HEMATOLOGIA - Hemograma en Equinos

8/9/2019 HEMATOLOGIA - Hemograma en Equinos

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N Ú M E R O 1 4 P R I M E R C U A T R I M E S T R E 2 0 0 6

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Una de las pruebas laboratoriales más empleadas por el veterinario especialista en medi-cina equina actualmente es el hemograma, debido a la facilidad y rapidez de su reali-zación y a la excelente relación entre su coste y la información proporcionada.Los componentes celulares de la sangre pueden reflejar un cambio específico produci-do en un órgano o sistema corporal o, con más frecuencia, reflejan una respuesta gene-ral del individuo frente a la enfermedad.En este trabajo revisamos las técnicas analíticas que se utilizan para valorar los diferen-tes parámetros del hemograma, así como la interpretación de los mismos. Se exponen

también las aportaciones que los nuevos analizadores hematológicos automatizadoshan traído consigo, contribuyendo a mejorar la precisión y exactitud de los parámetrosanalizados y a abrir nuevas expectativas sobre la utilidad práctica de otros parámetrosmenos conocidos.

Rafaela Cuenca Valera, Josep Pastor Milán

Patología General y Médica - Facultad de Veterinaria - Universidad Autónoma de Barcelona

R e s u m e n

C a p í t u l o I I

U t i l i d a d d e l h e m o g r a m a

e n l a c l í n i c a e q u i n a

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a función principal de las

pruebas laboratoriales en-tre las que se encuentra elhemograma, es la de ge-nerar una información queayude al clínico en los

procesos de diagnóstico, toma de decisiones,formulación del pronóstico y manejo y con-trol del paciente (Rowan, 1999). Inclusopara los clínicos con experiencia que confrecuencia son capaces de hacer diagnósti-cos seguros sin contar con pruebas laborato-

riales, entre ellas el hemograma, el uso ade-cuado del mismo le proporciona una dimen-sión añadida en la práctica clínica.

El hemograma, dentro de las pruebaslaboratoriales, es quizá una de las que másse utiliza debido a la facilidad y rapidez desu realización y a la excelente relación entresu coste y la información que proporciona.A este respecto, sólo en contadas ocasionesun hemograma completo sirve como méto-do diagnóstico para una enfermedad con-

creta; con mucha más frecuencia refleja lacondición general del individuo o su res-puesta general frente a la enfermedad(Kidd, 1991).

Los resultados del hemograma hande interpretarse teniendo siempre en cuentael paciente (edad, raza, sexo, aptitud, trata-mientos médicos instaurados, etc.) y losresultados de la exploración clínica que sele ha realizado. La forma en la que la mues-tra se haya recogido y manejado, y la meto-

dología empleada en la determinación delos diferentes parámetros, puede, influirtambién en los resultados obtenidos y, portanto, en su interpretación.

De todas las variables mencionadas,sin duda las que generan una mayor causade variación son la edad y el estado emo-cional del animal (Tablas 1 y 2).

Los équidos domésticos presentanentre si tan sólo diferencias hematológicassutiles (Archer y Jefcott, 1977). La única

diferencia evidente entre los caballos deri-

vados del árabe, denominados de “sangrecaliente” y los caballos de tiro y ponies, ode “sangre fría”, es un hematocrito ligera-mente superior en descanso en los primeros(Tabla 3).

La muestra de sangre se ha de reco-ger con el animal en descanso, antes de rea-lizar ejercicio, y bajo unas condiciones quedisminuyan al máximo la probabilidad decausarle temor o excitación. Con ello seminimiza el efecto de la contracción esplé-

nica (elevaría el valor hematocrito, elrecuento de eritrocitos y la concentración dehemoglobina), y la liberación de adrenalinao corticosteroides (provocan modificacio-nes en el leucograma). El temperamento delcaballo y la técnica empleada en la extrac-ción pueden tener un efecto importantetanto en los valores eritrocitarios como leu-cocitarios del hemograma (Archer yClabby, 1965; Stewart et al., 1970).

La extracción sanguínea se ha de rea-lizar, siempre que sea posible, con el animalen ayunas, para evitar la lipemia postpandrialque puede interferir con los resultados deotras determinaciones y provocar la hemóli-sis in vitro de la muestra. Se debería evitarrecoger la muestra de sangre en las tres horasinmediatas a la administración de una comi-da rica en concentrados o una ración de heno,puesto que en este intervalo se produce unincremento importante en el valor hematocri-

to y también un incremento del 12% en laconcentración de proteínas plasmáticas (Kerry Snow, 1982) debido al aumento de la pro-ducción salivar y a la desviación de líquidosdesde la circulación al tracto gastrointestinal(Clarke et al., 1990; 1998).

