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 REPORTE DE INVESTIGACIÓN ANÁLISIS FITOQUÍMICO Y DETERMINAC IÓN ANTIMICROBIANA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LAS HOJAS DE GUAYABA  PSIDIUM GUAJAV A L. FITOQUÍMICA TÉCNICO SUPERIOR UNIVERSITARIO EN QUÍMICA ÁREA TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA PRESENTA:  GACHUZ VAZQUEZ EDWIN JHONATAN MEJÍA AVILÉS ISAAC SALVADOR VEGA PIÑA MARÍA GUADALUPE PROFESOR: M.C.A ARMANDO QUISTIAN GARCÍA SAN JUAN DEL RÍO, QRO. ABRIL 16

Hojas de Guayaba Fitoquímica Final

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Contenido

1.  INTRODUCCIÓN   ...................................................................................................................... 2

2.  OBJETIVOS  ............................................................................................................................... 3

3.  HIPÓTESIS  ................................................................................................................................. 3

4.  JUSTFICACIÓN  ......................................................................................................................... 3

5.  ALCANCE  .................................................................................................................................. 3

6.  MARCO TEÓRICO  .................................................................................................................... 4

6.1  Farmacognosia  .................................................................................................................... 4

6.2  Divisiones de la Farmacognosia  .......................................................................................... 4

6.3  Fitoquímica  ......................................................................................................................... 5

6.4  Principios activos de las plantas  .......................................................................................... 6

6.6  PSIDIUM GUAJAVA....................................................................................................... 12

7.  DESARROLLO  ........................................................................................................................ 18

8. RESULTADOS  ......................................................................................................................... 25

9.  CONCLUSIONES  .................................................................................................................... 26

10.  REFERENCIAS BIBLOGRÁFICAS ....................................................................................... 28

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1. INTRODUCCIÓN

La especie Psidium guajava L., conocida popularmente como guayaba, familia Myrtaceae,se ha utilizado tradicionalmente como antidiarreico y para los cólicos intestinales. Utilizandolas hojas jóvenes de la guayaba para la preparación de infusiones orales que ha sido parte de

ésta medicina tradicional desde hace siglos en México y partes de América del Sur.

Las hojas de guayaba vienen de un gran arbusto de hoja perenne o un pequeño árbol nativode las regiones tropicales, y la ciencia moderna reconoce algunos de los beneficios para lasalud que sus componentes naturales tienen.

Las hojas de guayaba contienen fitoquímicos naturales, incluyendo varios antioxidantesllamados carotenoides y antocianinas, y otros llamados flavonoides. Algunos de suscompuestos pueden tener actividad antibiótica natural que ayuda a matar los agentes patógenos responsables de la diarrea infecciosa.

En esta investigación se estudiará de forma cualitativa la identificación de los metabolitos presentes en las hojas del árbol de guayaba y la verificación antimicrobiana frente a dosmicroorganismos causantes de la diarrea infecciosa como E. Coli y Estafilococos aureus.

Imagen 1 Psidium Guajava L

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2. OBJETIVOSRealizar el análisis fitoquímico cualitativo y determinación antimicrobiana del extractoetanólico de las hojas de guayaba psidium guajava l. 

3. 

HIPÓTESISEl extracto etanólico de las hojas de guayaba  psidium guajava l. tiene actividadantimicrobiana frente a E. Coli y Estafilococos aureus.

4. JUSTFICACIÓNEn la medicina tradicional mexicana se utilizan las infusiones de las hojas de guayabo con lafinalidad de contrarrestar las diarreas infecciosas, estudios farmacológicos demuestran quelos extractos de estas hojas tienen acción antimicrobiana.

El estudio del reto microbiano se realiza con la finalidad de comprobar la actividadantimicrobiana del extracto frente a E. Coli y Estafilococos aureus, microorganismos patógenos que desempeñan un papel muy importante en brotes de enfermedades causadas por el consumo de alimentos, que con un proceso de cocción deficiente han sido implicadosen episodios diarreicos y tóxico-infecciosos en seres humanos.

5. ALCANCEPresentar los resultados del análisis fitoquímico cualitavo de los metabolitos presentes en lashojas de guayaba y la actividad antimicrobiana del extracto etanólico frente a E.Coli y

Estafilococos aureus.

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6. MARCO TEÓRICO

6.1 FarmacognosiaEl nombre farmacognosia se deriva del griego Pharmakon, que significa droga, y Gignosco,

que significa adquirir el conocimiento de algo (Kinghorn, 2001). Por lo tanto, lafarmacognosia es la ciencia farmacéutica que se ocupa del estudio de las drogas y lassustancias medicamentosas de origen natural, bien sea este vegetal, microbiano (hongos, bacterias) y/o animal. El término ha evolucionado con el pasar del tiempo, así lafarmacognosia fue definida por primera vez, en 1815, como una disciplina farmacéutica conla siguiente definición: “se refiere a la ciencia que tiene la tarea de aprender todo acerca de

las drogas de origen vegetal o animal en todos los aspectos, excepto los efectos fisiológicos, para describirlas correctamente y ba jo una visión general conectando este conocimiento”

(Verporte, 2000). Posteriormente, nuevos conceptos en torno a la transición de lafarmacognosia desde una disciplina botánica descriptiva, hasta una más centrada en aspectosquímicos, acorde con la evolución de las ciencias, permitieron incorporar en lafarmacognosia contemporánea, elementos de química analítica y orgánica, así como de biología y biotecnología, temas de investigación y descubrimiento de fármacos de origennatural a partir de fuentes terrestres y marinas, caracterización química de los constituyentes biológicamente activos de las drogas y el establecimiento de la seguridad y eficacia de las plantas medicinales utilizadas en fitoterapia (Kinghorn, 2001; 2002; Verporte, 2000).

6.2 Divisiones de la Farmacognosia

En un inicio, la farmacognosia se había desarrollado principalmente en su aspecto botánico,refiriéndose particularmente a la descripción e identificación de las drogas, tanto enterascomo pulverizadas, así como a su recolección, preparación y almacenamiento. Algunos deestos aspectos, por supuesto de fundamental importancia, son tratados en una de las principales divisiones de la farmacognosia, la farmacoergasia. Ahora, con el rápido avanceen las técnicas analíticas y moleculares, la farmacognosia se ha establecido como una cienciamultidisciplinar, convirtiéndose en una de las disciplinas básicas en la investigación yeducación farmacéutica. En este proceso de avance, recientemente se ha propuesto que lafarmacognosia analítica, la farmacognosia clínica, y la farmacognosia industrial hanaparecido como campos profesionales importantes. Además, que la farmacognosiamolecular, la farmacognosia genómica, y la farmacognosia metabolómica están emergiendocomo los dominios preponderantes de investigación en la próxima generación, manteniendoel ritmo de evolución impulsado por el campo de la biología molecular, la bioinformática yla biotecnología. En estos aspectos y para una mayor ampliación, ver el trabajo publicado porDhami, N. (2013). No obstante, y de acuerdo a la Sociedad Americana de Farmacognosia, elestudio contemporáneo de esta ciencia farmacéutica puede ser dividido en los siguientes:

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 Farmacoergasia.

 Etnobotánica Médica y Etnofarmacología.

 Fitoterapia.

 Fitoquímica.

 Zoo-farmacognosia.

 Farmacognosia Marina.

