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MICOLOGÍA

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•Reino fungi.

•Célulaseucariotas inmóviles (cuerpo o soma:thallo o talo) yosmótrofos (no poseen tubodigestivo).•Pueden ser unicelulares o pluricelulares(incapaces de formar tejidos, cada célulamicótica aislada tiene independenciametabólica).

•Requieren material orgánico paradesarrollarse. Sonheterótrofos no fotosintéticos.SAPRÓFITOS: Material orgánico inerte o endescomposición. SIMBIÓTICOS: Se nutren de

seres vivos de mayor complejidad biológica.

CARACTERÍSTICAS

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Utilizan la GLUCOSA comofuente de carbonomás

usada y NITRÓGENO ORGÁNICO o compuestos de AMONIO comofuentes de nitrógeno.Las especies micóticas patógenas para el hombre son AEROBIAS.

Llevan a cabo su ciclo de vida en ambiente con rangosde tº entre10 y 60ºC(mesófilos: 10-50ºC y termófilos:20-58ºC).

El PH de crecimiento varía entre 4.5 y 8.0 y necesitancierto grado de humedad

 

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 ASOCIACIONES SIMBIÓTICASMUTUALISMO.

 Asociación obligatoria. Beneficio mutuo. Ej: Líquenesy micorrizas.

COMENSALISMO.

 Asociación NO obligatoria. Hongo vive a expensas de

otro ser vivo sin perjudicarlo. Ej: Candida,Trichosporon, Malassezia(flora humana normal enpiel o mucosas). Pueden causar cuadros infecciososOPORTUNISTAS.

PARASITISMO. Asociación heteroespecífica, no obligatoria. Uno de losintegrantes se hospeda y nutre del otro. Ocasionanperjuicio. Causan MICOSIS.

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ESTRUCTURA DEL HONGOPared micótica: Constituída por carbohidratos (quitina,quitosano, glucanosα yβ,manano, galactano y N-acetil

glucosamina)y glucoproteínas.Función: Mantenimiento de la forma celular, protegiendoal hongo del shock osmótico frente a medios hipotónicos.

Membrana citoplasmática fosfolipoproteica. Dentro de

los lípidos la conforman los esteroles: ergosterol yzimosterol.

Función: Participa de la formación de la pared, en laabsorción de nutrientes, el contenido lipídico varía de

una especie a otra y determina la susceptibilidad aantimicóticos que actúan como detergentes poliénicos.

Presencia demitocondrias yretículo endoplásmicoen elcitoplasma.

Tienenmembrana nuclearycromosomas.

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MORFOLOGÍA DE LOS HONGOSUnicelulares: (Talo unicelular) oLevaduras.

Pluricelulares: (Talo filamentoso) oMohos, formadospor estructuras tubulares denominadas HIFAS. Seforman a partir de una ESPORA que da lugar a unTUBO GERMINAL y este a un FILAMENTOTUBULAR. Cuando se ramifican forman el MICELIO

(masa algodonosa).

Espora Tubo germinalFilamento tubular: Hifa

Micelio

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TUBO GERMINAL DECandida albicans.

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Levaduras

Levaduras: Gemación

Hifa sin tabiques: Cenoctico

Hifa tabicada

Micelio

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MICELIO

 Vegetativo: Fija al hongo al medio y se responsabilizade sunutrición y crecimiento. Asegura la absorción yasimilación de elementos nutritivos y energéticos.Hifa del sustrato o sumergida (en medio de cultivo

sólido). Aéreo o reproductor: “de fructificación”, sonresponsables de ladiseminación y conservación de laespecie. Posibilitan su reproducción local y adistancia (esporos). Hifa rampante o superficial (enmedio de cultivo sólido).

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ESPORAS

Mecanismo de reproducción (sexuados y asexuados).Membrana interna: ENDOSPORIA.Membrana externa: EXOSPORIA.

Identificación de hongos:La estructura, formación y pigmentación de esporasayuda mucho.

 Algunos hongos se originan a partir de la separación de

parte del micelio – gemación: LEVADURAS.Otros hongos son DIMÓRFICOS: pueden aparecer enforma de levaduras o micelial, depende de lascondiciones de desarrollo.

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MECANISMOS DE REPRODUCCIÓN

Reproducción sexuada.Reproducción de ESPORAS por fusión de 2 núcleoshaploides sexualmente diferentes. Se forma unacélula diploide: ZIGOTO. Por división meióticaforma 4 células haploides: ESPORAS.

Se los llama HONGOS PERFECTOS. No es común enhongos que producen patologías en humanos.

