LAPORAN RESMI PRAKTIKUM MIKROTEKNIKMETODE PARAFIN PADA TUMBUHAN

Disusun oleh:Nama: WinarniNIM: K4312074Kelas: BKelompok: 10

PENDIDIKAN BIOLOGIFAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKANUNIVERSITAS SEBELAS MARETSURAKARTA2014I. JUDULMetode Parafin pada Tumbuhan

II. TUJUANUntuk mengetahui bahan, alat dan cara pembuatan sediaan irisan jaringan tumbuhan dengan metode parafin.

III. DATA PENGAMATANAkar Kaktus 10x

Akar Kaktus 20x

Akar Padi 20x

Akar Padi 40x

Akarr Kaktus20x

Batang Kacang 10x

Batang Kacang 20x

Batang Kacang2 10x

Batang Selederi2 10x

Batang Seledri 10x

Benang Sari Cabe 10x

Biji Kacang 10x

Biji Kacang2 10x

Bji Kacang 3 10x

Bunga Cabe1 10x

Bunga Cabe2 10x

Bunga Cabe3 10x

Daun Ficus Tengah1 10x

Daun Ficus Tengah2 10x

Daun Ficus Tengah2 10x

Daun Ficus Tepi2 10x

Daun Jeruk 10x

Daun Jeruk 20x

Ovulum Bunga Cabe 10x

IV. PEMBAHASANA. Prinsip kerja pembuatan sediaan preparat dengan metode parafin:Hari ke I: a) Pencucian Mencuci organ dengan air, jangan sampai merusak organ. Kemudian memasukkan kedalam flakon.b) Koleksi organ tumbuhan: Bunga 1. Mengambil bunga yang masih kuncup2. Potong bagian ujung untuk mendapatkan benang sari dan putik, dan potong bagian pangkal untuk mendapatkan ovul. Daun1. Memotong daun dengan bentuk persegi empat pada bagian daun yang terdapat tulang daun atau urat daun. Akar1. Memotong akar secara melintang Batang 1. Memotong batang secara melintang Biji1. Mengambil bagian biji

c) Fiksasi : Dipakai larutanFormalin 5 bagianAsam asetat glasial 5 bagianAlkohol 70% 90 bagianDiamkan selama 24 jamHari ke II : Pencucian dan dehidrasi:Fiksatif dibuang lalu diganti berturut-turut dengan:Alkohol 70% 30 menitAlkohol 80% 30 menitAlkohol 95% 30 menitAlkohol 100% 30 menitAlkohol 100% 30 menitDealkoholisasi:Alkohol / xilol 3:1 30 menitAlkohol / xilol 1:1 30 menitAlkohol / xilol 1:3 30 menitXilol 30 menitXilol 30 menitCampuran Xilol / parafin 1:9 dengan temperatur 57C selama 24 jamHari ke III: Infiltrasi: Campuran xilol/parafin dibuang diganti dengan paraffin murni.Temperatur tetap 57C selama 24 jam.Hari ke IV: Penyelubungan: Parafin dibuang diganti dengan parafin murni yang baru.Setelah 1 jam dibuat balok.Hari ke V: Pengirisan: Dibuat irisan-irisan dengan menggunakan Rotary mikrotome dengan ketebalan 6-12m (mikronmeter). Perekatan: Irisan direkatkan pada gelas benda dengan campuran Gliserin: Albumin yang dibubuhi air, kemudian gelas benda ditaruh diatas Hot plate dengan temperatur 45C sampai pita paraffin merenggang.Hari ke VI: Pewarnaan : dengan safranin 1% dalam alkohol 70%. Berturut-turut gelas benda dimasukkan dalam:Xilol 3 menitXilol 3 menitAlkohol / xilol 1:3 3 menitAlkohol / xilol 1:1 3 menitAlkohol / xilol 3:1 3 menitAlkohol 100% 3 menitAlkohol 100% 3 menitAlkohol 95% 3 menitAlkohol 80% 3 menitAlkohol 70% 3 menitSafranin 1% dalam Alkohol 70% 1 jamAlkohol 70% 1 menitAlkohol 80% 1 menitAlkohol 95% 1 menitAlkohol 100% 1 menitAlkohol 100% 1 menitAlkohol / xilol 3:1 1 menitAlkohol / xilol 1:1 1 menitAlkohol / xilol 1:3 1 menitXilol 1 menitXilol 1 menitPenutup: Irisan ditutup dengan gelas penutup dengan pemberian Balsam Kanada terlebih dahulu.Pemberian nama: Disebelah kiri gelas penutup dilekatkan etiket dan diberi keterangan: nama spesies, organ, penampang, dsb.

