Laboratorijskadijagnostika u

kliničkoj praksidr Milan Jovanović

Logičan tok kliničkog postupka

Anamneza

Klnički simptomi

Laboratorijski i specijalni dijagnostički postupci

Dijagnoza

TerapijaPrognoza

IstorijaIstorijabolestibolesti

Specijalne dijagnostičke metode

– Laboratorijska ispitivanja krvi i drugih telesnihtečnosti

– Laboratorijska ispitivanja telesnih sekreta i ekskreta

– Brzi One - step testovi

– Citološka, histolška i histopatološka ispitivanja

– Ultrazvučna dijagnostika

– Endoskopija

– Rendgenološka i druga ispitivanja

Zašto raditi laboratorijske analize?

• Da se potvrde vaše kliničke sumnje

• Kod postojanja manje karakterističnih simptoma

• Praćenje toka bolesti

• Proveriti da li je bolest multisistemska (stare životinje)

• Provera pre opšte anestezije

• Praćenje efekta terapije

Klinička laboratorija

Faze u izvoñenju laboratorijskih analiza:

• Pre-analitička: – Zahtev za željenim analizama– Priprema pacijenata– Identifikacija pacijenata– Uzimanje uzoraka i njihova priprema– Transport uzoraka

• Analitička i

• Post-analitička

Veterinar:

“Ne verujem ovim rezultatima, mora da je u pitanju

neka laboratorijska greška”

Laboratorijske greške

Pre-analitičke (46 – 68,2%) - trenutno

osnovni izvor nepouzdanosti rezultata

Analitičke (7 – 13,3%)Post-analitičke (18,5 – 47%)

Najčešće pre-analitičke greške:

• Pogrešno vreme uzorkovanja krvi ili urina

• Netačna identifikacija i obeležavanje uzoraka

• Nepravilan redosled vañenja krvi tokom vañenja

u različite epruvete

• Neodgovarajući antikoagulans

• Nedovoljna količina uzorka

• Zgrušan uzorak

• Hemoliza, lipemija

• Formiranje hematoma tokom vañenja krvi

• Hemokoncentracija

Način uzimanja krvi

• Antikoagulansi

– EDTA 1 mg/ml krvi

– Natrijum oksalat 2 mg/ml krvi

– Natrijum citrat 5 mg/ml krvi

– Natrijum heparinat 0,75 mg/ml krvi

Izgled seruma

• Najčešći uzroci hemolize u serumu ili plazmi:– Nepravilno uzimanje

krvi

– Naglo mešanje krvi

– Predugo stajanje na sobnoj temperaturi

– Zamrzavanje

– Centrifugiranje na velikom broju obrtaja ili suviše dugo

Osnovne hematološke analize

• Broj eritrocita

• Broj leukocita

• Broj trombocita

• Koncentracija hemoglobina

• Hematokrit

• Eritrocitni indeksi (MCV, MCH, MCHC, RDW)

• Broj retikulocita

• Leukocitarna formula

• Koncentracija serumskog gvožña

• Koncentracija ukupnih proteina

• Sedimentacija eritrocita

• Morfologija krvnih elemenata

• Pregled kostne srži

Odreñivanje broja Eritrocita

•• brojanjem u specijalnim komoricama za brojanje brojanjem u specijalnim komoricama za brojanje eritrocitaeritrocita

•• automatskim brojaautomatskim brojaččima koji se moraju ima koji se moraju podepodeššavati za svaku avati za svaku žživotinjsku vrstuivotinjsku vrstu

Automatska metoda na bazi

provodljivosti ćelija

Kap krvi

TEHNIKA PRAVLJENJA KRVNOG RAZMAZA

Primeri loše napravljenih krvnih razmazaPrimer dobro napravljenog

krvnog razmaza

• napraviti KR u roku od 60 minuta od uzorkovanja

• sušenje najmanje 10 minuta na sobnoj temperaturi

• ukoliko je vazuduh vlažan: upotreba fena ili ventilatora (Allison i Meinkoth, 2007)