6.3 

Fitoquímica

La Fitoquímica es una disciplina científica que tiene como objeto el aislamiento, análisis,

 purificación, elucidación de la estructura y caracterización de la actividad biológica de

diversas sustancias producidas por los vegetales. (Albert 2014)

Las plantas producen una diversidad de sustancias, producto del metabolismo secundario, 

algunas responsables de la coloración y aromas de flores y frutos,  otras vinculadas coninteracciones ecológicas, como es el caso de la atracción de polinizadores. Actualmente, se

ha demostrado que principalmente la mayoría de ellos participan en el mecanismo de defensa

de las plantas. Entre estos últimos, se consideran a las fitoalexinas,  los alelopáticos, por

mencionar algunos. La razón de ser de estos metabolitos, llamados también fitoquímicos, 

 permite una gama de usos en la agricultura y en la medicina. Adicionalmente, las múltiples

funciones que presentan en los vegetales permite la búsqueda de nuevos medicamentos y

agroquímicos naturales, como insecticidas, herbicidas,  reguladores de crecimiento, etc.

(Albert 2014)

Para su estudio la fitoquímica permite aislar e identificar los principios activos de numerosas plantas con importante actividad biológica, tal es el caso de las plantas medicinales. Por el

 potencial que representan estos metabolitos, las investigaciones no solo se han dirigido a la

elucidación de estructuras químicas y evaluación de su actividad biológica mediante

 bioensayos, sino hacia la obtención por cultivo in vitro. (Albert 2014)

El análisis fitoquímico tiene como objetivo determinar los metabolitos secundarios presentesen la especie vegetal a estudiar, por ejemplo en las plantas medicinales aplicando para ellasuna serie de técnicas analíticas de extracción, separación, purificación y determinaciónestructural. (R.Gámez 2001)

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6.4 Principios activos de las plantas Bruneton, J. (2001). Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas Medicinales. 2ª Ed. Zaragoza:

 Acribia S. A.

Los principios activos son sustancias que se encuentran en las distintas partes u órganos de

las plantas y que alteran o modifican el funcionamiento de órganos y sistemas del cuerpohumano y animal. La investigación científica ha permitido descubrir una variada gama de principios activos, de los cuales los más importantes desde el punto de vista de la salud, sonlos aceites esenciales, los alcaloides, los glucósidos o heterósidos, los mucílagos, gomas, ylos taninos. Existen en las plantas otros principios activos relevantes denominados nutrientesesenciales, como las vitaminas, minerales, aminoácidos, carbohidratos y fibras, azúcaresdiversos, ácidos orgánicos, lípidos y los antibióticos.

Los principios activos se clasifican, según su estructura química, en grupos:

Productos resultantes del metabolismo primario (procesos químicos que intervienen en formadirecta en la supervivencia, crecimiento y reproducción): Glúcidos, lípidos, derivados deaminoácidos.

Productos derivados del metabolismo secundario (no son esenciales para el metabolismo sinoque son sintetizadas como defensa, adaptación, etc):

 

Heterósidos: Antraquinónicos, Cardiotónicos, Cianogénicos, Cumarínicos, Fenólicos,Flavónicos: Ranunculósidos, Saponósidos, Sulfurados

 Polifenoles: Ácidos fenólicos; Cumarinas; Flavonoides; Lignanos; Taninos; Quinonas.Terpenoides: Aceites esenciales; Iridoides; Lactonas; Diterpenos; Saponinas.

 

Alcaloides 

Otros

6.4.1 Heterósidos

Los glucósidos o heterósidos son compuestos que están formadas por 2 partes: una es unazúcar (glucosa) y la otra de no-azúcar o aglucona, aglicón o genina. El enlace entre ambases hidrolizable y debe romperse para que se active el compuesto; esta ruptura es catalizada

 por fermentos que contiene la misma planta. Se clasifican de acuerdo a las característicasestructurales de la parte no-azúcar o aglicón, su nombre termina en – ósido, aunque algunosmantienen su nombre tradicional acabado en – ina (por ejemplo, digitoxina). Constituyen los principios activos de muchas plantas y su actividad farmacológica se debe fundamentalmentea la parte no glucídica. Los más importantes son los antraquinónicos, los cianogénicos, loscardiotónicos y los cumarínicos. También los fenólicos, ya que es en este grupo en el que seencuentra la salicilina, precursora del ácido acetil salicílico, o aspirina.

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  Heterósidos Antraquinónicos: Consisten en una molécula de azúcar unido a underivado del antraceno. Se emplean como laxantes o purgantes.

  Heterósidos cardiotónicos: A este grupo pertenecen una serie de principios activosque actúan directamente sobre el músculo cardiaco y por tanto ejercen su acciónterapéutica en la insuficiencia cardíaca congestiva o en las alteraciones del ritmocardíaco. Sin embargo, precisamente por la gravedad de esta patología y lascaracterísticas especiales de estos principios activos, cuyo margen terapéutico essumamente estrecho, muchas de las drogas que los contienen no se emplean en laactualidad directamente como productos fitoterapéuticos aunque sus principiosactivos aislados siguen siendo indispensables en la terapéutica.  

 

Heterósidos cianogénicos: Hay plantas que desprenden ácido cianhídrico(Fenómeno que se conoce como cianogénesis). Han sido causa de envenenamientos

mortales. Propiedades. La única droga que se emplea en fitoterapia por su contenidoen estas sustancias es el laurel cerezo (Prunus laurocerasus), que contiene prunasósido. Se emplea como agua destilada, como antiespasmódico, estimulante dela respiración y aromatizante.

  Heterósidos cumarínicos: La cumarina es un aromatizante. Tienen propiedades

vitamínicas, disminuyen la permeabilidad capilar y aumentan la resistencia de las paredes de capilares (protegen la fragilidad capilar y actúan como tónico venoso).Algunos tienen propiedades sedantes, como la angelicina. Pueden tener propiedadeshipnóticas. En la genciana encontramos la amarogenciana. Por ser amargos son

estimulantes del apetito y digestión, excitan las papilas linguales. Por vía refleja actúaen el estómago, aumentando la motilidad, favoreciendo el aumento de secreciones.Está contraindicada en la lactancia ya que los principios activos pasan a la lechematerna. 

6.4.2 Polifenoles

Son sustancias que tienen un núcleo bencénico que soporta un grupo hidroxilo. Se suelenunir a azúcares para formar heterósidos pero también se pueden encontrar libres. Van desdesustancias muy simples, hasta muy complejas como las ligninas y taninos. Los grupos másimportantes de este grupo son los ácidos fenólicos o fenoles, las cumarinas, los flavonoides,los lignanos, los taninos y las quinonas.

  Ácidos Fenólicos: Son aril-carboxílicos, con uno o más grupos OH en el arilo. Susacciones farmacológicas y aplicaciones son diversas, como antioxidantes,analgésicos, coleréticos etc. El eugenol por ejemplo es un antiséptico y anestésico

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local empleado en odontología. Entre los fenoles en estado libre, se encuentranconstituyentes importantes de las esencias, como el timol y su isómero el carvacrol(esencias de tomillo). Muchos de los fenoles están en estado de éter oxidado en lasesencias, entre ellos el estragol, la miristicina, el apiol, y el atenol. 

Imagen 2 Estructura básica de los ácidos fenólicos

  Flavonoides: Los flavonoides son los pigmentos amarillos derivados de la fenil- benzo γ pirona o fenil cromona. Se dan mucho en el reino vegetal, normalmente enforma de heterósidos. Son una estructura molecular del tipo C6  –  C3 –  C6. Son unafamilia muy diversa de compuestos, aunque todos los productos finales secaracterizan por ser polifenólicos y solubles en agua. Existen 6 clases principales, laschalconas, las flavonas, los flavonoles, los flavanoles, las antocianidinas, los taninoscondensados, y otras dos más, las xantonas y las auronas.

