ANALISIS POTENSI ANTIBIOTIK
ANALISIS POTENSI ANTIBIOTIK
I. KOMPETENSI UMUM
Praktikan dapat mengetahui cara-cara pengujian mikrobiologis
sehingga kita dapat mengetahui bahwa suatu sediaan farmasi tersebut
terkontaminasi atau tidak dengan mikroorganisme.
II. KOMPETENSI KHUSUS
Praktikan dapat mengetahui tingkat pengenceran dari sampel yang
beredar dan juga untuk menghitung jumlah mikroba pencemar pada
sediaan yang beredar di pasaran apakah sampel memenuhi syarat atau
tidak.
III. PRINSIP
Prinsip percobaan adalah menggunakan beberapa medium seperti NA,
PDA, EMBA, PW, VJA, TSB, CETA, SCB, SSA untuk melihat apakah sampel
yang beredar dipasaran sudah memenuhi syarat atau tidak.
IV. TINJAUAN PUSTAKA
Antibiotik adalah suatu senyawa yang dihasilkan oleh
mikroorganisme yang pada konsentrasi rendah dapat memusnahkan atau
menghambat pertumbuhan mikroorganisme lain. Pengujian potensi
antibiotik dilakukan untuk memberikan jaminan bahwa kualitas dan
mutu antibiotik yang digunakan dalam pengobatan memenuhi
persyaratan yang telah ditentukan (Radji, 2010).
Antibiotik digunakan untuk membasmi mikroba penyebab terjadinya
infeksi. Gejala infeksi terjadi akibat gangguan langsung oleh
mikroba dan berbagai zat toksik yang dihasilkan mikroba. Pada
dasarnya suatu infeksi dapat ditangani oleh sistem pertahanan
tubuh, namun adakalanya sistem ini perlu ditunjang oleh penggunaan
antibiotik. Antibiotik yang digunakan untuk membasni mikroba
penyebab infeksi pada manusia, harus memiliki sifat toksisitas
selektif. Artinya antibiotik harus bersifat toksik untuk mikroba,
tetapi relatif tidak toksik untuk hospes. Toksisitas selektif
tergantung kepada struktur yang dimiliki sel bakteri dan manusia
misalnya dinding sel bakteri yang tidak dimiliki oleh sel manusia,
sehingga antibiotik dengan mekanisme kegiatan pada dinding sel
bakteri mempunyai toksisitas selektif relatif tinggi (Ganiswarna,
1995).
Prinsip penetapan potensi antibiotik dalam sediaan obat adalah
membandingkan dosis larutan sediaan uji terhadap dosis larutan baku
pembanding yang menghasilkan derajat hambatan yang sama pada
mikroorganisme uji (Radji, 2010).
Pada umumnya, pengujian potensi antibiotik secara mikrobiologi
menggunakan dua metode, yaitu metode turbidimetri dan metode
lempeng silinder atau difusi agar. Prinsip metode turbidimetri
adalah berdasarkan hambatan pertumbuhan biakan mikroorganisme dalam
media cair yang mengandung larutan antibiotik sedangkan prinsip
metode lempeng silinder adalah membandingkan zona hambatan
pertumbuhan mikroorganisme uji oleh dosis senyawa antibiotik yang
diuji terhadap zona hambatan oleh dosis antibiotik baku pembanding
pada media lempeng agar (Radji, 2010).
Keampuhan (kekuatan) kandungan antibiotik dalam sampel (jumlah
antibiotik murni) dapat ditentukan secara kimiawi, fisik dan
biologis. Uji biologis adalah yang termudah untuk melakukan
penetapan semacam itu. Cara penetapan secara mikrobiologis yang
digunakan adalah cara penetapan difusi (lempeng) yaitu zat yang
diperiksa berdifusi dari pencadang (reservoir) kedalam medium agar
yang telah diinokulasikan jasad renik, setelah diinkubasikan maka
hambatan pertumbuhan mikroba diukur dan dibandingkan hasilnya
(Anonim, 2014).
Pada umumnya metode yang dipergunakan dalam uji sensitivitas
bakteri adalah metode Difusi Agar yaitu dengan cara mengamati daya
hambat pertumbuhan mikroorganisme oleh ekstrak yang diketahui dari
daerah di sekitar kertas cakram (paper disk) yang tidak ditumbuhi
oleh mikroorganisme. Zona hambatan pertumbuhan inilah yang
menunjukkan sensitivitas bakteri terhadap bahan anti bakteri
(Jawetz, 1995).
