Cuaderno Microbiología NHD

CUADERNO-GUIÓN DE PRÁCTICAS

DE MICROBIOLOGÍA

GRADO EN NUTRICIÓN HUMANA Y DIETÉTICA

SEGUNDO CURSO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA FACULTAD DE FARMACIA UNIVERSIDAD DE GRANADA

PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA EN EL GRADO DE NUTRICIÓN HUMANA Y DIETÉTICA

CURSO ACADÉMICO 2011-2012

ALUMNO: FECHA DE REALIZACIÓN: TURNO: PROFESOR: MARGARITA AGUILERA GÓMEZ EVALUACIÓN-CALIFICACIÓN:

La elaboración del Cuaderno-Guión de Prácticas ha sido realizada por la Dra. Margarita Aguilera Gómez.

PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA EN EL GRADO DE NUTRICIÓN HUMANA Y DIETÉTICAPRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA EN EL GRADO DE NUTRICIÓN HUMANA Y DIETÉTICAPRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA EN EL GRADO DE NUTRICIÓN HUMANA Y DIETÉTICAPRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA EN EL GRADO DE NUTRICIÓN HUMANA Y DIETÉTICA

PRÁCTICAS DE LABORATORIO 1,5 Créditos (15 Horas de LaboratorioPRÁCTICAS DE LABORATORIO 1,5 Créditos (15 Horas de LaboratorioPRÁCTICAS DE LABORATORIO 1,5 Créditos (15 Horas de LaboratorioPRÁCTICAS DE LABORATORIO 1,5 Créditos (15 Horas de Laboratorio Presenciales Presenciales Presenciales Presenciales)))) TEMARIO PRÁCTICO: TEMARIO PRÁCTICO: TEMARIO PRÁCTICO: TEMARIO PRÁCTICO:

1. Preparación de medios de cultivo. Esterilización. Control de los microor1. Preparación de medios de cultivo. Esterilización. Control de los microor1. Preparación de medios de cultivo. Esterilización. Control de los microor1. Preparación de medios de cultivo. Esterilización. Control de los microorganismos por ganismos por ganismos por ganismos por

métodos físicos y químicos.métodos físicos y químicos.métodos físicos y químicos.métodos físicos y químicos.

1.1.1.1. Efecto de la temperatura sobre la viabilidad de los microorganismos en alimentos. Efecto de la temperatura sobre la viabilidad de los microorganismos en alimentos. Efecto de la temperatura sobre la viabilidad de los microorganismos en alimentos. Efecto de la temperatura sobre la viabilidad de los microorganismos en alimentos. 2.2.2.2. Técnicas de observación de los microorganismos: Tinción de Gram. Tinción de esporas.Técnicas de observación de los microorganismos: Tinción de Gram. Tinción de esporas.Técnicas de observación de los microorganismos: Tinción de Gram. Tinción de esporas.Técnicas de observación de los microorganismos: Tinción de Gram. Tinción de esporas.

3.3.3.3. Técnicas de cultivo de los microorganismos: Técnicas de cultivo de los microorganismos: Técnicas de cultivo de los microorganismos: Técnicas de cultivo de los microorganismos: Aislamiento y recuento de microorganismos.Aislamiento y recuento de microorganismos.Aislamiento y recuento de microorganismos.Aislamiento y recuento de microorganismos.

4.4.4.4. Microbiota Humana: Microbiota Intestinal. Estudio de portadores nasales de Microbiota Humana: Microbiota Intestinal. Estudio de portadores nasales de Microbiota Humana: Microbiota Intestinal. Estudio de portadores nasales de Microbiota Humana: Microbiota Intestinal. Estudio de portadores nasales de

Staphylococcus aureusStaphylococcus aureusStaphylococcus aureusStaphylococcus aureus

ÍNDICEÍNDICEÍNDICEÍNDICE---- CONTENIDO Y DÍAS DE REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICAS CONTENIDO Y DÍAS DE REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICAS CONTENIDO Y DÍAS DE REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICAS CONTENIDO Y DÍAS DE REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICAS

DÍA 1. DÍA 1. DÍA 1. DÍA 1.

---- Normas generales de Trabajo en un L Normas generales de Trabajo en un L Normas generales de Trabajo en un L Normas generales de Trabajo en un Laboratorio de Microbiologíaaboratorio de Microbiologíaaboratorio de Microbiologíaaboratorio de Microbiología

---- Material de uso normal en un Laboratorio de Microbiología Material de uso normal en un Laboratorio de Microbiología Material de uso normal en un Laboratorio de Microbiología Material de uso normal en un Laboratorio de Microbiología

*Práctica 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN. *Práctica 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN. *Práctica 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN. *Práctica 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN.

