LAPORAN PKM-P 100%.pdf

USULAN PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWA

JUDUL PROGRAM

PENGARUH BAKTERI PROBIOTIK DARI SUSU KUDA SUMBAWA

TERHADAP AKTIVITAS IMUNOGLOBULIN PADA MENCIT JANTAN

(MUS MUSCULUS)

BIDANG KEGIATAN:

PKM PENELITIAN

Diusulkan oleh:

Riska Ade Suryani NIM. 11.033 Angkatan 2011/2012

Mila Yulaikha NIM. 11.029 Angkatan 2011/2012

Kurnia Afifah NIM. 12.021 Angkatan 2012/2013

Aviva Erdianti NIM. 13.011 Angkatan 2013/2014

Iknewati Mega Rosita NIM. 13.024 Angkatan 2013/2014

AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA

MALANG

2014

DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................. i

DAFTAR ISI ..................................................................................... ii

RINGKASAN ................................................................................... iii

A. LATAR BELAKANG MASALAH ........................................ 1

B. PERUMUSAN MASALAH ................................................... 3

C. TUJUAN PENELITIAN ........................................................ 3

D. LUARAN YANG DIHARAPKAN ........................................ 3

E. KEGUNAAN ......................................................................... 3

F. TINJAUAN PUSTAKA ......................................................... 4

G. METODE PENELITIAN ....................................................... 9

H. JADWAL RENCANA PENELITIAN .................................. 15

I. RANCANGAN BIAYA ....................................................... 16

J. PELAKSANAAN PROGRAM ............................................ 17

K. HASIL DANPEMBAHASAN .............................................. 18

L. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................. 28

M. DAFTAR PUSTAKA ............................................................ iv

N. LAMPIRAN ........................................................................... v

I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Masalah

Produk pangan alami tersebut dapat berupa bahan makanan fungsional

yang berasal dari tanaman atau hewan. Susu merupakan bahan pangan alami

dari hewan mamalia, banyak mengandung senyawa bioaktif yang diantaranya

yaitu komponen protein protektif meliputi imunoglobulin, lisozim, laktoferin

dan peroksidase (Lonnerdal, 1985; May, 1988 dalam: Shida et al., 1992).

Umumnya susu yang dikonsumsi atau produk susu yang dipasarkan

berasal dari susu sapi, hal ini dikarenakan produksinya lebih besar

dibandingkan ternak lain seperti kambing dan kuda. Di Indonesia mulai

banyak masyarakat yang mengonsumsi susu kuda liar karena dapat

menanggulangi penyakit-penyakit tuberculosis (TBC), saluran pencernaan,

avitaminosis, anemia (lesu darah), penyakit kardiovaskuler, lever, dan ginjal

(Dharmojono, 1993).

Kandungan kadar protein dalam air susu kuda liar lebih tinggi daripada

susu sapi sebagai alternatif tambahan air susu ibu (ASI) bagi bayi dalam masa

pertumbuhan dan untuk kecerdasaan otak. Rantai protein pada susu kuda

sumbawa lebih pendek dibandingkan dengan yang ada pada susu sapi

sehingga mudah dicerna bayi. Dari hasil analisa kadar protein susu kuda liar

yaitu 1,92 g% (Heru Yuniati dan Ema Sahara, 2012).

Susu kuda juga merupakan sumber lemak, vitamin dan mineral.

Kandungan gizinya yang mendekati air susu ibu (ASI), cocok untuk bayi

karena kadar kaseinnya lebih rendah dibanding susu sapi, karena kaseinnya

rendah sehingga bentuk gumpalan yang lunak di saluran pencernaan (Welsch

et al, 1998).

Hal ini dibuktikan dari adanya sebuah penelitian untuk melihat

komponen bioaktif antara lain protein, lemak, karbohidrat, laktosa, kalsium dan

mineral seperti kalium dan magnesium. Susu kuda memiliki kadar protein

1,89g% dan kadar lemak 1,09g% serta bersifat asam dengan pH 3 4, tidak

mengandung bakteri patogen, bahan pengawet maupun bahan yang

membahayakan tubuh. (Ressang dan Nasution, 1998). Sifat keasaman pada

susu kuda Sumbawa berdampak baik karena memiliki aktivitas antimikroba

alami yang sangat kuat. Hal ini dilihat dari beberapa penelitian yang telah ada

seperti susu kuda dapat menghambat pertumbuhan Mycobacterium

tuberculosis (Rijatmiko, 2003) dan bakteri patogen perusak bahan pangan

(Hermawati et al, 2004).

Tidak membusuknya susu kuda tersebut juga menjadi bukti bahwa

adanya senyawa antimikroba alami di dalamnya seperti telah dikemukakan

oleh Randolp dan Gould, 1968 di dalam Corner, 1993. Selain tidak busuk, susu

kuda Sumbawa tidak menjadi pecah. Hal ini disebabkan oleh kadar kaseinnya

rendah ( Sudarwanto et al, 1998 ), selanjutnya dilaporkan bahwa susu kuda

Sumbawa mengalami fermentasi alami yang ditandai dengan penurunan pH

sampai 3,5 dan adanya pertumbuhan alami bakteri asam laktat sehingga susu

kuda mempunyai daya awet yang kuat.

Bakteri asam laktat termasuk dalam bakteri probiotik yang telah banyak

dimanfaatkan dalam penanggulangan berbagai penyakit infeksi di negara-

negara maju seperti menanggulangi diare pada anak-anak (Marteau et al,

2001), dan kelainan sistem imun (Isolauri et al, 2002). Bakteri probiotik ini

merupakan mikroorganisme yang bila dikonsumsi dalam kadar tertentu dapat

meningkatkan aktivitas antibodi karena menghasilkan IgA, IgG, dan IgM.

Antibodi merupakan biomolekul yang tersusun atas protein dan dibentuk

sebagai respon terhadap keberadaan benda-benda asing dalam tubuh. Antibodi

disebut juga imunoglobulin (Ig) atau serum protein globulin yang berfungsi

melindungi tubuh. Imunoglobulin senyawa pertama yang diidentifikasi

sebagai molekul dalam serum yang dapat menetralisir sejumlah

mikroorganisme penyebab infeksi penyakit (Wiwi, 2011).

Berdasarkan uraian di atas dan dengan adanya berbagai penelitian tentang

aktivitas antimikroba dalam pertumbuhan bakteri asam laktat secara alami

pada susu kuda, maka permasalahan yang timbul apakah bakteri asam laktat

pada susu kuda dapat meningkatkan sistem imun. Untuk itu dilakukan

penelitian pengaruh bakteri probiotik dari susu kuda liar terhadap aktivitas

imunoglobulin M dan imunoglobulin G.

1.2 Rumusan Masalah

Adapun rumusan masalah dalam penelitian ini yaitu bagaimana efek

bakteri probiotik dari susu kuda Sumbawa terhadap aktivitas imunoglobulin

pada mencit jantan ( Mus Musculus ) ?

1.3 Tujuan Penelitian

Adapun tujuan penelitian ini yaitu untuk menguji pengaruh bakteri

probiotik dari susu kuda Sumbawa terhadap aktivitas imunoglobulin pada

mencit jantan ( Mus Musculus ).