Las muestras de sangre se recogennormalmente en tubos de cristal en vacío,con la sal del ácido etilén diaminotetracéti-co (EDTA) como anticoagulante, que pro-longa el tiempo en el que la morfología

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UTILIDAD DEL HEMOGRAMA EN LA CLÍNICA EQUINA

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celular se mantiene intacta. Dado que elEDTA puede causar pseudotrombocitopenia(Hinchcliff et al., 1993) se puede recogertambién un tubo adicional en citrato sódicopara asegurar la fiabilidad del recuento pla-quetario. El análisis debe realizarse tanpronto como sea posible tras la recogida,puesto que los componentes celulares de la

sangre sufren cambios degenerativos a laspocas horas. Si el examen no puede realizar-se rápidamente es mejor hacer una extensiónsanguínea y adjuntarla al tubo de sangrepara asegurar, al menos, que los cambiosque se obervan en la extensión no son varia-ciones provocadas por el almacenaje.

El hemograma comprende la cuanti-ficación de los componentes sanguíneos, así como la observación de las alteraciones ensu composición o morfología. En su estudio

se incluye el recuento de eritrocitos, el valorhematocrito, la concentración de la hemo-globina, el volumen corpuscular medio(VCM), la concentración corpuscular mediade hemoglobina (CCMH), el recuento totaly diferencial de leucocitos, el recuento deplaquetas y el estudio de la morfología celu-lar en las tres líneas.

Los recuentos celulares de eritroci-tos, leucocitos y plaquetas se pueden reali-zar de forma manual con cámara hemocito-métrica de Neubauer y distintos diluyenteso bien de forma automatizada mediantecontadores celulares (véase a continuación)que han aumentado la fiabilidad de losresultados obtenidos y disminuido el tiempoempleado en el análisis. El número de pla-quetas en el caballo es relativamente bajo,comparado con el de otras especies (Fig. 1).

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Tabla III. Rangos hematológicos de normalidad para el caballo

Parámetros Razas de “Sangre Caliente” Razas de “Sangre Fría”

(Basado en 147 caballos (Recogido de la literatura)

clínicamente normales)

Recuento de eritrocitos (x106/µL) 6,8-12,9 5,5-9,5

Concentración de hemoglobina (g/dL) 11,0-19,0 8,0-14,0

Valor hematocrito (%) 32,0-53,0 24-44

VCM (fl) 37,0-58,5 --CCMH (%) 31,0-38,6 --

Recuento total de leucocitos/µl 5.400-14.300 6.000-12.000

Recuento diferencial de leucocitos

Linfocitos 15.000-7.700 --

Monocitos 0-1.000 --

Neutrófilos 2.260-8.580 --

Eosinófilos 0-1.000 --

Basófilos 0-290 ---

Datos obtenidos de Feldman, B. F.; Zinkl, J. G. y Jain, N. C. (2000).

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El recuento manual en cámara llevaasociado un error que puede oscilar entre el10-25%, según la serie celular. Con la utili-zación de los métodos electrónicos losrecuentos pueden verse sometidos a gran-des errores sobre todo si no se realiza uncontrol diario y una calibración periódicadel analizador.

VALOR HEMATOCRITO

Este parámetro es especialmenteútil en el caballo puesto que permite valo-rar y controlar el estado de hidratación deun animal con síntomas de cólico, procesoque es frecuente en esta especie. El valorhematocrito se define como el volumenque ocupan los eritrocitos contenidos en100 ml de sangre (expresado en porcenta-

jes). Se obtiene al centrifugar la sangre conanticoagulante en un capilar de microhe-

matocrito para conseguir la separación deésta en sus tres componentes principales.La sangre se ha de centrifugar aproxima-damente entre 12.000-15.000 rpm durante5’. En la parte distal del tubo se acumulanlos glóbulos rojos, separados del plasmapor una capa delgada blanco-grisácea queincluye los leucocitos y las plaquetas. Enla parte superior la apariencia macroscópi-ca del plasma, permite obtener informa-ción adicional al poder detectar si existe

ictericia, hemólisis o lipemia. Éste es el

método considerado goal standard paraesta determinación.