*Práctica 2. AISLAMIENTO Y/O RECUENTO DE MICROORGANISMOS: *Práctica 2. AISLAMIENTO Y/O RECUENTO DE MICROORGANISMOS: *Práctica 2. AISLAMIENTO Y/O RECUENTO DE MICROORGANISMOS: *Práctica 2. AISLAMIENTO Y/O RECUENTO DE MICROORGANISMOS:

- 2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMAN2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMAN2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMAN2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMANAAAA - 2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS


*Práctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE LOS *Práctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE LOS *Práctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE LOS *Práctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE LOS MICROORGANISMOS EN ALIMENTOSMICROORGANISMOS EN ALIMENTOSMICROORGANISMOS EN ALIMENTOSMICROORGANISMOS EN ALIMENTOS

*Práctica 4. *Práctica 4. *Práctica 4. *Práctica 4. ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus aureusaureusaureusaureus (MICROBIOTA HUMANA)(MICROBIOTA HUMANA)(MICROBIOTA HUMANA)(MICROBIOTA HUMANA)


*P*P*P*Práctica 5. MICROSCOPIO ÓPTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDADráctica 5. MICROSCOPIO ÓPTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDADráctica 5. MICROSCOPIO ÓPTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDADráctica 5. MICROSCOPIO ÓPTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDAD


*Práctica 6. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOTAS: *Práctica 6. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOTAS: *Práctica 6. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOTAS: *Práctica 6. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOTAS: MOHOS Y LEVADURAS.MOHOS Y LEVADURAS.MOHOS Y LEVADURAS.MOHOS Y LEVADURAS.

LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RECUENTOS. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RECUENTOS. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RECUENTOS. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RECUENTOS.


EXAMEN, CUADERNO Y EVALUACIÓN DEL APRENDIEXAMEN, CUADERNO Y EVALUACIÓN DEL APRENDIEXAMEN, CUADERNO Y EVALUACIÓN DEL APRENDIEXAMEN, CUADERNO Y EVALUACIÓN DEL APRENDIZAJE DEL ALUMNOZAJE DEL ALUMNOZAJE DEL ALUMNOZAJE DEL ALUMNO


---- Normas generales de Trabajo en un Laboratorio de Microbiología Normas generales de Trabajo en un Laboratorio de Microbiología Normas generales de Trabajo en un Laboratorio de Microbiología Normas generales de Trabajo en un Laboratorio de Microbiología

* Leer atentamente el guión de prácticas antes de cada experimento.

* Estar atento a cada una de las explicaciones de las prácticas por parte del profesor.

* Mantener las mesas de trabajo libre de objetos personales

* Planificar el trabajo antes de realizarlo. Comprobar que se dispones de todo el material para la realización de la práctica.

* Utilizar siempre bata de laboratorio.

* Los cultivos de microorganismos deben manipularse como potencialmente patógenos, aun cuando las bacterias utilizadas son inofensivas y mínimamente patógenas.

* No fumar o ingerir alimentos en el laboratorio. No beber agua en material de laboratorio.

* Trabajar siempre en la cercanía de un mechero que será el entorno estéril. No guardar material de laboratorio en los bolsillos de las batas.

* Rotular adecuadamente el material que se vaya a incubar o guardar en nevera con el nombre del alumno/grupo de trabajo, fecha y tipo de material.

* Someter a los medios a un control de esterilidad antes de su utilización.

* El material de desecho biológico debe disponerse en recipientes habilitados para ello en el laboratorio, para permitir su posterior descontaminación, limpieza y eliminación.

* Los restos de colorantes deben ser vertidos en los bidones de residuos tóxicos.

* Debe ser comunicado inmediatamente al profesor cualquier accidente personal (cortes, quemaduras, por pequeño que sea, etc) o rotura de material de laboratorio con material biológico.

* Al finalizar la tarea de prácticas diaria debe dejarse el material recogido, comprobar que los mecheros y los grifos están cerrados.

* Lavarse las manos antes de abandonar el laboratorio.

---- Material y aparatos de uso normal en un Laboratorio de Microb Material y aparatos de uso normal en un Laboratorio de Microb Material y aparatos de uso normal en un Laboratorio de Microb Material y aparatos de uso normal en un Laboratorio de Microbiologíaiologíaiologíaiología

Material de laboratorio de Microbiología: Material de laboratorio de Microbiología: Material de laboratorio de Microbiología: Material de laboratorio de Microbiología: 1 , placas de Petri con medio de cultivo sólido; 2,

tubos de ensayo con medio de cultivo líquido (caldo); 3, tubos de ensayo con medio de cultivo sólido; 4, matraz con brazo lateral para turbidimetría; 5, mechero Bunsen; 6, pipetas; 7, microplacas de 96 pocillos; 8, asas de siembra; 9, espátula de Digralski o varilla de vidrio acodada; 10, micropipeta automática; 11, pipeteador manual; 12, puntas de pipeta automática; 13, placas de Petri; 14, Jarra para el crecimiento de microorganismos anaerobios; 15, placas de contacto RODAC; 16, lengüeta o lámina para análisis de superficies.

