USPOREDBA KONCENTRACIJA INTERLEUKINA 12 U USPOREDBA KONCENTRACIJA INTERLEUKINA 12 U OČNOJ VODICI I SERUMU KOD BOLESNIKA S OČNOJ VODICI I SERUMU KOD BOLESNIKA S

DIJABETESOM TIPA 2 BEZ DIJABETIČKE DIJABETESOM TIPA 2 BEZ DIJABETIČKE RETINOPATIJE, S NETRETIRANOM I LASERSKI RETINOPATIJE, S NETRETIRANOM I LASERSKI TRETIRANOM NEPROLIFERACIJSKOM TRETIRANOM NEPROLIFERACIJSKOM

DIJABETIČKOM RETINOPATIJOMDIJABETIČKOM RETINOPATIJOM

Pristupnica : Antonela Gverović Antunica dr. med.Pristupnica : Antonela Gverović Antunica dr. med. Mentorica : Prof. dr. sc. Ksenija KaramanMentorica : Prof. dr. sc. Ksenija Karaman

Diabetes mellitusDiabetes mellitus Definicija i klasifikacija :Definicija i klasifikacija :

a) DM tip 1 autoimuni oblik idopatski oblik b) DM tip 2 c) ostali specifični tipovi genetski defekt djelovanja inzulina genetski defekt beta - stanične funkcije uzrokovani kroničnim bolestima gušterače endokrinoptije uzrokovani lijekovima ili kemijskim spojevima uzrokovani upalama ostali nasljedni sindromi udruženi s DM u trudnoći

Diabetes mellitusDiabetes mellitus

Kronične komplikacije šećerne bolestiKronične komplikacije šećerne bolesti

1. VaskularneVaskularne

nefropatijanefropatija retinopatija retinopatija koronarna arterijska bolestkoronarna arterijska bolest cerebrovaskularna bolestcerebrovaskularna bolest bolest perifernih krvnih žilabolest perifernih krvnih žila

2. 2. NevaskularneNevaskularne

neuropatijaneuropatija

Dijabetička retinopatijaDijabetička retinopatija

Patoanatomske promjenePatoanatomske promjene

Gubitak kapilarnih pericitaGubitak kapilarnih pericita MikroaneurizmeMikroaneurizme Zadebljanje kapilarne bazalne membraneZadebljanje kapilarne bazalne membrane Fenestracija endotelnih stanicaFenestracija endotelnih stanica

Dijabetička retinopatijaDijabetička retinopatija

1.1. Hiperglikemija Hiperglikemija 1,21,2

2.2. Put sorbitola Put sorbitola 33

3.3. Oksidacijski stres Oksidacijski stres 44

4.4. Diaglicerol i protein kinaza C Diaglicerol i protein kinaza C 33

5.5. Upalni citokini Upalni citokini 55

1. The Diabetes Control and Complication Trial Research Group.The effect of intensive treatment of diabetes on the development and progression of long- term complication in Insulin-Dependent Diabetes mellitus. N Engl J Med 1993;329:977-86.2. The Diabetes Control and Complication Trial Research Group. Progression of retinopathy with intensive versus conventional tretment in the Diabetes Control and Complication Trial. Ophthalmology. 1995;102:647-61.3. UK Prospective Diabetes Study (UPKDS) Group. Intensive blood-glucose control with sulphonylureases or insulin compared with conventional treatment and risc of complication in patients with type 2 diabetes. Lancet. 1998;352-87.4. Cadenas E, Davies KJ. Mitochondrial free radical generation, oxidative stress, andaging. Free Radic Biol Med. 2000;29:229-30.5. King GL. The role of inflammatory cytokines in diabetes and its complications. J Periodontol. 2008;79:1527-34.

Citokini Citokini

mali proteini od 8-80 kD ( kilodalton)

u svim fazama imunoloških reakcija

nema imunološke reakcije bez citokina

DaltonDalton

dalton (Da)

jedinica za molekularnu masu

1/12 mase  UGLJIKA

1 u ≈ 1.660538782(83) × 10−27 kg  1 u ≈ 1.660538782(83) × 10−27 kg 

CitokiniCitokini

makrofagi/ monociti dendritične stanice svi T limfociti B limfociti stanice epitela stromalne stanice timusa i koštane sržimastociti eozinofili granulociti fibroblasti osteoklasti endotelne stanicekeratinociti megakariociti trombociti hepatociti