1.4 LUARAN PENELITIAN

Adapun luaran penelitian yang diharapkan dari program penelitian ini adalah

sebagai berikut :

1. Penelitian ini menghasilkan inovasi terbaru bagi masyarakat sebagai

minuman kesehatan.

2. Penelitian penggunaan Susu Kuda Sumbawa sebagai produk pangan dan

farmasi ini dapat dijadikan artikel penelitian yang terpublikasikan agar

fungsinya sebagai antibodi dapat diterapkan dalam masyarakat.

1.5 MANFAAT

Adapun manfaat dari penelitian ini adalah :

1.5.1 Mahasiswa

Bagi mahasiswa, program ini sangat berguna sebagai bahan motivasi dan

referensi dalam menciptakan inovasi inovasi terbaru yang bermanfaat di

lingkungan masyarakat.

1.5.2 Masyarakat

Bagi masyarakat, program in sangat berguna sebagai pengetahuan terbaru

tentang Susu Kuda Sumbawa yang bermanfaat dalam menjaga kesehatan

tubuh dari berbagai macam penyakit.

II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Susu

Susu adalah sekresi kelenjar ambing dari hewan mamalia tidak ditambah

atau dikurangi suatu zat apa pun ke dalamnya dan diperoleh dari pemerahan

ternak yang sehat (Sudono, 1985). Pada umumnya susu terdiri atas tiga

komponen utama, yaitu protein, lemak dan laktosa (Schmidt et al. 1988)

ditambah air, vitamin dan mineral (Sudono, 1985).

2.1.1 Komposisi Susu

Susu mengandung semua zat gizi yang diperlukan untuk pertumbuhan dan

kelangsungan hidup anak mamalia seperti lemak, protein, karbohidrat (laktosa),

vitamin, mineral dan air. Komponen dan karakteristik zat gizi yang terdapat dalam

susu memungkinkan zat gizi susu mudah diserap dan digunakan oleh tubuh hewan

atau manusia (Buckle et al, 1997).

Pada tabel 1 dapat dilihat perbedaan kadar lemak, protein, gula, abu dan

air dari beberapa spesies mamalia. Kadar lemak susu bervariasi dari 1,59% -

54,2%, yang palinga rendah pada kuda (1,59%) dan yang paling tinggi pada aning

laut (54,2%). Kadar lemak susu sapi 3,90% hampir mendekati kadar lemak susu

manusia 3,80%, sedangkan kadar lemak susu kuda 1,59% lebih rendah dari susu

sapi dan susu manusia. Kadar protein susu juga bervariasi yaitu berkisar antara

1,20% - 12,95%. Kadar protein paling rendah pada susu manusia (1,20%) dan

paling tinggi pada susu kelinci (12,95%). Dilihat dari kadar proteinnya, kadar

protein susu kuda (2,00%) paling mendekati kadar protein susu manusia (1,20%),

disamping itu kandungan kasein susu kuda juga rendah sehingga susu kuda tidak

menggumpal bila diasamkan (Buckle et al, 1987).

Kadar laktosa susu beberapa spesies mamalia bervariasi antara 1,79% -

7,00%, yang paling rendah pada susu ikan paus (1,79%) dan paling tinggi pada

susu manusia (7,00%). Sedangkan susu anjing laut tidak mempunya kadar laktosa.

Dari variasi tersebut, kecuali lemak komposisi susu kuda mendekat kada laktosa

susu manusia (Buckle et al, 1997).

Tabel 1. Komposisi susu beberapa spesies mamalia

Jenis Lemak (%) Protein (%) Laktosa

(%)

Abu (%) Air (%)

Kambing 4,09 3,71 4,20 0,79 87,81

Ikan Paus 22,24 11,90 1,79 1,66 63,00

Kelinci 13,60 12,95 2,40 2,55 68,50

Kerbau 7,40 4,74 4,64 0,78 82,44

Kuda 1,59 2,00 6,14 0,41 89,86

Domba 8,28 5,44 4,78 0,90 80,60

Anjing laut 54,20 12,00 - 0,53 34,00

Sapi 3,90 3,40 4,80 0,72 87,10

Manusia 3,80 1,20 7,00 0,21 87,60

2.1.2 Susu Kuda Liar

Susu kuda liar adalah susu yang berasal dari ambing kuda betina yang

sehat tanpa ditambah atau dikurangi zat apapun yang secara empiris telah

digunakan sebagai obat yang dapat menyembuhkan berbagai penyakit seperti

penyakit saluran pencernaan, tuberkulosis, anemia, radang paru-paru dan kanker.

Susu kuda liar dari Sumbawa mempunyai keistimewaan yaitu tidak mengalami

penggumpalan dan kerusakan meskipun tidak dipasteurisasi dan tanpa diberi

bahan pengawet apapun, serta tahan disimpan pada suhu kamar sampai 5 bulan.

Sifat ini memberi petunjuk bahwa dalam susu kuda liar Sumbawa terkandung zat

yang dapat menghambat pertumbuhan atau membunuh bakteri yang diduga

senyawa antimikroba alami.

2.2 Antimikroba

Menurut Randolph dan Gould (1968) dan Reiter (1985) yang disitasi oleh

Conner (1993), mengelompokkan senyawa antimikroba alami dari susu terdiri

dari immunoglobulin, lysozym, dan laktoferin. Sedangkan Naidu (2000)

menyatakan bahwa beberapa kelompok senyawa antimikroba alami susu adalah

laktolipida dan senyawa protein yaitu laktoferin, laktoperoxidase dan

laktoglobulin.

a. Immunoglobulin

Imunoglobulin atau antibodi adalah sekelompok glikoprotein yang

terdapat dalam serum atau cairan tubuh pada hampir semua mamalia.

Imunoglobulin termasuk dalam famili glikoprotein yang mempunyai

struktur dasar sama, terdiri dari 82-96% polipeptida dan 4-18%

karbohidrat. Komponen polipeptida membawa sifat biologik molekul

antibodi tersebut. Molekul antibodi mempunyai dua fungsi yaitu mengikat

antigen secara spesifik dan memulai reaksi fiksasi komplemen serta

pelepasan histamin dari sel mast.

Imunoglobulin G ( Ig G) disebut juga rantai (gamma)

Antibodi dominan pada respon sekunder dan menyusun pertahanan yang

penting melawan bakteti dan virus. Ini merupakan satu-satunya antibodi

yang mampu melintasi plasenta,oleh karena itu merupakan imunoglobulin

yang paling banyak ditemukan pada bayi yang baru lahir.

Imunoglobulin A ( Ig A) disebut juga rantai (alpha)

Imunoglobulin utama pada hasil sekresi misalnya susu, saliva dan air mata

serta sekresi traktus respiratorius, intestinal dan genital. Imunoglobulin

inimelindungi membran mukosa dari serangan bakteri dan virus.

Imunoglobulin M ( Ig M) disebut juga rantai (mu)

Antibodi pertama yang bersirkulasi sebagai respons terhadap pemaparan

awal ke suatu antigen. Konsentrasinya dalam darah menurun secara cepat.

