CARACTERIZACIÓN DE Clostridium difficile EN MUESTRAS DE HECES DIARREICAS DE LECHONES.Dr. Edgardo Tzoc, MSc.; Dra. Ekaterina Bonilla, MSc.ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA, UNAH, 2014

DATOS GENERALESTIPO DE MUESTRA: MUESTRA PURAMATERIAL: HECES FECALESCONSISTENCIA Y CONDICIONES: HECES DIARREICA

PCR MUESTRAS OBTENIDASPARTE 1VOLUMEN FINAL DE PREPARADO PARA PCR: 25 μLTARGET: Tpi Housekeeping Gene 1

SECUENCIA PRIMERSA. Tpi-F (5’ – AAAGAAGCTACTAAGGGTACAAA – 3’)B. tpi-R (5’ – CATAATATTGGGTCTATTCCTAC – 3’)

COMPONENTE CANTIDAD200 μM Deoxynucleoside Triphosphate 0.5 μL0.5 μM Tpi-F 2.5 μL0.5 μM Tpi-R 2.5 μL0.5 U Taq DNA polymerase 0.1 μL2.5 mM MgCl2 2.5 μLBuffer de amplificación [1X]

10 mM Tris-HCl [pH 8.3] 50 mM KCl

2.5 μL

10 % (vol/vol) Glicerol 2.5 μLH2O PURA 8.4 μLMUESTRA 1.0 μLVOLUMEN TOTAL 25.0 μL

1 Multiplex PCR targeting Tpi (Triose Phosphate Isomerase), tcdA (Toxin A), and tcdB (Toxin B) Genes for toxigenic culture of Clostridium difficile. Lemme, L. et al, J. Clin. Microbiol. 2004, 42(12): 5710

CARACTERIZACIÓN DE Clostridium difficile EN MUESTRAS DE HECES DIARREICAS DE LECHONES.Dr. Edgardo Tzoc, MSc.; Dra. Ekaterina Bonilla, MSc.ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA, UNAH, 2014

AMPLIFICACIÓN DE ADN PARTE 2