BIOQUMICA CLNICA

Prof. Herlei Ribeiro Silva

HISTRICO DA ESPECTROFOTOMETRI A

HISTRICO DA ESPECTROFOTOMETRIA

Pierre Bouguer (Nasceu em Croisic, 16 de Fevereiro de 1698 Faleceu em Paris, 15 de Agosto de 1758) foi um matemtico, fsico e hidrgrafo francs.

Para saber mais sobre Pierre Bouger e suas obras visite o site: http://pt.wikipedia.org/wiki/Pierre_Bouguer

HISTRICO DA ESPECTROFOTOMETRIA Pierre

Bouguer - contribuio

Em 1729, publica Essai d'optique sur la gradation de la lumire (Ensaio de ptica sobre a gradao da luz), cujo objetivo a determinao da quantidade de luz perdida quando esta atravessa uma dada distncia na atmosfera terrestre. Descobre que a luz solar cerca de 300 vezes mais intensa que a da Lua. Este ensaio realmente inovador. Por um lado, o primeiro registo de medidas fotomtricas de luminncia,

HISTRICO DA ESPECTROFOTOMETRIAJohann Heinrich Lambert Nascimento - 26 de Agosto de 1728 Morte - 25 de Setembro de 1777 Nacionalidade - Francs

Para saber mais sobre Johann H. Lambert e suas obras visite o site: http://pt.wikipedia.org/wiki/Fun%C3%A7%C3%A3o_W_de_L

HISTRICO DA ESPECTROFOTOMETRIAAugust Beer fsico e matemtico alemo Nascimento - 31 Julho, 1825 Morte 18 November, 1863

Para saber mais sobre Beer e suas obras visite o site: http://en.wikipedia.org/wiki/August_Beer

Luz?

O que voc entende por

Como voc define a Luz?

A luz uma forma de onda eletromagntica que atravessa o vcuo a uma velocidade de 3 x 1010 cm/seg. Ela classificada em raios infravermelhos (IV), visvel (EV) e ultravioleta (UV), de acordo com o comprimento de onda.

O que comprimento de onda?

Comprimento de onda da luz a distncia entre duas cristas de onda, medida em direo progresso da onda, usualmente expressa pelo smbolo (lmbda). A unidade usada no UV e EV o nanmetro (nm) equivalente a 10-9 metro.

No grfico a baixo, o eixo x representa a distncia e o eixo y representa alguma quantidade peridica, como por exemplo a presso, no caso do som ou o campo eltrico para ondas eletromagnticas ou a altura da gua para uma onda no mar profundo. A altura no eixo y tambm chamada de amplitude da onda.

O comprimento de onda tem uma relao inversa com a frequncia f, a velocidade de repetio de qualquer fenmeno peridico. O comprimento de onda igual velocidade da onda dividida pela frequncia da onda. Quando se lida com radiao electromagntica no vcuo, essa velocidade igual velocidade da luz 'c', para sinais (ondas) no ar,essa velocidade a velocidade na qual a onda viaja.

= comprimento de onda de uma onda sonora ou onda electromagntica; c =velocidade da luz no vcuo = 299.792,458 km/s ~ 300.000 km/s = 300.000.000 m/s

f = frequncia da onda 1/s = Hz.

COR - DEFINIO

uma percepo visual provocada pela ao de um feixe de fotons sobre clulas especializadas da retina, que transmitem atravs de informao pr-processada no nervo ptico, impresses para o sistema nervoso. A cor de um material determinada pelas mdias de frequncia dos pacotes de onda que as suas molculas constituintes refletem. Um objeto ter determinada cor se no absorver justamente os raios correspondentes frequncia daquela cor. Assim, um objeto vermelho se absorver preferencialmente as frequncias fora do vermelho.

COR - DEFINIO

COR - DEFINIO

COR - DEFINIOConsiderando as cores como luz, a cor branca resulta da sobreposio de todas as cores primrias (amarelo, azul, verde e vermelho), enquanto o preto a ausncia de luz. Uma luz branca pode ser decomposta em todas as cores (o espectro) por meio de um prisma. Na natureza, esta decomposio origina um arco-ris.

Exemplo de difrao de luz produzida na natureza.

COR - DEFINIOQuando uma luz incide sobre um material que apresenta uma determinada cor porque ele absorveu todas as cores, menos essa determinada cor. Desta forma, podemos dizer que materiais coloridos apresentam sempre maior absoro em determinados comprimentos de onda. As cores absorvidas e as cores refletidas so complementares e, aps superposio, apresentam cor prxima do branco ou do cinza.

COR - DEFINIO

Mapa de cores: Observar que cada cor sempre a intermediria entre as duas vizinhas e que diametralmente opostas esto as cores complementares.

