultivares de trigo (1 plaacutentula por alveolo) y sustrato (turba y compost 3) Se evaluaron
los siguientes tratamientos control (sin patoacutegeno) inoacuteculo suelo (2 dosis 5 y 10 g)
control quiacutemico en inoacuteculo suelo (1 dosis 10 g) y control bioloacutegico en inoacuteculo suelo (2
dosis 5 y 10 g) La enfermedad fue evaluada a partir de los 8 diacuteas desde el inicio del
ensayo y se utilizoacute como criterios de evaluacioacuten los paraacutemetros descritos en el
apartado 23
26 Anaacutelisis estadiacutestico
Para la evaluacioacuten del estudio de los compost de alperujo las variables altura y peso
fresco de la parte aeacuterea fueron analizadas mediante anaacutelisis de varianza (ANOVA)
En los ensayos de puesta a punto y buacutesquedas de alternativas de control las
variables iacutendice de severidad incidencia de enfermedad y crecimiento se analizaron
del mismo modo Tambieacuten se realizaron Pruebas de Tukey (p lt 005) para determinar
diferencias entre tratamientos Estos anaacutelisis fueron hechos con el software PASW 18
Statistics
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
13
3 Resultados y Discusioacuten
31 Obtencioacuten inoacuteculo del patogeno
Previamente a la realizacioacuten de los ensayos fue necesario buscar el medio maacutes
adecuado para la obtencioacuten de macroconidias con las que efectuar el inoacuteculo de F
graminearum Para esto se probaron dos medios de crecimiento el medio con hojas
de clavel esteacuteril (CLA) y el medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA) Estos dos medios
son recomendados para la produccioacuten de macroconidias (Leslie amp Summerell 2006)
El medio que resultoacute mejor para la obtencioacuten de macroconias fue el medio SNA
(Figura 2) Con el medio CLA la concentracioacuten de macroconidias aumentoacute de forma
lineal a lo largo de los 21 diacuteas de estudio alcanzando a los 21 dias una concentracioacuten
de 32 x 105 macroconias ml-1 Con el medio SNA el crecimiento fue diferente entre los
8 y los 14 diacuteas varioacute entre 51 x 105 y 58 x 105 macroconidias ml-1 y a los 21 dias se
obtuvo una concentracioacuten de 11 x 106 macroconidias ml-1 lo que representa una
concentracioacuten un 72 mayor de un medio respecto al otro por lo que se eligioacute este
uacuteltimo medio para la preparacioacuten de los dos ensayos siguientes
Figura 2 Macroconidias producidas durante 21 diacuteas en dos medios de cultivo medio con hojas de clavel esteril (CLA) y medio Spezieller Naumlhrstoffarmer (SNA)
0 8 14 21
CLA
SNA
0
25
45
65
85
105
125
Diacuteas
Mac
roco
nidi
as m
l-1
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
14
32 Evaluacioacuten de compost de alperujo como sustrato para el crecimiento de trigo duro
La evaluacioacuten del pH y la conductividad de los composts (Tabla 2) nos muestra que el
pH variacutea entre 75 y 92 y la conductividad eleacutectrica entre 16 y 96 mScm El pH del
compost 3 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros Los pH
mejoraron significativamente para cada tipo y en cada dilucioacuten mejorando
significativamente en todos los casos para la mezcla 5050 En cuanto a la
conductividad eleacutectrica los composts varian entre 16 y 96 mScm La conductividad
del composts 4 (100) fue significativamente mejor que los demaacutes compost puros En
los casos la conductividad eleacutectrica mejora significamente con las mezclas (efecto
dilucioacuten)
Tabla 2 Propiedades fiacutesicas de los composts utilizados en el ensayo preliminar Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar del pH y la conductividad eleacutectrica
Compost
pH Conductividad eleacutectrica (mS
cm) 2 92 plusmn 0 a 96 plusmn 05 a
3 (compost
100) 85 plusmn 0 cd 65 plusmn 07 c 4 92 plusmn 0 a 35 plusmn 03 e 2 87 plusmn 0 bc 78 plusmn 01 b
3 (compostturba
7525) 81 plusmn 01 e 53 plusmn 02 d 4 88 plusmn 01 b 26 plusmn 02 ef 2 83 plusmn 01 d 53 plusmn 02 cd
3 (compostturba
5050) 75 plusmn 0 f 33 plusmn 02 e 4 85 plusmn 0 cd 16 plusmn 01 f
En cada columna letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Para la variedad Duroi en cuanto a altura el compost 3 (100) es significativamente
el maacutes alto (Tabla 3) y el compost 2 es el maacutes bajo aunque la altura aumenta