El valor hematocrito es el parámetromás fiable del hemograma al estar sujeto amenor error técnico que el recuento eritro-citario y la concentración de hemoglobina.Sin embargo, es un parámetro muy pocoestable en el animal, especialmente en razasequinas muy excitables. La contracciónesplénica, cuando se produce, hace que encuestión de minutos entre “en masa” en el

torrente circulatorio un gran reservorio deeritrocitos que normalmente están secues-trados en este órgano (pueden producirseincrementos superiores al 15%).

Los contadores hematológicos elec-trónicos dan un valor hematocrito al que sele denomina packed cell volumen (PCV),que se calcula matemáticamente a partir delnúmero de eritrocitos que el aparato detectay de su tamaño (VCM).

CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA

La hemoglobina se determina espec-trofotométricamente mediante el método dela cianometahemoglobina. Los contadoreshematológicos actualmente disponibles enel mercado también utilizan este método.

La hemoglobina ocupa aproximada-mente un tercio del volumen eritrocitario;por lo tanto, en la mayor parte de las mues-

tras sanguíneas, el valor que se obtengadividiendo el hematocrito por tres se apro-ximará al contenido de hemoglobina en elanimal.

Cuando las muestras presenten hemó-lisis, lipemia o un alto número de cuerpos deHeinz, hay que tener cuidado en la interpre-tación del parámetro, puesto que en estassituaciones varían las propiedades ópticas dela sangre y las lecturas que se realizan de lahemoglobina no son fiables.

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Fgura 1. Plaquetas 100X, Diff-Quick.

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VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO

Y CONCENTRACIÓN MEDIADE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR

El VCM da idea del tamaño medio delos eritrocitos. Los equinos tienen un VCMde 44-54 fL. LA CMHC expresa la relaciónentre el peso de la hemoglobina y el volumende los eritrocitos y es un parámetro muysemejante en todas las especies domésticas.Los nuevos contadores hematológicos derayo láser miden el VCM automáticamente,

y el valor de la CMHC lo miden directamen-te del anàlisis célula a célula, aunque tam-bién se puede calcular matemáticamente:

VCM (fl) = PCV% : n.º eritrocitos x106 /µl X 10

CMHC (g/dl) = Hb (g/dl): PCV% x 100

Estos parámetros, que principalmenteen pequeños animales ayudan a valorar la res-puesta medular frente a las anemia, son menos

útiles en la especie equina puesto que, a dife-rencia de los primeros, en el caballo no se pro-duce la liberación de eritrocitos inmaduros ynucleados en sangre ante una anemia. ElVCM y la CCMH se consideran indicadorespoco sensibles de regeneración periférica,puesto que se requiere de un gran número deeritrocitos macrocíticos e hipocrómicos paradetectar modificaciones en sus valores. ElVCM en un caballo anémico podría aumentaralgo, antes de que el valor hematocrito se

incremente (Weiser et al., 1983). Este cambio,de pequeña magnitud, se demuestra conmayor claridad cuando se utilizan analizado-res automáticos que producen eritrogramasdonde se muestra la distribución del tamañode los eritrocitos (Brown and Darien, 1989).

FROTIS SANGUÍNEO

La evaluación morfológica celularen la extensión de sangre es una parte

importante del hemograma que sirve para

identificar anormalidades no documentadasen los valores cuantitativos obtenidos. Lalectura de la extensión de sangre se ha dehacer de forma sistematizada para evitarpasar por alto algún detalle importante.

A pocos aumentos, utilizando elobjetivo de x10 se observan los bordes de lapreparación para buscar parásitos, célulasparasitadas, grandes células atípicas y agre-gación plaquetar o leucocitaria. En estazona de la extensión las céllulas suelen estar

deformadas o incluso rotas.La zona adecuada para realizar el

recuento diferencial es aquélla en la que loseritrocitos están muy cercanos, tocándosepero sin llegar a superponerse. En el cuerpode la preparación las células tienden a amon-tonarse, siendo difícil apreciar los detalles.

Con el objetivo de x40 se puedeobtener una impresión del recuento de leu-cocitos (bajo, normal o alto) y podríamosrealizar el recuento diferencial leucocita-rio, aunque ciertas células se deben identi-ficar con el objetivo de inmersión. Final-mente, con este último objetivo se lleva acabo el diferencial leucocitario, se examinala morfología celular y se realiza, si esnecesario, una estimación del número deplaquetas.

Serie eritrocitaria

Los eritrocitos del caballo tienenforma discoide bicóncava, y un tamaño de5-6 µm de diámetro. De forma fisiológicase observa la presencia de rouleaux o “pilasde moneda”, hileras de eritrocitos super-puestos los unos a los otros (Fig. 2), lo quegenera que la sangre de esta especie sedi-mente de forma rápida y que los eritrocitosse separen más rápidamente del plasma enlas muestras anticoaguladas, que en otrasespecies.