Esporas sexuales: ZIGOSPORAS (gametos similaresen el extremo de las hifas, OOSPORAS (gametosdiferentes en tamaño), ARCOSPORAS (unión de doshifas: ASCO con 4 a 8 esporas), BASIDIOSPORAS(Fusión de 2 núcleos de una hifa, haploides. Formanbasidiosporas).

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Reproducción asexuada:

1.No existen fusión de núcleos. Se generan los esporospor un proceso mitótico de células haploides.

2.Hay un crecimiento de Micelio.

3.Se denominan HONGOS IMPERFECTOS.

Existen varios tipos:

FRAGMENTACIÓN.Fragmentación de hifas segmentadas dan lugar a unanueva colonia.

GEMACIÓN.

Formación de una yema por la célula madre y da lugara una célula hija.

ESPORULACIÓN.

Se forman esporas que germinan posterirmente.

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TALOSPORAS: Si se desarrollan directamente de la célula

vegetativa.

Existen tres tipos:

 ARTROSPORAS.

Se forman por segmentación de las hifas.BLASTOSPORAS. 

Se forman por gemación sin separarse. Forman pseudohifas o

pseudomicelios.

CLAMIDOSPORAS.

Esporas grandes rodeadas de una pared gruesa. Son también

formas de resistencia.

TIPOS DE ESPORAS ASEXUALES

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Otras esporas se originan de estructuras especializadas:

ESPORANGIOSPORAS.

Se forman dentro de estructuras saculares que seencuentran en los extremos de las hifas no tabicadas.

CONIDIAS.Se originan a partir de hifas por gemación, separándoseluego de ellas.

 ALEURISPORA.

Similares a las anteriores pero se separan por ruptura delsepto.

TIPOS DE ESPORAS ASEXUALES

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CLASIFICACIÓNZYGOMYCOTINA. Hongos filamentosos no tabicados. Sereproducen por Zigosporas o por Oosporas. Ej: Mucor

(pan húmedo) y rhizospus (medio ambiente, alergias ypatógeno oportunista). ASCOMYCOTINA. Presentan micelios septados con: Ascosporas sexuales, Conidias como esporas asexuadas.

Ej: Penicillium (saprófito), Microsporum (micosissuperficial) , Histoplasma capsulatum(micosis profunda),etc.

BASIDIOMYCOTINA. Micelio septado. ProduceBasidiosporas. Ej:Cryptoccocus(en tierra pero puedecausar patología).

DEUTEROMYCOTINA u HONGOS IMPERFECTOS.Hongos filamentosos tabicados y levaduras. Sereproducen de forma asexual por conidios. (algunos

causan patología y otros no).

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HONGOS DE IMPORTANCIA CLÍNICA

Micosis cutáneas o superficiales(Piel, uñas o pelo).Micosis subcutáneas(Tejido subcutáneo).Micosis profundas o sistémicas (cualquier órgano,

fundamentalmente Pulmón).Micosis oportunistas (pacientes inmunodeprimidos,causadas por hongos no patógenos en individuosinmunocompetentes).

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MICOSIS

MICOSIS CUTÁNEAS O SUPERFICIALES:

Pitiriasis o tiña versicolor. Malasezzia fufur. Dx:Microscopía de escamas de la piel. Hongo de formaoval e hifas pequeñas.

Tiña negra. Exophiala werneckii. Lesiones negro-

parduzcas en palmas de mano y pies. Cultivo:colonias negras y brillantes. Microscopio: célulaslevuriformes verdes oliva.

Dermatomicosis. Producidas por hongos dermatofitos.

En piel, pelo y uñas. Penetran el tejido subcutáneo yutilizan como fuente de nitrógeno la QUERATINA.Tinea capitis, barbarea, unguium, cruris, corporis.

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MICOSIS SUBCUTÁNEAS: Causadas por hongos quese encuentran en forma saprófita en la naturaleza y deforma accidental penetran al hombre.Esporotricosis.Sporothrix schenckii.Penetra en elhombre por pinchazos o espinas (esporas). Cultivo:colonias de color crema, luego pardas o negras.

Crecimiento rápido.Micetoma. Causada por diferentes especies de hongos(actinomicetos por ej.). Puede diseminarse a otrostejidos internos. Puede llegar a la amputación de la

extremidad afectada.Cromoblastomicosis. Causada por diversos hongos depared pigmentada (dermatiáceos). Dermatitisverrugosa. Afección crónica caracterizada por placas

verrugosas y tumefacciones subcutáneas blandas.

MICOSIS

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MICOSIS SISTÉMICAS: Afecta a cualquier órgano.