B. ALAT & BAHANALATNama alatJumlah

a. Wadah untuk proses dehidrasi-clearingsecukupnya

b. Staining jarsecukupnya

c. Labelsecukupnya

d. Pinsetsecukupnya

e. Kotak parafinsecukupnya

f. Rotary mikrotomesecukupnya

g. Hot platesecukupnya

h. Waterbath secukupnya

i. Objek glasssecukupnya

j. Deg glasssecukupnya

BAHANNama bahanJumlah

a. Akar kaktussecukupnya

b. Akar Enceng Gondok (Eichornia crassipes)secukupnya

c. Batang Seledri (Apium graveolens) secukupnya

d. Batang Bayam (Amaranthus sp)secukupnya

e. Daun Jeruk purut (Citrus hystrix)secukupnya

f. Daun Karet kebo (Ficus elastica)secukupnya

g. Bunga Belimbing (Averrhoa carambola)secukupnya

h. Bunga Cabe (Capsicum annum)secukupnya

i. Biji Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi)secukupnya

j. Biji Cabe besar (Capsicum annum)secukupnya

k. Buah Pisang (Musa paradisiaca)secukupnya

l. Buah Cabe (Capsicum annum)secukupnya

Metode parafin adalah suatu metode pembuatan preparat dengan melakukan penanaman jaringan di dalam blok parafin untuk menghasilkan preparat jaringan hewan ataupun tumbuhan yang tipis. Preparat parafin ini dilakukan penyelubungan karena jaringan merupakan bahan yang lunak. Pembuatan sediaan dengan pemotongan jaringan menggunakan parafin dan mikrotom sebagai alat pemotongnya. Dilakukan infiltrasi agar parafin yang masuk berfungsi sebagai penyangga jaringan saat diiris dengan mikrotom, lalu diembedding (proses penanaman) yaitu merendam jaringan ke dalam parafin cair, dan parafin akan masuk ke seluruh bagian jaringan, proses pemotongan dengan mikrotom, penempelan pada kaca objek, pewarnaan dengan haematoksilin (pada umumnya bahan ini yang sering digunakan untuk jaringan hewan) sedangkan jaringan tumbuhan seringkali menggunakan safranin ataupun fast green. Setelah diwarnai lalu dimounting, diberi perekat entellan, dan diberi label nama (Tjiptrosoepomo, 1993). Irisan utuh suatu specimen sangat bermanfaat bagi studi pembelajaran. Dengan adanya preparat utuh maka dapat diamati bagian-bagian jaringan dan jenis sel yang ada dalam satu preparat. Dalam pembuatan preparat utuh diupayakan permanen atau awet agar sewaktu-waktu dapat diamati kembali. Dalam pembuatan preparat hendaknya dipahami karakteristik tanaman yang akan diambil sebagai spesimen. Karakteristik tersebut dapat berdasarkan atas pengelompokan jenis batang, termasuk dalam herba atau berkayu kemudian dilanjutkan berdasarkan penentuan tumbuhan tersebut tergolong dalam angiospermae atau gymnospermae dan selanjutnya tumbuhan itu tergolong dalam tumbuhan dikotil atau monokotil. Perbedaan karakteristik tumbuhan yang akan diambil sebagai spesimen menentukan larutan fiksatif dan zat warna yang akan digunkan dalam pembuatan preparat (Setjo, 2004).Karakteristik tumbuhan yang akan diambil spesimennya juga menentukan waktu pada tahap-tahap pemrosesan. Misalnya waktu yang berlebih pada suatu tahap pengecatan akan mengakibatkan suatu warna menjadi terlalu gelap dan mungkin warna lainnya menjadi kurang atau bahkan hilang. Keberhasilan pembuatan preparat permanen ini tergantung pada lima tahap yang utama yaitu fiksasi, dehidrasi, penjernihan, perembesan dan pengeblokan parafin serta pewarnaan. Larutan fiksatif yang dipilih, perembesan parafin yang bagus dan zat warna yang akan digunakan menentukan keberhasilan preparat irisan (Setjo, 2004).Metode paraffin merupakan metode pembuatan preparat awetan yang banyak digunakan karena memiliki beberapa keuntungan yaitu proses embedding