Keberhasilan penggunaan sediaan-sediaan farmasi yang mengandung
senyawa antibiotika dan vitamin tergantung (1) ketepatan diagnosis
dokter, (2) mutu antibiotika dan vitamin tersebut. Mutu sediaan
terutama antibiotika, mulai dalam bahan baku, selama dalam proses
pembuatannya sampai diedarkan, biasanya potensi masih tinggi,
setelah diedarkan beberapa waktu sering mengalami penurunan
potensi. Sehubungan dengan hal tersebut, maka pengawasan mutunya
perlu diperhatikan, agar penggunaan dapat dipertanggung jawabkan.
Demikian juga halnya dengan sediaan vitamin perlu diperlakukan
seperti halnya dengan sediaan antibiotika (Djide, 2003).
Tujuan dari proses uji sensisitivitas ini adalah untuk
mengetahui obat-obat yang paling cocok (paling poten) untuk kuman
penyebab penyakit terutama pada kasus-kasus penyakit yang kronis
dan untuk mengetahui adanya resistensi terhadap berbagai macam
antibiotik. Penyebab kuman resisten terhadap antibiotik yakni
memang kuman tersebut resisten terhadap antibiotik yang diberikan,
akibat pemberian dosis dibawah dosis pengobatan dan akibat
penghentian obat sebelum kuman tersebut betul-betul terbunuh oleh
antibiotic (Dwidjoseputro, 1998).
Sebagaimana suatu uji biologi, pada uji potensi antibiotika dan
vitamin secara mikrobiologi ini akan selalu didapatkan variasi acak
pada respon yang diamati, yang dikenal sebagai kesalahan biologik.
Walaupun kemajuan dibidang pengujian secara kimia telah
menghasilkan berbagai tekhnik penetapan kadar yang waktu
pelaksanaannya jauh lebih cepat, sehingga menimbulkan kecendrungan
pengujian antibiotika dan vitamin akan dilakukan dengan cara-cara
kimia atau fisikokimia, namun untuk beberapa antibiotika dan
vitamin atau dalam keadaan tertentu penetapan potensi tetap harus
dilakukan secara mikrobiologi. Lagi pula penetapan secara
mikrobiologi langsung berhubungan dengan khasiat atau efek dari
senyawa tersebut (Djide, 2003).
V. METODE KERJA
1. Pertama-tama dibuat pengenceran dengan 5 variasi dosis baku
(S1 sampai S5).
2. Dibuat 1 variasi dosis uji (U3) yang sesuai dengan S3 kurva
baku.
3. Dibuat suspensi inokulum dengan mencampurkan NA steril.
4. Dituang kedalam tiap-tiap cawan petri
5. Setelah inokulum padat kemudian diletakkan piper disk yang
telah direndam dengan larutan antibiotik.
6. Diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 37C.
7. Diamati zona hambat yang terbentuk dan dilakukan pengukuran
garis tengah dengan menggunakan penggaris.
8. Dihitung potensi antibiotik dari hasil pengukuran.
VI. HASIL PRAKTIKUM
Data Pengamatan
Diameter zona hambat pertumbuhan
Baku Pembanding
Sampel
S1
S3
S2
S3
S4
S3
S5
S3
U3
S3
1
6
6
11
12
9
5
11
9
10
8
2
6
6
10
11
10
10
9
8
10
8
3
6
6
11
11
9
10
10
10
9
8
4
9
9
6
11
9
8
8
8
9
8
5
9
8
6
12
9
8
10
7
9
9
6
7
9
6
11
9
9
10
8
8
9
7
9
6
6
11
10
10
12
12
10
8
8
8
6
6
11
9
10
11
12
9
8
9
9
6
6
11
10
10
10
10
10
9
Jumlah
69
62
68
101
84
84
92
76
Rata-rata
7,67
6,89
7,6
11,2
9,33
9,33
10,2
8,44
Hasil
-0,39
9,38
9,33
9,33
Kolektor
-0,39
1,82
0
-0,89
Gambar Praktikum
Uji Potensi Antibiotik
Laboratorium Mikrobiologi
Fakultas Farmasi
Universitas Muslim Indonesia
S5 dan S3
Medium NA
Laboratorium Mikrobiologi
Fakultas Farmasi
Universitas Muslim Indonesia
Sampel dan U3
Medium NA
VII. PEMBAHASAN
Antibiotik adalah suatu senyawa yang dihasilkan oleh
mikroorganisme yang pada konsentrasi rendah dapat memusnahkan atau
menghambat pertumbuhan mikroorganisme lain. Pengujian potensi
antibiotik dilakukan untuk memberikan jaminan bahwa kualitas dan
mutu antibiotik yang digunakan dalam pengobatan memenuhi
persyaratan yang telah ditentukan. Antibiotik memiliki spektrum
aktivitas antibiosis yang beragam.
