ACTIVIDAD PEROXIDASA Y PSEUDOPEROXIDASA EN EXTRACTO DEL

FRUTO DE Daucus carota Y SANGRE HUMANA

Angulo, Diana; Estrada, Luis F. y Gutiérrez, Gustavo.

Espacio de Laboratorio de Bioquímica

Facultad de Ciencias Naturales

Universidad Icesi

1. RESULTADOS

Se llevaron a cabo, en términos generales,

dos grupos de ensayos: con muestras

nativas y con muestras desnaturalizadas

a fin de determinar si la actividad

peroxidasa; descomposición del peróxido

de hidrogeno H2O2 en oxígeno molecular

O2 y agua H2O, se debe a la actividad de

una enzima (Peroxidasa) u otro tipo de

agente químico (Pseudoperoxidasa).

Los resultados obtenidos en los ensayos

con muestras nativas se encuentran en la

tabla 1, en contraste, los resultados

obtenidos con las muestras de extracto de

fruto de Daucus carota y sangre humana

desnaturalizadas se encuentran en la

tabla 2. Cabe anotar la función de la

bencidina, un reactivo incoloro que al

oxidarse en presencia de oxígeno

(Generado por la descomposición del H2O2)

genera un viraje de color característico.

Tabla 1. Resultados de ensayos con muestras

nativas

Muestra

(mL)

Bencidina

(gotas)

H2O2

(Gotas)

Resultado

Zanahoria

2 3 Positivo

Sangre

diluida

2

3

Positivo

Tabla 2. Resultados de ensayos con muestras

desnaturalizadas

Muestra

(mL)

Bencidina

(gotas)

H2O2

(Gotas)

Resultado

Zanahoria

2 3 Positivo

Sangre diluida

2

3

Negativo

Adicionalmente, se puso a prueba la

persistencia de la enzima en un tejido de

algodón, manchándola con una muestra

nativa de sangre, enjuagándola con agua y

posteriormente realizando sobre ésta la

prueba con peróxido de hidrógeno y

bencidina generando un positivo como

resultado.

Tabla 3. Ensayo: presencia de actividad

peroxidasa sobre una tela con residuos de

sangre

Material Resultado

Tela con residuos de

sangre Positivo

Nota: Al agregar peróxido de hidrógeno

sobre la tela no se observó la formación de

burbujas, sin embargo si se generó el

cambio de color al agregar la bencidina.

2. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Es pertinente, en primera instancia,

comentar un poco acerca del reactivo que

hizo posible: La bencidina. Comenzando

por el rearreglo que hace posible su

síntesis con relativa facilidad (Figura

1)[1,2], éste compuesto de relativa sencillez

estructural ofrece una alternativa sencilla

para la determinación de la presencia de

sangre sobre superficies como las telas, lo

que resulta en una aplicación sin

precedentes en criminalística, dado que

como puede observarse en la tabla 3, aun

enjuagando con abundante agua la

superficie; es posible detectar la presencia

de actividad peroxidasa; intuyendo así la

presencia de sangre.

Figura 1. Rearreglo en síntesis de bencidina

La formación del compuesto coloreado que

genera la oxidación de la bencidina

(Figura 2) [3] es rápida y además es

favorecida por el hecho de que la

descomposición del peróxido de hidrogeno

(de la cual se obtiene el oxígeno necesario

para llevar a cabo la oxidación) es,

termodinámicamente hablando, muy

favorable [4] lo cual hace que el resultado

sea de inmediato observable.

Figura 2. Esquema de reacción, oxidación de

Bencidina

Continuando, es conveniente definir los

términos peroxidasa y Pseudoperoxidasa,

dónde el último hace referencia a un

compuesto no enzimático capaz de

catalizar la descomposición del peróxido

de hidrógeno (Permanganato de sodio, por

ejemplo), mientras el primero hace

referencia a una enzima con actividad

peroxidasa. El método planteado permite

diferenciar la presencia entre una y otra

sustancia ya que si existe actividad

peroxidasa antes de someter la muestra a

altas temperaturas pero dicha actividad

desaparece luego del calentamiento es

posible intuir que el catalizador es

termolábil, tal como las enzimas, pero si

dicha actividad no desaparece después del

calentamiento es posible afirmar que se

trata de un catalizador no termolábil como

los permanganatos y se estaría hablando

de actividad pseudoperoxidasa.

Al contrastar a tabla número 1 con la

número 2 es fácil notar quién es quién,

como puede observarse la actividad

peroxidasa en la muestra de sangre

desapareció después del calentamiento,

mientras que la del extracto de zanahoria

no, por tanto se puede afirmar que se

trata de un compuesto pseudoperoxidasa

mientras que la reacción es de tipo

enzimático en el caso de sangre.

3. CONCLUSIONES

Es posible afirmar que la

descomposición del peróxido de

hidrogeno en la sangre es de tipo

enzimático.

Por las pruebas realizadas después del

proceso de calentamiento se concluye

que la zanahoria cuenta con

compuestos tipo pseudoperoxidasa.

Con el ensayo de la tela manchada de

sangre y posteriormente enjuagada se

demostró que la presencia de las

peroxidasas persiste después del

lavado, por tanto sugiriendo que es

posible determinar facilmente la

presencia de sangre residual en una

prenda.

4. BIBLIOGRAFÍA

1. H. J. Shine, H. Zmuda, K. H. Kwart, A. G. Horgan,

C. Collins, B. E. Maxwell: Mechanism of the benzidine

rearrangement. Kinetic isotope effects and transition

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Am. Chem. Soc. 1981, 103, 955–956

2. H. J. Shine, H. Zmuda, K. H. Kwart, A. G. Horgan,

M. Brechbiel: Benzidine rearrangements. 16. The use

of heavy-atom kinetic isotope effects in solving the

mechanism of the acid-catalyzed rearrangement of

hydrazobenzene. The concerted pathway to benzidine

and the nonconcerted pathway to diphenyline, in: J.

Am. Chem. Soc. 1982, 104, 2501–2509

3. Philip David Josephy, Michael Novak (2013)

“Reactive electrophilic metabolites of aromatic amine

and amide carcinogens” Frontiers in Bioscience S5,

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4. Polmar, Norman; Kenneth J. Moore (2004).

Brassey's. ed. Cold War Submarines: The Design and

Construction of U.S. and Soviet Submarines. pp. 35–

36