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Entre los cambios morfológicos quese pueden observar en los eritrocitos equi-nos (Latimer y Andreasen, 2002; Prasse et al., 1981; Korbutiak y Schneiders, 1994)destacamos los siguientes:

• Hipocromia. Son eritrocitos con unazona aumentada de palidez central,indicativos de una deficiencia dehierro. En el caballo, la pérdida cró-

nica de sangre a través del tractogastrointestinal, producida por para-sitación, es probablemente la causamás frecuente de la deficiencia enhierro.

• Anisocitosis. Indica la presencia deeritrocitos de diferentes tamaños.Tiene poca importancia para el clíni-co porque tan sólo informa de laexistencia de algún cambio morfoló-gico que debe ser detectado.

• Policromasia. No se observa en losfrotis sanguíneos de caballo puestoque, como se ha mencionado ante-riormente, los équidos no liberan deforma temprana eritrocitos inmadu-ros de la médula ante una situaciónde anemia. Indica la presencia deeritrocitos jóvenes que han sidoliberados de forma temprana y quese tiñen de tonalidad más azulada alas células maduras por la presencia

de organelas como ribosomas y

mitocondrias.• Esquistocitos. Son fragmentos de eri-

trocitos que se producen por desgarrode éstos, debido a un trauma intra-vascular. Aparecen en animales conneoplasias muy vascularizadas(hemangiosarcoma), con coagula-ción intravascular diseminada o bienen las deficiencias por hierro.

• Acantocitos. Son eritrocitos espicu-lados que presentan una serie de pro-

yecciones de superficie distribuidasde forma no uniforme. Se producenpor alteraciones en la concentraciónde fosfolípidos-colesterol a nivel dela membrana eritrocitaria.

• Equinocitos (crenación). Son eritro-citos que presentan numerosas pro-yecciones en la superficie, cortas,puntiagudas y uniformes en cuantoal tamaño y la forma. Su formaciónpuede ser artefactual o estar asociadaa enfermedad renal, linfoma, picadu-ra de serpiente o producirse en res-puesta al ejercicio (Weiss et al.,1994) asociado aparentemente conalteraciones electrolíticas, especial-mente hiponatremia.

• Esferocitos. Son eritrocitos que setiñen de una tonalidad más intensa ala normal porque tienen un área desuperficie disminuida respecto al

volumen, como resultado de unafagocitosis parcial producida por lapresencia de anticuerpos o comple-mento en su superficie. Su presenciaen la sangre equina no se detecta confacilidad al ser los eritrocitos equi-nos más pequeños y no tener unapalidez central tan evidente como loseritrocitos caninos. Su presenciasugiere una anemia hemolítica inmu-nomediada, producida en el potro

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Fgura 2. Pilas de moneda 100X, Diff-Quick.

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ocasionalmente como consecuencia

de la isoeritrolisis neonatal.• Cuerpos de Heinz. Son inclusiones

pequeñas, eccéntricas, de hemoglo-bina precipitada que protruyen lige-ramente desde el margen celular,provocadas por un daño oxidativodebido a la exposición a agentes oxi-dantes. Se forman por la desnaturali-zación oxidativa de la hemoglobinay su presencia hace que las célulassean menos deformables y, por tanto,

más susceptibles a la hemólisis.Cuando se tiñen con una tinción vitalcomo el nuevo azul de metileno,aparecen de color azul, más eviden-tes que en las tinciones Roma-nowsky. Se pueden forman por laingesta de plantas de la familia

Allium (cebollas y ajos silvestres),de hojas secas de arce ( Acerrubrum), o como consecuencia de laadministración de fenotiacina o azulde metileno (Carlson, 2002; Boyer et al., 2002).

• Eccentrocitos. Son eritrocitos quetienen una zona del citoplasma claray la restante ocupada por Hb con-densada. Son también indicativos deuna exposición a agentes oxidantes yse cree que se forman por alteracio-nes de la membrana eritrocitaria(Stockham et al., 1994).

• Aglutinación. Los eritrocitos apare-cen agregados de forma irregular,como racimos de uva, indicativo deanemia hemolítica inmunomediada(AHIM), que puede estar inducidapor la administración de fármacos,causada por infecciones por Clostri-dium o bien ser idiopáticas. Esimportante distinguir esta alteraciónen la que los eritrocitos se agregande forma desorganizada, de las pilas

de moneda, características de la san-

gre de esta especie. Para ello se mez-cla una parte de sangre con 4-5 par-tes de solución salina, que desharálas pilas, pero no la aglutinación.

