Upload
christian-rodriguez
View
125
Download
1
Embed Size (px)
Citation preview
DIPLOMADO DE DIPLOMADO DE HEMATOLOGÍA Y HEMATOLOGÍA Y
HEMOSTASIA APLICADO AL HEMOSTASIA APLICADO AL LABORATORIO CLÍNICOLABORATORIO CLÍNICO
IMPACTO DEL INMUNOFENOTIPO IMPACTO DEL INMUNOFENOTIPO EN EL DIAGNÓSTICO DE LOS EN EL DIAGNÓSTICO DE LOS
SINDROMES SINDROMES LINFOPROLIFERATIVOSLINFOPROLIFERATIVOS
CITOGENCITOGENÉTICAÉTICA
CITOMETRCITOMETRÍA ÍA DE FLUJODE FLUJO
MORFOLOGMORFOLOGÍA Y ÍA Y CITOQUÍMICACITOQUÍMICA
BIOLOGBIOLOGÍA ÍA MOLECULARMOLECULAR
DIAGNDIAGNÓSTICOÓSTICO
CLCLÍÍNICANICA
MORFOLOGIA CELULAR
+
CITOQUIMICA
INMUNOFENOTIPO
FAB MIC
GENETICA
REAL OMS1976
1986
1999
2001
CLASIFICACIONES Y SU EVOLUCION
OMS2008
BIOLOGIA MOLECULAR
OMS 2008OMS 2008
DefiniciónDefinición ICD ICD
EpidemiologíaEpidemiología EtiologíaEtiología
CompromisoCompromiso ClínicaClínica
MorfologíaMorfología Variantes Variantes morfológicasmorfológicas
Cito/histoquímicaCito/histoquímica Inmunofenotipo Inmunofenotipo
Genética y Biología molecular Genética y Biología molecular
Factores pronósticos y predictivosFactores pronósticos y predictivos
TerapiaTerapia
MIELOIDES :MIELOIDES : - Neoplasias mieloproliferativas- Neoplasias mieloproliferativas - Neoplasias mieloides y linfoides con- Neoplasias mieloides y linfoides con eosinofilia y anormalidades de PDGFReosinofilia y anormalidades de PDGFR - Neoplasias Mieloproliferativas y - Neoplasias Mieloproliferativas y MielodisplásicoMielodisplásico - SMD- SMD - Leucemias mieloides agudas y - Leucemias mieloides agudas y neoplasias precursoras relacionadasneoplasias precursoras relacionadas - Leucemias Agudas de Linaje Ambiguo- Leucemias Agudas de Linaje Ambiguo
WHO 2008 - TUMORES WHO 2008 - TUMORES HEMATOPOYÉTICOS Y LINFOIDESHEMATOPOYÉTICOS Y LINFOIDES
WHO 2008 - TUMORES WHO 2008 - TUMORES HEMATOPOYÉTICOS Y LINFOIDESHEMATOPOYÉTICOS Y LINFOIDES
LINFOIDES:LINFOIDES:
- Neoplasias linfoides precursoras- Neoplasias linfoides precursoras- Neoplasias maduras B- Neoplasias maduras B- Neoplasias maduras T y NK- Neoplasias maduras T y NK- Linfoma Hodgkin- Linfoma Hodgkin- Desórdenes linfoproliferativos- Desórdenes linfoproliferativos asociados a inmunodeficienciasasociados a inmunodeficiencias- Neoplasias histiocíticas y dendríticas- Neoplasias histiocíticas y dendríticas
SSíntomas y signosíntomas y signos LaboratorioLaboratorio
DIAGNÓSTICO DE NEOPLASIAS HEMATOLÓGICAS
MorfologMorfología ía + citoqu+ citoquímicaímica
CitogenCitogenéticaética
InmunofenotipoInmunofenotipo
BiologBiología molecular/FISHía molecular/FISH
Fuentes biológicasFuentes biológicas
Médula óseaMédula ósea
Sangre periférica Sangre periférica
Líquidos corporales Líquidos corporales (cavidades,lavados) (cavidades,lavados)
Tejidos sólidos (piel, ganglios linfáticos, Tejidos sólidos (piel, ganglios linfáticos, otrosotros))
ProcesamientoProcesamiento
Recepción: datos clínicos y dx. presuntivoRecepción: datos clínicos y dx. presuntivo
Lisado glóbulos rojos no nucleados (muestras Lisado glóbulos rojos no nucleados (muestras hematológicas)hematológicas)
Lavado y filtrado (muestras no hematológicas)Lavado y filtrado (muestras no hematológicas)
Aplicación de Ac : paneles (fases)Aplicación de Ac : paneles (fases)
Adquisición y almacenamiento de dataAdquisición y almacenamiento de data
Análisis e interpretaciónAnálisis e interpretación
Impresión e informeImpresión e informe
La célulaLa célula
Características físicas :Características físicas : Tamaño, forma celular y nuclear, Tamaño, forma celular y nuclear, complejidad celular o granularidad, etc.complejidad celular o granularidad, etc.