significativamente con las mezclas efectuadas Los compost 3 y 4 no cambian su
altura significativamente con las mezclas efectuadas Para la variedad Regallo se
sigue un patroacuten de crecimiento muy similar siendo el compost 3 (100) tambieacuten el
maacutes alto
Las plaacutentulas de las dos variedades de trigo cultivadas en en los composts 3 y 4 y
todas sus mezclas no mostraron diferencias significativas en el peso fresco de la parte
aeacuterea En el compost 2 (100) las plantas no pudieron crecer aunque cuando se
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
15
efectuaron las mezclas presentaron un crecimiento igual a los demaacutes composts y
mezclas
El compost 3 sin turba antildeadida es el sustrato maacutes recomendable para probar su
eficacia como medio supresor de enfermedad (pudricioacuten de la raiacutez causada por F
graminearum) Hay diferentes estudios que han demostrado la efectividad de los
composts en la supresioacuten de enfermedades causadas por hongos (Hoitink et al 1975
Trillas et al 1986 Segarra et al 2007) Las mezclas de composts con turba pueden
en algunos casos mejorar el crecimiento de las plaacutentulas (compost 2) aunque en otros
casos no (composts 3 y 4) sin embargo es mejor utilizar compost puros para evaluar
la supresividad natural de los mismos y evitar un efecto dilucioacuten que tambieacuten podriacutea
afectar a los fenoacutemenos de supresividad (Cotxarrera et al 2002) El objetivo de
mezclar los compost con turba fue tener sustratos de crecimiento alternativos en caso
de que los compost puros presentasen condiciones no favorables para el crecimiento
(compost 2)
Tabla 3 Estudio del efecto de los compost en el desarrollo de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum) var Duroi y Regallo Se presentan los valores promedio plusmn el error estaacutendar de la altura y el peso fresco de al parte aeacuterea
Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
33 Evaluacioacuten de enfermedad con distintas dosis de inoacuteculo del patoacutegeno
Los datos correspondientes a la evaluacioacuten de la enfermedad (variedades Duroi y
Regallo) se registraron cada dos diacuteas despueacutes de que las semillas pre-germinadas
2 (solo compost)3 161 plusmn 18 b B 168 plusmn 15 b B 012 plusmn 003 ab AB 017 plusmn 003 b AB4 115 plusmn 41 ab AB 115 plusmn 73 ab AB 009 plusmn 003 ab AB 008 plusmn 005 ab AB2 (compostturba 31 vv) 107 plusmn 45 ab AB 100 plusmn 53 ab AB 010 plusmn 005 ab AB 009 plusmn 005 ab AB3 180 plusmn 21 b B 177 plusmn 12 b B 015 plusmn 003 b AB 019 plusmn 002 b AB4 149 plusmn 21 b B 162 plusmn 05 b B 011 plusmn 002 ab AB 019 plusmn 002 b AB2 (compostturba 11 vv) 118 plusmn 32 ab AB 160 plusmn 28 b B 008 plusmn 004 ab AB 025 plusmn 007 b B3 140 plusmn 43 b AB 179 plusmn 03 b B 025 plusmn 005 b B 018 plusmn 002 b AB4 159 plusmn 17 b B 186 plusmn 05 b B 016 plusmn 003 b AB 024 plusmn 001 b B
Duroi RegalloCompost
Altura (cm)
0 a A 0 a A 0 a ADuroi Regallo
Peso fresco parte aeacuterea (g)
0 a A
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
16
fueron colocadas en los alveacuteolos inoculados con las distintas dosis y tipo de inoacuteculo
Se presentan los resultados despueacutes de 7 14 y 20 diacuteas de realizado el inoacuteculo (ddi)
(Figura 3)
Figura 3 Evaluacioacuten de la severidad en el estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo frente a F graminearum en plantas de Triticum durum var Duroi y var Regallo a los 7 14 y 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi) Solucioacuten de macroconidias 104 y 105 y gramos de suelo inoculados 05 1 2 5 y 10 g Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de
0
05
1
15
2 Duroi
Regallo
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
7 ddi
0
05
1
15
2 14 ddi
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
A A a a
0
05
1
15
2 20 ddi
A AB a a
ABC BC a ab
ABC AB a ab
ABC ABC a ab
AB ABC a ab
ABC ABC a ab
ABC C a b
104 105 05 1 2 5 10
Igravendi
ce d
e se
verid
ad d
e la
enf
erm
edad
Dosis de inoacuteculo
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
17
cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias signifivas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
