MN+5+-+Mikrobiološka+pretraga+namirnica,+03.15.+[Compatibility+Mode]

8/17/2019 MN+5+-+Mikrobiološka+pretraga+namirnica,+03.15.+[Compatibility+Mode]

1/35

Epidemiologija -bolesti koje se prenose hranom

EFSA (EU 2007.): amp!loba"ter # porast#$Salmonella # opadanj#$ %isteria - ista ra&ina

' 200.: *+ , istraianih #&oraka namirni"amikrobiolo/ki neisprano (jaja mlijeko dr#genamirni"e iotinjskog podrijetla)$ Salmonella dominantna E. "oli0...

Salmonella : broj sl#1ajea i epidemija # opadanj#(od 200)$ amp!loba"ter # porast# (od 200. -2sl#1ajea 22* # 2007.)


2/35

mlje1ni proi&odi: kas"i enterobakterije E. "oli0%isteria ...$ itari"e: plijesni enterobakterije ...$meso: %isteria mono"!togenes0 E. "oli enterobakterije ...$ jaja: Salmonella ...

Epidemije-oblici / učestalost:- manji oblik # doma3instima - 1e/3e$

- e3i oblik epidemija na go&bama - rje4e$- # ind#strijski proi&edenim namirni"ama inamirni"ama # #gostiteljst# - epidemija gotoonema

5roblem: rezultat nedostatne kontrole učitavom prehrambenom lancu


3/35

Mikrobiološka pretraga

namirnica


4/35

6ikrobiolo/ka pretraga namirni"apr#a slik# o:

kako3i siroina higijenskim (sanitarnim) #jetima

proi&odnje namirni"e (5)

#spje/nosti proedenog post#pka&a/tite namirni"e


5/35

Mikrobiološke tehnikeOvise o: vrsti namirnice; o svrsi pretrageOblici:

Mikroskopiranje- izravna metoda! "ulturelna metoda metoda uzgoja!-

neizravna metoda!- uz korištenje hranjivih podloga teku#e i krute!

Metoda brojenja na podlozi; M$%! &lternativne metode biokemijski testovi'

odre(ivanje &)$!

*rze metode detekcije speci+ičnihmikroorganizama i toksina imunološke metode:E,.&' E,&' $01' 2%"/1%" metoda!


6/35

3ranjive podloge

"emijski de+inirane sintetičke! i specijalne

posebne! podloge.pecijalne podloge prema namjeni!: za prenošenje - transportiranje &miesova

podloga! za namno4avanje selenit bujon' 5% bujon'

tetrationatni bujon!6 krvni agar' čokoladni agar! selektivne .. agar' ",2 agar' *.& agar!6 di+erencijalne Mac 0onke7ev agar' EM* agar'

Manitol slani agar!&a predstanike obitelji Enterobacteriaceae *


7/35

*iokemijski testovi za identi+ikaciju bakterija

)est iskorištenja ugljikohidrata "atalaza test "oagulaza test

0itratni test 0-test! 2ekarboksilaza test

)est na stvaranje 38. )est na indol -test!

,itmus milk test Metilno crvenilo test M0-test! )est na pokretljivost

Oksidaza test O- oksidacijsko-+ermentacijski! test )est na "9 agaru i test na )9 agaru

rea test


8/35

8est kori/tenja (+ermentacije)#gljikohidrata


9/35

38. test


10/35

rea test


11/35

1ezultati identi+ikacije biokemijskimtestovima nekih! izoliranih vrsta bakterija

9akterija 6 ;5 Urea 2Stest test test test test test


12/35


13/35


14/35

5orodi"a Enterobacteriaceae: karakteristike- izolacija-identi+ikacija

$redstavnici ove porodice te predstavnici porodiceMicrococcaceae najčeš#i su uzročnici kvarenja namirnica>

.vi predstavnici porodice Enterobacteriaceae +ermentirajuglukozu EM$ putem mješovito kisela +ermentacija!