Son DIMÓRFICOS (característica).Histoplasmosis.Causada por Histoplasma capsulatum. Afecta fundamentalmente a los pulmones. Inhalación.Cultivo de crecimiento lento. Colonias blanco-grisáceas

y aspecto cremoso. Hifas pequeñas y entrelazadas.Blastomicosis. Inhalación de conidios o hifas de Blastomyces dermatitis. Afecta pulmones, piel y otrostejidos. Cultivo: colonias blanquecinas con aspecto céreo.

Proyectan penachos hacia arriba (hifas tabicadas).Coccidiomicosis.Causada por el hongo Coccidioidesimmitis.Se transmite por inhalación. Afecta a lospulmones principalmente. Se visualizan colonias micelianas, brillantes, grises y húmedas

MICOSIS

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MICOSIS OPORTUNISTAS: Afecta a personasinmunosuprimidas.

Candidiasis.Candida albicans.Infección en varios órganos.Microscopía: células levuriformes y/o pseudohifas.

 Aspergilosis.  Aspergillus fumigatus. Ampliamente distribuídos.Ingresan por inhalación. Se disemina por todo el organismo.Colonias esponjosas o granulares. De crecimiento rápido.

Blancas o azul-verdosas. Al microscopio se ven hifas tabicadascon conidióforos.

Criptococosis.Cryptococcus neoformans.Produce meningitis en IS.Ingresa por via inhalatoria. Puede provocar otras infecciones. Dx:tinción con tinta china. Crecimiento rápido. Colonias blancas.

Zigomicosis.Causada por diversos tipos de hongos del suelo.Inhalación de esporas. Necrosis de la zona afectada. Microscopía:hifas sin tabicar. Cultivo: Crecimiento rápido. Coloniasblanquecinas, esponjosas y con hifas grandes, gruesas ygrisáceas.

MICOSIS

CANDIDIASIS OROFARÍNGEA Y OTRA DE FLUJO VAGINAL A LA

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 CANDIDIASIS OROFARÍNGEA Y OTRA DE FLUJO VAGINAL. A LADERECHA SE VE UN CORTE HISTOLÓGICO EN EL CUAL SE VENLEVADURAS; EN EL CENTRO, ABAJO, UN EXAMEN DIRECTO DE UNALEVADURA CON CÁPSULA, CON UNA PREPARACIÓN DE TINTACHINA, QUE CORRESPONDE A CRYPTOCOCCUS; ES UN CORTEHISTOLÓGICO REALIZADO CON UNA TINCIÓN ESPECIAL PARACRYPTOCOCCUS, LLAMADAMUCICARMIN MAYER.

Levadura con c.psula Mucicarmin Ma/er 

Corte 0istológico

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HONGO FILAMENTOSO, HIALINO, SEPTADO, EN MUESTRA DEMATERIAL PURULENTO; SE VEN ELEMENTOS CELULARESPOLIMORFONUCLEARES. SE PUEDE VER LA HIFA.

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Ñ

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 CABELLUDO (KERION DE CELSO) LAS TIÑAS DELCUERO CABELLUDO, ESPECIALMENTE EN SU FORMAINFLAMATORIA PUEDEN DAR LUGAR A UNA ALOPECIACICATRICIAL.

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MUESTRAS

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MUESTRAS Secreciones respiratorias. Esputos, lavados bronquiales, aspiradostraqueales. Sembrar lo que más se pueda en presencia deantibacterianos y antimicóticos (cicloheximida).

LCR. Filtrado. Medio de cultivo sin antibacterianos ni antimicóticos.Si es poco centrifugar y usar sedimento. Revisar todos los días.

Sangre. Hemocultivos: Sist. Bifásico agar y caldo infusión cerebrocorazón. Lisar los hematíes y leucos y concentrar por centrifugación.30 días a 30ºC.

Orina. Frecuentemente contaminada. Centrifugar y sembrar enmedio con antibióticos. Muestra fresca.

Tejidos. Homogeneizados y sembrados a 30ºC durante 30 días. Médula ósea. Se inocula directamente en el medio.

Líquidos estériles. Concentrar por centrifugación y se siembra almenos 1 ml.

Piel, pelo y escamas de uñas. Raspado o pinzas para obtención demuestras. Muy contaminadas. Incubar en medios con antibacterianosy antimicóticos (Agar Mycosel) durante 30 días a 30ºC.

MEDIOSDECULTIVO

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MEDIOS DE CULTIVO Para el aislamiento de los Hongos se recomiendan:

1.Medios con y sin sangre.

2.Medios con y sin antimicótico (cicloheximida).3.Medios con antibióticos.