A los 7 y 14 diacuteas ddi no hay diferencias significativas dentro de cada variedad Sin
embargo entre las dos variedades a los 20 diacuteas se observan diferencias significativas
La variedad Duroi inoculada con una solucioacuten de macroconidias 1 x 104 no presentoacute
enfermedad y no se observaron diferencias significativas entre las distintas dosis de
inoacuteculo para esta variedad ni para la variedad Regallo Las uacutenicas diferencias
significativas que se observaron fueron entre la variedad Duroi a la concentracioacuten de
macroconidias de 1x104 y la variedad Regallo a la concentracioacuten de macroconidias
1x105 y 10 gramos de inoacuteculo suelo Cabe remarcar que este estudio con todas sus
repeticiones soacutelo se ha efectuado una vez en el tiempo y lo recomendable es repetirlo
al menos dos veces maacutes esto permitiriacutea posiblemente encontrar mayores diferencias
entre dosis y tipo de inoacuteculo
Tabla 4 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 330 plusmn 04 a 0584 plusmn 0031 a 0102 plusmn 0003 a
F graminearum 104 315 plusmn 09 ab 0648 plusmn 0053 a 0106 plusmn 0008 a
F graminearum 105 227 plusmn 32 ab 0370 plusmn 0092 a 0060 plusmn 0015 a
F graminearum 05 g 249 plusmn 29 ab 0481 plusmn 0110 a 0080 plusmn 0016 a
F graminearum 1 g 275 plusmn 24 ab 0555 plusmn 0085 a 0107 plusmn 0020 a
F graminearum 2 g 243 plusmn 25 ab 0438 plusmn 0087 a 0073 plusmn 0012 a
F graminearum 5 g 243 plusmn 23 ab 0394 plusmn 0092 a 0070 plusmn 0014 a
F graminearum 10 g 221 plusmn 27 b 0348 plusmn 0084 a 0057 plusmn 0013 a Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de
la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias
significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
La altura es significativamente diferente en la variedad Duroi entre el control y el
tratamiento con dosis de 10 g de suelo y no se encontraron diferencias para el peso
fresco y peso seco aunque se observa una concordancia entre pesos y altura (Tabla
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
18
4) En la variedad Regallo el efecto del patoacutegeno fue maacutes evidente ya que hay
diferencias significativas en la altura entre el control y los tratamientos de solucioacuten de
macroconidias 1x105 y 10 g de suelo y las diferencias no son significativas entre los
dos inoacuteculos de patoacutegeno (Tabla 5) Tambieacuten se encontraron diferencias significativas
en el peso fresco y seco de la parte aeacuterea entre los tratamientos peso fresco 1x104 y
1x105 y entre los tratamientos peso seco control y solucioacuten de macroconidias 1x105 y
10 g de suelo
Tabla 5 Estudio concentracioacuten y tipo de inoacuteculo Efectos de F graminearum en el crecimiento
de plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Regallo)
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control 323 plusmn 05 a 0484 plusmn 0018 ab 0110 plusmn 0005 a F graminearum 104 298 plusmn 23 ab 0532 plusmn 0068 a 0078 plusmn 0009 ab F graminearum 105
121 plusmn 34 c 0147 plusmn 0064 b 0024 plusmn 0009 b F graminearum 05 g 218 plusmn 40 abc 0371 plusmn 0110 ab 0061 plusmn 0017 ab F graminearum 1 g 262 plusmn 37 abc 0465 plusmn 0110 ab 0076 plusmn 0016 ab F graminearum 2 g 204 plusmn 18 abc 0268 plusmn 0040 ab 0056 plusmn 0010 b F graminearum 5 g 186 plusmn 44 abc 0354 plusmn 0110 ab 0059 plusmn 0018 ab F graminearum 10 g 162 plusmn 40 bc 0204 plusmn 0066 ab 0032 plusmn 0010 b Solucioacuten de macroconidias concentracioacuten en macroconidias ml-1 de sustrato
gramos de suelo inoculados con el patoacutegeno
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aerea despueacutes de 20 diacuteas de evaluacioacuten Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
El entendimiento del por queacute y el coacutemo los patoacutegenos infestan a sus hospederos es un
punto de enfoque central en fitopatologiacutea y es de particular intereacutes en ensayos con
plantas hospederas cultivadas ya que cuando el patoacutegeno encuentra a un potencial
hospedero este tiene la capacidad de infectarlo o no (Pariaud et al 2009) Las
diferentes dosis tanto en solucioacuten de macroconidias como en inoacuteculo de suelo se
probaron para determinar cuaacutel de estas dosis era la maacutes severa y para determinar cuaacutel