Način sušenja krvnih razmaza

• Krvni razmazi se boje Romanowskim tipom bojenja

1. May-Grünwald Giemsa (MGG)

2. Wright Giemsa

3. Hemacolor (Merck)

4. Diff-Quick (SiemensHealthcare Diagnostic)

Bojenje krvnih razmaza

Normalna morfologija eritocita(krvni razmaz bojenje po May-Grunwald Giemsa-i)

normohromni normociti

1. 6-7 mikrona

2. ružičasti sa izraženom bleñom centralnom zonom

3. okrugli

4. bez inkluzija

Eritrociti psa (uveličanje 100 x) Eritrociti mačke (uveličanje 100 x)

1. 5 –6 mikrona

2. ružičasti bez izražene bleñe centralne zone

3. okrugli i blago nazubljeni

4. bez inkluzija

Hematološki rezultati• WBC 19.1 x109/L 6.0-17.0

• Li 3.25 x109/L 1.0-4.80

• Mi 1.20 x109/L 0.5-1.35

• Gra 14.6 x109/L 3.0-12.0

• Li 17.0 % 12-30

• Mi 6.3 % 1-11

• Gra 76.7 % 62-87

• RBC 5.90 x1012/L 5.50-8.50

• HGB 168 g/L 120-150

• HCT 43.6 % 37.0-55.0

• MCV 74 fl 66-70

• MCH 28.5 pg 19.5-24.5

• MCHC 386 g/L 310-340

• RDW 16.6 % 15-20

• PLT 291 x109/L 200-500

• MPV 9.5 fl 8.0-10.0

• PDW 38.8 % 30-45

Retikulociti

Broj retikulocita se odre|uje na krvnom razmazu, u odnosu

na 1000 izbrojanih eritrocita, a za bojenje se koriste komercijalne

boje ili metilensko plavo.

Krvni paraziti

• Hartworm - srčani

crv

Leukociti

• Leukociti se dele na osnovu oblika jedra, sastavacitoplazme (prisustvo granula sa enzimima i antibaktreijskim supstancama) i sposobnosti da primajuboje na:

• Polimorfonuklearne }elije ili granulocite u koje ubrajamo:• Neutrofili - Ne• Bazofile - Ba• Eozinofile - Eo• Mononuklearne }elije ili agranulociti u koje ubrajamo:• Limfocite - Li • Monocite - Mo

Neutrofili

• Normalni neutrofili

kod pasa

• Mladi

nesegmentiran

neutrofil (označen

strelicom)

Bazofilni granulociti

• Bazofilni granulociti

pasa

• Bazofilni granulociti

mačaka

Eozinofilni granulociti

• Eozinofili pasa

• Eozinofili mačaka

Monociti

Limfociti

• Reaktivni limfocit stimulisan antigenom

• Atipičan limfocit kod limfocitne leukemije pasa

Trombociti

• Trombociti psa na

sredini slike strelicom

označem mlad

trombocit

• Trombociti i eritrociti

kod mačaka

BIOHEMIJSKI PARAMETRI KRVI U DIJAGNOSTICI UNUTRAŠNJIH

BOLESTI PASA I MAČAKA

Hematološki i biohemijski pregled krvi je najjednostavniji, najbrži i najjeftiniji pokušaj otkrivanja skrivenih unutrašnjih poremećaja koji se ne mogu videti golim okom

• Serumski proteini

- Ukupni proteini

- Albumini

- Globulini

• Oboljenje bubrega- Urea

- Kreatinin

- Fosfor

• Oboljenja jetre- ALT, AST, AP, GGT,

Bilirubin, Amonijak .....

• Oboljenja pankreasa

- Amilaza

- Lipaza

• Elektroliti

- Na, K, P, Ca, Mg, Cl.

• Mi{i}ni enzimi

- CK-3, AST

• Metabolizam ugljenihhidrata

- Glukoza, Fruktozamin

• Metabolizam masti

- Holesterol

• Mikro i makro elementi

- Fe, Pb, Zn, Cu

Brzi dijagnostički testovi u dijagnostici pojedinih oboljenja pasa

i mačaka

BRZI DIJAGNOSTIČKI TESTOVI

• Jednostavna primena• Očitavanje rezultata brzo i lako• Čuvaju se na sobnoj temperaturi• Vrsta uzorka: puna krv, plazma, serum, feces,

iscedak iz nosa i oka

rezultati nakon 10 minutarezultati nakon 10 minuta

FIV pozitivnoFeLV pozitivno FIV/FeLV pozitivnoKontrola (Negativno)

Način izvoñenja brzog dijagnostičkog testa za FIV i FeLV