)ipične karakteristike predstavnika obiteljiEnterobacteriaceae :

5lu razgra(uju +ermentativnim putem nedostaje im aktivnost citokrom-oksidaze posjeduju sposobnost reduciranja nitrata

do nitrita


15/35

Enterobacteriaceae

5orodi"a: Enterobacteriaceae 5leme?: Es"heri"hieae >lebsielleae0

5roteeae @ersinieae ErAinieae 'od??: Es"heri"ihia0 Salmonella0 Shigella0

itroba"ter0 EdAardsiella$

>lebsiella0 Enteroba"ter0 aBnia0Serratia$

5rote#s$ @ersinia$ ErAinia C ? na osnoi geneti1kih podataka (odnos ba&a i ) i biokemijskihra&li1itostiC ?? na osnoi sli1nosti # DA


16/35


17/35

5rod#kti Bermenta"ije pirogro4anekiseline


18/35

ermentacija laktoze,aktoza: glukoza ? galaktoza; povezane

galaktozidnom vezom; EM$ put*itno:Mikroorganizmi ,ac-!koji u test podlozi ne +ermentirajulaktozu ne stvaraju kiselinu kao konačan produktrazgradnje! jesu oni mikroorganizmi kojima nedostaje@-galaktozidaza>.toga se Enterobacteriaceae ' u tijeku de+iniranja +ermentacije glukozeodre(uju samo na osnovi manjka odre(enih enzima>

,aktoza-+ermentiraju#i mikroorganizmi ,ac? !: imaju @-galaktozidazno i neznatno @-galaktozidaza-permeaznodjelovanje


19/35

Metabolizam laktoze


20/35

Algoritam identiBika"ije bakterija i&

porodi"eEnteroba"teria"eae


21/35

Dojni klj#1

&a bridentiBika"ij#E. "oli


22/35

Odre(ivanje +ermentacija glukoze i laktozena "9& i )9&!

2okazivanje ovih reakcija bitno je zaidenti+ikaciju predstavnika gram-negativnih bakterija iz porodiceEnterobacteriaceae

nakon izolacije na primarnimpodlogama za izolaciju!

"9& A "liglerov 4eljezni agar glukoza ?laktoza!

)9& A )rostruki še#er 4eljezni agarglukoza ? laktoza ? saharoza!


23/35

>arakteristike podloga: >GA i 8HGA bogate &a rast bakterija (sadr4e B izvora

proteina: ekstrakt gove(>mesa' ekstr> kvasca' pepton'proteoza-pepton!)

manjak inhibitora rasta (stoga) se #potrebljaaj# samo &a testiranjepojedina1nih rsta bakterija

kon"entra"ija: laktoza-glukoza u "9& je CD:C!'

a saharoza-glukoza u )9& je CD:C! Fe() s#lBat kao detektor 2S manje osjetlji odBeri() i Bero() soli - mog#3e nepod#daranjereltata koji se odnose na 2S na >GA i 8HGA

indikator: +enolno crvenilo (pri p niem od I#te boje) kona1an p3 pu+eriran na 'B (mala koli1ina

storene kiseline reltirati 3e idljiompromjenom boje)


24/35

1eakcije +ermentacije ugljikohidrata na

"liglerovom 4eljeznom agaru


25/35

Fermenta"ija gl#ko&e i lakto&e na >ligleroom

elje&nom agar# (>GA) i na trostr#kom /e3erelje&nom agar# (8HGA)9iokemijski prin"ipi bitnih reak"ija: l#nato na kosini podloge-l#nato #

d#bini (nema Bermentabilnih mikroorgani&ama)$5se#domonas aer#ginosa

kiselo na kosini-kiselo # d#bini(nema mikroorgani&ama koji Bermentiraj# lakto)$ Shigella

l#nato na kosini-kiselo ("rno) # d#bini$ Salmonella05rote#s

kiselo na kosini- kiselo # d#bini (pris#tnimikroorg. koji Bermentiraj# laktoJ saharo)$ lakto&a