Imagen 3 Estructura básica de los flavonoides

Para los vegetales, estos compuestos son importantes pues, además de serresponsables de las coloraciones de muchas flores, frutos y hojas y por ello interveniren la polinización atrayendo a los insectos, participan en la vida del vegetal ejerciendo

importantes funciones como por ejemplo protegerle de los efectos nocivos de laradiación UV y ejercer una eficaz actividad antioxidante.

De todos ellos, los que tienen mayor interés farmacológico son dentro del grupo delos flavonoides: flavonas, flavonoles y flavanonas y sus correspondientes heterósidosy los antocianósidos. Muchos de ellos presentan actividad bactericida, antiséptica,astringente y actividad sobre el sistema vascular como por ejemplo el rutósido o los

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citroflavonoides, llamados así por haber sido aislados en especies pertenecientes algénero Citrus.

Dentro de este grupo de flavonoides es necesario mencionar especialmente el grupode los antocianósidos, pigmentos rojos y azules de las flores, tienen características

especiales, muy solubles en agua. Se encuentran por ejemplo en el arándano,Vaccinium mirtyllus (Ericaceas), y la grosella, Ribes nigrum (Saxifragaceas).

  Cumarinas: Son benzo − α –  pironas. Con el nombre de cumarinas se conoce a ungrupo muy amplio de principios activos fenólicos que se encuentran en plantasmedicinales y tienen en común una estructura química de 2 H -1-benzopiran-2-ona,denominada cumarina. Sobre esta estructura se disponen sustituyentes de distintanaturaleza química lo que da lugar a distintos tipos de cumarinas: sencillas ycomplejas. 

Imagen 4 Estructura básica de las Cumarinas

Prácticamente todas las cumarinas, a excepción de la cumarina propiamente dicha, poseen un sustituyente hidroxílico (OH) en posición 7, ya sea libre, como sucede enla umbeliferona, o combinado (metilo, azúcares, etc.).Como grupo, su interés farmacológico no es muy grande, sin embargo debemosmencionar sus efectos sobre el sistema vascular tanto arterial como venoso y suutilidad en el tratamiento de algunas alteraciones de la piel como por ejemplo la psoriasis debido a sus propiedades fotosensibilizantes.

 

Lignanos: Son moléculas cuya estructura resulta de la unión de 2 unidades del fenil propano (C6  –   C3). Son muy abundantes en el reino vegetal. Por ejemplo, la podofilotoxina, se encuentra en el rizoma del podófilo (Podophyllum peltatum) y esla precursora de 2 sustancias (etopósido y tenipósido) empleadas en terapiaantitumoral. También la silimarina, que es hepatoprotectora y se obtiene del cardomariano (Sylibum marianum).

  Taninos: Son substancias complejas que no es posible clasificar dentro de unaestructura química única. Son sustancias polifenólicas hidrosolubles no nitrogenadas,

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de origen vegetal, de peso molecular entre 500 y 3000, que además de dar lasreacciones clásicas de los fenoles, precipitan gelatina, sales de alcaloides y metales pesados. Los hay hidrolizables y condensados.

El tanino se encuentra principalmente en las raíces, la corteza, y de vez en cuando en

las hojas de la planta. Estos compuestos tienen propiedades antibacterianas,astringentes y antisépticas. Se encuentran especialmente en las familias de lasEricáceas, Leguminosas, Rosáceas y Salicáceas.

Históricamente, son las sustancias empleadas para curtir pieles, ya que forman puentes de hidrógeno con las fibras de colágeno de la piel. Sus propiedadesfarmacológicas externas son astringentes, vasoconstrictoras (para hemorragias) ycicatrizantes (quemaduras). Internamente, antidiarreicas, y, al precipitar alcaloides,antídoto ante intoxicaciones.

  Quinonas: Son dicetonas aromáticas procedentes de la oxidación de fenoles. Hayvarios tipos:Para - Benzoquinonas: derivadas del benceno. Muy activas (antimicrobianas,antifúngicas)

 Naftoquinonas: derivadas del naftaleno. Antibacterianas y antifíngicas. Junglona, delnogal ( Juglans regia), lawsona, de la henna ( Lawsonia inermis) tintórea y comochampú, plumbagona, de la drosera ( Drosera rotundifolia), antitusiva y la VitaminaK1, en la alfalfa ( Medicago sativa).

Antraciclinonas: Derivadas del naftaceno. Constituyen el núcleo de antibióticos muyimportantes como la daunomicina y la doxorubicina, y las tetraciclinas.

Antraquinonas y fenantraquinonas: derivadas del antraceno y el fenantreno, son principios activos laxantes y purgantes, en sus formas de heterósido.

6.4.3 TERPENOIDESLos terpenoides están formados por la unión de un número entero de unidades de isopreno(C5). Según ese número se clasifican en: Unidad de Isopreno (C5), Monoterpenos (2 unidadesde isopreno = C10), Sesquiterpenos (3 unidades de isopreno = C15), Diterpenos (C20),Triterpenos C30), Carotenos (C40) y Politerpenos (Cn).

  Iridoides: Son compuestos monoterpénicos, su nombre proviene de unas hormigasaustralianas ( Iridomirmex sp) a partir de las cuales se aisló el iridodial, el compuestomás sencillo de este grupo. Se suelen encontrar en los vegetales en forma de

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heterósidos, en las familias Gencianáceas y Valerianáceas. Forman parte de los principios activos de algunas plantas como los valepotriatos de la raíz de valeriana(Valeriana officinalis), harpagósidos del harpagofito.

  Lactonas sesquiterpénicas: Se encuentran abundantemente en la familia de las

Compuestas, Lauraceas y Magnoliaceas, y son responsables del sabor amargo demuchas drogas como el cardo santo (Cnicus benedictus), el ajenjo ( Artemisia

absinthium) o el diente de león (Taraxacum officinale). Tienen actividadantibacteriana y antifúngica. Algunas producen dermatitis en la piel ya que inducenla formación de alérgenos.

  Saponinas: O saponósidos, del latín sapo = jabón, son sustancias que tienen poderespumante en soluciones acuosas, y son tensoactivos naturales. Muchas poseen propiedades hemolíticas (desintegración de los eritrocitos), resultando muy tóxicas

inyectadas en sangre. La toxicidad se reduce administrándolas vía oral. Son tóxicas para los animales de sangre fría.castaño de indias, en el regaliz (Glycyrrhiza glabra), la centella asiática (Centella

asiatica), y en el ginseng (Panax ginseng). Las segundas, en el rusco ( Ruscus

aculeatus), el ágave ( Agave sisalana) y las dioscoreas ( Dioscorea sp)

6.5 ALCALOIDES

Grupo de productos naturales de mayor interés en la farmacognosia. Dentro de este grupo se

encuentran sustancias tóxicas incluso a bajas dosis. El primer alcaloide aislado fue la morfina(Sertürner 1805). En 1819 se le dió el nombre de alcaloides debido a su naturaleza básica.Debido a su gran complejidad, aunque comenzaron a aislarse en el siglo XIX, ladeterminación de su estructura fue posterior.Así la estricnina (semilla de nuez vómica); fue aislada en 1819; en 1870 se hizo unaaproximación de su estructura; en 1889 se obtuvo por síntesis, en 1946 se determinó suestructura.El conocimiento de los alcaloides naturales ha progresado con el desarrollo de nuevastécnicas de separación y determinación. En 1930 se aislaron más de 300 y se determinó laestructura de 200; en 1950 se aislaron más de 1000; en 1973 entre 5000 y 6000Son sensibles a la luz y el calor, se estabilizan con ácidos inorgánicos. En la naturaleza seencuentran en forma de sales aunque también libres. En las plantas se consideraba que eran productos obtenidos durante la extracción y poco solubles en los disolventes típicos deextracción por su polaridad. Pueden sufrir isomerización (ácido lisérgico a isolisérgico),racemización (hiosciamina a atropina).