Características biológicas:Características biológicas: composición composición bioquímica, partículas lipo proteicas, bioquímica, partículas lipo proteicas, antígenos RNA, DNA, antígenos RNA, DNA,
Ambas sufrenAmbas sufren modificacionesmodificaciones durante durante los estadíos de maduraciónlos estadíos de maduración
COMPARTIMENTOS CELULARES
MEMBRANA CELULAR :
>CDs
CITOPLASMA : MPO, CD79a, Ig, CD22, CD3
NÚCLEO : TdT
HEMATOPOYESIS
Stem cell
Lymphoid precursor
Myeloid precursor
T-lymphocytesB-lymphocytesNK-cellsPlasmacytoid DC
Erythroid cellsMegakaryocytic cellsNeutrophilsMonocytesMonocytic DCEosinophilsBasophilsMast cellsMyeloid DC
10 10 10 10 100 1 2 3 4
10277.008CD45 PERCPCY5,5 ->
MMÉDULA ÓSEA NORMALÉDULA ÓSEA NORMAL
Rojos nucleados
Neutrófilos
Monocitos
CD34+ HPC
Eosinófilos
Linfocitos
DISTRIBUCIÓN DE POBLACIONES EN MÉDULA DISTRIBUCIÓN DE POBLACIONES EN MÉDULA ÓSEA NORMALÓSEA NORMAL
SUBPOBLACIONES MO % NORMAL MO% CD34+ 1.1 0.6 (0.3-2.6)% CD34+ y/o CD117+ 2.2 1.4 (0.6-6)% Eritroide 4.7 2.1 (2-9)% Neutrófilos 67 6.1 (57-80)% Monocitos 4.3 1.4 (2-6.5)% Eosinófilos 2.5 1.3 (0.8-5)% Basófilos 0.4 0.7 (<0.1-2.4)% Mastocitos 0.02 0.01 (<0.03)% Plasmáticas 0.2 0.2 (0.01-0.5)% Linfocitos B maduros 2.9 1.5 (1.6-6.3)% Linfocitos B precursores 0.9 1.5 (0.1-3.9)% Linfocitos T 9.2 4.5 (2.6-18)% Linfocitos NK 2.8 1.4 (0.7-5)
ANTANTÍGENOS Y LINAJESÍGENOS Y LINAJES LINAJ E T Y NK
LINAJ E B MIELOIDE INMADUREZ
TCR αβ/ γδ CD3 (Sm,Cy)
CD79a , I g M, CD22 I g D, I g A, I g G, k, l
MPO CD33, CD13 Lisozima
TdT, CD34, CD117,
CD1a, CD2,
CD4, CD5,
CD7, CD8,
CD10, CD19
CD20, CD11c
CD25, FMC7
CD103
CD14, CD15,
CD16,
CD64,CD11b
CD38
HLA-DR
CD56, CD57
CD16
Gly-A, CD71,
CD41a ,CD61
FITC PE PerCP/Cy5.5 APCcCont. cCont. CD45 CD34nTdt cMPO CD45 CD34cCD3 CD7 CD45 CD34CD19 cCD79a CD45 CD34CD20 CD10 CD19 CD34sCont. sCont. CD45 CD34HLADR CD117 CD45 CD34HLADR CD123 CD45 CD34CD11b CD13 CD45 CD34CD15 CD16 CD45 CD10CD36 CD64 CD45 CD14CD33 CD61 CD45 CD34CD71 GphA CD45 CD34CD2 CD56 CD45 CD34
COMBINACIONES X 4 FL
¿ ¿ QUÉ CARACTERIZA A LAS CQUÉ CARACTERIZA A LAS CÉÉLULAS NORMALES ? LULAS NORMALES ?
ExpresiónExpresión del linaje celular y estadío de maduración.del linaje celular y estadío de maduración.
¿ EN QU¿ EN QUÉ É DIFIEREN LAS ANORMALES ? DIFIEREN LAS ANORMALES ?