*Práctica 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN. *Práctica 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN. *Práctica 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN. *Práctica 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIÓN.

Video 1: Preparación de Medios de Cultivos. 7 minutos Video 2: Siembra y Aislamiento: 13 min

Video 3: Microscopio Óptico: 2: 9 min Video 4: Preparación de Tinciones: 6 min

(Material realizado por la Universidad de Sevilla)

Lo podéis volver a ver en Lo podéis volver a ver en Lo podéis volver a ver en Lo podéis volver a ver en www.pomif.eswww.pomif.eswww.pomif.eswww.pomif.es Prácticas de Bacteriología Prácticas de Bacteriología Prácticas de Bacteriología Prácticas de Bacteriología

*Práctica 2. CULTIVO, AISLAMIENTO Y/O RECUEN*Práctica 2. CULTIVO, AISLAMIENTO Y/O RECUEN*Práctica 2. CULTIVO, AISLAMIENTO Y/O RECUEN*Práctica 2. CULTIVO, AISLAMIENTO Y/O RECUENTO DE MICROORGANISMOS: TO DE MICROORGANISMOS: TO DE MICROORGANISMOS: TO DE MICROORGANISMOS:

- 2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMANA2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMANA2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMANA2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMANA

- 2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS

Cultivo de microorganismosCultivo de microorganismosCultivo de microorganismosCultivo de microorganismos: medios líquidos y sólidos, selectivos y diferenciales.

2.1. Aislamiento de microorganismos de muestras fecales

Imagen del Manual Práctico de Microbiología. R. Díaz, C. Gamazo, I. López-Goñi (1995). Ed. Masson, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

Se parte de una muestra fecal de bebé que se mantiene a -80 º C hasta su manipulación. Se hace un aislamiento tanto en un medio nutritivo para mesófilos como el TSA y comparativamente se hace una siembra o aislamiento en medio MRS para la selección de lactobacilos.

MEDIO SELECTIVO

2.2. Recuento de microorganismos mesófilos presentes en un alimento


Se realiza un recuento de Mesófilos totales en un alimento sin tratar y comparativamente con alimento tratado con calor a través de microondas. Se realizan diluciones seriadas de un alimento en caldo nutritivo desde la 10-1 a la 10-4 y se siembra en placa petri 0,1 ml mediante extensión con la espátula de Digralsky.

AISLAMIENTO: AISLAMIENTO: AISLAMIENTO: AISLAMIENTO: Obtención de cultivos puros mediante agotamiento por estría y diluciones seriadas. Recuento de viables.


RECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLESRECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLESRECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLESRECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLES



*Práctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE *Práctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE *Práctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE *Práctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE LOS LOS LOS LOS MICROORGANISMOS EN ALIMENTOSMICROORGANISMOS EN ALIMENTOSMICROORGANISMOS EN ALIMENTOSMICROORGANISMOS EN ALIMENTOS

Efecto de los agentes germicidas (calorcalorcalorcalor, luz ultravioleta, antibióticos) sobre el crecimiento bacteriano.

*Práctica 4. ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE *Práctica 4. ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE *Práctica 4. ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE *Práctica 4. ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE Staphylococcus aureusStaphylococcus aureusStaphylococcus aureusStaphylococcus aureus (MICROBIOTA HUMANA)(MICROBIOTA HUMANA)(MICROBIOTA HUMANA)(MICROBIOTA HUMANA)

Realizar una toma con escobillón estéril y sembrar de forma masiva en una placa de medio selectivo Manitol Salado. Incubar a 37 º C 24 h.


*Práctica 5. MICROSCOPIO ÓPTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDAD*Práctica 5. MICROSCOPIO ÓPTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDAD*Práctica 5. MICROSCOPIO ÓPTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDAD*Práctica 5. MICROSCOPIO ÓPTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDAD

Microscopio óptico compuestoMicroscopio óptico compuestoMicroscopio óptico compuestoMicroscopio óptico compuesto: Partes Principales: A) Base; B) Fuente de Iluminación; C) Diafragma; D) Brazo; E) Platina; F) Macro y Micrométrico; G) Condensador; H) Objetivos; I)

Ocular

OBJETIVOSOBJETIVOSOBJETIVOSOBJETIVOS AUMENTO DEL AUMENTO DEL AUMENTO DEL AUMENTO DEL OBJETIVOOBJETIVOOBJETIVOOBJETIVO

AUMENTO DEL AUMENTO DEL AUMENTO DEL AUMENTO DEL OCULAROCULAROCULAROCULAR

AMPLIFICACIÓN AMPLIFICACIÓN AMPLIFICACIÓN AMPLIFICACIÓN TOTALTOTALTOTALTOTAL

SECO DÉBIL SECO DÉBIL SECO DÉBIL SECO DÉBIL X10X10X10X10 X10X10X10X10 100100100100

SECO FUERTESECO FUERTESECO FUERTESECO FUERTE X40X40X40X40 X10X10X10X10 400400400400

IIIINMERSIÓNNMERSIÓNNMERSIÓNNMERSIÓN X100X100X100X100 X10X10X10X10 1000100010001000

Microscopía: uso y conservación del microscopio. Manejo de muestras en condiciones asépticas. Preparación de frotis bacterianos para tinción. Tinciones simples. Tinción negativa.

