ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITODEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍAINMUNOLOGÍA

Integrantes: Alejandro Olmedo, Andrea Vaca Fecha: 12 – 09 – 2013

Informe de Laboratorio Nº2

Práctica 2

TEMA: Grupo sanguíneo Rh; efectos indeseables de la inmunidad

OBJETIVO

Determinar el grupo sanguíneo y Rh, someterlos a compatibilidad con otros tipos y observar la reacción Ag-Ac

FUNDAMENTOS

El descubrimiento del sistema ABO para el grupo sanguíneo fue fundamental en la evolución de la transfusión sanguínea. Se supo entonces que si los eritrocitos de un grupo eran mezclados con el suero de otro grupo, sería aglutinados o hemolisados, aun cuando provinieran de individuos con un parentesco cercano. Tiempo después, se descubrió el factor Rh Rhesius en honor al mono donde fue investigado.

La inmunidad humoral comprende la producción de inmunoglobulinas Ac por linfocitos B, en respuesta a estímulos antigénicos específicos. La inmunidad celular comprende la interacción directa de los linfocitos T con las células de extrañas. Al entrar en contacto con eritrocitos de un grupo sanguíneo distinto al propio, el sistema inmunológico libera anticuerpos que se fijan a las células y las destruyen.

MUESTRA

Sangre total

Material

Agujas Tubos de ensayo de 12 x 75 mmJeringas Aplicadores de madera Torundas Ac anti A, anti B, anti DTorniquetes Antiglobulina específica IgGAlcohol Solución salinaPlaca de vidrio con círculos Pipetas desechables

MÉTODOGrupo sanguíneo y Rh

1. En caso de no contar con una placa marcada, trazar tres círculos en una placa de vidrio 2. Colocar una gota de sangre en cada círculo3. Agregar a cada círculo una gota de reactivo a distinto ac Anti A, B, D4. Mezclar el contenido de cada círculo con aplicadores de madera a distintos5. Observar la presencia o ausencia de aglutinación. La aglutinación indica la presencia

del antígeno para el anticuerpo agregado.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Se observó para cada tipo de muestra de sangre (A y B) las reacciones de aglutinación que ocurrían al agregar los distintos sueros con anticuerpos anti A, B y D y así se determina si una persona es del tipo sanguíneo A, B, AB, O y si presenta un factor Rh positivo o negativo.Esto ocurre porque en humanos, los eritrocitos poseen un conjunto de glucoproteínas y glucolípidos que pueden actuar como antígenos, que son sustancias capaces de estimular formación de anticuerpos reaccionando con el propio antígeno. Existen al menos 24 grupos sanguíneos con más de 100 antígenos que pueden ser detectables en la superficie de glóbulos rojos pero, los de interés general son los antígenos A, B y D (Rh) debido a la importancia a tomar en transfusión sanguínea, transplante de tejidos y enfermedades hemolíticas del recién nacido (Grispán, 2003).

En la figura 1, se puede observar las reacciones de aglutinación correspondientes para una persona de sangre A con factor Rh positivo, en la que en la primera gota desde la izquierda se puede observar aglutinación debido a una reacción antígeno-anticuerpo debido a los anticuerpos anti-A agregados demostrando la presencia de antígenos A, en la que los eritrocitos han sido destruidos; en la gota del centro no se observa nada debido que se agregó anticuerpos anti-B que reaccionarían con la presencia de antígenos B (ausentes en sangre A) y finalmente en la gota de la derecha se observa la aglutinación debido a los anticuerpos anti-D agregados demostrando la presencia de antígenos D (factor Rh positivo) (González, 2006).

Figura 1. Aglutinación por adhesión anticuerpos anti-A y anti-D (izquierda y derecha respectivamente)

En la figura 2, se puede observar las reacciones de aglutinación correspondientes para una persona de sangre B con factor Rh positivo, en la que en la primera gota desde la izquierda no se observa aglutinación con anticuerpos anti-A, indicando ausencia de antígenos A; en la gota del centro se observa aglutinación con anticuerpos anti-B indicando la presencia de antígenos B (característica de sangre B) y finalmente en la gota de la derecha se observa la aglutinación debido a los anticuerpos anti-D agregados demostrando la presencia de antígenos D (factor Rh positivo) (Arbeláez, 2009).