• Cuerpos de Howell-Jolly. Son rema-nentes nucleares, pequeños, redon-dos y de color púrpura. Un incre-mento de su concentración se produ-ce en los casos de anemias regenera-tivas, esplenectomía y supresión dela función esplénica.

• Inclusiones. Babesia caballi, Theile-ria equi y Ehrlichia spp.

Serie leucocitaria

La morfología de los leucocitos equi-nos es similar en muchos aspectos a la deotras especies. Las membranas nucleares delos neutrófilos son más irregulares que lasde otras especies, dándole a estos núcleosuna apariencia multilobulada que no debeconfundirse con hipersegmentación. Losmonocitos son similares a los de otras espe-cies. Aparecen tanto linfocitos pequeñoscomo de tamaño moderado. Los linfocitosson células de vida larga (de semanas aaños) que recirculan entre los tejidos linfoi-des y la sangre. El eosinófilo es característi-co, debido a sus múltiples y grandes gránu-los de color rosa-anaranjado. Los basófilosse reconocen con facilidad por sus gránulos

múltiples de color púrpura (Figs. 3 a 7).

• Cambios tóxicos. Los PMNs tóxicospresentan cambios morfológicoscausados normalmente por infeccio-nes bacterianas. Entre estos cambiosestá la granulación tóxica. Su pre-sencia en el caballo sugiere infeccio-nes por bacterias gram negativas oanomalías intestinales que generanuna absorción alta de endotoxinas.

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• Hipersegmentación. Es el resultadode un tiempo de tránsito aumentadode los neutrófilos en sangre; lamayoría de veces por administraciónde corticoides o su liberación endó-gena. El núcleo del PMN presenta

cinco ó más lóbulos unidos por fila-mentos finos.

• Linfocitos reactivos. Presentan unacantidad aumentada de citoplasmaazul oscuro y, en ocasiones, unazona perinuclear clara. Se producencuando hay estimulación antigénica.

En ocasiones se pueden observar en

las extensiones de sangre mórulas de Ehrli-chia ewengi, que aparecen en PMNs y enocasiones en los eosinófilos; o bien E. risticii,que se presenta en monocitos y linfocitos.Aparecen como cuerpos de inclusión pleo-mórficos de color azul grisáceo a azul oscuro.

Interpretación leucocitaria

Durante el primer año de vida elrecuento total de leucocitos no cambia de

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Fgura 3. Linfocito 100X, Diff-Quick.

Fgura 4. Monocito 100X, Diff-Quick.

Fgura 5. Polimorfonuclear neutrófilo 100X, Diff-

Quick.

Fgura 6. Eosinófilo 100X, Diff-Quick.

Fgura 7. Basófilo 100X, Diff-Quick.

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forma significativa, pero si lo hacen los

diferentes tipos leucocitarios. Amedida queel potro madura, el recuento de neutrófilostiende a disminuir y el de linfocitos y eosi-nófilos a aumentar (alcanza la meseta a losseis meses). Desde los ocho meses hastauno o dos años, la relación N:L es de 1:1;luego el número de linfocitos disminuyelentamente y la ratio N:L aumenta gradual-mente hasta alcanzar 2:1 en caballos demayor edad.

En el caballo se pueden observar tres

respuestas leucocitarias:

• Leucocitosis fisiológica, bastante fre-cuente en caballos de menos de dosaños. En esta situación se incrementael número de PMNs maduros y/o lin-focitos (Rossdale et al., 1982). Seproduce por la liberación de adrena-lina como consecuencia del temor, laexcitación o el ejercicio físico, queprovocan un aumento de la presiónsanguínea y la frecuencia cardíaca ygeneran una contracción esplénica.La respuesta se produce en segundosy se observa sobre todo en animalesmuy nerviosos. Es transitoria, puestoque tras 20-30’ de producido el estí-mulo, la cifra de PMNs vuelve a lanormalidad. La de linfocitos tardaaproximadamente una hora.Otras situaciones en las que se

puede producir neutrofilia son en lasleucocitosis mediadas por corticoi-des o las generadas en procesosinflamatorios, si bien en este últimocaso la neutrofilia es persistente yno transitoria como la de la leucoci-tosis fisiológica.Las linfocitosis se pueden generartambién en casos de estimulación anti-génica crónica (enfermedades víricas)o en la insuficiencia adrenocortical.