Reflejan desarreglos de expresión proteica conReflejan desarreglos de expresión proteica con
fenotipos aberrantes con o sin anomalías genéticasfenotipos aberrantes con o sin anomalías genéticas
asociadas asociadas
CARACTERIZACICARACTERIZACIÓÓN INMUNOFENOTN INMUNOFENOTÍÍPICAPICA
DE LAS CDE LAS CÉÉLULAS LULAS
APLICACIÓN CLAPLICACIÓN CLÍÍNICA EN NICA EN NEOPLASIAS NEOPLASIAS
LINFOHEMATOPOYÉTICASLINFOHEMATOPOYÉTICAS DIAGNDIAGNÓÓSTICOSTICO
Identificación de poblacionesIdentificación de poblaciones CLASIFICACIÓNCLASIFICACIÓN
LinajesLinajesEstadíos de maduraciónEstadíos de maduraciónFenotipo/genéticaFenotipo/genética
PRONPRONÓSÓSTICOTICO MONITORIZACIMONITORIZACIÓÓN DEL TRATAMIENTON DEL TRATAMIENTO
Fenotipos aberrantesFenotipos aberrantes
Intensidad fluorescente anormal por Ac Intensidad fluorescente anormal por Ac
Ausencia o sobreexpresión de AcAusencia o sobreexpresión de Ac
Expresión asincrónica madurativaExpresión asincrónica madurativa
Maduración/compartimento biológicoMaduración/compartimento biológico
Curva de maduración anormalCurva de maduración anormal
ExpresiExpresión antigénica de varios linajesón antigénica de varios linajes
%%LA BifenotLA Bifenotípicaípica 100100
LLA-TLLA-T 9999LLA-BLLA-B 9595
DLPC-BDLPC-B 9595GammapatGammapatía monoclonalía monoclonal 9090
LMALMA 7575DLPC-TDLPC-T NANA
SMD/SMPSMD/SMP NANA
FRECUENCIA DE FENOTIPOS ABERRANTES POR FRECUENCIA DE FENOTIPOS ABERRANTES POR
CITOMETRIA DE FLUJOCITOMETRIA DE FLUJO
ORIGEN Y MADURACION : LINFOCITOS B
MEDULAOSEA :
PRECURSOR
SANGREGANGLIO L.
BAZO, OTROS:PERIFERICO
Stem Cell
Pro B
TdT
B Común
Pre B
TdT
TdT
TdTHLA-DR
HLA-DR
HLA-DR
HLA-DR
19
19
79a
10
10
79a
19
20
20
34
CyIgM
34
34
79a
SmIg
HLA-DR 19
79a
20
B Madura
Linf B Naïve circulante
INMUNOFENOTIPO DE PRECURSORAS INMUNOFENOTIPO DE PRECURSORAS B NORMALES - MB NORMALES - MÉDULA ÓSEAÉDULA ÓSEA
CD34
TdT
CD38
CD45
CD10
CD19CD22 CD20
I II III IV
CyIgM
SmIgM
Precursores B-ALL: CD79a+ CD19+ CD34+ o -
- B I ó pro-B (CD10-/IgM-/CD20-) - B II ó común (CD10+/IgM-/CD20+) - B III ó pre-B (CD10+/CyIgM+/CD20+) - B IVó � madura (CD10-/SmIgM+/CD20+)
Precursor T-ALL:- T I (CD7+/CyCD3+)- T II (CD2+ y/o CD5+ y/o CD8+)- T III (CD1a+/CyCD3+)- T IV (CD1a-,SmCD3+)
CLASIFICACIÓN DE MADURACIÓN DE
PRECURSORES LINFOIDES
“FLOW CYTOMETRIC IMMUNOPHENOTYPING OF PRECURSOR
B-ALL WITH STANDARDIZED TRIPLE-STAININGS”
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
P Lucio, G Gaipa et al., Leukemia, 2001, 15: 1185-1192
0 64 128 192 256
14563.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14563.002CD45 PerCP ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14563.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14563.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14563.004CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14563.004CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14563.008Anti-TdT FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14563.009Anti-Cy IgM FITC ->
CD45++ CD34++ CD19++ TdT neg a + CD79a +
CD10- CD20- IgM -
Leucemia/Linfoma Linfoblástico de células B precursoras
estadío Pro-B Pro-B.
0 64 128 192 256
15016.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15016.002CD45 PerCP ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15016.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15016.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15016.004CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15016.004CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15016.008Anti-TdT FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15016.009Anti-Cy IgM FITC ->
CD10++ CD19++ CD20 +++ CD79a+ CD45 neg a + TdT neg a + IgM-
Leucemia Linfoma Linfoblástico de células B precursoras ComúnComún .