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6.6 PSIDIUM GUAJAVAPsiduim Guajava L., Species Plantarum 1: 470. 1453, UNAM 2014.

6.6.1 Descripción

 

Forma: Árbol o arbusto perennifolio o caducifolio, de 3 a 10 m (hasta 20 m) de alturacon un diámetro a la altura del pecho de hasta 60 cm. 

  Copa / Hojas: Copa irregular. Hojas decusadas simples; láminas de 3 a 13.5 cm delargo por 1.5 a 6 cm de ancho, oblanceoladas, oblongas o elípticas, margen entero;verde brillantes a verde parduscas; abundantes puntos glandulosos transparentes enla lámina; hojas fragantes cuando se estrujan.

  Tronco / Ramas: Tronco generalmente torcido y muy ramificado. Ramas gruesas,

ascendentes y retorcidas.

 

Corteza:  Externa escamosa en piezas lisas, delgadas e irregulares, pardo rojiza, lasescamas grisáceas.  Interna  fibrosa, ligeramente amarga, de color crema rosado o pardo rosado, cambiando a pardo oscuro. Grosor total: 5 a 8 mm. 

  Flor(es): Solitarias o en cimas hasta de 8 cm, axilares; flores dulcemente perfumadas,actinomórficas; sépalos 4 a 5, verdes en el exterior y blancos en el interior; pétalos 4a 5, blancos. 

 

Fruto(s): Bayas hasta de 8 cm de diámetro, globosas a ovoides, con el cáliz persistenteen el ápice, carnosas, de color crema amarillento a rosado, de olor fragante y saboragridulce. Cáscara exterior fina de color amarillo; fruto conteniendo numerosassemillas. 

  Semilla(s): Semillas redondas de 3 a 5 mm, rodeadas 

6.6.2  HábitatComún a la orilla de los caminos y cerca de casas dónde constituye a veces una verdadera

 plaga. En México prospera en diferentes condiciones climáticas: habita en climas cálido,semicálido, semiseco, seco y templado. Las plantaciones comerciales se encuentran en climastropicales secos, con temperaturas promedio de 18 ºC, precipitación anual de 600 mm yaltitud entre 150 a 600 m. La temperatura adecuada para su desarrollo está entre los 15 y 30ºC, aunque puede tolerar hasta 45 ºC. Los requerimientos pluviales se encuentran entre 1,000y 2,000 mm. Se han encontrado plantas donde las precipitaciones alcanzan 5,000 mmanuales. La especie tolera diversas condiciones de suelo, pero produce mejor en suelos bien

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drenados, con abundante materia orgánica y un pH de 4.5 a 7.5. Es tolerante a suelos ácidosy alcalinos (pH de 4.5 a 9.4). Se presenta principalmente en suelos con problemas de drenaje,tanto de origen calizo como metamórfico e ígneo.

6.6.3  Cultivo

La fertilización incrementa la calidad de los frutos durante su desarrollo. La poda se utilizaen el guayabo para adelantar o retrasar la floración, para mejorar el tamaño y la calidad defruto. Tolera bien la poda. El árbol produce chupones que deben ser eliminados para dejarsolo el tronco principal. Hay que encontrar un buen balance entre el crecimiento de renuevosy la parte madura. Con el despunte del brote se favorece la aparición de yemas axilares,incrementando la producción de brotes reproductivos. La distancia óptima de plantación esde 10 m, pero se pueden plantar a 5 m para establecer una barrera o cerco vivo.

6.6.4  Estudios Farmacológicos

SLDRevistaFármacéutica, Departamento de Farmacia, Universidad de Oriente. Cuba 2012.Psiduim Guajava L., Species Plantarum 1: 470. 1453, UNAM 2014.

6.6.4.1 Uso etnobotánico 

El uso etnobotánico de esta planta es amplio. Por su astringencia, las hojas se utilizan enenfermedades de la piel, en diarreas y para otras dolencias de estómago. Se ha utilizado comohemostática y antiséptica.  Otros reportes indican acción antimicrobiana, cicatrizante,hipoglicémica y espasmolítica. Se reporta también actividad antioxidante, hepatoptotectora,antialérgica, genotóxica citotóxica, cardiotónica, antiinflamatoria y anticatarral y otras.

Esta planta tiene un uso muy antiguo y actualmente es importante para tratar casi mediocentenar de padecimientos en casi todo el país (México). Es utilizada con frecuencia enenfermedades gastrointestinales como diarrea, escalofríos y dolor de estómago, mediante lainfusión de las hojas tres veces al día o como agua de uso; también puede tomarse con leche, bicarbonato, azúcar y hojas de hierbabuena.

En la región del sureste se emplea en cocimiento para tratar la debilidad y vómito; y en lazona de la Huasteca Potosina, la cocción de las hojas sirve para la disentería y los cólicos.

En padecimientos de la piel, las hojas solas o mezcladas con otras hierbas, se ponen a herviry después se aplican de forma local en lavados o cataplasmas. Por otro lado, se recomienda para la caries, hinchazón, bilis, escarlatina, hemorragia vaginal, heridas, fiebre ydeshidratación.

Las hojas estrujadas se usan para curar heridas, úlceras y reuma y masticadas para curar lasheridas en la boca. Las hoja del guayabo junto con las hojas de Loranthus beengwess, Citrus

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limon y Jatropha curcas han sido utilizadas en el tratamiento de diabetes melitus como unefectivo hipoglucémico.

La cocción de las hojas alivia el malestar de pecho y garganta. El cataplasma de hojas en elvientre se usa para combatir obstrucción del bazo y para hinchazones.

Los extractos fenólicos (guaverina, ácido psidiolico, quercetina) de hojas y flores handemostrado actividad antibiótica (G-) contra  Eschericia coli, Salmonella enteriditris yShigella  flexneri.

Corteza, se usa para cicatrizar heridas de la piel (llagas y úlceras).

El té de hojas y/o corteza se usa como un tratamiento efectivo para desordenesgastrointestinales (disentería, dispepsia, diarrea, dolores de estómago), vértigo, nausea y para

regular los períodos menstruales.

La raíz, corteza, hojas y frutos verdes son muy astringentes y se emplean contra disenteríasatónicas y también como remedio para la sarna y la picazón.

Raíz: para curar hidropesía. El fruto fresco es laxante y tiene propiedades hipoglicémicas.

6.6.4.2 Estudio farmacognóstico

La droga cruda fue estudiada. Se evaluaron las condiciones de secado y almacenamiento. Se

concluyó que la droga seca almacenada en bolsas de polietileno, mantiene la estabilidad hasta6 meses.  Se encontró diferencia en la composición de los extractos de cada muestra. Sevalidaron métodos analíticos (UV-V), para cuantificar taninos y flavonoides en las hojasde Psidium guajava, L. Se han informado la estandarización de la droga, para su inclusión enuna farmacopea.