Hal ini secara diagnostik bermanfaat karena kehadiran IgM umumnya

mengindikasikan adanya infeksi baru oleh pathogen yang menyebabkan

pembentukannya.

III. METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan metode penelitian jenis eksperimen yaitu

dengan mengetahui pengaruh bakteri probiotik yang terdapat pada susu kuda liar

terhadap aktivitas imunoglobulin pada hewan uji.

a. Tahap persiapan

Tahap persiapan yang dilakukan yaitu menentukan sampel penelitian,

menentukan lokasi dan waktu penelitian, serta menghitung kebutuhan bahan dan

mempersiapkan peralatan yang diperlukan sesuai dengan kebutuhan.

b. Tahap pelaksanaan

Tahap pelaksanaan meliputi pengumpulan data, isolasi bakteri probiotik dari

susu kuda liar, pemilihan dan penyiapan hewan uji serta perlakuan terhadap

hewan uji dalam pengujian aktivitas imunoglobulin.

c. Tahap akhir

Tahap akhir meliputi pengolahan data, analisis data, dan membuat

kesimpulan tentang aktivitas dari bakteri probiotik dari susu kuda liar terhadap

aktivitas imunoglobulin pada hewan uji.

3.2 Instrument Penelitian

a. Alat

Adapun alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah inkubator,

sentrifuge, cawan petri, sumur mikrotiter tipe U (Well plate 96 lubang),

mikropipet (socorex), blue tip, autoklaf

b. Bahan

Susu kuda liar, bakteri asam laktat dari susu kuda liar, sel darah merah

domba 2%, larutan Phosphate Buffer Saline pH 7, NaCl, media MRSA,

hewan uji yaitu mencit jantan ( Mus musculus ), alat suntik.

3.3 Metode Pengumpulan Data

1. Tahap Penyiapan alat dan bahan

Setiap alat yang akan digunakan dicuci bersih dan disterilkan

dalam autoklaf. Bahan yang akan digunakan juga disiapkan.

2. Tahap Penambahan bobot hewan uji

Setiap hari hewan uji diberi makanan sekitar 3 4 minggu hingga

mencapai bobot badan 25-30g.

3. Proses Fermentasi

a. Susu kuda Sumbawa disimpan pada suhu ruang 27oC.

b. Diuji mutu dari susu kuda Sumbawa tiap minggunya yang telah

difermentasi dengan beberapa parameter.

d. Susu kuda Sumbawa yang memiliki kualitas terbaik setelah difermentasi,

digunakan untuk dilakukan pengujian pada mencit.

4. Identifikasi Susu Kuda Sumbawa terfermentasi

a. Organoleptis

Susu kuda Sumbawa yang melalui proses fermentasi diamati secara

organoleptis meliputi bentuk, warna, aroma, rasa.

b. Derajat Keasaman (pH)

Pengukuran derajat keasaman menggunakan alat pH meter. Sebelum

digunakan alat distandarisasi dulu menggunakan dua larutan buffer yaitu

buffer pH 4 dan pH 7. Sekitar 25 ml sampel dimasukkan ke dalam gelas piala,

elektroda pH meter dicelupkan ke dalam sampel, kemudian dilakukan

pembacaan pH sampel setelah dicapai nilai yang tetap.

c. Viskositas (Viskometer Ostwold)

Mempersiapkan sampel yang akan diuji.

Sebelum digunakan , viscometer hendaknya di bersihkan terlebih dahulu

Letakkan viscometer pada posisi vertical

Pipet cairan yang akan ditentukan kekentalannya dimasukkan kedalam

reservoir a sampai melewati garis reservoirnya (kira-kira setengahnya)

Biarkan viscometer beberapa menit dalam thermostat untuk

menyeimbangkan atau mencapai suhu yang di kehendaki

Cairan dihisap melalui pipa b sampai melewati garis m.reservoirnya

Cairan dibiarkan turun sampai garis n

Catat waktu yang dibutuhkan cairan untuk mengalir dari garis m ke n

.

d. Total Asam Tertitrasi

Prinsip : Jumlah asam dihitung sebagai asam laktat.

Prosedur :

1. Menimbang contoh sebanyak 10 g contoh (W) ( pipet 10 ml contoh)

2. Melarutkan dalam air bebas CO2 sebanyak 2 kali volume

3. Menambahkan 2 tetes indikator PP dan titrasi dengan larutan NaOH 0,1 N

sampai terbentuk warna merah muda.

Perhitungan :

Jumlah asam =

Keterangan :

W adalah bobot contoh, dinyatakan dalam gram (g);

V adalah volume larutan NaOH, dinyatakan dalam mililiter (ml);

N adalah normalitas larutan NaOH.

90 adalah berat molekul asam laktat

e. Total Bakteri Asam Laktat

Prinsip : Pertumbuhan kultur starter setelah contoh diinkubasikan

dalam pembenihan yang sesuai selama 24 jam sampai 48 jam pada suhu (35

1) C.

Prosedur :

1. Membuat pengencer NaCl 0,85% sebanyak 72 mL kemudian disterilkan

dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit.

2. Membuat media MRS agar sebanyak 135 mL kemudian disterilkan dengan

menggunakan autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit.

3. Sterilkan semua alat dan bahan yang akan digunakan selama 30 menit di

autoklaf pada suhu 121oC

4. Menyiapkan 8 buah tabung, kemudian masukkan 9 ml pengencer NaCl

0,85% kedalam masing - masing tabung reaksi.

5. Melakukan pengenceran dipipet 1 ml sampel dan dimasukkan ke dalam

tabung reaksi berisi 9 ml NaCl 0,85% dan dihomogenkan. Maka didapatkan

pengenceran 10-1

.

6. Dari pengenceran 10-1 dipipet 1 ml lalu dimasukkan ke dalam botol yang

berisi 9 ml NaCl 0,85% dan dihomogenkan. Maka dipatkan Pengenceran 10-2

.

7. Dari pengenceran 10-2 dipipet 1 ml lalu dimasukkan ke dalam botol yang

berisi 9 ml NaCl 0,85% dan dihomogenkan. Maka dipatkan Pengenceran 10-3

8. Prosedur dilakukan hingga didapat pengenceran 10-8

9. Diambil 1 ml dari tiap tingkat pengenceran yaitu, 10-1,10-2 , 10-3 , 10-4, 10-5,

10-6

, 10-7

, dan 10-8

kemudian masing-masing dimasukkan ke dalam 8

cawan petri steril.

10. Dituang media MRS agar 15 ml hingga menutupi semua dasar cawan petri

11. Goyangkan cawan petri dengan hati-hati (putar dan goyang ke depan, ke

belakang, ke kanan dan ke kiri) sehingga sampel dan media tercampur

merata dan memadat

12. Ditambahkan 1 cawan petri dikhususkan berisi media MRS agar

digunakan sebagai control

13. Dimasukkan semua cawan petri dengan posisi terbalik ke dalam lemari

pengeram atau inkubator pada suhu 35C selama 24 jam sampai 48 jam;

14. Diinkubasi pada inkubator pada suhu 37C selama 2 x 24 jam.

15. Diamati hasilnya

5. Tahap Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah Domba 2%

Sebanyak 2 ml darah domba disentrifugasi dengan kecepatan 1500

rpm untuk memisahkan sel darah merah domba (SDMD) dari plasmanya.