lebih cepat dan lebih simpel, material embedding dapat disimpan dalam waktu yang lama pada kondisi kering, serta dapat membuat irisan yang tipis. Embedding menggunakan paraffin sangat baik digunakan untuk studi embriologi, anatomi dan sitologi (Khasim, 2002).Prosedur pembuatan sediaan menggunakan metode parafin pada umumnya sama baik pada jaringan hewan maupun tumbuhan. Pertamatama organ yang akan dijadikan preparat diisolasi terlebih dahulu, kemudian difiksasi minimal 24 jam. Fiksasi ini bertujuan untuk mengawetkan semua struktur sel sehingga sedapat mungkin berada dalam keadaan sama atau hampir sama dengan pada waktu masih hidup. Selanjutnya yaitu didehidrasi dengan alkohol bertingkat selama 30 menit. Dehidrasi ini bertujuan untuk menarik air yang masih terdapat dalam jaringan. Kemudian, diclearing dengan xilol murni juga selama 30 menit yang berfungsi untuk membersihkan sisa alkohol yang masih terdapat dalam jaringan untuk digantikan dengan xilol. Selanjutnya diinfiltrasi agar parafin yang masuk berfungsi sebagai penyangga jaringan saat diiris dengan mikrotom, lalu diembedding (proses penanaman) yaitu merendam jaringan ke dalam parafin cair, dan parafin akan masuk ke seluruh bagian jaringan, proses pemotongan dengan mikrotom, penempelan pada kaca objek, pewarnaan dengan haematoksilin (pada umumnya bahan ini yang sering digunakan untuk jaringan hewan) sedangkan jaringan tumbuhan seringkali menggunakan safranin ataupun fast green. Setelah diwarnai lalu dimounting, diberi perekat entellan, dan diberi label nama (Santoso, 2002).Pada organ hewan, Embedding merupakan proses pelilinan suatu organ dengan menggunakan kotak kertas. Proses ini memudahkan dalam membuat irisan yang sangat tipis dengan menggunakan mikrotom. Beberapa keuntungan menggunakan kotak kertas dalam embedding yaitu bisa membuat arah sayatan dan menandai suatu jaringan. Jaringan atau sampel akan ditanam di ketas kotak, dengan terlebih dahulu parafin membeku pada bagian dasar dalam kotak dan setelah penempelan jaringan dilanjutkan dengan penutupan dengan parafin sampai membeku (Al-farizi, 2011).Proses penyayatan (sectioning) diawali dengan pengirisan blok parafin dengan scalpel, sehingga permukaan blok parafin yang akan diiris dengan mikrotom berbentuk segi empat. Letak mata pisau pada mikrotom menentukan hasil yang diperoleh. Hasil sayatan diambil dengan menggunakan kuas secara hati-hati. Pita hasil sayatan ditempel pada kaca objek dengan menggunakan meyer albumin. Kaca obyek tersebut diletakkan di atas meja penangas ( haeting plate). Meyer albumin memiliki kandungan putih telur dan gliserin dan merupakan pelakat alami yang sangat baik (Hugo 2008).Proses pewarnaan dilakukan setelah preparat dideparafinasi dengan merendam preparat pada xylol. Salah satu pewarna metode parafin pada jaringan hewan adalah hematoxylin dan Eosin. Zat warna hematoxilin ini bersifat aquaosa (Al-farizi, 2011).Kelebihan dari metode parafin ini adalah (Maximilian, 2011) : Irisan dapat jauh lebih tipis daripada menggunakan metode beku maupun seloidin, dengan metode parafin tebal irisan dapat mencapai rata-rata 6 mikron. Irisan-irisan yang bersifat seri dapat dikerjakan dengan mudah. Prosesnya lebih cepat dari metode lain. Kelemahan dari metode ini adalah (Maximilian, 2011) : Jaringan menjadi keras, mengerut dan mudah patah. Jaringan-jaringan yang besar tidak dapat dikerjakan, bila menggunakan metode ini. Sebagian besar enzim-enzim akan larut dengan metode ini.