6.6.4.3 Composición química

Las hojas de esta planta contienen taninos y fenoles, flavonoides y triterpenos y esteroides,así como de saponinas y compuestos aminados. Se ha reportado un aceite esencial y otras

sustancias volátiles. 

Contiene, además, ácido guajanoico, ß-sitosterol, uvaol, ácido oleanólicoy ácido ursólico; ácido 2-á-hidroxiursólico, morin-3-O-á-L-arabopiranosido, hiperina,miricetina-3-O-α-D-glucosido, quercetin-3-O-ß-D-glucuronopiranosido, 1-O-galoil-α-D-glucosa. Se ha informado la presencia de ácido ascórbico y de otros flavonoides así comoazúcares reductores y alcaloides. Se ha aislado una nueva benzofenona y un flavonol denaturaleza galoil-glicósido, conjuntamente con 5 nuevos quercetin-glicósidos.  Se hainformado el aislamiento de nuevos flavonoides  y de 4 nuevos triterpenos.

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6.6.4.4 Efecto anticatarral

El extracto acuoso de las hojas de guayaba, disminuye la tos y tiene efecto anticatarral enratas y coballos, en dosis de 2 a 5 g/kg respectivamente y posee una DL50 mayor de 5g/kg.

6.6.4.5 

Efecto antiinflamatorio y analgésico

El extracto acuoso de las hojas, en dosis de 50-800 mg/kg, vía intraperitoneal, produce unefecto antiinflamatorio en ratas Wistar y analgésico en ratones Balb/c; (ambos efectos sondosis dependiente). Se reporta actividad antiinflamatoria, en el modelo de inflamación agudainducido por carragenina en ratas Wistar.

6.6.4.6 Efecto hipoglucemiante e hipotensor

El extracto acuoso de las hojas en dosis de 50-800 mg/kg, vía peroral, en ratas y ratones tiene

efecto hipoglucemiante e hipotensor. El extracto etanólico produce efecto anti-heperglucemiante, frente a un modelo de diabetes tipo-2 en ratas Sprague Dawley. El extractoacuoso inhibe la enzima alfa-glucosidasa in vitro, reduciendo la elevación postpandrial deglucosa en sangre y mejora la hiperglicemia en modelos de ratones. Los extractos de las hojasinhiben la glicación de proteínas en pacientes diabéticos además de un efectohipoglucemiante en diabetes tipo 2, en ratones, en dosis de 10mg/kg, por un mecanismo deinhibición de la proteína tirosin- fosfatasa 1B.

6.6.4.7 

Efecto genotóxico y mutagénico

Se ha evaluado en varios modelos la actividad genotóxica de extractos de las hojas deguayaba. No se observó actividad genotóxica. Se estudió el efecto mutagénico en dosmodelos experimentales diferentes, en ambos el efecto mutagénico estuvo ausente. Estosresultados avalan la inocuidad de esta planta, ampliamente utilizada en la medicinatradicional.

6.6.4.8 Toxicología aguda oral

Se evaluó la toxicidad aguda de extractos de las hojas por el método de la dosis letal mediay por método de las clases de toxicidad aguda. Se ha declarado, en ambos estudios ausencia

de toxicidad, en la dosis límite de 2000 mg/kg. La DL50 es mayor de 5g/kg en roedores.

6.6.4.9  Actividad antibacteriana

Se ha reportado actividad antibacteriana de amplio espectro para el extracto de las hojas.Comparando los extractos acuosos, alcohólicos y cetónicos de las hojas, frente a veinte cepas

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de bacterias de interés clínico. El extracto acuoso mostró actividad en el 35% de los casos, elalcohólico en un 65% y el cetónico en el 100% de los casos. 

6.6.4.10 Actividad citotóxica

Se reporta que el extracto acuoso no es citotóxico, el cetónico posee citotoxicidad baja (5.4%)y el alcohólico una citotoxicidad media (43.8%). Otro informe reporta que el extracto acuoso posee efecto citotóxico, in vitro, a corto plazo y que presenta actividad anti-proliferativa. Seha planteado que este extracto, interfiere en la cascada de señalización múltiple vinculadacon la tumorogénesis.

6.6.4.11 Efecto antioxidante

Se reportó efecto antioxidante in vitro de las hojas. En mayo y agosto el efecto es mayor queen octubre y diciembre. Otros autores reportan actividad antioxidante in vitro e in

vivo. Resulta vital un estudio dinámico de la acumulación de metabolito, para seleccionar laépoca de colecta del material vegetal.

6.6.4.12 Actividad hepatoprotectora

En 2011 se reportó efecto hepatoprotector de los extractos acuosos de las hojas de guayaba,frente a un modelo de intoxicación con CCl4, en dosis de 200mg/kg, en ratas SpragueDawley.

6.6.4.13 Actividad antidiarreica

Se señala que la sustancia activa del extracto de hojas es la quercetina.Se ha verificado elefecto espasmolítico que produce.Se ha reportado un efecto dosis dependiente en dosis de 50a 400 mg/kg (oral) con una disminución de la motilidad intestinal y retardo en el vaciadogástrico.El extracto acuoso de las hojas, disminuye la producción de toxinas lábiles de  E.

coli  y del cólera.  Un ensayo clínico realizado concluyó que la tintura al 20% de hojade Psidium guajava tiene efecto antidiarreico importante. En otro, que evaluó el polvo de lashojas secas, también se comprobó este efecto.

6.6.4.14 Otros efectos reportados

El extracto acuoso de las hojas en dosis de 400 mg/dL, tiene efecto estabilizador de lamembrana eritrocítica in vitro. Se reporta, además, que mejora los niveles de triglicéridos ycolesterol en modelos de ratones en tejido hepático, mejorando el balance del perfil lipídico.

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6.6.4.15 Formas farmacéuticas reportadas 

En la literatura solo se reportan como formas farmacéuticas de las hojas, la tintura 20%, el polvo y el talco de guayaba. Se reportó una suspensión oral utilizando polvo de las hojassecas. Se ha reportado una formulación de cápsulas duras de 500mg, a partir del polvo de las

hojas secas.

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7. DESARROLLO7.1  Materiales y Reactivos

Tabla 1 Reactivos

Metanol Éter de petróleo Ácido sulfúricoCloroformo Tolueno Cloruro de sodioÉter etílico Ácido clorhídrico Cloruro férricoEtanol Hidróxido de sodio Ferricianuro de potasioMagnesio metálico Acético anhidro Hidróxido de amonioHidróxido de potasio Peróxido de hidrogeno GrenetinaYoduro de potasio Citrato de sodio Carbonato de sodioSulfato cúprico Tartrato de sodio y potasio Tiras reactivas

Tabla 2 Materiales

Matraz de fondo plano Jarra de plástico Embudo de plásticoPerlas de ebullición Cristalizador Papel filtroRefrigerante recto Parrilla Pipeta PasteurManguera de látex Gradilla Vaso de pp 250 ml.Bomba para agua Tubo de ensaye Vaso de pp 50 ml.Soporte universal Pipeta cerológica de 10 ml. Vidrio de relojEspátula Perilla Capsula de porcelanaMatraz aforado 100 ml. Agitador de vidrio Cronómetro

7.2  Preparación de Soluciones 

CLORURO FÉRRICO: Sol. al 1% 0.5g de Cloruro Ferrico aforado a 50mL de aguadestilada.

 

REACTIVO DE GELATINA: 0.5g de grenetina pura aforado a 50mL de agua destilada.