Figura 1. Aglutinación por adhesión anticuerpos anti-B y anti-D (centro y derecha respectivamente)

En la figura 3, se pueden observar los anticuerpos empleados para la determinación de grupo sanguíneo y factor Rh, desde izquierda a derecha se observa los anticuerpos anti-A, anti-B y anti-D respectivamente donde los anticuerpos anti A y B son anticuerpos monoclonales, anticuerpos provenientes de una línea germinativa celular de una sola célula, mientras que el anticuerpo anti D empleado es una mezcla de anticuerpos monoclonales con anti-D IgM que produce la aglutinación directa con los glóbulos rojos con antígeno D normal, que en caso de D

débiles (disminución de expresión de antígeno D) no aglutinan directamente para lo cual complementa el anti-D IgG (wiener-lab, 2007).

CUESTIONARIO

Cuál es la estructura de los grupos sanguíneosEl grupo sanguíneo en humanos posee clasificaciones según los antígenos y anticuerpos del sistema ABO y el factor Rh. El sistema ABO recibe su nombre debido a los antígenos A, B y “O” que indica una ausencia, mientras Rh se refiere al factor “Rho”, descubiertos en monos Rhesus, con 50 antígenos descubiertos hasta el momento.

Sistema ABO: - Las personas con sangre tipo A, poseen eritrocitos con antígenos A en su superficie y anticuerpos contra antígenos B (anti-B) en el plasma.- Las personas con sangre tipo B, poseen eritrocitos con antígenos B en su superficie y anticuerpos contra antígenos A (anti-A) en el plasma.- Las personas con sangre tipo O, poseen eritrocitos sin antígenos A o B en su superficie por lo que se considera donadores universales y poseen anticuerpos tanto anti-A como anti-B.- Las personas con sangre tipo AB, poseen eritrocitos con ambos antígenos A y B, pero no poseen anticuerpos anti-A o anti-B por lo que se les considera receptores universales

Factor Rh:- Personas con factor Rh negativo, no poseen antígeno D y pueden formar anticuerpos contra el factor Rh (antígeno D) si están expuestas a sangre Rh positiva.- Personas con factor Rh positivo, poseen el antígeno D y no poseen algún tipo de anticuerpo de este factor. (Universidad de Arizona, 2004)

Cuáles son las características estructurales de los antígenos del sistema ABOLos antígenos del sistema ABO corresponden a los antígenos A, B y H que en este caso corresponde al grupo sanguíneo O.

Estructura Antígeno A.- posee una β-D-galactosa ligada a la proteína y asociada a una β-D-N-acetilglucosamina, que se asocia con una β-D-galactosa y ésta asociada a una α-L-fucosa y una α-N-acetylgalactosamina.

Estructura Antígeno B.- posee una β-D-galactosa ligada a la proteína y asociada a una β-D-N-acetilglucosamina, que se asocia con una β-D-galactosa, y ésta asociada a una α-L-fucosa y una β-D-galactosa, a diferencia de antígeno A.

Estructura Antígeno H (Precursor presente en sangre tipo O).- posee una una β-D-galactosa ligada a la proteína y asociada a una β-D-N-acetilglucosamina, que se asocia con una β-D-galactosa, y ésta asociada a una α-L-fucosa.

Cuáles son los precursores de estos antígenosUna glicoproteína SP, llamada sustancia precursora, produce una sustancia H en presencia del gen H. Este gen se localiza en el cromosoma 19 compuesto de 3 exones y produce una enzima fucosil-transferasa que añadirá un azúcar a la glicoproteína SP, produciendo el antígeno H consistiendo de una cadena ligada a la proteína de galactosa, N-acetilglucosamina, y galactosa ligada a una fucosa (Calafell, 2008).

De qué manera se van formando las estructuras glicosídicas de los tipos ABOUna vez que se ha formado el antígeno precursor H, actúa el gen del locus ABO que se encuentra en el cromosoma 9 compuesto de 7 exones conteniendo 3 formas alélicas: A, B y O; el alelo A codifica una glicosil-transferasa que unirá una N-acetilgalactosamina a la Galactosa del fin en el antígeno H precursor, produciendo el antígeno A. El alelo B codifica una glicosil-transferasa que unirá una Galactosa más a la Galactosa del fin en el antígeno H precursor, produciendo el antígeno B. El alelo O, posee una falta de un nucléotido comparado con el alelo A que ocasiona un desplazamiento en el marco lectura resultando en una terminación prematura de la traducción ocasionando la degradación del mRNA, no codificando enzima alguna por lo que el precursor antígeno H queda intacto para este grupo sanguíneo (Calafell, 2008).