Sel darah merah domba yang didapatkan dicuci dengan penambahan

sejumlah besar Phosphat Buffered Saline (PBS) dalam tabung lalu tabung

tersebut dibolak-balik beberapa kali, setelah itu disentrifugasi kembali.

Pencucian dilakukan paling sedikit 3 kali. Setelah disentrifugasi, PBS

dikeluarkan sehingga yang tertinggal adalah SDMD 100%, lalu

ditambahkan lagi PBS dengan jumlah yang sama hingga diperoleh

suspensi SDMD 50%. Sebanyak 0,4 ml SDMD 50% diencerkan dengan

9,6 ml PBS hingga diperoleh suspensi antigen (SDMD 2% v/v).

4. Tahap Pemilihan dan Penyiapan Hewan Uji

Hewan uji yang digunakan adalah mencit jantan Mus musculus

yang sehat dengan bobot badan 20-30 gram, sebanyak 10 ekor mencit

yang dibagi berdasarkan perlakuan dan dinyatakan telah teracak dengan

baik jika bobot badan tiap mencit tidak berbeda nyata.

5. Tahap Perlakuan Terhadap Hewan Uji

Pada perlakuan ini, mencit jantan Mus musculus diimunisasi

dengan 1 ml suspensi sel merah darah domba 2 % secara intraperitoneal.

Untuk perlakuan isolat bakteri probiotik setelah diimunisasi bakteri

probiotik dilarutkan dengan NaCMC sebanyak dengan faktor konversi

dosis mencit dengan volume 1 ml/25 g bobot badan secara oral setiap hari

selama 10 hari. Pada hari ke sebelas, darah mencit jantan diambil secara

intrakardiak untuk mengetahui aktivitas imunoglobulin. Perlakuan yang

sama dalam penelitian ini juga diberikan pada kontrol larutan NaCMC

sebanyak 1 ml/25g bobot badan secara oral setiap hari selama 10 hari.

Sampel darah hewan uji diambil secara intrakardiak pada hari kesebelas

setelah imunisasi dan diletakkan pada suhu kamar selama 1-2 jam hingga

darah tersebut menggumpal lalu diambil serumnya dengan cara

disentrifuge selama 10 menit dengan kecepatan 3000 rpm.

6. Tahap Uji Aktivitas Imunoglobulin G

Sumber bakteri probiotik yang dari susu kuda liar yang diberikan

secara peroral sebanyak 1 ml (106 sel)/30 g bobot badan mencit selama

sepuluh hari. Setiap hewan diimunisasi dengan antigen sel darah merah

domba (SDMD) 2 % v/v secara intra-peritoneal sebanyak 1 ml/30 g BB

mencit. Peng-amatan aktivitas Imunoglobulin G (IgG) dilakukan pada hari

kesebelas dengan metode hemaglutinasi titer antibodi.

7. Tahap Uji Aktivitas Imunoglobulin M

Sumber bakteri probiotik dari susu kuda liar, yang diberikan secara

peroral sebanyak 1 ml (106 sel)/30 g bobot badan mencit selama lima hari.

Sebelum diberi sampel uji, setiap hewan diimunisasi dengan antigen sel

darah merah domba (SDMD) 2 % v/v secara intraperitoneal se-banyak 1

ml/ 30 gram BB mencit. Pengamatan aktivitas imunoglobulin M (IgM)

dilakukan pada hari keenam dengan metode hemaglutinasi titer antibodi.

8. Tahap Uji Hemaglutinasi

Serum yang diperoleh lalu di encerkan secara double dilution

dengan phosphat Bufferred Saline (PSB) dengan perbandingan 1/4, 1/8,

1/16, 1/32, 1/64, 1/128, 1/256, dan 1/ 512. Dari masing- masing

perbandingan ini di pipet sebanyak 50l dan diletakkan pada 8 sumur

piring mikrotiter (well plate 96) isolat bakteri probiotik dari susu kuda liar

dan kontrol NaCMC. Setelah itu, masing-masing ditambahkan 50 ul

suspensi sel darah merah domba 2 % pada setiap sumur dan./ digoyang-

goyang selama 5 menit agar homogen. Selanjutnya di inkubasi pada suhu

37oC selama 60 menit dan didiamkan pada suhu kamar. Setelah itu

dilakukan pengamatan pengenceran tertinggi dari setiap serum darah

mencit jantan yang masi dapat mengaglutinasi sel darah merah domba.

