Debe su nombre al bacteriologo danes Christian Gram que desarrolllo la tecnica en 1824

Es una coloracin diferencial empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias.

Bacterilogo Dans Chistiha Gram, que desarroll la tcnica en 1884.

La coloracin Gram es una prueba potente y rpida que nos permite diferenciar dos clases de bacterias:

Gram Positivo

Gram negativo

Las Gram + se tien de morado ya que el colorante se queda atrapado en la capa gruesa de peptidoglucanos que rodea a la clula

Las Gram - tienen una capa de petidoglucano mucho ms delgada es por ello que no retiene el violeta cristal y por esto las clulas se tien con safranina y las observamos rojas

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano. *Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicacin y supervivencia de la bacteria. No tiene membrana externa

Poseen una pared celular ms compleja: -pared celular interna -pared de peptidoglucano - bicapa lipdica externa Membrana externa: forma un saco rgido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromolculas, ofrece proteccin en condiciones adversas Espacio periplasmtico: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmtica y la interna de la membrana externa.

No tiene espacio periplasmtico

La red de murena est muy desarrollada La red de murena presenta una sola capa y llega a tener hasta 40 capas

La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formacin de enlaces peptdicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano

La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de lipopolisacridos situada en la parte externa de la pared celular.

En la tincin de Gram, retienen la tincin Quedan decoloradas. azul

Conservan el complejo yodocolorante

Pierden el complejo yodocolorante

Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.

Pueden ser anaerobios o aerobios

Poseen otros componentes: cidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacridos complejos.

Poseen protenas con concentraciones elevadas.

La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, para la identificacin de microorganismos patgenos, por ejemplo M. tuberculosis. Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl, un bacterilogo y Friedrich Neelsen, un patlogo.

FUNDAMENTO Este mtodo se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cido graso | cidos grasos (por ejemplo, el cido miclico) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistencia | bacilos cido-alcohol resistentes o BAAR. Las Mycobacterium | mico bacterias como Mycobacteriumtuberculosis|M. tuberculosis y Mycobacterium marinum|M. marinum y los parsitos coco (bacteria) | coccdeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.

Variante histolgica Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Losreactivos necesarios para su realizacin son los siguientes: cido peridico 5% Carbol fucsina de Ziehl (fucsina fenicada). Preparar mezclando en elorden dado:a)0,5 g fucsina bsicab)50 cc agua destiladac)5 cc etanol absoluto)2,5 g cristales de fenol derretidos Hematoxilina Alcohol cido 1%: a)Alcohol de 70 b)cido clorhdrico

El procedimiento es el siguiente :Desparafinar e hidratar los cortes cido peridico 5%, 10 min Lavar con agua destilada Fucsina fenicada, 15 min Decolorar en alcohol cido al 1% Lavar con agua destilada Hematoxilina, 10 min Azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio Deshidratar, aclarar y montar preparaciones Resultados BAAR: rojo.Ncleos: azul.

VARIANTE CLSICA O "EN CALIENTE" STA Y LA SIGUIENTE VARIANTES SON PARA PREPARACIONES CITOLGICOS 1)Hacer un frotis de la muestra de esputo. I. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al porta objetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tincin. II. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tincin con los extendidos hacia arriba. Coloque todos los porta objetos orientados uniformemente, con el frotis hacia arriba. Nunca tia ms de 12 portaobjetos a la vez.

2)Dejar el frotis sobre el puente de tincin. 3)Aplicar fucsina-fenicada.III.Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5minutos. Mantenga el calor durante este perodo. 4)Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).I.Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicadapenetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva ose seque el colorante.II.Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con aguacorriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lavesuavemente de manera que el extendido no se barra delportaobjetos. Retire el exceso de agua.

5)Decolorar con alcohol-cido. III. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetos durante 3minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teido. Enjuague con agua una vez ms los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los porta objetos an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la solucin decolorante de 1 a 3 minutos. 6)Aplicar azul de metileno (1 minuto). I.Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1minuto.7)Enjuagar con aguaI. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada porta objetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.II. Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y hagala observacin al microscopio con 10 x 100

En "fro" Hacer un frotis.

Dejarlo en el puente de tincin. Aplicar fucsina-fenicada (solucin con fenol y mayor concentracin defucsina). Dejar en vasos coplin durante 20 minutos. Decolorar con alcohol acido.

Lavar con agua del grifo. Contrastar con azul de metileno

MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS PERFINGES Mycobacterium tuberculosis perfinges es una bacteria responsable de la mayor cantidad de casos de tuberculosis en el mundo. Fue descrito por primera vez el 24 de marzo de 1882 por Robert Koch, de ah su sobrenombre de Bacilo de Koch, quien posteriormente recibira el premio Nobel de Fisiologa o Medicina en 1905. Su genoma est secuenciado, lo que permitir aclarar su relacin con las otras especies del complejo Mycobacterium Tuberculosis. Es una Bacteria Alcohol-cido resistente frecuentemente incolora, aerbica estricta. Su crecimiento est subordinado a la presencia de oxgeno y al valor del pH circundante. Es muy resistente al fro, la congelacin y la desecacin; por el contrario muy sensible al calor, la luz solar y la luz ultravioleta. Su multiplicacin es muy lenta (se divide cada 16 a 20 horas) y ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente, pudiendo retrasar su multiplicacin desde algunos das hasta varios aos. El reservorio natural del M. tuberculosis es el hombre, tanto el sano infectado como el enfermo.

