Ispitivanje prisustva zenskih hormona u vodama Save i · PDF fileNa ovom projektu ispitivane su vode dve reke u Srbiji,Dunava i Save

Ispitivanje prisustva zenskih hormona u vodama Save i Dunava

Modernisation of Post-Graduate Studies in Chemistry and Chemistry Related Programmes 511044-Tempus-1-2010-1-UK-Tempus-JPCR
[HBTS] Page 2
UVOD Voda je osnovni preduslov za zivot svih zivih bica na Zemlji.Ona je izvor hrane i neophodnih minerala,sredstvo za rad,sredina za mnoge zive organizme, izvor energetskih resursa,mesto rekreacije,itd.Neophodna je za odrzavanje strukturnog jedinstva celija,tkivai celog organizma.Najvecu ulogu u zagadjivanju vode ima covek sa svojim aktivnostima.Izvori zagadjivanja zivotne sredine mogu se podeliti u dve kategorije:jednu cine prirodni izvori zagadjivanja a drugu predstavljaju vestacki.U procesu prirodnog kruzenja vode mnoge zagadjujuce materije koje covek proizvodi u okviru svojih raznovrsnih aktivnosti dospevaju u prirodne vode. Prema navodima naucnih saradnika i ekoloskih grupa,od kasnih devedesetih,naucna zajednica je saznala da su lekovi,posebno oralni kontraceptivi,pronadjeni u otpadnim vodama potencijalni zagadjivaci vode za pice. Na ovom projektu ispitivane su vode dve reke u Srbiji,Dunava i Save. Dunav je druga po velicini reka u Evropi i njen najprometniji plovni put koji kroz svoj tok od planine Svarcvald u Nemackoj do usca u Crno more povezuje deset zemalja i 80 miliona ljudi razlicitih jezika,nacionalnosti,istorijskog i kulturnog nasledja.Duga je 2850 km a u svom slivu ima 120 pritoka.Dunav se pruza kroz Srbiju sa 588 km. Reka Sava duga 945 km,podrucjem Beograda protice u duzini od 30 km.Usce Save u Dunav ispod Kalemegdana je nanadmorskoj visini od 68 metara. Cilj ovog naeg istraivanja je da se identifikuju zagaivai,tj.ostaci lekova(zenskih hormona) u uzorcima vode uzetim iz Save i Dunava, pomou LC/MS tehnike ( tecna hromatografija -masena spekrtometrija ) i da se ustanove njihovi izvori.Nedavne studije pokazuju zabrinutost zbog rizika raka prostate kod muskaraca usled dugorocnog konzumiranja ostataka farmaceutskih preparata koji se koriste kao zenski kontraceptivi a nalaze se u vodi za pice.
ZENSKI POLNI HORMONI
Zenski polni hormoni jos se nazivaju i estrogeni hormoni. Tri glavna estrogena kod zena su estriol,estron i estradiol (slike 1., 2. i 3.) ,zatim imamo i sinteticki estrogen,to je dietilstilbestrol,steroidni hormon progesterone i noretindron koji je sinteticki progesteron i koristi se kod oralnih kontraceptiva.
Slika 1.Estriol

[HBTS] Page 3
Slika 2.Estron
Slika 3. Estradiol
Razlika u strukturi ova tri estogena je u cetvrtom (D) prstenu. Estriol na cetvrtom prstenu ima vezane dve hidroksilne grupe (-OH), estradiol na cetvrtom prstenu ima jednu hidroksilnu grupu, dok estron ima keto grupu (=O).
Hemijska formula estriola je C18H24O3, dok mu je molekulska masa 288.39 gr/mol.
Hemijska formula estrona je C18H22O2, molekularna masa 270,336 gr/mol, a polu-zivot 19 casova.
Hemijska formula estradiola je C18H24O2, molekularna masa 272.39 gr/mol , dok mu je polu-zivot 13 casova.