 AGAR SABOURAUD:Muy utilizado.

Se utilizan placas de petri o tubos con agar inclinado. Examinar 2 o 3

veces por semana a 30ºC o TA durante 30 días para informarNEGATIVOS.

Cultivos más empleados:

Medios para aislamiento primario: Agar cerebro-corazón conantibióticos y agar extracto levadura. Ailamiento hongos patógenos

(también se usa agar sangre y Sabouraud) excepto dermatofitos(Agar Mycosel o Sabouraud con atb).

Medios diferenciales: Agar maíz con Tween 80 y azul triptano(Candidas), agar semilla (criptococos), otros.

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MICROSCOPIA

KOH. Muy utilizado para detección rápida de hongos. Aclara lasmuestras.

Tinta china. Pone de manifiesto las cápsulas. Coloración de mucicarmín. Tiñe de rosa brillante el polisacáridocapsular de algunos hongos.

Tinción de metanamina plata. Mejor para muestras histológicas.

Tiñe las paredes de los hongos de color marrón oscuro. Tinción de ácido peryódico de Schiff. Una de las mejores. Tiñe lamayoría de los hongos. Distingue entre hifas y levaduras.

Blanco de calcoflúor. Produce fluorescencia. Tinción de Papanicolau. Además de identificar células malignastambién visualiza hongos.

Tinción de Wright. Histoplasma capsulatum en MO y SP. Tinción de Gram. Hongos se tiñen como gram +

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 ASPECTOS GENERALES DEL DIAGN.

En general son de crecimiento lento.No se puede usar como único criterio de identificación lacaracterización macroscópica de las colonias.

Microscópicamente se puede procesar la muestra de

diferentes maneras:1.Examen en fresco. Porta y cubre – objetos (desventaja).Gota de azul de lactofenol.

2.Cinta adhesiva de celofán. Portaobjeto, cinta adhesiva y

azul de lactofenol. Permite ver la forma microscópica delcultivo.

3.Cultivo microscópico. Porta y cubre – objetos y pedazo deagar con la colonia.

Ó

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IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS  Métodos convencionales:

1.Prueba del tubo germinativo.

2.Morfología en el agar harina de maíz. Permite verblastoconidios.

3.Utilización de carbohidratos.

4.Detección de fenol oxidasa con agar semilla de níger (la

mayoría deCryptococcus neoformans la produce). Métodos rápidos:

1.Ureasa (Detecta levaduras que producen ureasa:Cryptococcus, Rhodotorula).

2.Nitrato reductasa.

3.Levodopa-citrato férrico (Cryptococcus neoformansda positivo). Sistemas comercializados:

La mayoría se basan en utilización de sustratos. Otros se basanen la degradación de carbohidratos o hidrólisis de sustancias.

COLONIASDEHONGOSFILAMENTOSOS,LOSQUESE

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COLONIAS DE HONGOS FILAMENTOSOS, LOS QUE SEIDENTIFICAN PRINCIPALMENTE PORMICROMORFOLOGÍA. EN EL MICROCULTIVO SE VE LAESTRUCTURA.

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IDENTIFICACIÓN DE HONGOSFILAMENTOSOS.

C lti d l d ii ditit ti d l i S t l di

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Cultivos de levaduras que originan distintos tipos de colonias. Se muestra el medio

agar cromogénico; en este caso, es una fotografía del cromoagar, donde algunas especies

presentan colores particulares, característica muy importante cuando se quiere

determinar si más de una especie causa el cuadro clínico o coloniza a un paciente. El

tiempo en relación al agar Sabouraud es el mismo, pero es mucho más fácil de trabajar.

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Flujograma paraCryptococcus.

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La visualización y el aislamiento del hongo son el gold standard. El examen microscópico directo es rápido, tarda media

hora y la sensibilidad depende del observador. El cultivo permite obtener mayor positividad, pero esmás lento; si es levadura demora 24 horas y, si esfilamentoso, varios días. Es importante la correlaciónentre exámenes directos y cultivos; si se ven hifas,deben crecer hongos peludos y, si se ven pseudohifas,

deben crecer levaduras. El diagnóstico molecular y PCR para hongos estarándisponibles en un futuro próximo. Hasta ahora no hayningún sistema comercial, pero van a ser unaherramienta más de apoyo diagnóstico; no van areemplazar lo anterior. En cuanto a la visión de

futuro, lo ideal es que se pueda llegar a hacer deinmediato inmunodiagnóstico o PCR en el paciente ycomplementarlos con lo que tenemos disponible hoyen nuestro laboratorio.