10 10 10 10 100 1 2 3 4
HG30672.002CD10 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
HG30672.006CD34 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
HG30672.008CD34 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
HG30672.010CD13 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
RFR7690.007CD34 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
RFR7690.008CD10 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
RFR7690.008CD13 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
RFR7690.011CD34 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
UVJ39869.002CD34 PE ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
UVJ39869.004CD13 PE ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
MO21489004CD34 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
AP36452.003CD10 ->
Normal BM CD34+ B-cells
DNA diploid Bcr/abl+ ALL
DNA aneuploid Bcr/abl+ ALL
CD10 CD13 CD34 CD34
CD10 CD13 CD34 CD34
CD10 CD13 CD34 CD34
CD
19
CD
19
CD
19
CD
45
CD
45
CD
45
CD
38
CD
38
CD
38
CD
19
CD
19
Inmunofenotipo de LLA-B con fenotipo BCR/ABLInmunofenotipo de LLA-B con fenotipo BCR/ABL
DIFERENCIACIDIFERENCIACIÓN ÓN T, NK Y DCT, NK Y DC
CD34CD34++
HPCHPC
Lymph/pDCLymph/pDCprecursorprecursor
c-kitc-kit
TTprecursorprecursor TT
pDCpDCprecursorprecursor
NKNKprecursorprecursor
CD34CD34++
CD117CD117++
CD135CD135++
CD38CD38++
HLA DRHLA DR++
CD10CD10--
CD45CD45+/-+/-
CD34+CD34+CD13-/+CD13-/+CD33-/+CD33-/+CD38+CD38+HLA DR+HLA DR+CD10+CD10+CD45RA+CD45RA+
CD44CD44LOLO
CD5CD5++
CD34CD34++
NK/pDCNK/pDCprecursorprecursor
CD44CD44HIHI
CD5CD5--
CD34CD34++
CD34CD34++
CD161CD161++
CD122CD122++
CD56CD56--
BBprecursorprecursor
CD34+CD34+HLADRHLADRHIHI
CD4CD4++
CD40+CD40+CD36+CD36+CD123+++CD123+++
Células
estromales
ORIGEN Y MADURACION : LINFOCITOS T
Early
Thymocyte
Cortical
Thimocyte
Mature
Thymocyte
BONEMARROW
- P.B.- LYMPH NODE- SPLEEN
StemCell
Pro T
2
73 TdT
73
34
TdT
34
2
7
3 TdT
5
73
2
TdT
2
7
3 TdT 1
5
4
8 2
7
1 5
8
43
2
7
5
4
3
αβ
αβ
2
7
5
3αβ
8
2
7
5
3αβ
4
2
7
5
3αβ
8HELPER
/CITO SUPPRESSOR
2
7
5
αβ
27
3γδ
27
3γδ
3
2
7
5
3
αβ
MEDULA
THYMUS
CORTEZA
CITOTOXIC s
(5%)(10%)
αβ LINEAGE γδ LINEAGE
sDoble
Negative5%
Doble
Positive80%
EarlyThymocyte
CommonThymocyte
MatureThymocyte
IMMUNOFENOTIPO DE CIMMUNOFENOTIPO DE CÉLULASÉLULAS NORMALES vs T-ALL BM CD7+NORMALES vs T-ALL BM CD7+
CD4 CD2 CD5
CD5 CD2 CD4 C
D8
CD
3
CD
3
CD
8
CD
3
CD
3
A Porwit-MacDonald, et al. Leukemia 2000: 14, 816-825
A Porwit-MacDonald, et al. Leukemia 2000: 14, 816-825
0 64 128 192 256
14971.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.002CD45 PerCP ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.005CD8 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.006CD7 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.007CD5 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.010Anti-TCR-alpha-beta-1 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.012Anti-TdT FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.012CD3 APC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14971.005CD3 APC ->
CD45++ CD2++ CD4 neg a + CD7+ CyCD3+ a ++ CD5 neg a + CD8 neg a + TdT neg a + TCRs neg CD1a neg CD34 neg CD10 neg
Leucemia/Linfoma Linfoblástico- Células T precursorasLeucemia/Linfoma Linfoblástico- Células T precursoras
103
102
101
SEGMENTADOMETAMIELOCITOMIELOCITOPROMIELOCITOMYELOBLASTO
CD34
HLA-DR CD117
CD13
CD33
CD11b
CD64
CD65
CD54
CD10
CD35
CD13
CAMBIOS FENOTÍPICOS DE DIFERENCIACIÓN NEUTROFÍLICA NORMAL
MPO
CD15
CD16