 REACTIVO DE BENEDICT: 8.65g de Citrato de Sodio + 5g de Na2CO3 anh. en 30mL deagua destilada se añadió lentamente y agitando + 0.865 CuSO4 en 7.5mL de agua y se aforaa 50mL. 

 

HIDROXIDO DE SODIO 5%: 2.5g de Hidróxido de Sódio aforado a 50mL de aguadestilada. 

 HIDROXIDO DE SODIO 10%: 5g de Hidróxido de sódio aforado a 50mL de agua de agua

destilada.  REACTIVO DE ROSENTHALER: 0.5 g de vainillina a 50 mL con etanol.

 REACTIVO DE GRIGNARD: 0.5g de Carbonato de sodio + 50 mg de Ácido pícrico yagua hasta 50 mL. 

 

HIDROXIDO DE POTASIO AL 5 %: 2.5g de hidróxido de potasio a 50 mL de aguadestilada. 

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 FERROCIANURO DE POTASIO AL 1%: 0.5g de Ferrocianuro de potasio en 50 mL deagua destilada. 

 AgNO3 al 5%: 0.5g de AgNO3 en 9.5 mL de agua destilada. 

7.3 

ProcedimientoObtención del extracto

Secado de la planta.

1.  Tomar una muestra representativa (200g aprox) de las hojas más jóvenes de unárbol de guayaba.

2.  Lavar y secar.3.  Colocar la muestra fresca entre hojas de periódico (técnica de secado por exposición

indirecta)

Extracción por reflujo

1. 

Pesar 25 g de muestra o material biológico seco y molido (hojas)2.  Colocar en un matraz de fondo plano de 500 mL.3.  Agregar 300 mL de etanol y perlas de ebullición.4.

 

Poner a reflujo durante 30 minutos.5.  Filtrar el extracto etanólico obtenido.6.  Concentrar el extracto a baño maría.

Secado de las hojasTomar muestra de hojas verdesLavar y secar.Colocar entre hojas de periódico y poner al sol (exposición indirecta) Pesar 25 g de muestra seca y

molida

Colocar en un matraz 500 mL.

Añadir etanol (2/3 partes delvolumen del matraz

Poner a reflu o durante 30 min.

Filtrar y almacenar

Inicio

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Análisis Fitoquímico cualitativo

Reacción DragendorffReacción SonneschainTestigo

Alcaloides

Flavonoides

Azucares reductores

Saponinas

Taninos

Inicio

Tomar 2mL del extracto,adicionar entre 10 ml de HCl al10%, calentar a ebullición x5min, enfriar y filtrar.Dividir el filtrado en 3 tubos

Quinonas

Cumarinas

Disolver 0.5 mL del extracto en2mL de etanol absoluto y dividiren tres capsulas de porcelana.

Reacción ShinodaReacción hidróxido de sodio 10% 

Prueba de altura y estabilidad deespuma.Reacción de Lieberman Bouchard.

Prueba del espejo de plata

A 1 mL del extracto adicionar 2mL de agua y 3 gotas de NaCl al2%, calentar a ebullición por unminuto, enfriar y filtrar.Dividir el filtrado en cuatro tubos

Reacción con gelatina.Reacción de Cloruro férrico.Reacción ferricianuro de potasio al 1%. 

Colocar 2 mL del extracto en unacápsula de porcelana y seconcentra a sequedad, dividir entres porciones.

Reacción con ácido sulfúrico.Reacción de Börntraguer.

Reacción con hidróxido deamonio.

Fin

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 Alcaloides.

1.  Tomar una porción del extracto y adicionar entre 5 ml a 10 ml de ácido clorhídrico al10%, calentar a ebullición por cinco minutos, enfriar y filtrar.

2.  Dividir el filtrado en 3 tubos de ensaye, uno de los cuales servirá como testigo.

3. 

Tubo 1. Se adiciona una gota del reactivo dragendorff, la prueba se considera positivasi se forma un precipitado naranja.

4.  Tubo 2. Se adiciona una gota del reactivo sonneschain la prueba se considera positivasi se forma un precipitado naranja.

Flavonoides.

Disolver 0.5 mL del extracto en 2mL de etanol absoluto y dividir en 3 cápsulas de porcelana.

Reacción de Shinoda.

1. 

Adicionar 2 gotas de ácido clorhídrico concentrado, si se obtiene una coloración rojaindica la presencia de auronas o chalconas.

2.  En caso de haber cambio, se colocar un trozo de magnesio metálico, si se forma unacoloración naranja a rojo, indica la presencia de flavonas; si es rojo flavonoles y si esmagenta flavononas.

Reacción de hidróxido de sodio al 10%.1.  Adicionar 2 gotas de hidróxido de sodio si se forma una coloración de amarillo a rojo,

indica la presencia de xantonas y flavonas; de café a naranja de flavonoles; con tresgotas de NaOH 10% si se forma una coloración de púrpura a rojizo indica presencia

de chalconas y azul de antocianinas.

 Azucares Reductores.

Prueba del espejo de plata1.  Añadir en un tubo de ensayo:

- AgNO3 1% 1 ml- NH4OH 5 % 1 ml- Extracto1 ml

2. 

Mezclar bien y se calentar durante 2 minutos.3.  Sacar y dejar reposar.

Si el ensayo es positivo la plata metálica, que precipita, se va depositando en la pared del tubo formando un espejo (“espejo de plata”). 

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Saponinas.

Prueba de altura y estabilidad de espuma.1.  En un tubo de ensaye se colocar 1 mL de extracto, agitar vigorosamente y se tomar

la altura de la espuma, en caso de que se presentara.

2. 

Se considerar positivo si la espuma alcanza una altura de 8 mm a 10 mm y semantiene estable por 30 minutos.

Reacción de Lieberman Bouchard.1.  Concentrar 0.5 mL de extracto hasta 0.2 mL; después se agregar 2 gotas de acético

anhídro y se estratifica con 2 gotas de ácido sulfúrico concentrado.2.  Al formarse una coloración azul o verde en la interfase, hay presencia de

saponinas esteroidales; si la coloración es rosa, rojo, magenta o violeta habrá presencia de saponinas triterpenoides.

Taninos.

A 1 mL del extracto adicionar 2 mL de agua destilada y 3 gotas de cloruro de sodio al 2%,calentar a ebullición por un minuto, enfriando y filtrando.Dividir el filtrado en cuatro tubos de ensaye, el cuarto utilizar como testigo.

Reacción con gelatina.1.  Adicionar 2 gotas de reactivo de gelatina.2.  La formación de un precipitado blanco indica presencia de taninos.

Reacción de Cloruro férrico.1.  Se adiciona una gota de cloruro férrico al 1%, la formación de coloraciones de

azul a negro indica la presencia de derivados del ácido gálico y coloracionesverdes de derivados del catecol.

Reacción de ferrocianuro de potasio al 1%.1.  Al tercer tubo, se agrega una gota de ferrocianuro de potasio al 1%.2.

 

La formación de una coloración azul, indica la presencia de compuestos fenólicos.

Quinonas.

Colocar 2 mL del extracto en una cápsula de porcelana y se concentra a sequedad, posteriora ello se divide el extracto siruposo en tres porciones.

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Reacción de hidróxido de amonio.1-  Adicionar una gota de hidróxido de amonio concentrado al extracto.2-  Considerar positiva la prueba para antraquinonas al tener la presencia de una

coloración roja que aparece en los dos primeros minutos.

Reacción con ácido sulfúrico.1.