• Leucocitosis en respuesta a corticoi-

des, se caracteriza por neutrofilia(normalmente sin desviación a laizquierda) y linfopenia, con eosino-penia. El recuento total de leucocitosno suele exceder de 20.000/µl. Larespuesta está causada por la admi-nistración de corticoides exógenos osu liberación endógena y se produceentre las dos y cuatro horas, desapa-reciendo a las 24 horas de haberseeliminado el estímulo.

Cuando se presenta esta respuestahay que considerar también que elanimal puede tener un proceso infla-matorio crónico, donde hay neutrofi-lia con estrés asociado que generalinfopenia. Otras pruebas laborato-riales confirmarán o descartarán unau otra situación.Otras causas de linfopenia, puedenser las infecciones sistémicas agudas,las enfermedades víricas agudas (her-pesvirus, influenza) o la pérdida delinfocitos en las cavidades corporales.

• Leucocitosis de la respuesta inflama-toria, el indicador más sensible y espe-cífico de inflamación en el caballo esla presencia de un número alto de neu-trófilos inmaduros circulantes. En unarespuesta inflamatoria se puede verleucocitosis, leucopenia o un númeronormal de leucocitos circulantes,

dependiendo del equilibrio entre lademanda tisular y/o el secuestro indu-cido por endotoxinas y el nivel de pro-ducción de PMNs en la médula. Si laproducción medular excede el nivel dedemanda tisular o de secuestro se pro-duce una leucocitosis y neutrofilia. Sise genera la situación inversa el resul-tado es una leucopenia con neutrope-nia. Si, finalmente, la demanda o elsecuestro son similar a la producción

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de la médula ósea, el recuento de

leucocitos y neutrófilos podría sernormal.En la especie equina, la leucopenia yneutropenia se producen con fre-cuencia en problemas gastrointesti-nales en individuos adultos (salmo-nelosis, impactación grave, estran-gulación, etc.) y en los problemasgastrointestinales y las septicemias,normalmente por microorganismosgram negativos, en potros. En estas

situaciones se produce una demandaintensa de neutrófilos por parte delos tejidos y/o una endotoxemiagrave que genera, marginación delos neutrófilos en los pequeñosvasos.En estos casos es frecuente observarneutrófilos tóxicos, debido a la parti-cipación de bacterias y sus toxinasen la patogenia de la leucopenia.Otras causas de neutropenia, acom-pañada con frecuencia de linfopenia,son las enfermedades víricas agudascomo la arteritis, la infección porherpesvirus 1 -EHV 1- y la anemiainfecciosa equina (Duncan y Prasse,1986). La neutropenia se producetambién en la ehrlichiosis granulocí-tica (Madigan y Gribble, 1987) ydurante las primeras fases de la ehr-lichiosis monocítica.

La monocitosis se produce durantela inflamación crónica, especialmen-te aquellas que se asocian a necrosistisular (Jain, 1986; Tyler et al.,1987).La situación de eosinofilia se produ-ce en enfermedades de origen alérgi-co (dermatitis por Culicoides) o para-sitario (vermes pulmonares y ásca-ris). Los estados intraluminales delos parásitos gastrointestinales no

suelen inducir eosinofilia (Jain,

1986); sí lo hace en cambio la migra-ción larvaria, sobre todo si es masiva.

Fibrinógeno

El fibrinógeno es una proteína defase aguda que suele utilizarse junto con elleucograma para valorar la inflamación. Sudeterminación resulta especialmente útilcuando el proceso inflamatorio no se acom-paña de cambios en el leucograma. No obs-

tante, no todos los procesos inflamatorioscursan con aumento de fibrinógeno, por loque un valor normal de dicho parámetro nopermite descartar la inflamación. El interva-lo de referencia en équidos va de 100-400mg/dl. Su concentración plasmática empie-za a aumentar a las 48 horas del inicio de lainflamación y alcanza un pico máximo (quepuede exceder los 1.000 mg/dl) entre loscinco y siete días.

Aportacionesde los nuevos analizadores

La necesidad de producir resultadosfiables, que a su vez sean efectivos en tiem-po y coste, ha impulsado el desarrollo desistemas hematológicos automatizados,puesto que el recuento manual tiene pocaprecisión (ICSH, 1994). Los nuevos anali-zadores hematológicos tienen una alta

reproductividad y exactitud respecto a losrecuentos manuales puesto que evalúanmiles de células de cada muestra.

