7/25/2019 Observacindelaclula#1_Microbiologa
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OBSERVACION DE UNA CELULA
Objetivo: Que el alumno pueda observar con diferentes tcnicas o
mtodos
una clula ya sea animal o vegetal, utilizando la tincin gram.
Azul de metilenoy el fresco, utilizado por muestra mango, saliva y
aguas residuales y observaren el microscopio cada una de las
muestras.
Introduccin: La clula es una unidad bsica de la vida. Para su
supervivenciacada una de las clulas debe mantener ciertas
condiciones internas quepermiten el desarrollo de sus reacciones
bioqumicas esenciales a pesar de loscambios e!tracelulares. "stn
son generadas en lugares acuosos.
Para poder ver la clula utilizando una peque#a muestra de mango,
saliva yaguas residuales se utilizan varias muestras como la tincin
gram, el fresco y
azul de metileno, para poder observar la clula y sus
caractersticas y al vercomo reaccionan con algunas bacterias.
Marco terico:
$incin %ram& "sta tincin esta desarrollada por el doctor
'(ristian %ram en)**+, es (oy la ms utilizada en el laboratorio de
bacteriologa y permite, deacuerdo con la estructura y grosor de la
pared bacteriana, agrupar las bacteriasen %ram positiva y gram
negativa. Las %ram positivas poseen una capa gruesade peptidoglicn
y carecen de membrana e!terna, mientras que las %ramnegativas
tienen una capa ms delgada de peptidoglicn y poseen una
membrana e!terna.Algunas bacterias se clasifican como %ram
variables, pues simultneamentepresentan tincin de %ram positiva y
de %ram negativa, aun ba-o condicionesptimas de cultivo. in
embargo, en su estructura estas bacterias poseen unapared de %ram
positiva, aunque la capa de peptidoglicn es ms delgada quela mayora
de las bacterias %ram positivas.
"sta tincin adems, correlaciona con otras propiedades como
endoto!inas,susceptibilidad a antibiticos, sensibilidad o
resistencia a sales biliares, puntoisoelctrico y tincin
superficial.
"!isten variaciones de esta tcnica, pero en trminos generales,
la tincin de%ram involucra varios pasos&
). $incin /nicial& Las clulas se ti#es con cristal violeta,
el cual es elcolorante primario. "n este paso todas las clulas se
ti#en morado.
0. 1ordente& e adiciona yoduro 2lugol3 que reacciona con el
cristal violetay forma un comple-o cristal violeta4yoduro. "n este
punto todas lasclulas contin5an de color morado.
6. 7ecoloracin& e adiciona un solvente no polar, el cual
act5a lavando elcomple-o cristal violeta4yoduro de las clulas %ram
negativas. 7e estamanera las bacterias %ram positivas contin5an
moradas y las gram
negativas quedan incoloras. "ste es el paso crtico de esta
tincin, pues
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si se e!agera, decolora las %ram positivas y si se (acen muy
dbiles nodecolora a las %ram negativas.
+. 'ontratincin& e vuelve a te#ir con safranina o fucsina,
de manera quelas bacterias %ram negativas, que (aban sido
decoloradas, se ti#an derosado o fucsia seg5n el colorante
empleado8 en tanto, las bacterias
%ram positivas no se afectan con la concentracin y
permanecenmoradas debido a lo intenso de esta coloracin.
Adems de una e!cesiva decoloracin, otro factor que puede influir
en quelas bacterias %ram positivas se observen parcial o
completamente rosadas,es la edad del cultivo8 las clulas vie-as
tienden a perder su capacidad deretener el comple-o cristal
violeta4yoduro y por lo tanto las bacterias severn rosadas. 9tro
factor de variabilidad podra se condiciones de estrsdurante el
cultivo de clulas %ram positivas.
7ebe prestarse atencin a os lavados que se realizan al ir
agregando los
diferentes reactivos, si se de-a un e!ceso de agua en las lminas
losreactivos se diluirn, especialmente el yoduro.
e (an descrito modificaciones de esta tcnica orientadas a
resolverproblemas especficos y cuyas variaciones radican en la
composicin de losreactivos, especialmente en la concentracin y
preparacin de cristalvioleta, as como en el tipo de solvente
orgnico empleado como agentedecolorante8 por lo tanto, si se cuenta
con varias de estas modificaciones esimportante no confundir los
reactivos de cada una, pues los resultadospueden ser
inadecuados.
Aunque esta tcnica parece simple, su realizacin con un alto
grado de
confiabilidad requiere prctica y e!periencia, por lo que el
estudiante tendrla oportunidad de practicarla en numerosas
oportunidades a lo largo delcurso.
:acteriolog;a %eneral& Principios < Pr=cticas de
Laboratorio 4 Pgina >6
Material:
Portaob-etos 'ubreob-etos 1ec(ero de bunce 'erillos 1icroscopio
aliva 1ango Aguas residuales Agua ?abn Azul de metileno @ioleta
cristal
olucin yodada Alco(ol