SERIE MIELOIDE : SERIE MIELOIDE : Maduración normal y subpoblacionesMaduración normal y subpoblaciones
SERIE MIELOIDE : SERIE MIELOIDE : Maduración normal y subpoblacionesMaduración normal y subpoblaciones
10 10 10 10 100 1 2 3 4
10944.005CD36 FITC ->
DIFERENCIACIÓN MONOCÍTICA EN MO NORMAL
CD36-FITC
CD
64
-PE
HLADR CD64 CD36 CD14 IREM2
10 10 10 10 100 1 2 3 4
12784.031MAR FITC -> IREM-2 FITC
CD
14
-PE
CTIF b11DC
EP 61DC
CD34/ CD10 APC
MON2-L.N.002
10 10 10 10 100 1 2 3 4
MON2-L.N.002CD11b FITC ->
Maduración de neutrófilos
CD11b-FITCCD11b-FITC
CD
16
-PE
CD34/CD10-APC
103
102
101
CAMBIOS FENOTÍPICOS DE MADURACIÓN NORMAL DE CÉLULAS DENDRÍTICAS PLASMACITOIDES EN MO
ESTADÍO I ESTADÍO IVESTADÍO IIIESTADÍO II
CD 123 PE
HLA DR PERCP
CD 34 APC
CD 117 APC
CD 33 APC
CD 36 FITC
BDCA2 PE
BDCA4 PE
CAMBIOS FENOTCAMBIOS FENOTÍPICOS DURANTE LA DIFERENCIACIÓN ÍPICOS DURANTE LA DIFERENCIACIÓN NORMAL DE MASTOCITOSNORMAL DE MASTOCITOS
CD34
CD203c
HLA-DR
cytB12 (Tryptase)
FceRI
CD117
cytG4 (Triptasa)
cytG3 (Triptasa)
CAMBIOS FENOTCAMBIOS FENOTÍPICOS DURANTE ÍPICOS DURANTE DIFERENCIACIÓN DE BASÓFILOSDIFERENCIACIÓN DE BASÓFILOS
CD34
HLA-DRCD117
FceRI
CD123
CD203
2D7
0 64 128 192 256
14939.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.002CD45 PerCP ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.003CD15 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.004CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.005CD8 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.007Anti-HLA-DR FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.008CD64 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.009CD71 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14939.011Anti-Myeloperoxidase ( ->
CD45++ CD13+ CD34+ a ++ CD33+ a ++ CD15 + HLA-DR++ CD71+ CD117+ a ++ MPO+ CD64 neg a +
Negativas: CD4, CD7, CD56, CD14, CD11b
Leucemia Aguda Mieloide, no Promielocítica,componente monocítico maduro, probable FAB M2.
0 64 128 192 256
14558.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14558.002CD45 PerCP ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14558.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14558.002CD13 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14558.003CD15 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14558.005CD8 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14558.007Anti-HLA-DR FITC ->
CD45++ CD33++ hom CD13+ het CD15 neg a + Negativas: CD34 HLA-DR CD2 CD56
Leucemia Aguda Promielocítica con t(15;17). FAB M3 clásica
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14558.006CD7 FITC ->
Diagnosis Genetic Aberrant immunophenotype
B-ALL t(9;22)* CD34hi,CD10+,CD38lo,CD13lo
t(12;21) CD34het,CD10+,CD20-,CD13lo
11q23/t(4;11) CD34+,CD10-,7.1+,CD15+
AML t(15;17) CD34-/+,CD15-/lo,CD2-/
lo,CD13het
Inv(16) MPOhi,CD2-/lo
t(8;21) CD19+,CD56+
11q23 CD56+,7.1-/+,CD19-/lo,CD2-/+
AL: GENOTYPIC-PHENOTYPIC ASSOCIATIONS
GENGENÉÉTICA Y LEUCEMIASTICA Y LEUCEMIASAML-M2 con t(8;21) AML1/ETOAML-M2 con t(8;21) AML1/ETO: 2/3 de novo : 2/3 de novo CD19+ , y usualmente CD34+. Favorable.CD19+ , y usualmente CD34+. Favorable.AML-M2 con t(8;21)AML-M2 con t(8;21) : 1/2 de novo expresan : 1/2 de novo expresan CD56, periodo corto de remision y disminucion CD56, periodo corto de remision y disminucion de sobrevida. [Arber,D. AJCP Ene2002;117(3)]de sobrevida. [Arber,D. AJCP Ene2002;117(3)]AML-M3 con t(15;17) PML/RARAML-M3 con t(15;17) PML/RARαα:: HLA-DR-, HLA-DR-, CD15-. Favorable.CD15-. Favorable.AML-M3 variante ,no t(15;17):AML-M3 variante ,no t(15;17): HLA-DR+, CD15+ HLA-DR+, CD15+AML-M3 con CD56+:AML-M3 con CD56+: recaída temprana y/o recaída temprana y/o resistencia a ATRA.resistencia a ATRA.AML-M7 con t(1;22) OTT/MAL:AML-M7 con t(1;22) OTT/MAL: CD61,CD41,HLA- CD61,CD41,HLA-DR con MPO-, CD13-, CD33-, CD117-, DR con MPO-, CD13-, CD33-, CD117-, CD34-,CD15, CD14-CD34-,CD15, CD14-