En 1956, durante la ConferenciaAnual Electrónica de Chicago, USA, se pre-sentó un sistema de recuento basado en unamedida de resistencia o conductividad(impedancia). Esta tecnología utiliza el prin-cipio de que las células son malas conducto-ras eléctricas. En estos instrumentos la san-gre se diluye en un medio eléctricamente

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conductor y se la fuerza a pasar a través de

un pequeño orificio entre dos electrodos.Las células desplazan una pequeña cantidadde líquido conductor e incrementan la resis-tencia eléctrica causando un cambio depotencial entre los electrodos, con la consi-guiente producción de un pulso, en donde laamplitud es proporcional al tamaño de lacélula y la cantidad de impulsos, al númerode células.

Los eritrocitos y plaquetas se sepa-ran basándose en el tamaño y los leucocitos

se determinan tras lisar los eritrocitos conunas gotas de saponina, dejando los núcleoscelulares libres (que es lo que realmente secuenta). Estos analizadores permiten dife-renciar dos poblaciones leucocitarias que sibien no facilitan datos fiables en las espe-cies canina y felina respecto al diferencialleucocitario (Pastor et al., 1999a, 1999b), sí lo hacen en el caso de la especie equina(Pastor et al., 1992).

La anchura de distribución del histo-grama de hematíes (RDW) informa sobre elgrado de anisocitosis eritrocitaria presenteen la muestra. En veterinaria no se disponede suficientes datos publicados para facili-tar la interpretación de la RDW; sin embar-go, sí se ha confirmado éste como un pará-metro útil para evaluar anemias por defi-ciencia en hierro –muy poco frecuente enlos équidos–, eritropoyesis activa y, enmuestras almacenadas, casos en los cuales

se produce un aumento de la anisocitosis(Weiser, 1982; Tvedten, 1993).El histograma de la concentración de

hemoglobina y el ancho de distribución delmismo (HDW) proporcionan informaciónsobre la anisocromía de la muestra. Sinembargo, su utilidad e interpretación enmedicina veterinaria debe evaluarse todavía,debido a que sólo son capaces de determi-narla los analizadores de rayo láser. A prin-cipios de la década de los 80 se desarrolló el

método de recuento denominado anàlisis

cuantitativo del buffy-coat. Este sistema sebasa en que la diferente densidad de cadagrupo de células sanguíneas hace que secoloquen en bandas diferenciadas, cuando lasangre se coloca en un tubo de hematocritoy se somete a centrifugación. La anchura decada banda refleja el número de células pre-sentes en cada población.

La citometría de flujo es el últimoavance en la tecnología de analizadoreshematológicos. Dentro de ellos, los que uti-

lizan doble ángulo de luz láser son los másnovedosos. En este sistema, las célulaspasan a través de un haz de luz láser que esabsorbido y dispersado por la célula. Lasinterrupciones en el haz de luz se utilizanpara determinar el recuento celular, mien-tras que los cambios en la dispersión de laluz se utilizan para determinar el tamañocelular y su complejidad interna o densidad.

Los modernos analizadores de rayoláser con tinciones de peroxidasa y basofiliapermiten realizar el diferencial leucocitarioen prácticamente todas las especies domés-ticas con gran precisión y exactitud (Tved-ten y Haines, 1994; Tvedten et al., 2000)(Fig. 8).

Una aportación novedosa y de apli-cación práctica importante, en un futuromediato, es la información que proporcio-nan estos analizadores de rayo láser sobre lapresencia de reticulocitos circulantes. Como

se ha mencionado anteriormente, la médulaósea del caballo responde a la pérdida desangre incrementando la eritropoyesis yproduciendo reticulocitos; sin embargo,éstos no son liberados durante la homeosta-sis o las situaciones de anemia suave omoderada (Jeffcott, 1977; Fernández yGrindem, 2000).

Hasta muy recientemente, la tinciónmanual, incubando la sangre con un coloran-te vital (como el nuevo azul de metileno),

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específico para ácidos nucléicos, y el recuen-to manual de los eritrocitos que contienen el

precipitado de colorante (Deiss y Kurth,1970; Fernández y Grindem, 2000), no per-mitían detectar reticulocitos en el caballo,incluso cuando el animal presentaba una ane-mia grave (Smith y Agar, 1976).