CONCEITOS GERAISLei de Lambert-Beer A lei de Beer foi independentemente e de maneiras: descoberta diferentes

Pierre Bouguer em 1729, Johann Heinrich Lambert em 1760; August Beer em 1852.

CONCEITOS GERAISLei de Lambert-BeerA

lei de Lambert relaciona a diminuio da intensidade da luz emergente com o aumento da espessura do meio absorvente. lei de Beer relaciona a diminuio de intensidade da luz emergente com o aumento da concentrao do meio absorvente. lei de Lambert-Beer vlida para luz monocromtica.

A

A

Ao

mesmo tempo, uma luz incidente sobre soluo provoca diminuio da

determinada

intensidade energtica na luz emergente. Isto provocado pela parte de luz absorvida.Diagrama da absoro de um feixe de luz atravessando uma cubeta de tamanho l. Isto se pode expressar de distintas maneiras:Onde: A a absorbncia (ou absorvncia) I0 a intensidade da luz incidente I1 a intensidade da luz uma vez tendo atravessado o meio l a distncia que a luz atravessa pelo corpo c a concentrao de sustncia absorvente no meio o coeficiente de absoro ou a absorbtividade molar da substncia o comprimento de onda do feixe de luz k o coeficiente de extino

OBSERVAO:

Como j foi ressaltado, a lei de Lambert-Beer somente se aplica luz monocromtica. Isto quer dizer que h necessidade de limitarmos, ao mximo, a faixa de comprimento de onda a ser usada. Para obtermos essa limitao, utilizamos filtros pticos, prismas ou grades de difrao.

OBSERVAO:

A relao entre absorbncia e transmitncia pode ser expressa por uma frmula matemtica:

A = 2 log T%

Grade de difrao

(a)

(b)

Espectro visvel da luz de uma lmpada difratada por uma grade de difrao: (a) Esquema e (b) fotografia.

Prisma

(a) (b)

Espectro visvel da luz de uma lmpada difratada por um prisma: (a) esquema e (b) fotografia.

ESQUEMA DE UM APARELHO:

Imagem AA: Esquema ptico dos principais componentes do espectrofotmetro. As letras representam: (a) fonte de luz, (b) colimador, (c) prisma ou rede de difrao, (d) fenda seletora de X, (e) compartimento de amostras com cubeta contendo soluo, (f) clula foteltrica, (g) amplificador.

ESQUEMA DE UM APARELHO:Fundamentalmente, uma medida quantitativa da absoro ou transmisso de energia provinda de uma luz branca que passa por uma barreira selecionadora de faixa de comprimento de onda, atravessa uma soluo em anlise e esbarra em uma Fonte: http://wfdaj.sites.uol.com.br clula fotoeltrica. Logicamente, a energia final tem intensidade menor que a incidente. A fotoclula transforma a energia luminosa em eltrica, que lida num galvanmetro.

APARELHOS FOTOMTRICOSFotocolormetros:Os fotocolormetros utilizam filtros que somente conseguem limitar as faixas de comprimento de onda ou bandas de passagem superiores a 20 nm. Portanto, so considerados aparelhos de qualidade inferior.

APARELHOS FOTOMTRICOSEspectrofotmetros:A utilizao de prismas ou grades de difrao possibilita um melhor desempenho com relao ao estreitamento das faixas que so inferiores a 20 nm. So considerados aparelhos de qualidade superior.

Espectrofotmetro CELM

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REFLETIR:

Provrbios 23:7 parte (a)

Porque, como ele pensa consigo

Sim, eu possoSe voc PENSA que est vencido, voc est; Se voc PENSA que no ousa no faz; Se voc gostaria de vencer mas PENSA que no pode, quase certo que perder; Se voc PENSA que perder j perdeu, pois neste mundo percebemos que o sucesso comea com a vontade e que tudo um estado de esprito; Se voc PENSA que est superado, j est; Voc precisa PENSAR alto para subir; preciso confiar em si mesmo antes de ganhar o prmio mximo. As vitrias nem sempre vo para o mais forte ou mais rpido;

Mas, cedo ou tarde, quem vence aquele que PENSA que pode!Annimo

CHEGA POR HOJE!!!!

REFERNCIA:1. Secretaria de Estado de Sade do Distrito Federal. 2. http://www.laboratoriofontana.com.br/equi_in terfaceamento.php 3. http://www.santalydia.com.br/ecommerce_sit e/categoria_17051706_3648_ANALISADORES-BIOQUIMICOSBIOQUIMICOS 4. http://www.aptools.com.br/estudo_caso/estu do1.php?id=9 5. Imagem AA: http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/componentes.html