IV. JADWAL RENCANA PENELITIAN

BULAN Ke-1 Ke-2 Ke-3 Ke-4 Ke-5

Tahap Penambahan bobot hewan uji

Persiapan Alat dan Bahan

Tahap Penyimpanan Susu Kuda Sumbawa

Tahap Pengujian Mutu Fisik, Kimia,

Mikrobiologi

Tahap Pembuatan Suspensi Sel Darah

Merah Domba 2%

Tahap Pemilihan dan Penyiapan Hewan

Uji

Tahap Perlakuan Terhadap Hewan Uji

Tahap Uji Hemaglutinasi

Analisis Data

Pelaporan

V. RANCANGAN ANGGARAN

No Jenis Anggaran Jumlah Keterangan Biaya

A Peralatan Penunjang

1. Kain Lap 1 pcs Rp. 20.000,00 Rp. 20.000,00

2. Tissue Gulung 5 pcs Rp. 4.000,00 Rp. 20.000,00

3. Botol Kaca 9 pcs Rp. 10.000,00 Rp. 90.000,00

4. Sendok Tanduk 1 pcs Rp. 9.000,00 Rp. 9.000,00

5. Pipet Tetes 3 pcs Rp. 1.500,00 Rp. 4.500,00

6. Tempat minum mencit 10 pcs Rp. 8.000,00 Rp. 80.000,00

7. Pembuatan Kandang Mencit

10 pcs Rp 25.000,00 Rp. 250.000,00

8. Mikrotiter 80 pcs Rp. 300,00 Rp. 24.000.,00

9. Sonde 2 pcs Rp. 7.500,00 Rp. 15.000,00

10. Spuit 5 pcs Rp. 2.500,00 Rp. 12.500,00

Sub-Total Rp. 525.000,00

B. Bahan Habis Pakai

1. Susu Kuda Liar 5,5 L Rp. 100.000,00 Rp. 550.000,00

2. NaCl 10 g Rp. 2.500,00 Rp. 25.000,00

3. NaOH 5 g Rp. 2.000,00 Rp. 10.000,00

4. As. Oksalat 10 g Rp. 1.000,00 Rp. 10.000,00

5. Aquades 25 L Rp. 25.000,00 Rp. 125.000,00

6. Media MRSA 105 g Rp. 5.000,00 Rp. 525.000,00

7. Darah Domba 200 mL Rp. 100.000,00/50

ml

Rp. 400.000,00

8. Na-CMC 100 g Rp. 12.000,00 Rp. 12.000,00

9. Kertas Coklat 8 pcs Rp. 1.000,00 Rp. 8.000,00

10. Mencit 35 ekor Rp. 15.000,00 Rp. 525.000,00

11. Larutan Phosphat Buffered

Saline

23 L Rp. 192.600,00 Rp. 4.429.800,00

12. Pakan Standart Mencit 100 g Rp. 150.000,00 Rp. 150.000,00

13. Gas LPG 3 kg Rp. 16.000,00 Rp. 16.000,00

Sub-Total Rp. 6.785.800,00

C. Perjalanan

1. Akomodasi Susu Kuda

Liar

Rp. 150.000,00 Rp. 150.000,00

Sub-Total Rp. 150.000,00

D. Lain-lain

1. Sewa Lab. Mikrobiologi 8 kali Rp. 250.000,00 Rp. 2.000.000,00

2. Sewa Lab. Farmakognosi 5 kali Rp. 250.000,00 Rp. 1.250.000,00

3. Sewa Lab. Biosains 1bulan Rp. 350.000,00 Rp. 350.000,00

Sub-Total Rp. 3.600.000,00

Total Biaya Rp.

11.060.800,00

VI. PELAKSANAAN PROGRAM

A. Waktu dan Tanggal Pelaksanaan

Pelaksanaan penelitian ini dilaksanakan mulai bulan Februari 2014 diawali

dengan penyiapan alat dan bahan serta penyewaan laboratorium kemudian

dilakukan proses penyimpanan susu kuda Sumbawa, pengujian mutu fisik, kimia,

pengujian aktivitas imunoglobulin yang selesai pada bulan Juli 2014.

B. Jadwal Pelaksanaan

VII. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian

Hasil penelitian telah mendapatkan hasil yang sesuai dengan rencana awal.

Hasil penelitian yang telah dilaksanakan menghasilkan data-data yang tersusun

secara statistik. Data yang didapatkan diuraikan sebagai berikut :

BULAN Ke-1 Ke-2 Ke-3 Ke-4 Ke-5

Persiapan Alat dan Bahan

Tahap Penyimpanan Susu Kuda Sumbawa

Tahap Pengujian Mutu Fisik, Kimia,

Mikrobiologi

Tahap Pembuatan Suspensi Sel Darah

Merah Domba 2%

Tahap Pemilihan dan Penyiapan Hewan

Uji

Tahap Perlakuan Terhadap Hewan Uji

Tahap Uji Hemaglutinasi

Analisis Data

Pelaporan

4.1.1 Uji Fisikokimia Susu Kuda Fermentasi

Adapun hasil identifikasi susu kuda setelah fermentasi adalah sebagai berikut :

Tabel 4.1 Hasil Uji Mutu Fisik

No

Umur

Simpan Susu

Kuda

Uji Mutu

Organoleptis

Viskositas

Pemeriksaan

pH

Warna Bau Rasa

1. 0 minggu putih Bau khas

susu

Sedikit

manis

1,173 x 10-3

4,95

2. 1 minggu putih Bau

sedikit

asam

Sedikit

Asam

1,183 x 10-3

4,36


asam

Sedikit

Asam

1,191 x 10-3

4,33


asam

Asam 1,191 x 10-3

4,30


asam

Asam 1,202 x 10-3

4,29


asam

Asam 1,202 x 10-3

4,26


asam

Asam 1,210 x 10-3

4,23


sangat

asam

Sangat

Asam

1,214 x 10-3

4,22


sangat

asam

Sangat

Asam

1,218 x 10-3

4,19

10. 9 minggu Putih Bau

sangat

asam

Sangat

Asam

1,218 x 10-3

4,19


sangat

asam

Sangat

Asam

1,218 x 10-3

4,19

12. 11 minggu Putih Bau

sangat

asam

Sangat

Asam

1,218 x 10-3

4,18

Tabel 4.2 Hasil Uji Mutu Kimia

No

Umur

Simpan

Susu Kuda

Total Asam Tertitrasi

Rata-rata

(mL)

Jumlah

Asam

(%) I

(mL)

II

(mL)

III

(mL)

1 0 minggu

2 1 minggu 8,25 8,25 8,2 8,23 0,7407

3 2 minggu 7,20 7,25 7,25 7,23 0,6507

4 3 minggu 6,95 7,1 6,9 6,98 0,6282

5 4 minggu 6,9 6,8 6,8 6,83 0,6147

6 5 minggu 6,25 6,20 6,25 6,23 0,5607

7 6 minggu 5,30 5,30 5,30 5,30 0,4777

8 7 minggu 5,20 5,25 5,20 5,21 0,4689

9 8 minggu 5,15 5,10 5,10 5,11 0,4599

10 9 minggu 5,15 5,10 5,10 5,11 0,4599

11 10 minggu 5,10 5,10 5,10 5,10 0,4590

12 11 minggu 5,10 5,10 5,10 5,10 0,4590

Tabel 4.3 Hasil Uji Mutu Mikrobiologi

No Umur

Simpan Susu

Kuda

Pengenceran

Kontrol 10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

10-6

10-7

10-8

1 0 minggu X 143 131 124 119 87 77 TSU

D

TSU

D

2 1 minggu X 195 187 173 164 143 134 127 TSU

D

3 2 minggu X 256 241 223 218 147 139 129 115

4 3 minggu X 278 252 235 231 151 143 138 119

5 4 minggu X 287 265 243 239 167 159 148 137

6 5 minggu X 296 276 253 241 187 176 154 142

7 6 minggu X TBU

D

297 265 258 197 181 172 167

8 7 minggu X TBU

D

TBU

D

295 270 210 198 183 171

9 8 minggu X TBU

D

TBU

D

TBU

D

TBU

D

TBU

D

215 195 187

10 9 minggu

X TBU

D

TBU

D

TBU

D

TBU

D

TBU

D

217 197 188

11 10 minggu X TBU

D

TBU

D

TBU

D

TBU

D

TBU

D

218 199 189

12 11 minggu X TBU

D

TBU

D

TBU

D

TBU

D

TBU

D

218 199 189

4.2 Aktivitas Imunoglobulin

Hasil uji aktivitas imunoglobulin dari perlakuan susu kuda Sumbawa fermentasi dan

kontrol NaCMC dapat dilihat pada tabel I :

Kontrol P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8

1/8 1/8 1/8 1/8 1/16 1/32 1/16 1/32 1/64

1/8 1/4 1/8 1/8 1/16 1/32 1/32 1/32 1/64

1/4 1/4 1/8 1/16 1/32 1/16 1/32 1/32 1/128

1/8 1/8 1/4 1/16 1/16 1/32 1/32 1/32 1/128

1/4 1/4 1/8 1/8 1/32 1/16 1/32 1/64 1/64

Histogram aktivitas imunoglobulin dengan mengkonversi nilai titer antibodi dengan

rumus [2 log (titer) 1] dapat dilihat pada grafik 1 :

*titer immunoglobulin merupakan pengenceran tertinggi yang masih dapat

mengaglutinasikan antigen.