era la maacutes idoacutenea para probar al momento de hacer un ensayo de buacutesqueda de
posibles alternativas para controlar al patoacutegeno Estudios de patogenicidad con
especies de Fusarium tanto en espigas como en raiacuteces se han realizado en el pasado
y en general estos estudios han demostrado que las dos especies maacutes patoacutegenas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
19
fueron F culmorum y F graminearum (Fernandez amp Chen 2005) Adicionalmente se
ha demostrado que F graminearum ademaacutes de ser el causante de la fusariosis de la
espiga tambieacuten puede ser un patoacutegeno agresivo de la raiacutez (Dyer et al 2009)
Mediante el ensayo realizado en este trabajo se ha demostrado la patogenicidad de F
graminearum tanto en dosis aplicadas como solucioacuten de macroconidias como dosis
de gramos de suelo
La diferente sensibilidad de las diversas especies y variedades de plantas frente a los
patoacutegenos es un aspecto ampliamente conocido (Agrios 2005) y que se observa en
este estudio La variedad Regallo fue maacutes sensible que la variedad Duroi frente a la
cepa de F graminearum estudiada Es interesante en este tipo de estudios disponer
de variedades con distinta sensibilidad resistencia para poder estudiar mejor el control
de la enfermedad
34 Alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Para las plaacutentulas cultivadas en turba tanto el iacutendice de severidad como el iacutendice de
incidencia fueron significativamente diferentes en la variedad Duroi y no en la variedad
Regallo en semillas pre-germinadas plantadas en turba 20 diacuteas despueacutes de realizado
el inoculo (Tabla 6) Las plaacutentulas control se mostraron sanas por tanto todas ellas
mostraron iacutendices de severidad incidencia igual a 0
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de severidad) en la variedad
Duroi nos muestran que el tratamiento con turba inoculada con 5 g de patoacutegeno y
tratada con Trichoderma asperellum cepa T34 no presentoacute plaacutentulas enfermas
mostraacutendose significativamente diferentes a los tratamientos con 10 g de inoculo suelo
y 10 g de inoculo suelo mezclados con la T asperellum cepa T34 fueron los que
presentaron los valores maacutes altos de enfermedad para los dos iacutendices El inoacuteculo de 5
gramos de suelo y 10 gramos de suelo con tratamiento fungicida mostraron un
comportamiento intermedio
Los resultados de la evaluacioacuten de la enfermedad (iacutendice de incidencia) en la variedad
Duroi nos muestran los valores maacutes bajos de enfermedad para los tratamientos con 5
g de inoacuteculo 5 g de inoacuteculo tratada con T34 y 10 g de inoacuteculo tratados con fungicida
El tratamiento con 10 g de inoacuteculo es el que presenta una mayor incidencia de
enfermedad mientras que 10 g de inoacuteculo tratado con T34 presenta unos valores
intermedios de iacutendice de enfermedad
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
20
Tabla 6 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con turba para el control de pudricioacuten de la
raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y
Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 01 plusmn 01 ab A 10 a AB 11 plusmn 03 a AB 60 a ABC 10 g 09 plusmn 02 b AB 70 b ABC 16 plusmn 02 a B 90 a C 5 g + T34 0 a A 0 a A 10 plusmn 03 a AB 50 a ABC 10 g + T34 10 plusmn 04 b AB 60 ab ABC 14 plusmn 03 a B 70 a BC 10 g + fungicida 01 plusmn 01 ab A 10 a A 10 plusmn 03 a AB 60 a ABC
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Los resultados obtenidos nos indican que para la variedad de trigo menos sensible
(Duroi) los tratamientos con T34 sobre todo a dosis bajas de patoacutegeno podriacutea
considerarse una alternativa de control (datos que tendriacutean que reforzarse con maacutes
ensayos) hay que tener en cuenta que estos datos corresponden a un solo ensayo
con sus repeticiones El tratamiento quiacutemico funciona bien a dosis altas de patoacutegeno
Adicionalmente y en vista de los resultados obtenidos con el tratamiento bioloacutegico
(T34) se podriacutean ensayar una mayor concentracioacuten posteriores aplicaciones otras
estrategias