Cuál es el tipo sanguíneo BOMBAY y como se formaEs un tipo de sangre muy poco frecuente que no presenta ningún antígeno A, B o H en membrana de glóbulos rojos. Esto ocurre debido a que una persona es homocigota recesiva para el gen H por lo que no puede transformar la glicoproteína SP en precursor antígeno H que es necesaria para luego dar lugar a los antígenos A o B. Este tipo de personas rechaza transfusiones de cualquier tipo de sangre normal A, B, O, AB debido a que posee además de anticuerpos anti-A y Anti-B, un adicional anti-H rechazando incluso sangre O; siendo la solución que esta persona reciba la transfusión de sangre de otra persona con sangre “Bombay” (Mellado et al., 2009).

Que son las pruebas cruzadasSon pruebas de compatibilidad que fijan la seguridad transfusional entre donante-receptor, es entre el suero del receptor y células del donante (eritrocitos o plaquetas) e investiga posible presencia de anticuerpos en el suero mediante su reacción en diferentes medios físico-químicos. En una prueba cruzada mayor completa (PCM) se investiga posibles anticuerpos frente a Antígenos tanto en ABO como el resto de antígenos eritrocitarios en el suero del receptor. En una prueba cruzada mayor en medio salino (PC en salino) determina generalmente presencia IgM-Ac, en el suero del receptor frente a eritrocitos del dador (Barbolla y Contreras, 2007)

Que son las pruebas directa e indirecta de CoombsSon pruebas empleadas en inmunología y hematología que detectan anticuerpos en suero de sangre que reaccionan con antígenos de superficie de eritrocitos. La prueba directa se emplea para determinar si existen anticuerpos ya fijados a eritrocitos que son tomados de manera directa del paciente, estas células sacadas de la vena se lavan e incuban con un reactivo propio Coombs que poseen anticuerpos y se unirán a IgG, IgM. Indica un resultado positivo cuando se produce aglutinación de un grupo de células indicando distintos posibles trastornos. Mientras que la prueba indirecta detecta anticuerpos específicos de antígenos que pueden no estar presentes en los eritrocitos del paciente pero, si en eritrocitos de otras personas que puede ser como en el caso de madre-hijo por eritroblastosis fetal (Walport, Travers y Murphy, 2008).

Qué tipo de herencia se da en el sistema ABO y qué fenotipos se tendrían a partir de los genotipos:Este sistema es controlado por un gen en el locus ABO, que se hereda de manera mendeliana simple, con 3 formas de sus alelos ya explicados donde alelos A y B son dominantes sobre O y codominantes entre sí. Por lo que una persona fenotipo A puede ser de genotipo A/A o A/o, fenotipo B puede ser genotipo B/B o B/o, fenotipo O solo puede ser o/o, y fenotipo AB solo puede ser A/B resumidos en el cuadro a continuación (Calafell, 2008).

Cuadro 1. Genotipos y Fenotipos diferentesSangre

Genotipos AA Ao BBBo AB oo

Fenotipos A A B B AB O

Qué tipo de anticuerpos se forman contra los antígenos del sistema ABOEn el sistema ABO, existe un anticuerpo para cada tipo de antígeno, es así que para el antígeno A hay el anti-A, para el antígeno B hay el anti-B, por lo que un individuo que carezca de ambos antígenos producirá ambos anticuerpos (Sangre O). Dichos anticuerpos son predominantes del tipo IgM y menos frecuentes del tipo IgG. Existe un anti A-B que presenta una reacción cruzada con un antígeno presente en eritrocitos A y B, que es denominado antígeno C o complejo A,B. Existe a la par un anti-H que será el anticuerpo correspondiente para el antígeno H precursor de los antígenos A y B y antígeno presente en sangre tipo O (Universidad de Arizona, 2004).

Porque un individuo con fenotipo A o B tiene anticuerpos contra el fenotipo que no poseeDebido a que si poseyera anticuerpos contra los antígenos que posee existiera constantemente hemólisis en su sangre (algo absurdo contra la naturaleza) además se cree que este tipo de anticuerpos nacen contra defensa bacteriana que poseen antígenos similares que se adquirió la defensa acorde la evolución del humano (Grispán, 2003).