RPERPE

autokrinoautokrino - svoje stanicee

parakrinoparakrino - susjedne stanice

endokrinoendokrino - udaljene stanice cirkulacijski 1

1 Roitt I., Brostoff J., Male D., Imunology 5th ed.Mosby, London, 1998

CitokiniCitokini

Podjela:Podjela:

interleukini interferoni faktori nekroze tumora ( tumour necrosis factors) faktori rasta (growth factors) faktori koji stimuliraju kolonije (colony stimulating factors) kemokini (chemokines)

CitokiniCitokini

proupalniproupalni protuupalniprotuupalni

TNF IL - 4

IL-1 IL -10

IL-12IL-12 IL - 13

IL-18 TGF-ß

IFN -γ

Interleukin 12Interleukin 12

glikoproteinski heterodimer 75 KD

Sinonimi : Sinonimi :

NKSF (natural killer cell stimulatory factor)

CLMF (cytotoxic lymphocyte maturation factor)

Interleukin 12Interleukin 12

Interleukin 12Interleukin 12

dvije genetski nesrodne podjedinice:

manja p 35 srodna IL-6 i G-CSF

veća p 40 e slična solubilnom receptoru za IL-6

ukazuje da je nastao od citokin solubilnog receptorskog

kompleksa

Funkcija IL-12Funkcija IL-12

• diferencijacija Th1 i Th0• stimulacija Th1, Tc1 i NK na povećano lučenje IFγ i TNF• stimulacija makrofaga na pojačanu fagocitozu preko Ifγ kojeg luče Th1,Tc1 i NK• zajedno s IL-18 stimulira diferenciranje Th1, Tc1 i NK stanica i makrofaga • preko B limfocita formira AFC (antibody forming cells) na T nezavisne antigene (urođeni imunitet)• povezuje urođeni i stečeni imunitet • endogeni adjuvant u cjepivima - poticanje celularne reakcije

imunog aparata

Genska transkripcija posredovana Genska transkripcija posredovana citokinimacitokinima

Cilj istraCilj istražživanjaivanja

Glavni ciljGlavni cilj usporediti koncentracije citokina IL-12 u serumu i očnoj vodici u :

1. dijabetičara tipa 2 a) bez dijabetičke retinopatije b) s netretiranom neproliferacijskom dijabetičkom retinopatijom c) dijabetičara s laserski tretiranom neproliferacijskom dijabetičkom retinopatijom

2. nedijabetičara

Cilj istraCilj istražživanjaivanja

Sporedni cilj :Sporedni cilj :

povezanost vrijednosti IL-12 u očnoj vodici i/ili serumu s konvencionalnim povezanost vrijednosti IL-12 u očnoj vodici i/ili serumu s konvencionalnim čimbenicima rizika čimbenicima rizika • spol spol • dob dob • trajanje dijabetesatrajanje dijabetesa• BMIBMI• pušenjepušenje• krvni tlakkrvni tlak• GUKGUK• glikozilirani hemoglobin - HbA1c glikozilirani hemoglobin - HbA1c • trigliceridi trigliceridi • kolesterolkolesterol• SESE• CRPCRP• fibrinogenfibrinogen

OOččekivani rezultatiekivani rezultati

1. Poremećaj lokalne homeostaze - povećanje koncentracije proupalnih citokina u oku povezano jepovezano je s prisutnošću dijabetičke retinopatije.

2. Koncentracija IL-12 u očnoj vodici je većaje veća u dijabetičkih pacijenata s dijabetičkom retinopatijom u usporedbi s a) pacijentima bez dijabetesa b) dijabetičarima bez dijabetičke retinopatije c) dijabetičarima s laserski tretiranom dijabetičkom retinopatijom

OOččekivani rezultatiekivani rezultati

33. Koncentracije IL-12 u serumu dijabetičara, s ili bez dijabetičke retinopatije i osoba bez dijabetesa se razlikujuse razlikuju

4. 4. Postoji pozitivna korelacijaPostoji pozitivna korelacija koncentracije IL-12 u serumu s dužinom trajanja dijabetesa, BMI-om, HDL kolesterolom, trigliceridima, sistoličkim krvnim tlakom i pušenjem

5. 5. Ne postoji korelacijaNe postoji korelacija IL-12 u očnoj vodici s dužinom trajanja dijabetesa, BMI-om, HDL kolesterolom, trigliceridima, sistoličkim krvnim tlakom i pušenjem

Metode istraživanjaMetode istraživanja

Kriteriji uvrštenja :

Dob > 60 godina očna mrena DM > 10 godina tip 2 DM

Kriteriji isključenja : a) upalne bolesti oka b) glaukom c) pseudoeksfolijacijski sindrom d) okluzivne i degenerativne bolesti mrežnice

Metode istraživanjaMetode istraživanja

IIspitanicispitanici Bolesnici Očnog odjela OB Dubrovnik kojima je postavljena indikacija za operaciju mrene.