En las plaacutentulas cultivadas en compost no se encontraron diferencias significativas
para el iacutendice de severidad y el iacutendice de incidencia (Tabla 7) En Duroi el iacutendice de
severidad tuvo una ligera variacioacuten y el iacutendice de incidencia llego a su valor maacuteximo y
en Regallo los dos iacutendices llegaron a sus valores maacuteximos
Para el sustrato turba se encontraron diferencias significativas en altura peso fresco y
peso seco en las dos variedades (Tablas 8 y 9) Los tratamientos control fueron
significativamente diferentes del resto de tratamientos para las tres caracteriacutesticas y en
las dos variedades de trigo Los valores maacutes bajos se observaron en el tratamiento 10
g de inoculo suelo y 10 g de inoculo suelo con Trichoderma asperellum cepa T34
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
21
Tabla 7 Evaluacioacuten de la severidad en el ensayo con compost para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum en dos variedades de trigo duro Triticum durum var Duroi y Regallo a los 20 diacuteas despueacutes del inoacuteculo (ddi)
Duroi Regallo
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
Iacutendice de severidad
Iacutendice de incidencia ()
5 g 19 plusmn 01 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g 14 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 5 g + T34 17 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + T34 16 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A 10 g + fungicida 13 plusmn 02 a A 100 a A 20 plusmn 0 a A 100 a A
Los tratamientos fueron dosis de 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo 5 y 10 g de patoacutegeno en suelo inoculado previamente con Trichoderma asperellum cepa T34 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno tratados con un fungicida comercial Letras minuacutesculas diferentes muestran diferencias significativas dentro de cada variedad y letras mayuacutesculas diferentes muestras diferencias significativas entre las dos variedades (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 8 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 296 plusmn 03 a 0670 plusmn 0018 a 0080 plusmn 0003 a F graminearum 5 g 276 plusmn 15 ab 0612 plusmn 0089 ab 0077 plusmn 0010 a F graminearum 10 g 186 plusmn 30 bc 0249 plusmn 0058 d 0036 plusmn 0008 bc F graminearum 5 g + T34 251 plusmn 08 ab 0390 plusmn 0056 bcd 0049 plusmn 0007 abc F graminearum 10 g + T34 164 plusmn 44 c 0263 plusmn 0090 cd 0031 plusmn 0011 c
Tratamiento quiacutemico 259 plusmn 12 ab 0532 plusmn 0070 abc 0069 plusmn 0008 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
22
Tabla 9 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en turba
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control (sin patoacutegeno) 297 plusmn 13 a 0649 plusmn 0042 a 0077 plusmn 0004 a F graminearum 5 g 156 plusmn 43 ab 0314 plusmn 0115 ab 0038 plusmn 0013 ab F graminearum 10 g 97 plusmn 52 b 0183 plusmn 0123 b 0023 plusmn 0014 b F graminearum 5 g + T34 139 plusmn 48 ab 0209 plusmn 0085 b 0030 plusmn 0011 ab F graminearum 10 g + T34 88 plusmn 49 b 0147 plusmn 0100 b 0017 plusmn 0012 b Tratamiento quiacutemico 160 plusmn 45 ab 0270 plusmn 0115 ab 0035 plusmn 0014 ab
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en turba previamente inoculada con T asperellum cepa T34
Turba inoculada con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Las plaacutentulas cultivadas en compost para la variedad Duroi no se encontraron
diferencias significativas para la altura pero si hubo diferencias para peso fresco y
seco de la parte aeacuterea entre el control y los demaacutes tratamientos (Tabla 10) Para la
varieda Regallo se encontraron diferencias significativas entre el tratamiento control y
los demaacutes tratamientos para las tres carecteriacutesticas analizadas (Tabla 11)
Varios compost procedentes de diversos residuos han demostrado ser un medio de
control bioloacutegico eficaz para patoacutegenos presentes en el suelo (Trillas et al 2006) sin
embargo el compost elegido (alperujo) para la evaluacioacuten como posible sustrato
supresor no fue efectivo contra del patoacutegeno F graminearum No todos los compost
muestran supresividad natural la efectividad y la estabilidad de los compost tiene un