 

Agregar 1 gota de ácido sulfúrico concentrado a otra porción del extracto.2.  La formación de una coloración roja indica la presencia de antraquinonas.

Reacción de Börntraguer.1.  Diluir una porción del extracto con 3 mL de agua destilada, filtrar.2.  Al líquido filtrado, añadir 3 mL de hidróxido de potasio al 5%; calentar a

ebullición por 3 minutos y enfriar.3.

 

Realizar una extracción con 3 mL de cloroformo.

4. 

Eliminar la fase acuosa y a la fracción clorofórmica adicionar 2mL de hidróxidode potasio al 5%.5.  Un color rojo indica la presencia de benzoquinonas; si es amarillo verdoso,

adicionar 1 gota de peróxido de hidrógeno al 6%.6.  Si la coloración cambia a roja, se consideró positiva para derivados de antrona.

Cumarinas.

Reacción con hidróxido de amonio.1.

 

Concentrar otra porción del extracto y adicionar 0.5 mL de etanol y dos gotas de

hidróxido de amonio concentrado.2.  Se considera positiva la prueba si se presenta una fluorescencia azul-violeta.

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Reto microbiano al extracto

1.  Tomar 5 ml de extracto al 5% en un tubo estéril.2.  Añadir 0.5 ml, del cultivo de Escherichia coli y/o Estafilococs aureus (reto

independiente); agitar bien el tubo para distribuir las bacterias uniformemente,

anotando el tiempo.3.  A intervalos de 2, 5, 10 y 15 minutos, tomar una asada de la mezcla Desinfectante-Cultivo y pasar a un tubo con caldo nutritivo (CN)estéril. NOTA: identificar cada tubo con el tiempo de exposición.

4.  Incubar a 35°C por 48h5.  Anotar los resultados: (+) Crecimiento y (-) Crecimiento Ausente.

Tomar 5 ml de extracto al 5 % enun tubo estéril

Añadir 0.5 ml, de MO (realizar estudioindependiente con E.Coli y Estafilococos aureus

anotando el tiempo. 

Agitar el tubo

A intervalos de 2, 5, 10 y 15minutos, tomar una asada

Inocular en un tubo con CN

Inicio

Anotar los resultados (+) Crecimiento(-) Crecimiento Ausente.  

Fin

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8. RESULTADOSTabla 3 Metabolitos presentes en las hojas de Psidium Guajava L determinados culitativamente durante

análisis fitoquímico

Metabolito Imagen ResultadoAlcaloides Presencia de alcaloides

Flavonoides Presencia de flavonoles,xantonas, flavonas y

antocianinas.

Azúcares reductores Presencia de azúcaresreductores.

Saponinas Presencia de saponinasesteroidales.

Taninos Presencia de taninos yderivados de ácido gálico.

Quinonas Presencia de antraquinonasy benzoquinonas.

Cumarinas Presencia de cumarinas.

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Tabla 4 Resultados del reto microbiano al extracto etanólico de las hojas Psiduim Guajava L frente a E.Coli yEstafilococos aureus

Reto microbiano al extracto etanólico al 5%

M.OTiempo de exposición

2 min 5 min 10 min 15 min

E.Coli - - - -

Estafilococosaureus

- - - -

Dónde: (+) Positivo y (-) negativo

9. CONCLUSIONESIsaac Salvador Mejía Avilés

Se cumplió con el objetivo de la investigación ya que se realizó el análisis fitoquímicocualitativo y determinación antimicrobiana del extracto etanólico de las hojas de guayaba psidium guajava l. 

Se comprobó la hipótesis planteada ya que el extracto etanólico de las hojas de guayaba psidium guajava l.tiene actividad antimicrobiana frente a E. Coli y Estafilococos aureusdebido a que no hubo crecimiento de estos microorganismos a una concentración del extractodel 5%.

Como resultados del análisis fitoquímico se reporta la presencia de alcaloides, flavonoles,

xantonas, flavonas, antocianinas, azúcares reductores, saponinas esteroidales, taninos,derivados de ácido gálico, antraquinonas, benzoquinonas y cumarinas. Que de acuerdo a lainformación bibliográfica los taninos y flavonoides son los metabolitos que ejercen acciónantimicrobiana, astringente y antiséptica que proporciona el extracto de las hojas de psidium

guajava l.

En el estudio del reto microbiano se utilizaron 2 microorganismos causantes de la diarreainfecciosa (E. Coli y Estafilococos aureus) para comprobar que las infusiones realizadas conlas hojas del guayabo son efectivas para contrarrestar el padecimiento como se ha utilizadoen la medicina tradicional mexicana obteniendo resultados satisfactorios.

Las hojas de  psidium guajava l. contienen más metabolitos que pueden ser estudiados a profundidad para evidenciar de manera científica que no solo es efectiva para la diarreainfecciosa sino también para los demás usos que se le da en la medicina tradicional como:febrífuga, antisecretoria, cicatrizante, hipoglicémica, laxativa y nutritiva.

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Vega Piña María Guadalupe

Después de realizar todas las pruebas planteadas con anterioridad finalmente se puedeobservar que el objetivo planteado al inicio de esta práctica fue satisfactorio puesto queaunque por algunas cuestiones no se realizaron todas la pruebas requeridas, las realizadas

arrojaron resultados favorables al verificar de manera cualitativa por medio de las reaccionesllevadas a cabo, el contenido de metabolitos secundarios en las hojas de psidium guajava l.

esto nos permite corroborar la información obtenida de este ejemplar.

Así pues haciendo un recuento de la presencia de metabolitos secundarios encontramosalcaloides, flavonoles, xantonas, flavonas y antocianinas, azúcares reductores, saponinasesteroidales, taninos y derivados de ácido gálico, antraquinonas y benzoquinonas yfinalmente cumarinas. Algo de lo más importante de estos metabolitos es la presencia deflavonoides y taninos puesto que estos proporcionan la parte antibacteriana que fue puntoclave para nuestra investigación.

Tomando en cuenta todo lo anterior y evaluando los resultados junto con el reto bacterianodando negativo a todas las pruebas, se comprueba la eficacia de este extracto al inhibir la presencia y crecimiento de E. coli y de Estafilococos aureus y obtener buena eficaciacorroborando la hipótesis planteada a lo largo del proyecto sin embargo según las fuentes deconsulta nos marca que este deja mejores resultados con una extracción cetónica, algo quesería interesante confirmar.

Edwin Jhonatan Gachuz Vazquez

Se cumplió con el objetivo, en base a las pruebas fitoquimicas realizadas puedo concluir que

en la hoja de guayaba tenemos la presencia de la mayoría de los metabolitos secundarios,esto debido a que no se pudieron realizar todos los análisis ya que no se tenían los reactivos para las demás pruebas, y para la determinación de azucares reductores se tuvo que cambiarlas pruebas, ya que en las pruebas de Fehling y Benedic no se podía notar el cambio y precipitado de los metales debido al color de nuestra muestra, la prueba se cambió por elreactivo de Tollens en el cual se pudo observar el espejo de plata.

Después de los análisis fitoquímicos se obtienen como resultado la presencia de alcaloides,flavonoles, xantonas, flavonas, antocianinas, azúcares reductores, saponinas esteroidales,taninos, derivados de ácido gálico, antraquinonas, benzoquinonas y cumarinas.

Para comprobar la presencia de actividad microbiana o el efecto contra la diarrea que se dicetienen las hojas, se sometió una infusión hecha a bases de hojas de guayabo a un retomicrobiano, utilizando las bacterias E. Coli y Estafilococos aureus causantes de dicho mal,en donde los resultados fueron favorables, debido a que no hubo crecimiento alguno de ambas bacterias, resultado el cual nos permite comprobar que nuestra hipótesis planteada esverdadera.

