試験研究用

成体マウス・ラット脳からの神経系細胞濃縮ガイドライン

130-107-677

Adult Brain Dissociation Kit, mouse, rat*

130-096-427

gentleMACS™ Octo Dissociator with Heaters

最小限の時間で優れた実験結果を提供できる、最適化されたソリューションをご用意しています。脳の分散から神経系細胞の分離まで、成体脳においても4時間以内に完了します。分離後の細胞はそのまま培養や細胞移入等の実験に使用できます。

www.miltenyibiotec.co.jp

神経科学研究におけるMACSワークフロー

プログラム：

37℃_ABDK_1

組織分散

8等分に縦切り

Adult Brain Dissociation Kit, mouse, rat*

• Debris Removal Solution によるデブリの除去↓

• Red Blood Cell Removal Solution による溶血処理

C Tube

SmartStrainer(70μm)

ｻﾝﾌﾟﾙｸﾘｰﾆﾝｸﾞ

ニューロン

アストロサイト

内皮細胞

オリゴデンドロサイト

ミクログリア

細胞分離

培養ﾌﾛｰｻｲﾄﾒﾄﾘｰ

用手法あるいはautoMACS pro を用いた磁気細胞分離

磁気標識 磁気分離 標識細胞の回収

デブリ、ミエリン片を除去後、赤血球を除去します。

成体脳を単細胞懸濁液に調製します。

分離後の細胞は、すぐに培養やフローサイトメトリー解析に使用できます。

ニューロンMACS Neuro Medium, MACS NeuroBrew-21, L-Glutamine, BDNF (0.01% Poly-L-Lysin coating dish)

アストロサイトMACS Neuro Medium, MACS NeuroBrew-21, L-Glutamine (0.01% Poly-L-Lysin+Laminin coating dish)

オリゴデンドロサイトMACS Neuro Medium, MACS NeuroBrew-21, L-Glutamine, PDGF-AA, FGF-2 (0.01% Poly-L-Lysin coating dish)

ミクログリアDMEM, FCS, L-Glutamine (0.01% Poly-L-Lysin coating dish)

>P7

日齢・週齢

マウス用製品 ラット用製品

*ミクログリアが目的細胞の場合は、Neural Tissue Dissociation Kit (PN)(130-094-802)での分散後、Myelin Removal Beads II によるミエリン片除去をお勧めします。

最大加速・減速3,000 x g

4℃ 10 min

スイングロータ

〒135-0041 東京都江東区冬木16-10 NEX永代ビル5F

TEL：03-5646-8910（代） FAX：03-5646-8911

【 E - m a i l 】 m a c s @ m i l t e n y i b i o t e c . j p

■販売元

学 術 的 な お 問 い 合 せ ：03-5646-9606

機器修理のお問い合せ：0120-03-5645

在庫・納期のお問い合わせ：03-5646-8566

AM9：00～PM5：00

（土日祝日除く）

Neuroscience Research with MACS Products

カラムの種類 最大総細胞数 最大標識細胞数

アストロサイト Anti-ACSA-2 MicroBead Kit, mouse MS 2x10e7 1x10e7 1 x MS 10 μl/10e7 cells

130-097-678 autoMACS 1x10e8 5x10e7 Possel

オリゴデンドロサイト Anti-O4 MicroBeads, human, mouse, rat MS 2x10e7 1x10e7 1 x MS 2.5 μl/10e7 cells