amplio rango de variacioacuten ello se debe tanto al tipo de residuo como proceso de
compostaje y este es el principal factor limitante a la hora de elegir un compost como
posible agente de control (Hoitink et al 1997)
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
23
Tabla 10 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento en plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var Duroi)
Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 156 plusmn 12 a 0119 plusmn 0022 a 0022 plusmn 0003 a
F graminearum 5 g 81 plusmn 24 a 0033 plusmn 0022 b 0007 plusmn 0004 b
F graminearum 10 g 115 plusmn 08 a 0039 plusmn 0009 b 0013 plusmn 0002 ab
F graminearum 5 g + T34 87 plusmn 27 a 0041 plusmn 0018 b 0010 plusmn 0004 ab
F graminearum 10 g + T34 78 plusmn 27 a 0037 plusmn 0020 b 0009 plusmn 0003 ab
Tratamiento quiacutemico 113 plusmn 27 a 0052 plusmn 0014 ab 0011 plusmn 0003 ab Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
Tabla 11 Alternativas para el control de pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum
Efectos del patoacutegeno en el crecimiento de las plaacutentulas de trigo duro (Triticum durum var
Regallo) Semillas pre-germinadas plantadas en compost
Tratamiento Altura (cm) Peso fresco parte aeacuterea (g)
Peso seco parte aeacuterea (g)
Control sin patoacutegeno 166 plusmn 14 a 0162 plusmn 0030 a 0021 plusmn 0005 a
F graminearum 5 g 28 plusmn 15 b 0003 plusmn 0002 b 0002 plusmn 0001 b
F graminearum 10 g 55 plusmn 22 b 0020 plusmn 0015 b 0004 plusmn 0002 b
F graminearum 5 g + T34 24 plusmn 09 b 0004 plusmn 0002 b 0001 plusmn 0 b
F graminearum 10 g + T34 61 plusmn 30 b 0022 plusmn 0018 b 0008 plusmn 0004 b
Tratamiento quiacutemico 69 plusmn 22 b 0016 plusmn 0011 b 0004 plusmn 0002 b Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno
Dosis de 5 y 10 g de suelo inoculado con el patoacutegeno en compost previamente inoculado con T asperellum cepa T34
Compost inoculado con 10 g de suelo con patoacutegeno y tratada con un fungicida
Los datos representan los promedios plusmn el error estaacutendar de altura peso fresco y peso seco de la parte aeacuterea despueacutes de 20 diacuteas del ensayo Letras diferentes muestran diferencias significativas (Prueba de Tukey p lt 005)
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
24
La efectividad y el manejo sustentable de hongos patoacutegenos estaacuten dentro de las
principales preocupaciones en la agricultura teniendo en cuenta que las peacuterdidas
causadas por enfermedades fuacutengicas han sido estimadas en el 12 a pesar del
continuo desarrollo de nuevas variedades y nuevos fungicidas (Gao et al 2000) El
ensayo de buacutesqueda de alternativas de control para la pudricioacuten de la raiacutez causada por
F graminearum demuestra que este patoacutegeno tiene una dinaacutemica de infestacioacuten
diferente de acuerdo al sustrato de crecimiento y la variedad de cultivo tratada los
resultados muestran que la variedad Regallo es maacutes sensible al patoacutegeno que la
variedad Duroi
Especies del genero Trichoderma han sido ampliamente estudiadas para el control de
enfermedades y numerosos estudios han demostrado la eficacia de este geacutenero en el
control de enfermedades (Chet amp Inbar 1994) Trichoderma asperellum cepa T34 ha
sido ampliamente utilizado como agente de control bioloacutegico (Trillas y Segarra 2009)
Aunque mediante este ensayo no se pudo obtener una buena eficacia de esta cepa
para el control bioloacutegico de la pudricioacuten de la raiacutez causada por F graminearum se
deberiacutean aumentar las dosis y estudiar los momentos de aplicacioacuten Para este estudio
se ha aplicado la dosis de 10 gr de producto m3 de sustrato De acuerdo con Orr
(2009) es interesante probar algunas alternativas a los fungicidas quiacutemicos para el
manejo de esta enfermedad teniendo en cuenta que el control bioloacutegico es un
componente esencial en el manejo de enfermedades La repeticioacuten de los ensayos
realizados asiacute como la realizacioacuten de nuevos estudios posiblemente dariacutea resultados
positivos en lo que se refiere al control de enfermedades por medio de este agente de
control bioloacutegico