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RECOMENDACIONES:

 

Continuar el estudio antimicrobiano, astringente y antiséptico que proporcionan los taninosy flavonoides presentes en las hojas de guayabo psidium guajava l. 

 Cuantificar los metabolitos presentes las hojas de guayabo psidium guajava l. 

 Aislar los metabolitos de interés y/o de mayor proporción en las hojas para comprobar más propiedades farmacológicas.

10. REFERENCIAS BIBLOGRÁFICASBruneton, J. (2001). Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas Medicinales. 2ª Ed. Zaragoza:Acribia S. A.

SLDRevistaFármacéutica, Departamento de Farmacia, Universidad de Oriente. Cuba 2012.

Psiduim Guajava L., Species Plantarum 1: 470. 1453, UNAM 2014.

Pengelly, A. (2014). The constituents of Medicinal Plants. 2nd Ed. Cabi Publishing, U. K.

Van Ginkel, A. (2003). Apuntes del Máster y Diplomatura de posgrado de la UAB “Plantas

Medicinales y Fitoterapia. Módulo 2. Cultivo de plantas medicinales. Tecnología yProducción.” 

Rattanachaikunsopon P y Phumkhachorn P. Contents and antibacterial activity offlavonoids extracted from leaves of Psidium guajav. J Med Plant Res 2010; 4 (5): 393-396.

Rojas HNM, Acosta DS. Potenciales antitumorales en extractos acuosos de plantascubanas. III. Rev Cubana Farm 1980; 14(3): 325-328

Ozores, M. (2015). Cromatografía. Abril 24, 2016, de Laboratorio de técnicasinstrumentales UVA Sitio web: http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/cromatografa

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ANEXOS

Imagen  Proceso de sacado delas hojas de Psidium guajava

Imagen Trituración ymolienda de las hojas secas

Imagen Extracción por reflujo en

soluciónhidroalcoholica

Imagen Proceso de filtraciónImagen Preparación de la

 bacteria para el retomicrobiano

Imagen Toma dealícuota a los 10min

de agitación

Imagen Lectura del retomicrobiano despues de laincubación x 48h

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CUESTIONARIOEscribe cuales son las principales reacciones químicas y el mecanismo de reacción de lasmismas que se presentan en la detección de los metabolitos secundarios que identificaste enla práctica.

Glicosido Nucleo Químico Reacción deIdentificación

Fundamento

Quinonas BORNTRÄGER

Las antraquinonas dan color rojo en 1/2acuoso alcalino merced a la disolucióndebida al estado de resonancia de los OHfenólicos.Requiere que el núcleo antraquinona estélibre. En caso de glicósidos, es necesariouna hidrólisis previa y la posteriorextracción de las agliconas en medioorgánico (generalmente benceno otolueno).

Flavonoides SHINODA(Zn / HCl cc)

El zinc en polvo reacciona con HCl cc.El hidrógeno generado produce porreducción el ión flavilio de color rojoescarlata (varía desde el rosa muy débilhasta rojoescarlata.

Todos los flavonoides, exceptochalconas, auronas, e isoflavonas, dan

 positiva esta reacción.

Taninos Reacción c/gelatinaLos taninos precipitan las proteínas ensolución. Originan desde opalescencia

 blanca hasta precipitado.

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Saponinas

Por hidrólisis de lassaponinas seobtienencarbohidratos y unaaglicona, llamadagenéricamenteSAPOGENINA, lacual puede tenerun núcleoesteroide otriterpeno.

Podertensioactivo

Poder tensioactivo: se disuelven en aguacaliente y disminuyen la tensiónsuperficial de ésta; por lo tanto, al agitarsus soluciones, se formará una espumaabundante y relativamente estable. Seconsidera positva cuando la espuma es> o = a 0,5 cm y perdura 15 min o más.

Reacción de LiebermanBouchard

El grupo activador del grupo hidroxilo estan grande que el fenol reacciona con ácidonitroso, con formación de p-nitrosofenol,este compuesto es tautomero de lamonoxima de quinona, si se efectua lareacción en presencia de ácido sulfúricoconcentrado, se produce máscondensación con fenol y se forma unasolución de sulfato ácido de indofenol

AZÚCARESREDUCTORES Espejo de Plata

Los monosacáridos son capaces de reducir,en medio amoniacal, el ión Ag+ aAgo (plata metálica), que se deposita en las

 paredes del tubo.

Ag+ + 2 NH3  →  Ag (NH3)2+ + R-

CHO →  Ag0 + R-COONH4 

Una vez detectados los metabolitos secundarios que otros métodos utilizarías para realizar

el aislamiento y purificación de los mismos y como determinarías su estructura química,describe por lo menos tres métodos a emplear.

La purificación y el aislamiento de los principios activos se pueden llevar acabo pormétodos fisicoquímicos no cromatográficos y cromatográficos. 

a.  Métodos fisicoquímicos no cromatográficos: incluyen una serie de operacionescomo la sedimentación, decantación, centrifugación, filtración, precipitaciónselectiva, cristalización, partición, etc. 

 b.  Métodos cromatográficos: consiste en la separación de los componentes de una

mezcla debido a la diferente velocidad de elución a través de una fase estacionaria,cuando la mezcla es transportada por una fase móvil, las principales técnicascromatográficas son cromatografía en capa fina, cromatografía liquida,cromatografía en columna, cromatografía de gases y cromatografía de altaresolución. 

8/17/2019 Hojas de Guayaba Fitoquímica Final

http://slidepdf.com/reader/full/hojas-de-guayaba-fitoquimica-final 33/33

Sedimentación: se refiere a la remoción por efecto gravitacional de las partículas ensuspensión presentes en el agua. Estas partículas deberán tener un peso específico mayorque el fluido.

Cromatografía líquida: la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que

contiene a la fase fija. La separación cromatográfica en HPLC es el resultado de lasinteracciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil yestacionaria. A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de altorendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por lavolatilidad o la estabilidad térmica de la muestra.

La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturaleslábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase móvil líquida interactiva, otro parámetro se encuentradisponible para la selectividad, en adición a una fase estacionaria activa. Ofrece una mayorvariedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas interaccionesselectivas y más posibilidades para la separación.

Cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columnacromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil que es un gas inerte, ya diferencia de la mayoría de los tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona conlas moléculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de lacolumna.

Respecto a la cromatografía líquida, la cromatografía de gases tiene la ventaja de disponerde detectores mucho más universales (por ejemplo, el de ionización de llama). Además, para

numerosas aplicaciones, los métodos son más simples, más rápidos y más sensibles que loscorrespondientes a la cromatografía líquida de alta resolución. La instrumentación requerida para cromatografía de gases también es mucho más sencilla y económica que la empleadaen HPLC. Sin embargo, en cromatografía de gases, la influencia de la temperatura sobre ladistribución del equilibrio es considerable, a diferencia de la cromatografía líquida. Por ello,la cromatografía de gases presenta limitaciones en tres casos:

  Compuestos poco volátiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.  Compuestos sensibles a una elevación de la temperatura incluso moderada

(determinados compuestos de interés biológico)  Compuestos que se encuentran en forma iónica (puesto que son e n general poco

volátiles)

Por esta razón, la cromatografía de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla problema son volátiles o semivolátiles y térmicamente estables a temperaturas de hasta 350-400ºC.