4.2 Pembahasan

Mutu atau kualitas susu merupakan hubungan sifat-sifat susu yang mencerminkan

tingkat penerimaan susu tersebut oleh konsumen. Sifat-sifat tersebut meliputi sifat fisik,

kimiawi, dan mikrobiologi. Sifat fisik susu menunjukkan keadaan fisik susu yang dapat

diuji dengan peralatan tertentu atau panca indera. Sifat fisik susu yang dapat diuji

dengan alat antara lain berat jenis, kekentalan. Sedangkan sifat yang dapat diuji dengan

pancra indera yaitu bau, rasa, warna, dan konsistensi.

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

Aglutinasi

0,5139 0,3979 0,6478

1

1,602 1,718 1,8519

2,1019

2,8075

Kontrol (+) P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8

Sifat kimiawi susu menunjukkan komposisi zat gizi serta kandungan zat kimia

tertentu termasuk adanya cemaran. Sifat mikrobiologis susu menunjukkan jumlah

mikroba yang ads didalam susu serta beberapa parameter lain yang berkaitan dengan

pertumbuhan mikroba.

Dalam praktek, mutu susu sering disebutkan berdasarkan kelompok sifatnya

sehingga dikenal mutu fisik susu, mutu kimiawi susu, ataupun mutu mikrobiologis susu.

Bahkan dalam menguji mutu susu sering hanya dilakukan terhadap beberapa atribut

yang dianggap penting, misalnya bobot jenis, kadar lemak dan total bakteri. Akan tetapi

secara menyeluruh mutu susu harus menggambarkan sifat-sifat susu yang mencakup

sifat fisik, kimiawi dan mikrobiologis. Gabungan basil penilaian sifat-sifat susu akan

mencerminkan nilai atau derajat mutu susu. Menurut Standar Nasional Indonesia (SNI)

mutu susu fermentasi yang baik harus memenuhi beberapa persyaratan seperti

tercantum pada Tabel 1.

Tabel 1 Syarat Mutu Yoghurt, SNI 2981 : 2009

Kriteria Uji Persyaratan

Keadaan

Penampakan Cairan kental sampai semi padat

Bau Normal/khas

Rasa Asam/khas

Konsistensi Homogen

Jumlah asam 0,5 2,0 % b/b

Jumlah bakteri starter min. 107

Viskositas

a. Pemeriksaan Warna

Warna susu yang normal adalah putih kekuningan. Pada susu kuda Sumbawa,

warna susu berwarna putih. Warna putih ini disebabkan karena refleksi sinar matahari

dengan adanya butiran-butiran lemak, protein, dan garam-garam didalam susu.

b. Pemeriksaan Bau

Susu segar yang normal mempunyai bau yang khas terutama karena adanya asam-

asam lemak. Namun pada susu kuda Sumbawa memiliki bau yang semakin asam setiap

minggunya. Bau tersebut dapat terjadi karena adanya pertumbuhan mikroba didalam

susu.

c. Pemeriksaan Rasa

Susu segar yang normal adalah sedikit manis yang ditimbulkan karena

kandungan laktosa didalam susu. Tingkat kemanisan susu bervariasi tergantung tinggi

rendahnya kandungan laktosa. Adanya garam juga mempengaruhi rasa susu. Namun

dalam susu kuda Sumbawa sebelum mengalami fermentasi terasa manis dan semakin

lama semakin asam, hal itu terjadi karena pertumbuhan mikroba pada susu.

Rasa dan bau susu sering kali sulit dipisahkan dan keduanya bergabung

menghasilkan kesan spesifik yang disebut sebagai flavor susu. Potineni and Peterson

(2005) melaporkan bahwa senyawa vanilin didalam susu yang terdegradasi menjadi

asam vanilat dapat menyebabkan Off-flavor selama penyimpanan. Degradasi tersebut

terkait erat dengan reaksi oksidatif dari enzim xanthine oksidase yang secara intrinsik

ada didalam susu. senyawa lain yang ikut berperan menentukan flavor susu adalah

beberapa senyawa phenol khususnya alkyl-phenol (Kilic and Lindsay, 2005).

d. Viskositas

Faktor yang mempengaruhi viskositas susu ialah konsentrasi dan keadaan protein,

konsentrasi dan keadaan lemak, susu dan lamanya susu disimpan. Susu lebih berat dari

air karena susu merupakan suatu sistem koloidal kompleks, yaitu air sebagai medium

dispersi antara lain mengandung garam-garam dan gula dalam larutan.

Viskositas susu kuda Sumbawa jauh lebih encer dari susu sapi dengan rata-rata

1,201 x 10-3

Pa.S hal ini bisa disebabkan keadaan protein, lemak serta lamanya susu

disimpan.

e. Total Asam Tertitrasi

Uji ini dimaksudkan untuk mengetahui derajad keasaman susu. Semakin besar

derajad keasaman susu, semakin buruk kualitas susu segar. Derajad keasaman

menunjukkan banyak sedikitnya asam yang terbentuk didalam susu akibat pertumbuhan

mikroba.

Penetapan kadar total asam dihitung dalam persen setara asam laktat dapat

ditentukan sebagai berikut (Lampert, 1970). Sampel susu sebanyak 9 gram atau 10 ml

ditetesi phenolphathalein (pp) 1% sebanyak 3 tetes dan kemudian dititrasi dengan

NaOH 0,1 N. Titrasi diakhiri ketika warna sampel berubah menjadi merah muda dan

tidak berubah. Ada beberapa penjelasan yang perlu diketahui dalam penentuan

keasaman susu setara asam laktat. Setiap mililiter 0,1 N alkali (NaOH) akan

menetralkan 0,009 g asam laktat. Jika 9 g atau setara 10 mL susu diencerkan 2x

volumenya dengan H2O, kemudian dititrasi, maka setiap ml 0,1 N NaOH yang

digunakan setara dengan 0,1% asam laktat. Larutan pp 1% digunakan sebagai indikator

untuk titrasi. Larutan ini tidak berwarna didalam suasana asam dan berwarna merah

muda (pink) didalam suasana alkali. Penggunaan larutan pp sekitar 2 ml. Rata-rata asam

laktat pada susu kuda Sumbawa 0,4 % - 0,7%. Asam laktat terbentuk melalui beberapa

proses yaitu laktosa pada susu kuda dipecah menjadi gula yang lebih sederhana yaitu

glukosa dan galaktosa dengan bantuan enzim -galaktosidase yang kemudian akan

mengubah glukosa menjadi produk akhir asam laktat.

f. Pemeriksaan pH Nilai pH merupakan cerminan jumlah ion H+ dari asam didalam susu yang

diakibatkan oleh pertumbuhan mikroba. Tujuan dari uji pH adalah mengetahui

tingkat keasaman susu sehingga dapat diperkirakan tingkat kualitas dan keamanan

susu untuk dikonsumsi. Pada susu kuda Sumbawa nilai pH berkisar 4,95 4,19 dan

setiap minggunya pH dari susu kuda semakin asam.

g. Total Bakteri Asam Laktat

Pengujian kultur starter digunakan untuk mengitung pertumbuhan kultur starter

setelah contoh diinkubasikan dalam pembenihan yang sesuai selama 24 jam sampai 48

jam pada suhu (35 1) C. Pengujian dilakukan dengan cara sebanyak 1 ml sampel

diencerkan dalam 9 ml larutan garam fisiologis (NaCl 0.85%) hingga pengenceran 10-8

.