Bermentiraj#3e bakterije: E. "oli0 >lebsiella


26/35

9akterije i& porodi"e 6i"ro"o""a"eae *gram-po&itini koki$ poe&ani saintoksika"ijama # lj#di (eg&otoksini)$ra/ireni s# pos#da # prirodi?'odoi: Staph!lo"o""#s a#re#s

Strepto"o""#s thermophil#s 6i"ro"o""#s l#te#s

Entero"o""#s Bae"alis %a"to"o""#s la"tis

%e#"onosto" mesenteroides 5edio"o""#s a"idila"ti"i

Sar"ina maKima


27/35

.peci+ičnosti po kojima se razlikujugram-pozitivne bakterije od gram-negativnih:

- isok sadraj peptidoglikana- ni&ak sadraj lipida (# stani1noj stjen"i)

- osjetljiost na antibiotike- otpornost na s#/enje poi/en#temperat#r# s#n1eo sjetlo

kemijske agense- sekolika ra/irenosti # prirodi


28/35

8estoi &a identiBika"ij# gram-po&itinihaerobnih i Bak#ltatino anaerobnih koka

#klj#1#j#

Sposobnost rasta # hranjiim podlogama pritemperat#ri od 0 o i L+ o

sposobnost rasta # podlo&i sa + , al

sposobnost rasta # podlo&i sa L0 , #1i dop#/teno &agrijaanje pri + oJM0 min. sposobnost hidroli&e /kroba elatine

arginina


29/35

Determina"ija gram-po&itinih koka

na osnoi i&gleda kolonija (morBologija) srstaanjem stani"a nakon bojenja po

ram# na osnoi tipa hemoli&e na krnom agar# na osnoi reak"ije na katala na osnoi reak"ije na koag#la


30/35

"atalaza

En&im koji ra&gra4#je 2N2 na od# ikisik Sinteti&ira ga naje3i broj aerobnih i

Bak#ltatino anaerobnih bakterija 5o kemijskom sasta#-hemoprotein$

po str#kt#ri nalik#je hemoglobin# 8est: na prtedmetni"i$ # epr#eti$ #5etrijeoj &djeli"i


31/35

>atala&a test

# epr#eti

na predmetni"i


32/35

"oagulaza

Aktinost sli1na protrombin# (tori idljie#gr#/ke) O Bibrinogen pretara # Bibrin Pin ioQ na mjest# staBilokokne inBek"ije

stara barijer# od Bibrina Dola&i kao: PslobodnaQ- (test # epr#eti) i

Pe&anaQ koag#la&a (Baktor &gr#/aanja) -

(test na predmetni"i)


33/35

>oag#la&a test


34/35

>olonije >olonijestaBilokoka streptokoka;eli1ina 2-M mm do 2 mm

(promjer):&gled: i&bo1ene m#tne pro&irne1esto obojene pol#pro&irne

'ast: gro&daste # paroimanak#pine lan"ima>atala&a: po&itian test negatian

>oag#la&a: po&itian test negatianemoli&a: manje &one hemoli&e e3e &one(Staph!lo"o""#s) (Strepto"o""#s)


35/35

Ra potrd# identiBika"ije mikrokoka

- Staph!lo"o""#s a#re#s #potrebljaaj# se jo/ da testa: staranje kiseline i& manitola

(Bermenta"ijom)(6anitol: slani agar visoko selektivna podloga za izolacijupatogenih sta+ilokoka iz mješovitih kultura> okolo rasta

kolonija .> aureus stvara se zeleni vijenac kao dokazstvaranja kiseline iz manitola>!

red#k"ija tel#rita do slobodnog tel#ra

(8el#rit agar: selektivna podloga za dokazivanje.> aur

e#s.a tel#rit agar# je inhibiran rast koagulaza-negativnihsta+ilokoka - S. epidermidis Rbog reduciranja telurita u slobodni telur kolonije .>aureus

su crno obojene>!

Documents

MN+5+-+Mikrobiološka+pretraga+namirnica,+03.15.+[Compatibility+Mode]