Cuáles son los mecanismos que participan en la eritroblastosis fetalEste trastorno proviene de la incompatiblidad Rh principalmente aunque en ocasiones puede deberse también a reacciones contra otros antígenos como Kidd, Kell. Una incompatiblidad ABO hemólisis grave en el feto con muy baja frecuencia ya que antígenos ABO generan una respuesta inmune con anticuerpos tipo IgM, anticuerpos que no cruzan la placenta y por ende no pueden atacar el feto. Se produce cuando una madre posee sangre Rh negativa y el feto por herencia del padre tiene Rh positiva, debido a esto la madre al poseer anticuerpos contra Rh el organismos de la madre no tolera los eritrocitos del feto tratándoles como agentes extraños creando anticuerpos tipo IgG que cruzan la placenta hasta el feto y atacan las células sanguíneas del mismo (González, 2006)

Cuál es la alternativa para evitar la isoinmunización materno fetal y como actúaUna vez que se ha determinado el caso de eritroblastosis fetal se puede realizar una acción preventiva ante la incompatiblidad Rh, la madre debe tomar un medicamento llamado RhoGAM durante y después del embarazo que es un globulina hiperinmune Rh (RhIg) que ocasiona la destrucción rápida de los eritrocitos del feto o bebé que puedan haber entrado en la circulación sanguínea materna, previniendo así que la madre genere anticuerpos Rh que pueden ser peligrosos para el feto o causar posibles futuras complicaciones del embarazo (González, 2006).

CONCLUSIONES

- Los grupos sanguíneos ABO y factor Rh se determinan mediante pruebas con anticuerpos que aglutinan los eritrocitos en la sangre indicando el grupo sanguíneo correspondiente.

- Los antígenos que determinan el grupo sanguíneo ABO que están presentes o ausentes en las membranas de los eritrocitos se encuentran regulados su expresión por 3 alelos de un gen.

- La determinación del grupo sanguíneo ABO como factor Rh es muy importante especialmente en enfermedades que requieran transfusiones

sanguíneas o determinación de histoinmunocompatibilidad para transplante de órganos, así como madres embarazadas en prevención de una isoinmunización materno fetal.

- Los anticuerpos son células del sistema inmune que sirven de detección y defensa contra cuerpos extraños como son agentes patógenos.

- Los antígenos son moléculas como glicoproteínas, glicolípidos o lipoproteínas donde el receptor o molécula fijadora en antígenos ABO consiste en un carbohidrato.

BIBLIOGRAFÍA Arbeláez C. Sistema de grupo sanguíneo ABO. (2009). Extraído de

http://www.medigraphic.com/pdfs/medlab/myl-2009/myl097-8c.pdf el 11/09/2013. Barbolla L., Contreras E., Pruebas pretransfusionales: compatibilidad de transfusión.

(2007). Extraído de http://sehh.org/archivos/informacion_fehh_fondo_capitulo04.pdf el 11/09/2013.

Calafell F. et al. Evolutionary dinamics of the human ABO gene. (2008) Human Genetics 124 (2): 123–135.

González J. Capítulo 41: Enfermedad hemolítica perinatal. Obstetricia. Elsevier. Quinta Edición. España (2006). Extraído de books.google.es el 11/09/2013.

Grispán S. Grupos Sanguíneos ABO y Rh-Revisión. (2003). Extraído de http://www.bvs.hn/RMH/pdf/1983/pdf/Vol51-3-1983-6.pdf el 11/09/2013.

Mellado S., Riquelme N., Cárdenas M., Pizarro F., Sáez A., Valenzuela C., Ahumada T., Escandón C., Colquicocha R., Maturana M. Manejo transfuncional de paciente Bombay, en el complejo hospitalario San José. Quinto Congreso de medicina transfusional. (2009). Extraído de http://www.hematologia.org/bases/arch664.pdf el 11/09/2013.

Universidad de Arizona. Los tipos sanguíneos: la guía. (2004). Extraído de http://www.biologia.arizona.edu/human/sets/blood_types/Intro.html el 11/09/2013.

Walport M., Travers P., Murphy K., Appendix I: Immunologists Toolbox. Janeway’s Immunobiology. Séptima edición (2008). Pp. 748-749.

Wiener-lab. Anti-D Rho, monoclonal. (2007). Extraído de http://www.wiener-lab.com.ar/wiener/catalogo/archivos/6429_anti_d_rho_monoclonal_sp.pdf el 11/09/2013.