Hrusak, O y Porwit-MacDonald. Leukemia 2002, Sep16, 1233-1258
ENFERMEDAD ENFERMEDAD MMÍÍNIMA RESIDUALNIMA RESIDUAL
Factores que influyen en la repuesta a la Factores que influyen en la repuesta a la terapia en pacientes con Leucemia Agudaterapia en pacientes con Leucemia Aguda
LEUKEMIA CELL
Umbral tumoral
Crecimiento cel
- Resistencia a drogas
Terapia
Dosis
Interacción
Huesped
Edad
Farmacogenómica
Respuesta a terapia
British Journal Haematology 2003;121,823-838
Morfología
EMR
TREATMENT
1010
108
1 célula detectada entre
10,000 normales
0 64 128 192 256
15550.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15550.002CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15550.003CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15550.005CD38 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15550.009CD5 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15550.009CD5 FITC ->
0 64 128 192 256
15117.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15117.002CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15117.005CD5 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15117.008CD38 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
15117.005CD5 FITC ->
DLPC 20,000 eventos totales (05/01/07) 3,79%
MRD 426,180 eventos totales y 1,147 eventos CD19 (04/07/07) 0,17%
Enfermedad Mínima ResidualEnfermedad Mínima Residual
R1
R2
R3R6
R4R13
R7R8 R9
R13
R10
R11R12R13
File: PT 5 .BM.012
Acquisition Date: 13-Jun-01
Gate: G1
Gated Events: 3341
Total Events: 3387
Gate Events % Gated % Total
G1 3341 100.00 98.64
G2 353 10.57 10.42
G3 2180 65.25 64.36
G4 280 8.38 8.27
G5 195 5.84 5.76
G6 133 3.98 3.93
G7 2536 75.91 74.87
G8 70 2.10 2.07
G9 166 4.97 4.90
G10 173 5.18 5.11
G11 150 4.49 4.43
G12 2674 80.04 78.95
G13 168 5.03 4.96
G14 133 3.98 3.93
G15 2180 65.25 64.36
G16 353 10.57 10.42
File: PT 5 .BM.012
Acquisition Date: 13-Jun-01
Gate: G16
Gated Events: 353
Total Events: 3387
Gate Events % Gated % Total
G1 353 100.00 10.42
G2 353 100.00 10.42
G3 0 0.00 0.00
G4 166 47.03 4.90
G5 109 30.88 3.22
G6 3 0.85 0.09
G7 10 2.83 0.30
G8 17 4.82 0.50
G9 113 32.01 3.34
G10 105 29.75 3.10
G11 130 36.83 3.84
G12 32 9.07 0.94
G13 32 9.07 0.94
G14 3 0.85 0.09
G15 0 0.00 0.00
G16 353 100.00 10.42
File: PT 5 .BM.012
Acquisition Date: 13-Jun-01
Gate: G15
Gated Events: 2180
Total Events: 3387
Gate Events % Gated % Total
G1 2180 100.00 64.36
G2 0 0.00 0.00
G3 2180 100.00 64.36
G4 8 0.37 0.24
G5 43 1.97 1.27
G6 0 0.00 0.00
G7 2046 93.85 60.41
G8 29 1.33 0.86
G9 28 1.28 0.83
G10 36 1.65 1.06
G11 3 0.14 0.09
G12 2072 95.05 61.18
G13 61 2.80 1.80
G14 0 0.00 0.00
G15 2180 100.00 64.36
G16 0 0.00 0.00
File: PT 5 .BM.012
Acquisition Date: 13-Jun-01
Gate: G14
Gated Events: 133
Total Events: 3387
Gate Events % Gated % Total
G1 133 100.00 3.93
G2 3 2.26 0.09
G3 0 0.00 0.00
G4 11 8.27 0.32
G5 23 17.29 0.68
G6 133 100.00 3.93
G7 23 17.29 0.68
G8 5 3.76 0.15
G9 18 13.53 0.53
G10 22 16.54 0.65
G11 5 3.76 0.15
G12 27 20.30 0.80
G13 71 53.38 2.10
G14 133 100.00 3.93
G15 0 0.00 0.00
G16 3 2.26 0.09
CCÁÁ
LCU
LO D
E
EM
RLC
ULO
DE
E