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
25
4 Conclusiones
minus Se ha conseguido el primer objetivo obtener un bioensayo y generando
enfermedad (F graminearum)
Disponemos de una variedad muy sensible (cv Regallo) al aislado del
patoacutegeno
Se puede producir macroconidas del patoacutegeno de una forma eficiente
(medio SNA) y tanto el inoacuteculo liacutequido como el inoacuteculo suelo son capaces
de generar enfermedad
El ambiente (temperatura humedad en maceta nutricioacuten) son los
adecuados para reproducir la enfermedad
minus Se deberiacutean evaluar distintos tipos de composts y que preferentemente que no
esteacuten diluidos con turba
minus Es necesario evaluar nuevas dosis y momentos de aplicacioacuten del agente de control
bioloacutegico
minus Es imprescindible efectuar maacutes repeticiones y aumentar el nuacutemero de reacuteplicas en
los experimentos
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
26
5 Bibliografiacutea
Agrios GN (2005) Plant Pathology 5ordf Edicioacuten Elsevier Academic Press
Bailey KL Harding H amp Knott DR (1989) Disease progression in wheat lines and
cultivars differing in levels of resistance to common root rot Canadian Journal of Plant
Pathology 11 273ndash278
Bhaskara Reddy MV Arul J Angers P amp Couture L (1999) Chitosan Treatment
of Wheat Seeds Induces Resistance to Fusarium graminearum and Improves Seed
Quality Journal of Agricultural and Food Chemistry 47 1208minus1216
Borrero C Ordovaacutes J Trillas MI amp Avileacutes M (2006) Tomato Fusarium wilt
suppressiveness The relationship between the organic plant growth media and their
microbial communities as characterised by Biolog Soil Biology amp Biochemistry 38
1631ndash1637
Briggs J Whitwell T Thomas Fernandez R amp Riley MB (2002) Effect of
Integrated Pest Mananement Strategies on Chlorothalonil Metalaxyl and Thiophanate-
metyl Runoff at a Container Nursery Journal of the American Society for Horticultural
Science 127(6) 1018ndash1024
CFIA Canadian Food Inspection Agency (2012) The Biology of Triticum
turgidum ssp durum (Durum Wheat) Biology Document BIO2006-07 A companion
document to Directive 94-08 (Dir94-08) Assessment Criteria for Determining
Environmental Safety of Plant with Novel Traits
Chet I amp Inbar J (1994) Biological Control of Fungal Pathogens Applied
Biochemestry and Biotechnology 48 37ndash43
Cotxarrera L Trillas-Gay MI Steinberg C amp Alabouvette C (2002) Use of sewage
sludge compost and Trichoderma asperellum isolates to suppress Fusarium wilt of
tomato Soil Biology amp Biochemistry 34 467ndash476
Dyer AT Johnston RH Hogg AC amp Johnston JA (2009) Comparison of
pathogenicity of the Fusarium crown rot (FCR) complex (F culmorum F
pseudograminearum and F graminearum) on hard red spring and durum wheat
European Journal of Plant Pathology 125 387ndash395
European Commission (2005) Review report for the active substance thiophanate-
methyl
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
27
European Commission (2009) Development of guidance for establishing Integrated
Pest Management (IPM) principles
Fernandez M R amp Chen Y (2005) Pathogenicity of Fusarium species on different
plant parts of spring wheat under controlled conditions Plant Disease 89164ndash169
Gao A-G Hakimi SM Mittanck C A Wi Y Woener BM Stark D M Shah D
M Liang J amp Rommens CMT (2000) Fungal pathogen protection in potato by
expression of a plant defensin peptide Nature Biotechnology 18 1307ndash1310
Gilbert J Tekauz A amp Woods S M (1997) Effect of storage on viability of Fusarium
head blight-affected spring wheat seed Plant Disease 81 159ndash62
Hekimhan H Ahmet Bagci S Nicol J Arisoy RZ amp Taner S (2004) Dryland Root
Rot a major threat to winter cereal production under sub-optimal growing conditions
En New directions for a diverse planet Proceedings for the 4th International Crop
Science Congress Brisbane Australia
Henkes GJ Jousset A Bonkowski M Thorpe MR Scheu S Lanoue A
Schurr U amp Roumlse USR (2011) Pseudomonas fluorescens CHA0 maintains carbon
delivery to Fusarium graminearum-infected roots and prevents reduction in biomass of
barley shoots through systemic interactions Journal of Experimental Botany 62(12)
4337ndash4344