Sensitivitas suatu bakteri terhadap antibiotik ditentukan oleh
diameter zona hambat yang terbentuk. Semakin besar diameternya maka
semakin terhambat pertumbuhannya, sehingga diperlukan standar acuan
untuk menentukan apakah bakteri itu resisten atau peka terhadap
suatu antibiotik.
Pada praktikum ini digunakan medium NA dan PDA dengan sampel
antibiotik Kloramfenikol. Pertama-tama dibuat pengenceran dengan 5
variasi dosis baku (S1 sampai S5). Dibuat 1 variasi dosis uji (U3)
yang sesuai dengan S3 kurva baku. Kemudian dibuat suspensi inokulum
dengan mencampurkan NA steril. Lalu dituang kedalam tiap-tiap cawan
petri. Setelah inokulum padat kemudian diletakkan piper disk yang
telah direndam dengan larutan antibiotik. Diinkubasi selama 1x24
jam pada suhu 37C dan diamati zona hambat yang terbentuk dan
dilakukan pengukuran garis tengah dengan menggunakan penggaris.
Dihitung potensi antibiotik dari hasil pengukuran.
Pada pengujian yang telah dilakukan terbentuk zona bening
disekitar piper disk. Ini menunjukan bahwa antibiotik yang
digunakan berpotensi menghambat pertumbuhan E.Coli. Pengaruh
konsentrasi antibiotika terhadap pertumbuhan bakteri adalah semakin
besar konsentrasi dari antibiotika maka kemampuan antibiotika untuk
menghambat atau membunuh bakteri akan semakin besar (efektifitas
kerja antibiotia meningkat).
Berdasarkan hasil pengamatan setelah sampel diinkubasi selama 48
jam, diperoleh hasil bahwa pada cawan petri yang diberikan
antibiotik Kloramfenikol, terdapat zona hambat yang ditandai dengan
daerah sekitar antibiotik berwarna bening. Terdapatnya zona hambat
pada percobaan tersebut disebabkan karena khamir tersebut tidak
resisten terhadap antibiotik yang ditanam pada media yang sama.
Resistensi ini merupakan suatu sifat tidak terganggunya kehidupan
sel mikroba oleh antimikroba. Sifat ini merupakan suatu mekanisme
alamiah untuk bertahan hidup. Resistensi dari khamir tersebut
biasanya disebabkan karena khamir tersebut dapat menghasilkan suatu
enzim yang dapat menghancurkan antibiotik tersebut.
VIII. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil dari penelitian yang telah dilakukan dapat
disimpulkan bahwa :
1. Terbentuknya zona bening atau zona hambat yang menandakan
adanya potensi dari antibiotik yang digunakan dalam menghambat dan
membunuh bakteri gram positif yaitu E.Coli.
2. Pengaruh komsentrasi antibiotika terhadap pertumbuhan bakteri
adalah semakin besar konsentrasi dari antibiotika maka kemampuan
antibiotika untuk menghambat atau membunuh bakteri akan semakin
besar (efektifitas kerja antibiotia meningkat).
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2014. Penuntun Praktikum Analisis Mikrobiologi Farmasi.
Universitas Muslim Indonesia : Makassar.
Djide, M.N, 2003. Mikrobiologi Farmasi. Jurusan Farmasi Unhas,
Makassar.
Dwidjoseputro, D.1998, Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan,
Jakarta.
Ganiswarna, S.G, 1995. Farmakologi dan Terapi Edisi IV. Bagian
Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.
Jawetz, G., Melnick, J. L., dan Adelberg, E. A. 1991,
Mikrobiologi untuk Profesi Kesehatan. EGC, Jakarta.
Radji, DR. Maksum. 2010. Buku Ajar Mikrobiologi Panduan
Mahasiswa Farmasi & Kedokteran.
PUSPA INDAH PUTRIMUSDALIFAH S.Farm