Kemudian dipipet sebanyak 1 ml atau 0,1 ml sampel yang telah diencerkan ke dalam

cawan petri steril, ditambahkan dengan 15-20 ml MRSA cair (media yang belum

memadat) steril. Kemudian cawan petri digoyangkan secara mendatar agar sampel

menyebar rata. Setelah agar membeku, diinkubasi dengan posisi terbalik pada suhu

370C selama 2-3 hari.

Hasil dari pengujian kultur starter yang ada pada susu kuda Sumbawa, semakin

lama penyimpanan susu bakteri asam laktat semakin bertambah. Bakteri asam laktat

terbentuk karena adanya bantuan senyawa yang disebut bakteriosin. Bakteriosin

merupakan senyawa proteinaceous yang disintesis oleh bakteri gram positif dan

dikeluarkan ke lingkungan. Bakteri asam laktat yang terbentuk bersifat broad spectrum,

yang berarti hampir semua bakteri patogen dan perusak terhambat oleh keberadaan

substansi ini.

h. Aktivitas Imunoglobulin

Bakteri probiotik memiliki banyak manfaat untuk kesehatan manusia diantaranya

dalam sistem imunitas. Menurut Safitri S, (2009) Sistem imunitas menyediakan

pertahanan utama melawan mikroorganisme patogen, sistem imun ini diperlukan tubuh

untuk mempertahankan keutuhannya terhadap bahaya yang dapat ditimbulkan berbagai

bahan dalam lingkungan hidup. Pertahanan tubuh berkaitan dengan antibodi. Antibodi

atau imunoglobulin adalah golongan protein yang dibentuk sel plasma (poliferasi sel B)

akibat kontak dengan antigen. Keseimbangan antara antibodi dan antigen dalam tubuh

akan menghasilkan status imunitas yang baik dan akan sangat menguntungkan imunitas.

Pada penelitian ini, digunakan bakteri probiotik yang berasal dari susu kuda

Sumbawa dan kontrol dari suspensi NaCMC sebagai perbandingan. Tujuan dilakukan

pengamatan terhadap bakteri probiotik susu kuda Sumbawa adalah untuk mengetahui

pengaruh terhadap aktivitas imunoglobulin berdasarkan penelitian-penelitian

sebelumnya.

Pada penelitian ini hewan coba yang digunakan yaitu mencit jantan yang

dikelompokkan secara acak berdasarkan bobot badan, sehingga berat setiap mencit tidak

menunjukkan perbedaan yang signifikan dan antigen yang digunakan untuk diinduksi

produksi antibodi adalah sel darah merah domba (SDMD) dalam bentuk SDMD 2%

yang merupakan imunogen, yaitu antigen yang berasal dari gen spesies lain. Menurut

penelitian yang dilakukan oleh Kurnianto A, (2010) sel darah merah domba (SDMD)

merupakan antigen polivalen yang merupakan protein dengan determinan potensial

yang lebih besar dibandingkan dengan antigen monovalen. Lagi pula semakin asing

antigen yang digunakan, semakin efektif ia menimbulkan respon imun. Antigen

tersebut diinjeksikan ke tubuh mencit secara intraperitoneal sehari sebelum pemberian

susu kuda Sumbawa yang telah difermentasi. Susu kuda Sumbawa yang mengandung

bakteri probiotik sebelum diberikan secara oral pada mencit terlebih dahulu diencerkan

dengan NaCMC, hal ini disebabkan karena sel darah merah domba (SDMD 2%)

berbentuk suspensi sehingga harus disamakan agar absorbsi atau kerja dalam tubuh

sama.

Hari ke-11 setelah penginduksian SDMD, darah mencit diambil secara

intrakardiak untuk mengamati aktivitas imunoglobulin. Pengambilan darah untuk

pengukuran imunoglobulin harus dilakukan sesuai dengan hari yang ditentukan setelah

pemberian SDMD sebab imunoglobulin akan segera terbentuk pada selang hari tersebut

setelah pemberian antigen. Selama kurun waktu tersebut, diharapkan telah terjadi

sensitasi sel B yang akan berproliferasi, berdiferensiasi dan berkembang menjadi sel

plasma yang memproduksi antibodi yaitu imunoglobulin. Imunoglobulin mencapai

puncak terbentuknya pada hari 10 sampai 11 setelah pemaparan antigen. Karena itu

diambil darah secara intrakardiak, untuk pengamatan pada hari kesebelas (Kurnianto,

2010).

Pengujian hemaglutinasi terhadap serum darah mencit dilakukan dengan

menambahkan antigen yang sama yaitu sel darah merah domba. Interaksi antara antigen

dengan antibodi menyebabkan terjadinya reaksi sekunder, yaitu berupa aglutinasi, sebab

antigen merupakan partikel-partikel kecil yang tidak larut. Gumpalan yang terbentuk

antara antigen dan anti serum spesifik akan bersatu dan akhirnya mengendap sebagai

gumpalan-gumpalan besar dan mudah terlihat dengan cairan atasnya tetap

memperlihatkan kejernihan. Hal ini terjadi karena pada umurmnya antibodi memiliki

lebih dari satu reseptor pengikat antigen sehingga antibodi bereaksi dengan molekul

antigen lain yang mungkin sudah berikatan dengan salah satu molekul antibodi dan

terbentuklah gumpalan. Reaksi aglutinasi baru dapat terjadi bila rasio antara antigen dan

antibodi seimbang, sehingga terbentuk zona ekuivalen Kresno (2004), dibantu oleh suhu

yang tinggi (37-56oC) dan oleh gerakan yang menambah kontak antigen dan antibodi

(misalnya mengocok, mengaduk, dan memutar) serta berkumpulnya gumpalan

memerlukan garam-garam yang berasal dari PBS yang digunakan. Hasil akhir dari uji

hemaglutinasi dapat ditentukan dengan melihat pola pengendapan sel darah merah pada

dasar sumur mikrotiter (wheel plate). Apabila sel darah merah membentuk titik

berwarna merah pada pusat sumur, uji dinyatakan negatif sedangkan sel yang

teraglutinasi akan menyebar pada cairan di dalam sumur mikrotiter, dengan melihat

aglutinasi yang terjadi maka dihitung sebagai titer aglutinasi yang merupakan

pengenceran tertinggi dari serum darah mencit jantan Mus Musculus yang masih

memberikan reaksi aglutinasi, maka uji tersebut dinyatakan positif.

Pengamatan aktivitas imunoglobulin dilakukan dengan melihat titer antibodi yaitu

pengenceran tertinggi dari larutan yang masih menunjukkan reaksi aglutinasi. Dari hasil

perhitungan dengan mengkonversi nilai titer antibodi dengan rumus [2 log (titer) +1],

maka hasilnya dapat dilihat pada histogram (grafik 1) yang menunjukkan terjadinya

peningkatan aktivitas imunoglobulin setelah pemberian susu kuda Sumbawa fermentasi

dan kontrol NaCMC.