Puede causar enfermedad en cualquier rgano del cuerpo, siendo lo ms frecuente la infeccin en los pulmones, desde donde se disemina a otros rganos por va sangunea o linftica. Los sntomas aparecen cuando las lesiones son ya muy extensas, de forma que el diagnstico se establece cuando la enfermedad est muy avanzada. Los sntomas que la delatan son: fiebre, sudoracin, adelgazamiento, expectoracin purulenta y tos. Provocan lesiones tisulares (tubrculos). Generan una respuesta inmune en donde participan los linfocitos CD4+ y los linfocitos citotoxicos, por su parte las clulas NK (natural killer) se encargan de eliminar macrofagos y linfocitos infectados. In vitro se destruye mediante pasteurizacin a 80 C. El medio de cultivo ms usado y ms adecuado es el de Lowenstein Jensen . Tambin se est utilizando el medio Ogawa. La bacteria requiere por lo menos de 15 dis para presentar un desarrollo visible macroscpicamente sobre el medio de cultivo y necesita hasta 8 semanas de incubacin debindose incubar un promedio de 30 das; sus colonias son de color blanco cremoso, son esfricas, secas, rugosas, opacas, polimorfas y de dimensiones variables. Los laboratorios especializados, realizan pruebas de susceptibilidad antibitica (antibiograma) de las cepas aisladas y que ofrecen resistencia al tratamiento convencional.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.. En la tincin de Gram, retienen la tincin azul por su capa gruesa de peptidoglucanos que rodea a la clula.

Se reconocen dos tipos de filos principales: Firmicutes Actinobacterias

Firmicutes BacillusEs un genero de bacterias en forma de bastn Viven en el suelo, agua del mar y ros, aparte de alimentos que contaminan con su presencia

Listeria

L. monocytogenes, es la especie tpica y es el patgeno causante de listeriosis.

StaphylococcusComprende microorganismos que estn presentes en la mucosa y en la piel de los humanos y de otros mamferos y aves.

Los EstreptococosEstreptococo Alfa-Hemoltico Neumococo S. pneumoniae, causante de neumonia bacteriana, otitis media y meningitis. S. mutans, un contribuyente para caries dental. S. viridans, causa de endocarditis. S. thermophilus, usado en la manufactura de algunos quesos y yogurts.

Estreptococos Beta-Hemolticos Grupo A S.Pyogenes Es el agente causal en las infecciones estreptococicas del grupo A. Grupo B S.Agalactiae causa neumona y meningitis en neonatos

EnterococcusLos enterococos son coco gram positivos que se presentan en parejas, es un organismo facultativo aerobio.

ClostridiumEs un gnero de bacterias anaerbica, bacilos gram positivas, algunas de ellas, son mviles, en general por intermedio de flagelos.

Actinobacterias La mayora de ellas se encuentran en la tierra, e incluyen algunas de las ms tpicas formas de vida terrestre, jugando un importante rol en la descomposicin de materia orgnica .

Actinomyces

Muchos Actinomyces son patgenos oportunistas de los seres humanos y de otros mamferos , particularmente en la cavidad bucal.

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS Las gram negativas tienen una capa de petidoglucano mucho ms delgada es por ello que no retiene el violeta cristal y por esto las clulas se tien de un color rojizo.

Las proteobacterias

Todas las proteobacterias son Gram negativas , con una pared celular formada principalmente de lipopolisacaridos.

Escherichia coli puede causar infecciones intestinales y extraintestinales generalmente graves

Salmonella Es un gnero de bacterias que pertenece a la familia enterobacteriaceae, formado por bacilos gram negativos, anaerobios facultativos.

Las espiroquetasSon un filo de bacterias Gram negativas que tienen clulas alargadas y enrolladas helicoidalmente. Se distingue de los dems filos bacterianos por la presencia de unos flagelos especializados denominados filamentos axiales .

Robert Koch fue el descubridor de los bacilos de la tuberculosis en 1882 y del clera en 1883 y premio Nobel de Medicina en 1905. Demostrara la teora germinal de las enfermedades infecciosas de Pasteur aislando los microorganismos que causaban las enfermedades infecciosas estableci adems las condiciones que hacen que un organismo sea considerado el transmisor de una enfermedad, conocidos como Postulados de Koch

Mycobacterium tuberculosis perfinges

Es una Bacteria Alcohol-cido resistente frecuentemente incolora, aerbica estricta. Su crecimiento est subordinado a la presencia de oxgeno y al valor del pH circundante. Su multiplicacin es muy lenta (se divide cada 16 a 20 horas) y ante circunstancias adversas puede entrar en estado latente, pudiendo retrasar su multiplicacin desde algunos das hasta varios aos.

Tincin Ziehl-Neelsen