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CITOMETRA DE FLUJO
PRESENTADO POR: Torres Garcia, MazielSantos Medina, Mariliz
CITOMETRA DE FLUJOINTRODUCCINse inici en la dcada de los 60 como
un importante avance en el proceso de contar y medir el tamao de
partculas o clulas en poblaciones no homogneas. Aparato que es
capaz de medir componentes y propiedades de clulas y organelos
celulares (partculas biolgicas) que fluyen en una suspensin
celular.CONCEPTO
CITOMETRA DE FLUJO
CITOMETRA DE FLUJOAPLICACIONES: La CMF se puede emplear para
estudiar caractersticas estructurales y funcionales de clulas o
partculas en suspensin. Las aplicaciones fundamentales de esta
tcnica se dan en biologa y medicina y son la identificacin de
antgenos celulares mediante tcnicas de inmunofluorescencia y el
estudio del contenido de ADN y fases del ciclo celular. LA CMF SE
HA UTILIZADOEn hematologaEn farmacologa En inmunologaEn oncologaEn
microbiologaEn gentica
CITOMETRA DE FLUJOPROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS:La muestra a
analizar debe encontrarse en forma de suspensin monodispersa. Hay
muestras como la sangre perifrica, mdula sea, o otros fluidos
biolgicos, que precisan de un mnimo procesamiento; en cambio los
tumores slidos o las muestras parafinadas necesitan de una
disgregacin ms o menos intensa (mecnica, enzimtica, etc.).
CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS CITMETROS DE FLUJO: Para la
lectura por Citometra de flujo, las clulas son teidas con
fluorocromos que se unen especficamente a un constituyente celular.
Las clulas son inyectadas en un flujo lquido laminar y pasan una a
una por un punto de medida iluminado con luz de alta intensidad
(lser).
CITOMETRA DE FLUJOLa Citometra de Flujo es una tcnica de anlisis
celular multiparamtrico cuyo fundamento se basa en hacer pasar una
suspensin de partculas (generalmente clulas) alineadas y de una en
una por delante de un haz de lser focalizado.
ESTRUCTURA BSICA DE UN CITMETRO DE FLUJO SISTEMA FLUDRICO -
Inyeccin de la muestra. - Cmara de flujo.* SISTEMA OPTICO - Fuentes
de luz. - Detectores * SISTEMA ELECTRICO - Amplificador convertidor
- Sistema informtico CITOMETRA DE FLUJO
SISTEMA FLUDRICO:Este sistema consta de dos fluidos, uno que
contiene en suspensin a la muestra y otro que lo envuelve a fin de
darle estabilidad). Las clulas deben pasar una a una por delante
del haz del lser. Ambos fluidos (Solucin fisiolgica, PBS, aire) no
se mezclan porque circulan a diferente presin.
CITOMETRA DE FLUJOSISTEMA PTICO:Este sistema se compone de dos
tipos de pticas: -La ptica de excitacin, compuesta de el lser y las
lentes para enfocar y dirigir el haz de luz; y -La ptica de
lectura, compuesta por las lentes de recoleccin de luz emitida
luego de la interaccin entre el haz del lser y las partculas y el
sistema de espejos y filtros para direccionar longitudes de onda
especficas hacia los detectores correspondientes.
SISTEMA ELECTRICO: El sistema electrnico convierte todo en
seales digitales para almacenar en la computadora
CITOMETRA DE FLUJO
INFORMACION OBTENIDA POR CITOMETRIA DE FLUJO Bsicamente podemos
obtener los siguientes datos: - Tamao de la clula - Complejidad de
la membrana celular - Con el uso de fluorocromos se puede detectar
hasta 3 colores con un mismo laser CITOMETRA DE FLUJO
Seales de dispersin: La dispersin resulta de la interaccin de la
luz con una partcula que produce un cambio de direccin (no de la
longitud de onda) en todas las direcciones del espacio. Las
caractersticas morfolgicas que determinan la dispersin de la luz
son fundamentalmente el tamao celular, la membrana, el ncleo y el
material granular del interior de la clula, llamado complejidad. En
los Clitmetros de Flujo se miden dos fracciones de dispersin:-La
luz dispersada en ngulo cnico pequeo (0-10) que casi coincide con
la direccin de la luz incidente, llamada FSC (Forward Scatter). Es
una medida proporcional al tamao de la partcula que produce la
dispersin.-La luz dispersada en ngulo recto llamada SSC (Side
Scatter). Es proporcional a la complejidad de la estructura interna
de la partcula.
CITOMETRA DE FLUJOSeales de Fluorescencia: Un fluorocromo es una
molcula qumica que absorbe luz a una determinada longitud de onda
(energa) y emite a una longitud superior (menor energa). El
espectro de absorcin o excitacin es el rango sobre el que un
fluorocromo absorbe luz, y el espectro de emisin es el rango sobre
el que un fluorocromo emite luz. Cuando un fluorocromo interacciona
con la luz de excitacin procedente del lser emite energa radiante.
El espectro de absorcin o excitacin es el rango sobre el que un
fluorocromo absorbe luz, y el espectro de emisin es el rango sobre
el que un fluorocromo emite luz. Cuando un fluorocromos
interacciona con la luz de excitacin procedente del lser emite
energa radiante. Debido a que parte de la energa se utiliza para la
absorcin, la luz emitida es de menor energa que la luz de
excitacin, es decir la longitud de onda emitida es mayor. La
diferencia entre la longitud de onda de absorcin y emisin se
denomina Stokes shiff.
GRACIAS