130-094-543 autoMACS 1x10e8 5x10e7 Posseld2

ニューロン Neuron Isolation Kit, mouse LS 2x10e7 1x10e7 1 x LS 20 μl/10e7 cells

130-115-389 autoMACS 1x10e8 5x10e7 Depl05

ミクログリア CD11b MicroBeads, human, mouse MS 2x10e7 1x10e7 2 x MS 10 μl/10e7 cells

130-093-634 LS 4x10e7 2x10e7 2 x LS

autoMACS 1x10e8 5x10e7 Possel

CD11b/c MicroBeads, rat MS 2x10e7 1x10e7 2 x MS 20 μl/10e7 cells

130-105-634 LS 4x10e7 2x10e7 2 x LS

autoMACS 1x10e8 5x10e7 Posseld2

内皮細胞 CD31 MicroBeads, mouse MS 2x10e7 1x10e7 1-2 x MS 10 μl/10e7 cells

130-097-418 autoMACS 1x10e8 5x10e7 Posseld

CD45 MicroBeads, mouse LD 4x10e7 2x10e7 1 x LD 10 μl/10e7 cells

130-052-301 autoMACS 1x10e8 5x10e7 Depletes

カラム　キャパシティー分離試薬細胞タイプ

カラム本数/

プログラムマイクロビーズ使用量

成体脳の分散～各種神経系細胞の分離例

成体脳からの各種神経系細胞の分離スペシャルプロトコルをご用意しています。

アストロサイトの分離

◆ Anti-ACSA-2 MicroBead Kit, m ・・・・・・・・・品番 130-097-678

ACSA-2+細胞を磁気標識し、ポジティブセレクションによりアストロサイトを分離します。

[分散：ABDK 推奨]

オリゴデンドロサイトの分離

◆ Anti-O4 MicroBeads, h,m,r ・・・・・・・・・・・品番 130-094-543

O4+細胞を磁気標識し、ポジティブセレクションによりオリゴデンドロサイトを分離します。

[分散：ABDK 推奨]

ニューロンの分離

◆ Neuron Isolation Kit, m ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・品番 130-115-389

ニ ュ ー ロ ン以 外の 細 胞を磁 気 標識 し 、 非 標 識で ニ ュー ロ ンを 分離し ます 。

[分散：ABDK 推奨]

ミクログリアの分離

◆ CD11b (Microglia) MicroBeads, h,m ・・・品番 130-093-634

◆ CD11b/c (Microglia) MicroBeads, r ・・・・品番 130-105-634

CD11b+細胞を磁気標識し、ポジティブセレクションによりミクログリアを分離します。カラムを2回通すことで純度を高めます。 [分散：NTDK 推奨]

内皮細胞の分離

◆ CD31 MicroBeads, m*・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・品番 130-097-418

◆ CD45 MicroBeads, m・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・品番 130-052-301

CD45+白血球をディプリーションした後、CD31+細胞を磁気標識してポジティブセレクションにより内皮細胞を分離します。 [分散：ABDK 推奨]

ミエリン片の除去

◆ Myelin Removal Beads II (4 mL), h,m,r ・・品番 130-096-733

ミエリン片を磁気標識して除去します。 [分散：NTDK 推奨]

ディプリーション

ネガティブセレクション

ポジティブセレクション

マウス成体脳からアストロサイトの分離～培養

※神経系細胞を磁気分離する際に使用するBuffer は、EDTA不含のPB buffer（0.5% BSA in PBS with Ca2+ and Mg2+) をお勧めしております。

FSC

FSC

SSC

SSC

Ter119-PE

Ter119-PE

分散直後

デブリ・赤血球の除去後

A B

C D

成体脳を分散直後は、大量のデブリ（A）および赤血球（B）が混在しており、その後の細胞分離、培養ならびに解析に影響します。Adult Brain Dissociation Kit に含まれる試薬でデブリ（C）および赤血球（D）を取り除くことで、最適な状態の単細胞懸濁液を調製できます。

GFAP/GLAST

FSC

Anti-ASCA-2-PE

成体マウス脳を分散後、Anti-ACSA-2 MicroBead Kit を用いてアストロサイトを分離しました。ASCA-2+細胞をMACS Neuro Medium+MACS NeuroBrew-21+L-glutamine で培養し、7日後にAnti-GLAST, GFAP抗体で免疫染色を行いました。

マウス成体脳の分散～デブリ・赤血球の除去

培養7日目分離前 分離後

ポジティブセレクション

ポジティブセレクション

ポジティブセレクション

ポジティブセレクション

ABDK: Adult Brain Dissociation Kit / NTDK: Neural Tissue Dissociation Kit / h: human / m: mouse / r: rat

2018年3月現在の情報に基づきます。MACSはMiltenyi Biotec GmbH の登録商標です。記載されていない限り、Miltenyi Biotec社の製品およびサービスは全て研究用です。それ以外の目的に使用しないでください。