Pada histogram menunjukkan bahwa peningkatan aktivitas imunoglobulin lebih

tinggi pada kelompok perlakuan VIII yang diberikan susu kuda Sumbawa fermentasi

umur 8 minggu jika dibandingkan dengan kontrol negatif yang hanya diberikan NaCMC

1%, dan diperoleh hasil bahwa peningkatan imunoglobulin lebih tinggi pada susu kuda

Sumbawa fermentasi. Hal ini sesuai dengan penelitian yang telah dilakukan sebelumnya

oleh Moller C (2004) menyatakan bahwa bakteri probiotik dapat memperkuat sistem

imun karena adanya bantuan mukus.

Melekatnya probiotik pada mukus ini ternyata diakibatkan oleh suatu zat protein

yang dimiliki oleh probiotik tersebut. Zat tersebut dinamakan mucus-binding protein

(protein pengikat mukus), yang ternyata dijumpai dalam jumlah yang lebih banyak pada

bakteri penghasil asam laktat, dengan adanya protein ini maka bakteri probiotik dapat

menempel pada mukus saluran cerna dan melakukan interaksi dengan host. Peneliti ini

juga menemukan bahwa ternyata mucus-binding protein mengenal protein

imunoglobulin manusia yang merupakan bagian dari sistem imun, dan hasil penelitian

yang sama dilakukan oleh Dr. Nathalie Juge dari Institute of Food Research berhasil

mengungkapkan cara menempelnya suatu probiotik dalam saluran pencernaan, dari

temuan ini juga dapat dijelaskan mengapa tidak semua bakteri dapat digunakan sebagai

probiotik. Usus merupakan organ dengan sistem imun terluas di tubuh, sel-sel yang

menyusun usus dilindungi oleh lapisan pelindung mukus yang secara terus-menerus

mengalami proses regenerasi. Selain melindungi, ternyata mukus ini juga memberikan

keuntungan bagi bakteri probiotik yaitu menjadi media melekatnya probiotik di dinding

usus. Melekatnya probiotik pada mukus ini ternyata diakibatkan oleh suatu zat protein

yang dimiliki oleh probiotik tersebut, dari hasil penelitian diselidiki lebih jauh pada

probiotik Lactobacillus reuteri. Zat tersebut dinamakan mucus-binding protein (protein

pengikat mukus), yang ternyata dijumpai dalam jumlah yang lebih banyak pada bakteri

penghasil asam laktat, dengan adanya protein ini maka bakteri probiotik dapat

menempel pada mukus saluran cerna dan melakukan interaksi dengan host. Dari fakta

temuan yang telah dijabarkan di atas, jelas bahwa bakteri yang dipilih sebagai probiotik

sebaiknya bakteri yang mampu menghasilkan mucus-binding protein, agar bakteri dapat

survive dan bertahan untuk meningkatkan populasi dalam saluran cerna. Pada

pengamatan aktivitas imunoglobulin menunjukkan adanya perbedaan signifikan antara

kelompok kontrol negatif terhadap kelompok perlakuan pemberian susu kuda Sumbawa

fermentasi umur 8 minggu. Dari hasil ini berarti terjadi peningkatan aktivitas

imunoglobulin dengan pemberian susu kuda Sumbawa fermentasi jika dibandingkan

dengan kontrol NaCMC.

VIII. Kesimpulan dan Saran

8.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian maka disimpulkan bahwa:

1. Bakteri probiotik dari susu kuda Sumbawa fermenyasi, dapat meningkatkan aktivitas

imunoglobulin

2.Bakteri probiotik susu kuda Sumbawa berdasarkan pengenceran titer imunoglobulin

perlakuan 8 yaitu susu kuda Sumbawa umur fermentasi 8 minggu merupakan

pengenceran tertinggi dan memiliki aktivitas imunoglobulin terbaik dan memiliki

perbedaan yang signifikan dengan kontrol.

8.2 Saran

1. Dilakukan analisis data secara statistik untuk mengetahui keakuratan hasil penelitian

yang didapatkan

DAFTAR PUSTAKA

Dian, D.A., 2011. Pengaruh Bakteri Probiotik Dari Berbagai Sumber

Terhadap Aktivitas Imunoglobulin G (IgG) Pada Mencit Jantan (Mus

musculus). Skripsi. Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin. Makassar.

Safitri R., 2009, Manfaat Bakteri Probiotik untuk Kesehatan Manusia.

Medical Review vol 22. FMIPA Universitas Pajajaran. Bandung.

aglar, E., Kargul. B., & Tanboga. I., 2005, Bacteriotherapy and Probiotics

Role on Oral Health. Review Article Blackwell Munksgaard, 11. Pp. 131-136.

Matsuzaki T and Chin J. Modulation Immune

Responses with Probiotik Bacteri. Immunology and Cell Biology. 2000; 78: 67-

73.

Formanto B. Aktivitas Antimikroba Susu terhadap Bakteri Pathogen. [Skripsi].

Institut Pertanian Bogor, Bogor. 2001.

Sujaya IN, Dwipayanti UNM, Suariani PNL, et al. Isolasi dan Karakterisasi

Bakteri Asam Laktat dari Susu Kuda Sumbawa. Jurnal Veteriner. 2008; 9(2):

52-59.

Hermawati D, Sudarwanto M, Soekarto ST, Zakaria FR, Sudrajat S dan Tjatur

RFS. Aktivitas Antimikroba Pada Susu Kuda Sumbawa. Jurnal Teknologi dan

Industri Pangan. 2004;15 (1): 47-53.

Kurnianto A.A., 2010. Efek Jus Daun Pare (Momordica charantia Linn.)

Terhadap Imunoglobulin M (IgM) dan Imunoglobulin G (IgG) Mencit

Jantan (Mus musculus). Skripsi. Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin.

Makassar.

Moller C, Vrese MD. Review :Probiotics Effects of Selected Acid Bacteria,

Institute for Physiology and Biochemistry of Nutrition. Federal Research

Center for Nutrition and Food, Location Kiel, D-24103 Kiel,Germany. 2004. pp

5-2.

Kresno, S.B. 2004. IMUNOLOGI : Diagnosa dan Prosedur Laboratorium, Ed.4.

Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. hal. 4-5, 7, 11-12, 15-16, 44-

47, 53-54, 408-409.

Anang, M.L., 2002. Sifat Kimiawi, Fisik, dan Mikrobiologis Susu. Diklat

Kuliah. Fakultas Peternakan Universitas Diponegoro. Semarang.

Surono, I.S. 2004. Probiotik Susu Fermentasi dan Kesehatan. PT. Tri Cipta

Karya. Jakarta.4,182,202.

Lampiran 1. Foto Praktikum

Pengenceran Gambar Pengenceran Gambar

10-1

10-5

10

-2

10-6

10

-3

10-7

10

-4

10-8

Documents

LAPORAN PKM-P 100%.pdf