Por tanto, la forma, de comprobar elgrado de regeneración eritropoyética en laespecie equina se limitaba al anàlisis deltamaño de los eritrocitos, es decir, de suvolumen (VCM) –indicador tardío de rege-neración–, de la anchura de distribución de

la serie roja, es decir, del grado de anisoci-tosis que muestran los eritrocitos (RDW),

de los citogramas eritrocitarios o de los his-togramas de la distribución del volumen

–parámetros todos ellos que aportan losnuevos analizadores hematológicos (Tved-ten y Weiss, 2000).

Mediante la observación de biopsiasde médula ósea (Lumsden et al., 1975; Eas-ley, 1985; Radin et al., 1986; Malikides et al., 2000) donde se determina la relaciónmieloide:eritroide (la relación normal es de0,5:1,5), asumiendo que el comportamiento

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Fgura 8. Ejemplo de diferencial leucocitario obtenido con el ADVIA 120 con sangre de caballo.

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mieloide es normal, se puede también valo-

rar el grado de respuesta eritropoyética. Unaratio < a 0,5 supone que hay un incrementoen la serie eritroide y, por tanto, una anemiaregenerativa. Otra forma de valorar la eritro-poyesis en esta especie es contar los reticulo-citos mediante preparaciones de médula óseateñidas con nuevo azul de metileno (Schalm,1975). Un caballo normal tiene hasta un 3%de reticulocitos en médula ósea y su incre-mento sugiere un aumento de la eritropoye-sis (Lassen y Swardson, 1995; Schalm,

1980; Tablin y Weiss, 1985).En la actualidad, al aumentar la sensi-

bilidad de los analizadores hematológicosautomatizados más actuales, como el ADVIA120 que cuantifican aquellos eritrocitos quecontienen ácidos nucléicos por citometría deflujo, se ha detectado la presencia de reticulo-citos en sangre de équidos con anemia grave(Weiss y Moritz, 2003).

Este analizador determina las propor-ciones de reticulocitos por la combinación de

la aborción de la luz y su dispersión en dos

ángulos (el bajo que mide el tamaño de la

célula y el alto que mide su cantidad dehemoglobina), mediante la detección de lascélulas que fluorescen, tras incubarlas con uncolorante de ácidos nucléicos catiónico, oxa-zina 750 (Tvedten, 1993; Weiss, 2002), quetiñe las células de acuerdo a su cantidad deARN. Esto permite que el analizador informesobre los reticulocitos con baja (reticulocitosmaduros), media (reticulocitos de madurezintermedia) y alta absorbancia (reticulocitosinmaduros) (Fig. 9).

Estos métodos automatizados identi-fican la proporción de células que contienenácido nucléico en > 40.000 eritrocitos (Coo-per et al., 2005), dependiendo de la densidaderitrocitaria de la muestra, en lugar de en1.000 eritrocitos como sucede en el métodomanual. Además, la medida directa deltamaño y concentración de hemoglobina deun gran número de reticulocitos, que llevana cabo estos contadores, permite analizar deforma automatizada la variación de estos

parámetros, lo que no era posible realizar

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Fgura 9. Ejemplo de recuento de reticulocitos. Se identifican varias poblaciones según la cantidad de grá-

nulos. EjeY = densidad celular, EjeX = tamaño celular.

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con la determinación manual de reticuloci-

tos y sólo en una medida limitada en los apa-ratos que utilizan un sistema de funciona-miento de impedancia eléctrica (Knoll,2000; Waters y Seal, 2001).

Cooper et al. (2005) comprobaronmediante el uso del analizador de citometríade flujo ADVIA 120 que en caballos a losque se les había provocado una anemiagrave por sangría, se producía un incremen-to en los parámetros de reticulocitos estudia-dos por el aparato, principalmente en el

volumen corpuscular medio del reticulocito(MCVr) y en la concentración de hemoglo-bina reticulocitaria (CHr). En los animales alos que se le impuso un tratamiento con eri-tropoyetina se comprobó el incremento delnúmero de reticulocitos y la modificación delos parámetros reticulocitarios proporciona-dos por el analizador (MCVr, CHr, RDWr

–anchura de distribución de reticulocitos–,HDWr –anchura de distribución del conteni-do en hemoglobina de los reticulocitos).

En conclusión, el examen laboratorialde la sangre equina proporciona una informa-ción que contribuye a reducir la lista de diag-nósticos potenciales o, en menor número deocasiones, a realizar un diagnóstico específi-co. La incorporación en los laboratorios denuevos analizadores hematológicos ha contri-buido a mejorar la precisión y exactitud de losparámetros analizados y a abrir nuevasexpectativas sobre la utilidad práctica de

otros parámetros menos conocidos.

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