Hoitink HAJ Schmitthener AF amp Herr LJ (1975) Composted bark for control of
root rot in ornamentals Ohio Repeports 60 25ndash26
Hoitink HAJ Stone AG amp Han DY (1997) Suppression of Plant Diseases by
Compost HortScience 32 (2) 184ndash187
Howell CR (2003) Mechanisms Employed by Trichoderma Species in the Biological
Control of Plant Diseases The History and Evolution of Current Concepts Plant
Disease 87(1) 4ndash10
Huang X Shi D Sun F Lu H Liu J amp Wu W (2012) Efficacy of sludge and
manure compost amendments against Fusarium wilt of cucumber Environmental
Science and Pollution Research 19 3895ndash3905
IGC International Grains Council (2002) World Grains Statistics pp 13-17
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
28
Leslie JF amp Summerell BA (2006) The Fusarium Laboratory Manual Blackwell
Publishing USA
Ma Q Gan J Becker JO Papiernik SK amp Yates SR (2001) Evaluation of
propargyl bromide for control of barnyardgrass and Fusarium oxysporum in three soils
Pest Management Science 57 781ndash786
Mao W Lewis J Hebber P amp Lumsden R (1997) Seed treatment with a fungal or a
bacterial antagonist for reducing corn damping-off caused by species of Pythium and
Fusarium Plant Disease 81 450ndash454
Orr D (2009) Biological Control and Integrated Pest Management En Integrated Pest
Management Innovation-Development Process editores Peshin R amp Dawan AK
Springer Science p 207ndash239
Ortega Molina JI (2009) La calidad de las variedades de trigo duro comercializadas
en Espantildea Vida RURAL 1 38ndash41
Pariaud B Ravigneacute V Halkett F Goyeau H Carlier J amp Lannou C (2009)
Aggressiveness and its role in the adaptation of plant pathogens Plant Pathology 58
409ndash424
Paulitz TC Smiley RW amp Cook RJ (2002) Insights into the prevalence and
management of soilborne cereal pathogens under direct seeding in the Pacific
Northwest USA Canadian Journal of Plant Pathology 24 416ndash428
Pharand B Carisse O amp Benhamou N (2002) Cytological aspects of compost-
mediated induced resistance against Fusarium crown and root rot in tomato
Phytopathology 92424ndash438
Saharan MS Kumar J Sharma AK amp Nagarajan S (2004) Fusarium Head Blight
(FHB) or Head Scab of Wheat-A Review Proceedings of the Indian National Science
Academy 3 255ndash268
Segarra G Casanova E Borrero C Avileacutes M amp Trillas I (2007) The suppressive
effects of compost used as growth media against Botrytis cinerea in cucumber plants
European Journal of Plant Pathology 117 393ndash402
Trillas-Gay MI Hoitink HAJ amp Madden LV (1986) Nature of suppression of
Fusarium wilt of radish in a container medium amended with composted hardwood
bark Palnt Disease 70 1023ndash1027
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
29
Trillas MI Casanova E Cotxarrera L Ordovaacutes J Borrero C amp Avileacutes M (2006)
Composts from agricultural waste and the Trichoderma asperellum strain T-34
suppress Rhizoctonia solani in cucumber seedlings Biological Control 39 32ndash38
Trillas MI amp Segarra G (2009) Interaction Between Nonpathogenic Fungi and
Plants En Advances in Botanical Research editor Van Loon LC Burlington
Academic Press 51 321ndash359
Wang H Hwang SF Eudes F Chang KF Howard RJ amp Turnbull GD (2006)
Trichothecenes and aggressiveness of Fusarium graminearum causing seedling blight
and root rot in cereals Plant Pathology 55 224ndash230
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
30
7 Anexos
71 Anexo 1 Protocolo de esterilizacioacuten de semillas de trigo
1 Poner las semillas en una solucioacuten de lejiacutea (Hipoclorito de sodio) al 30 durante
30 minutos
2 A partir de este punto realizar todo bajo la cabina de flujo laminar
3 Hacer dos o tres lavados a las semillas con agua destilada autoclavada
4 Colocar papel filtro autoclavado en placas de Petri y agregar 1 ml de agua
destilada autoclavada
5 Poner 10 semillas por placa de Petri
6 Colocar las cajas en un recipiente hermeacutetico con papel previamente humedecido
con agua destilada para mantener la humedad
7 Colocar el recipiente a 4ordm C
8 Controlar el estado de las semillas cada dos diacuteas
![Siva Sutra Varttikam by Bhaskara [1916]](https://img.pdfslide.tips/doc/110x75/5456a07cb1af9f02548b4754/siva-sutra-varttikam-by-bhaskara-1916.jpg)