MR
CALC. EMR Version3.lx
SINDROMES SINDROMES LINFOPROLIFERATIVOS LINFOPROLIFERATIVOS CRCRÓÓNICOS-NEOPLASIAS NICOS-NEOPLASIAS
DE CDE CÉÉLULAS MADURASLULAS MADURAS
PANEL BASE - DLPCPANEL BASE - DLPC
FL-1FL-1 FL-2FL-2 FL-3FL-3 FL-4FL-4
Tubo 1*Tubo 1* CD10CD10 CD20CD20 CD45CD45 CD19CD19
Tubo 2Tubo 2 kappakappa CD20CD20 CD19CD19
Tubo 3Tubo 3 lambdalambda CD20CD20 CD19CD19
Tubo 4Tubo 4 CD5CD5 CD23CD23 CD19CD19
Tubo 5Tubo 5 CD8CD8 CD4CD4 CD45CD45 CD3CD3
Tubo 6Tubo 6 CD13CD13 CD11bCD11b CD45CD45 CD34CD34
* Previo control sin anticuerpos
Panel complementario Linfoide B Panel complementario Linfoide B CD5+CD5+
FL-1FL-1 FL-2FL-2 FL-3FL-3 FL-4FL-4
Tubo 1Tubo 1 CD38CD38 CD20CD20 CD19CD19
Tubo 2Tubo 2 IgMIgM IgDIgD CD19CD19
Panel complementario Linfoide B CD5 -Panel complementario Linfoide B CD5 -
FL-1FL-1 FL-2FL-2 FL-3FL-3 FL-4FL-4
Tubo 1Tubo 1 CD11cCD11c CD20CD20 CD19CD19
Tubo 2Tubo 2 CD103CD103 CD25CD25 CD19CD19
Tubo 3Tubo 3 IgMIgM IgDIgD CD19CD19
SLPC : Pan B CD5 +SLPC : Pan B CD5 +
CD10CD10 CD23CD23 CD103CD103 Cy D1Cy D1 FMC7FMC7 CD43CD43 IgIg
CLLCLL -- ++ -- -- -- ++ kappa kappa -/+-/+
SLLSLL -- ++ -- -- -- ++ LambLamb -/+-/+
PLL*PLL* -- -- -- -- ++ -- IgMIgM
MCLMCL -- -- -- ++ ++ ++ lamblamb
LBLLBL -- -- -- -- -- -- ++
* CD5+ en 1/3 de casos
SLPC : Pan B CD5 -SLPC : Pan B CD5 -CD10CD10 CD23CD23 CD43CD43 CD11cCD11c CD30CD30 CD38CD38 IgIg CyD1CyD1 Bcl6Bcl6
LFLF ++ -- -/+-/+ -- -- -- +/-; +/-; -- --
LBLLBL ++ -- -- -- ++ -- ++ -- ++
MWMW -- -- +/-+/- -- -- + + ++ -- --
LEMLEM -- -- -- -- -- -- +; +; -- --
HCLHCL -- -- -- ++ -- -- +; +; -- --
MMMM -- -- -- ++ -- ++ +;+;// -- --
MALTMALT -- -- +/-+/- +/-+/- -- -- IgMIgM -- --
BuLBuL ++ -- -- -- -- -- +; +; -- ++
PLLPLL -- -- -- -- -- -- ++ -- --
Otros marcadores : HCL(CD25,CD103), LBL(bcl-2) MM(CD56, CD138) ,
LBL-variante anaplásica(IHQ: Cy ALK nuclear Anaplásico verdadero T)
10 10 10 10 100 1 2 3 4
LDSA08.002CD19 PCy5 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
LDSA08.002CD22 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
LDSA05.006Lambda FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
LDSA03.002CD22 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
LDSA03.002CD19 PCy5 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
LDSA03.006Lambda FITC ->
0 256 512 768 1024
LDSA03.004FSC-Height ->
B-CLPD: ABERRANT PHENOTYPES
Normal PB
B- CLPD PB
0 256 512 768 1024
LDSA02.006FSC-Height ->
B-cellsT-cells
T-cellsNormal B-cells
Leukemic B-cells
DESORDEN LINFOPROLIFERATIVO CRÓNICO - B
PB NORMAL
PB ANORMAL
CD45 ++ a +++ CD19 + CD20 + kappa + CD5 + CD23
neg a + IgD+
Negativas a : CD10 CD34 lambda CD38 IgM
DLPC-B : Leucemia Linfática Crónica/Linfoma de linfocitos
pequeños
0 64 128 192 256
14965.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.002CD19 APC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.002CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.002CD10 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.003Anti-Kappa FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.004Anti-Lambda FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.005CD5 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.006CD8 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.009CD11c FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.010CD103 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14965.012Anti-Sm IgM FITC ->
CD45++ CD19+++ CD20+++ CD11c,++ CD25+ CD103+
Negativas: CD5, CD23, CD10, CD34, kappa, lambda, IgM, IgD .