V. KESIMPULAN1. Metode parafin adalah suatu cara pembutan sediaan baik itu tumbuhan ataupun hewan dengan menggunakan parafin2. Prosedur pembuatan sediaan menggunakan metode parafin pada umumnya sama baik pada jaringan hewan maupun tumbuhan yaitu diseksi, fiksasi, pencucian dan dehidrasi, dealkoholisasi, infiltrasi, embedding, penyayatan, affixing, pewarnaan, penutupan dan pemberian nama atau pelabelan3. Hasil pengamatan yang dilakukan :NoNama OrganData Hasil Pengamatan

1.Akar KaktusMerupakan akar dikotil dengan anatomi sebagai berikut : epidermis, korteks, endodermis, stele. Ciri khusus : Xilem dan floem pada tumbuhan kaktus tersusun radial atau membentuk jari-jari. Xilem berbentuk bintang di pusat dan floem mengelilingi xilem.

1. Akar PadiMerupakan akar monokotil dengan anatomi sebagai berikut : epidermis, korteks, endodermis, dan stele. Letak keduanya saling berdekatan karena tidak memiliki kambium.Empulur, terletak di bagian tengah serta dikelilingi xilem dan floem yang berselang-seling.

3.Batang SeledriMerupakan batang dikotil herba jadi tidak memiliki kambium gabus. Batang Seledri memiliki anatomi batang terdiri dari : Epidermis, korteks, endodermis dan stele.

4.Batang kacang tanahMerupakan batang dikotil herba dengan anatomi batang terdiri dari : Epidermis, korteks, endodermis dan stele. Aktivitas kambium yang menyebabkan perbedaan jumlah floem dan xilem. Jumlah floem dan xilem yang dibentuk lebih sedikit. Bagian korteks tersusun menyimpan cadangan makanan.

5.Daun ficus elasticaMerupakan daun tanaman dikotil yang anatominya terdiri dari : epidermis atas, jaringan mesofil yang terdiri dari jaringan tiang dan bunga karang, jaringan pengankut dan epidermis bawah.

6.Daun JerukMerupakan daun tanaman dikotil yang anatominya terdiri dari : epidermis atas, jaringan mesofil yang terdiri dari jaringan tiang dan bunga karang, jaringan pengankut dan epidermis bawah.

7.Bunga cabaiAntera bunga cabai yang terdiri dari epidermis anter, endotesium, tapetum, dan butir polen. Saat anter merekah terdapat celah yang disebut stomium yang memungkinkan butir polen keluar.

8.Benang sari bunga cabaia. Benang sari bunga cabai terdiri :epidermis,endotesium,tapetum.kandungan sel-selnya diserap oleh butir polen selama perkembangannya. Butir polen (mikrospora) merupakan spora jantan yang menghasilkan gamet jantan.

9.Ovulum bunga cabai

10.Biji kacang tanahBiji kacang terdiri dari epidermis, jaringan vaskuler dan parenkim. Jaringan vaskuler biji kacang menyebar di embrio pada kotiledon. Sel parenkim terdiri dari spherosom, aleuron, dan butir amilum

VI. DAFTAR PUSTAKA Campbell NA. 2003. Biologi Edisi Kelima Jilid II. Erlangga. Jakarta.Dwijoseputro D. 1984.Pengantar Fisiologi Tumbuhan.Jakarta: Penerbit PT Gramedia.Estiti, B. Hidayat. 1997. Anatomi Tumbuhan Berbiji. ITB Press: BandungFahn A . 1992.Anatomi Tumbuhan. Yogyakarta : Gadjah Mada Press.Hartanto, L ; Sumardi, Issirep. 2008. Anatomi Tumbuhan Berbiji (spermatophita). Penebar Swadaya : BogorLakitan B. 1996.Fisiologi pertumbuhan dan perkembangan tanaman. Jakarta : Rajawali Pers.Mulyani, Sri. 2006.Anatomi Tumbuhan. Yogyakarta: Kanisius.Rudyatmi, Ely. 2012.Bahan Ajar Mikroteknik. Semarang: Jurusan Biologi FMIPA UNNESSalisbury, Frank B.dan Ross, Cleon W.1995.Fisiologi Tumbuhan. Bandung: ITB.Syarif 2009.Struktur dan Fungsi jaringan Tumbuhan. Bandung : Pusat pengembangan dan pemberdayaan Pendidikan.Tjitrosoepomo HS. 1989.Botani Umum. UGM Press. Yogyakarta.Tri Wahyu Agustina. 2010.Materi Pokok Ajar Anatomi Tumbuhan. Bandung: Pendidikan BiologiWibisono Surodikusumo dan Suikno.2011. Petunjuk Praktikum Mikroteknik Tumbuhan. Laboratorium Mikroteknik Tumbuhan. UGM Yogyakarta

VII. LAMPIRAN

1 lembar laporan sementara

2 lembar foto dokumentasi