U istraživanje su uključene 4 skupine ispitanika :

1. ispitanici bez šećerne bolesti koji imaju negativnu obiteljsku anamnezu za šećernu bolest 2. ispitanici oboljeli od šećerne bolesti bez znakova dijabetičke retinopatije 3. ispitanici oboljeli od šećerne bolesti s neproliferacijskim tipom dijabetičke retinopatije, a bez ikakvog tretmana na oku 4 ispitanici oboljeli od šećerne bolesti s neproliferacijskim tipom dijabetičke retinopatije, koji su tretirani laserskom fotokoagulacijom mrežnice

Metode istraživanjaMetode istraživanja

PostupciPostupci

1. 1. Opća i oftalmološka anamnezu kao i slijedeće varijable :Opća i oftalmološka anamnezu kao i slijedeće varijable : dob, spol, trajanje dijabetesa, terapija, obiteljska anamneza, pušenje, krvni tlak, indeks tjelesne mase -BMI

2. 2. Laboratorijski parametri : Laboratorijski parametri : IL-12 u očnoj vodici (pg/mL) IL-12 u serumu (pg/mL) GUK (mmol/L) HbA1c (%) kolesterol, HDL i LDL kolesterol (mmol/L) trigliceridi (mmol/L) SE (mm/h) CRP (mg/L) fibrinogen (g/L)

Metode istraživanjaMetode istraživanja

3. 3. Kompletni oftalmološki pregled :Kompletni oftalmološki pregled :

• vidna oštrina bez i s korekcijom na Snellenovim tablicama vidna oštrina bez i s korekcijom na Snellenovim tablicama • biomikroskopski pregled prednjeg segmenta oka bez i s midrijazom biomikroskopski pregled prednjeg segmenta oka bez i s midrijazom • mjerenje očnog tlaka Goldmanovim aplanacijskim tonometrommjerenje očnog tlaka Goldmanovim aplanacijskim tonometrom• indirektna oftalmoskopija asferičnom lupom od +20 dioptrija indirektna oftalmoskopija asferičnom lupom od +20 dioptrija • pregled kontaktnom lupom Volk trans equator na biomikroskopu Haag pregled kontaktnom lupom Volk trans equator na biomikroskopu Haag • Streit BQ 900Streit BQ 900• fotodokumentacija na digitalnoj fundus kameri Zeiss Visucam lite (god. fotodokumentacija na digitalnoj fundus kameri Zeiss Visucam lite (god.

2007.)2007.)• fluoresceinska angiografija za diabetičare na digitalnoj fundus kameri fluoresceinska angiografija za diabetičare na digitalnoj fundus kameri

Zeiss Visucam lite Zeiss Visucam lite

Očekivani znanstveni doprinosOčekivani znanstveni doprinos

Po prvi put pokazati da li je koncentracija IL-12 u očnoj Po prvi put pokazati da li je koncentracija IL-12 u očnoj vodici povećana kod dijabetičara s dijabetičkom vodici povećana kod dijabetičara s dijabetičkom retinopatijom u odnosu na:retinopatijom u odnosu na:

a) dijabetičare koji nemaju dijabetičku retinopatijua) dijabetičare koji nemaju dijabetičku retinopatiju

b) dijabetičare koji su laserski tretiranib) dijabetičare koji su laserski tretirani

c) nedijabetičarec) nedijabetičare

Očekivani znanstveni doprinosOčekivani znanstveni doprinos

Ukazati trebaju li buduća istraživanja raditi na ispitivanju

učinkovitosti protuupalnih lijekovaučinkovitosti protuupalnih lijekova u smanjivanju lučenja

IL-12 u oku, a u svrhu prevencije ili liječenja dijabetičke

retinopatije

Očekivani znanstveni doprinosOčekivani znanstveni doprinos

Odgovoriti da li laserski tretman uništavajući dijelove retine Odgovoriti da li laserski tretman uništavajući dijelove retine

smanjuje koncentraciju IL-12 u očnoj vodici, a time i upalnismanjuje koncentraciju IL-12 u očnoj vodici, a time i upalni

odgovor i stupanj dijabetičke retinopatijeodgovor i stupanj dijabetičke retinopatije

Pilot studijaPilot studija

• snaga istraživanja od 80%snaga istraživanja od 80%• razina statističke značajnosti od 0,05 (p - vrijednost 5%) razina statističke značajnosti od 0,05 (p - vrijednost 5%) • minimalno 48 ispitanikaminimalno 48 ispitanika• 12 po skupini12 po skupini