Desorden Linfoproliferativo crónico B, Hairy Cell Leukemia
0 64 128 192 256
14783.002Forward Scatter ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.002CD45 PerCP ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.002CD38 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.002CD19 APC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.002CD19 APC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.003CD38 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.004CD38 FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.005CD38 FITC ->
CD38++ CD56+ CD28+ CD117++ CD138++ a ++
Negativas: CD45, CD19, Lambda, Kappa, Sm IgG, Sm IgA.
Desorden Linfoproliferativo Crónico, Neoplasia Maligna de Células Plasmáticas
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.009Anti-Kappa FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
14783.010Anti-Lambda FITC ->
DLPC-B BICLONAL O COMPUESTODLPC-B BICLONAL O COMPUESTO
LLC LLC // HCLHCL
Diagnóstico
typCLL
atypCLL
PLL
HCL
LPL
SMZL
FL
MCL
LCL
Total
Casos/total
12/353
4/29
0/5
3/13
0/12
1/14
0/22
1/19
2/10
23/477
% de casos
Incidencia de Biclonalidad del DLPCIncidencia de Biclonalidad del DLPC
(Sanchez et al, Blood, 2003)
3
14
0
23
0
7
0
5
20
4,8
Panel complementario Linfoide T/NKPanel complementario Linfoide T/NK
FL-1FL-1 FL-2FL-2 FL-3FL-3 FL-4FL-4
Tubo 1Tubo 1 CD7CD7 CD56CD56 CD3CD3
Tubo 2Tubo 2 CD5CD5 CD2CD2 CD3CD3
Tubo 3Tubo 3 CD5CD5 CD25CD25
Tubo 4Tubo 4 TCRTCRαβαβ TCRTCRγδγδ
CD30 : “Linfoma anaplásico” no por CF
CD45 ++ CD5 ++ CD4 ++ a +++ SmCD3 ++ CD25 + TCRαβ
+ a ++ CD2 neg a +
Negativas a: CD7 CD8 CD56 TCRγδ CD34 CD10
Desorden Linfoproliferativo Crónico de estirpe linfoide T,
probable ATL
10 10 10 10 100 1 2 3 4
003CD3 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
005Vb16 FITC Vb17 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
006Vb20 FITC Vb5.1 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
007Vb13.6 FITC Vb8 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
008Vb12 FITC Vb2 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
003Vb3 FITC Vb7 ->
Leucemias de células T: Clonalidad
Normal Leucémicas
10 10 10 10 100 1 2 3 4
PAF9989.001CD3 APC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
PAF9989.001CD8/Lambda FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
PAF9989.001CD4/CD19 PCy5 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
PAF9989.001CD8/Lambda FITC ->
CD
56 /
sIg
kap
pa
- P
E
Tra
ns
form
ed
S
SC
CD8 / sIg lambda - FITCCD3 - APC
CD8 / sIg lambda - FITC
CD
4 /
CD
19 P
Cy5
CD4 / CD19 - PCy5
CD
3 -
AP
C
DETECCIDETECCIÓÓN RN RÁÁPIDA DE NEOPLASIAS MALIGNAS PIDA DE NEOPLASIAS MALIGNAS EN ASPIRADOS DE GANGLIOS LINFEN ASPIRADOS DE GANGLIOS LINFÁÁTICOSTICOS
10 10 10 10 100 1 2 3 4
PAF9989.001CD4/CD19 PCy5 ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
PAF9989.001CD8/Lambda FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
9663.001CD8/lambda FITC ->
10 10 10 10 100 1 2 3 4
9663.001CD4/CD19 PERCP/CY5.5 ->
CD
56 /
sIg
kap
pa
- P
E
CD8 / sIg lambda - FITCCD4 / CD19 - PCy5
CD
3 -
AP
C
CD
56 /
sIg
kap
pa
- P
E
CD8 / sIg lambda - FITCCD4 / CD19 - PCy5
CD
3 -
AP
C
NORMAL
B-DLPC
DETECCIDETECCIÓÓN RN RÁÁPIDA DE NEOPLASIAS MALIGNAS PIDA DE NEOPLASIAS MALIGNAS EN ASPIRADOS DE GANGLIOS LINFEN ASPIRADOS DE GANGLIOS LINFÁÁTICOSTICOS