Práctica 2. Tinciones diferenciales (tinción de Gram)Práctica 2. Tinciones diferenciales (tinción de Gram)Práctica 2. Tinciones diferenciales (tinción de Gram)Práctica 2. Tinciones diferenciales (tinción de Gram) y específicas (tinción para endosporas). y específicas (tinción para endosporas). y específicas (tinción para endosporas). y específicas (tinción para endosporas). Ubicuidad de los microorganismos: presencia en agua, tierra, alimentos y material seleccionado Ubicuidad de los microorganismos: presencia en agua, tierra, alimentos y material seleccionado Ubicuidad de los microorganismos: presencia en agua, tierra, alimentos y material seleccionado Ubicuidad de los microorganismos: presencia en agua, tierra, alimentos y material seleccionado por los alumnos. por los alumnos. por los alumnos. por los alumnos.

PREPARACIÓN DE LAS TINCIONESPREPARACIÓN DE LAS TINCIONESPREPARACIÓN DE LAS TINCIONESPREPARACIÓN DE LAS TINCIONES


TINCIÓN DE GRAMTINCIÓN DE GRAMTINCIÓN DE GRAMTINCIÓN DE GRAM


ESCURRIR

ESCURRIR

ESCURRIR

TINCIÓN DE ESPORASTINCIÓN DE ESPORASTINCIÓN DE ESPORASTINCIÓN DE ESPORAS


MOVILIDAD MICROBIANAMOVILIDAD MICROBIANAMOVILIDAD MICROBIANAMOVILIDAD MICROBIANA: Observación microscópica de bacterias móviles.

Movilidad entre porta y cubreMovilidad entre porta y cubreMovilidad entre porta y cubreMovilidad entre porta y cubre

Movilidad en gota pendienteMovilidad en gota pendienteMovilidad en gota pendienteMovilidad en gota pendiente

Imagen del Cuaderno de Prácticas de Microbiología I del Grado en Farmacia (Universidad de Granada).


*Práctica 6. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOT*Práctica 6. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOT*Práctica 6. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOT*Práctica 6. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOTAS: AS: AS: AS: MOHOS Y LEVADURAS.MOHOS Y LEVADURAS.MOHOS Y LEVADURAS.MOHOS Y LEVADURAS.

Material necesario: Portaobjetos, cubreobjetos, Azul de Metileno

Microscopio: Objetivos de 10 y 40

Imagen sacada del cuaderno de Prácticas de Microbiología Alimentaria de Ciencia y Tecnología de los Alimentos (Universidad de Granada).

*LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RECUENTOS.*LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RECUENTOS.*LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RECUENTOS.*LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RECUENTOS.

*INRORME FINAL DE LA REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICASINRORME FINAL DE LA REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICASINRORME FINAL DE LA REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICASINRORME FINAL DE LA REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICAS

COMENTARIOS Y NOTAS DEL ALUMNO DURANTE LA REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICASCOMENTARIOS Y NOTAS DEL ALUMNO DURANTE LA REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICASCOMENTARIOS Y NOTAS DEL ALUMNO DURANTE LA REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICASCOMENTARIOS Y NOTAS DEL ALUMNO DURANTE LA REALIZACIÓN DE LAS PRÁCTICAS

BIBLIOGRAFÍA:

- DÍAZ R., GAMAZO C., LÓPEZ-GOÑI I. (1995). MANUAL PRÁCTICO DE MICROBIOLOGÍA. ED. MASSON, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

- MOSSEL, D.A.A., MORENO, B. Y STRUIJK, C.B. (2003).MICROBIOLOGÍA DE LOS

ALIMENTOS. 2ª EDICIÓN. ACRIBIA. ZARAGOZA. ESPAÑA. - MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. Y PARKER, J. (2009). BROCK. BIOLOGÍA DE LOS

MICROORGANISMOS. 11ª EDICIÓN. PEARSON PRENTICE HALL. MADRID. ESPAÑA

- PRESCOTT, L.M., HARLEY, J.P. Y KLEIN, D.A. (2009). MICROBIOLOGÍA 6ª

EDICIÓN. MACGRAW HILL. MADRID.

Documents

Cuaderno Microbiología NHD