[HBTS] Page 4
Estriol je hormone koji se javlja u toku trudnoce.
Estron je najmanje zastupljen od sva tri estrogena hormona u ljudskom (zenskom) organizmu. Dok je estradiol zastuljen u zenskom organizmu gotovo sve vreme, estron je zastupljen najvise u toku trudnoce. Estron je bitan za zdravstveno stanje, jer se konvertuje u estron sulfat, derivat estrona dugog zivota. Estron sulfat deluje kao rezerva estrona, koji se po potrebi konvertuje u aktivniji estradiol.
Estradiol je polni hormon koji nema samo uticaja na seksualnu funkciju, vec ima i uticaja i na ostale organe, cak i na strukturu kostiju. On je i primarni estrogen u organizmu muskarca. U periodu mogucnosti reprodukcije najveci deo estradiola kod zena proizvodi se aromatizacijom androstenediona u estriol, koji se kasnije konvertuje u estradiol. Manji deo ovog hormona se proizvodi u nadbubreznoj kori, a kod muskaraca u testisima. Estradiol se takodje proizvodi u mozgu i u zidovima artetija.Kolicina estadiola okd zena odrzava primarnu aktivnost jajnika.Estradiol, kod zena, deluje kao hormon rasta i razvoja organa za reprodukciju. Razvice sekundarnih polnih odlika kod zena je u zavisnosti od estrogena, narocito estradiola. Te promene pocinju u periodu puberteta, najprimetnije su u reproduktivnom dobu, a manje su primetne u periodu kada nivo estradiola pada, u periodu menopauze. To znaci da estradiol utice na razvoj grudi kod zena, promene u organizmu, razvoj skeleta, zglobova, deponovanja masti, kompozicije koze.Uticaj estradiola i estrogena uopste kod muskaraca je slozeno. Estriol se kod muskaraca proizvodi u posebnim celijama u testisima.
UZORKOVANJE VODE
Uzorci su uzeti 03.04.2013.godine, nisu konzervirani i uzeti su na sledecim mestima:
1. Reka Sava~Zabran
2. Reka Sava~Makis
3. Reka Sava~Kapetanija
4. Reka Dunav~Batajnica
5. Reka Dunav~Vinca

[HBTS] Page 5
Na mapi su prikazana mesta uzorkovanja:
Slika 4.Mesta uzorkovanja
Tabela 1. Lokacije na kojima je izvreno uzorkovanje

[HBTS] Page 6
POSTUPAK ISPITIVANJA
#SPE METOD:
UZORAK 400 ML RECNE VODE
KERTRIDZI:SUPERCLEAN-18,SPETUBES,6ML,1GR
SLIKA 5.KERTRIDZI
KONDICIONIRANJE:5ML HEKSANA,5ML ETIL ACETATA,5ML METANOLA,10ML MILLIQ-WATER
SLIKA 6.KONDICIONIRANJE

[HBTS] Page 7
PROPUSTANJE UZORAKA
SLIKA 7.PROPUSTANJE UZORKA
SUSENJE 20MIN U VAKUUMU
SLIKA 8.SUSENJE

[HBTS] Page 8
ELUIRANJE:6ML SMESE ETIL ACETAT-METANOL(5:1)
EVAPORACIJA DO SUVA
SLIKA 9.EVAPORACIJA
REKONSTITUISANJE SA 1ML METANOLA
FILTRIRANJE(LUT SYRINGE FILTERS PTFE,13MM,0.45UM
SLIKA10.FILTRACIJA

[HBTS] Page 9
SPREMLJENI UZORCI
SLIKA11.UZORCI(VIJALE)
Kondicioniranje kertrida Kondicioniranje kertrida je izvreno pomou etiri rastvaraa. Najpre je proputeno 5 mL heksana, zatim 5mL etil-acetata, onda 5 mL metanola, in a kraju 10 mL milliQ vode.
Nanoenje uzorka Nakon kondicioniranja, na kertride je naneto po 400 mL svakog uzorka. Nanoenje uzorka je vreno automatski, pomou cevica, zapreminskim protokom od priblino 3-5 mL/min.
Suenje Posle nanoenja uzorka izvreno je suenje kertrida na vakuumu u trajanju od 20 minuta.
Eluiranje Analiti su eluirani sa kertrida sa 6 mL smee etil-acetat methanol (5:1).
Nakon eluiranja, rastvori su upareni do suva u struji azota i rekonstituisani sa 1 mL metanola. Zbog mogueg prisustva razliitih vrsta neistoa u povrinskoj void uzorci su zatim filtrirani (LUT Szringe Filters PTFE, 13 mm, 0,45 m).

[HBTS] Page 10
TECNA HROMATOGRAFIJA I MASENA SPEKTROMETRIJA
APARAT NA KOM SU RADJENE ANALIZE I NJEGOVE KARAKTERISTIKE:
SLIKA12.LC SLIKA13.LC/MS
HPLC/ESI-MS ANALYSIS:
COLUMN: PHENOMENEX KINETEX 2.6 M, C18, 100 A, 150X3 MM
MOBILE PHASE: ACN/WATER
GRADIENT OF MOBILE PHASE:T0=40% OF ACN, T20=90% OF ACN
COLUMN TEMPERATURE: 25 C
FLOW: 0.25 ML.MIN-1
NEBULIZER PR

Documents

Ispitivanje prisustva zenskih hormona u vodama Save i · PDF fileNa ovom projektu ispitivane su vode dve reke u Srbiji,Dunava i Save