UNIVERSIDAD RICARDO PALMA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

FARMACOLOGIA

EFECTOS DEL EXTRACTO ETANOLICO DE MYRCIARIA

DUBIA (CAMU CAMU) COMO CICATRIZANTE DE

HERIDAS EN RATONES ALBINOS.

LIMA – PERÚ

2013

UNIVERSIDAD RICARDO PALMA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

FARMACOLOGIA

EFECTO DEL EXTRACTO ETANOLICO DE MYRCIARIA DUBIA

(CAMU CAMU) COMO CICATRIZANTE DE HERIDAS EN RATONES

ALBINOS

ASESORES:

Lic. Eduardo Jesús Villalobos Pacheco

Alison Rocío Velásquez Vásquez

Carla del Pilar Cupe Quispe

Pedro Infante Bustamante

INVESTIGADORES:

Castillo Márquez, José Luis

Medrano Amuy, Héctor Ricardo

Torres Otárola, Claudia Andrea Judith

Vargas Campana, Carla Alejandra

LIMA – PERÚ

2013

Efecto Del Extracto Etanolico De Myrciaria dubia (Camu Camu) como

cicatrizante de heridas en ratones albinos

Castillo-Márquez, José Luis; Medrano-Amuy, Héctor Ricardo; Torres Otárola,

Claudia Andrea Judith; Vargas-Campana, Carla Alejandra.

I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

¿Se reducen las áreas de las heridas a nivel tisular con la aplicación de la

crema a base de Myrciaria dubai en ratones albinos?

1.2 JUSTIFICACIÓN DEL PROBLEMA

Cuando la herida no cicatriza por unión primaria, se lleva a cabo un proceso de

cicatrización más complicado y prolongado. La cicatrización por segunda

intención es causada por infección, trauma excesivo, pérdida o aproximación

imprecisa del tejido.

En este caso, la herida puede dejarse abierta para permitir que cicatrice desde

las capas profundas hacia la superficie exterior. Se forma tejido de granulación

que contiene miofibroblastos y cierra por contracción. El proceso de

cicatrización es lento y habitualmente se forma tejido de granulación y cicatriz.

Como resultado, puede ser necesario que el cirujano trate el excesivo tejido de

granulación que puede protruir por el margen de la herida y evitar epitelización.

Como punto a parte vemos que el Perú es un país con una amplia

biodiversidad de plantas medicinales que la población usa para aliviar sus

males; y estas costumbres ancestrales aun persisten en el tiempo. Muchos de

los efectos de las diversas plantas han sido motivo de estudio como el caso de

Myrciaria dubia (Camu Camu), que gracias a su alto contenido de Vitamina C

es útil como cicatrizante de heridas y reparación y mantenimiento de los tejidos

por la formación de colágeno; también es importante en la síntesis y

producción de hormonas y neurotransmisores.

Viabilidad del Proyecto

Se cuenta con la capacidad técnico y el apoyo logístico para el desarrollo de la

investigación correspondiente al acceso:

Laboratorio, Maquinarias y Jaulas adecuadas

Animales y alimento balanceado certificados por el Instituto Nacional de

Salud

El personal profesional y técnico

Recursos económicos

1.3 OBJETIVOS

1.3.1 OBJETIVO GENERAL

- Demostrar el efecto cicatrizante del extracto etanólico de Myrciaria dubia

(Camu Camu) en heridas incitadas en ratones albinos.

I.3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

- Demostrar el efecto cicatrizante del extracto etanólico del Camu Camu

(Myrciaria dubia) al 1% en heridas incitadas en ratones albinos.

- Analizar la rapidez de cicatrización de la crema a base del extracto

etanólico del Myrciaria dubia (Camu Camu) al 1% de las heridas incitadas

en ratones albinos.

II. MARCO TEÓRICO

2.1 ANTECEDENTES:

a. Eficacia tópica de Myrciaria dubia en la curación de quemaduras de

segundo grado en ratas Holtzman: El siguiente trabajo fue realizado en

el 2009 en la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, el objetivo fue

comparar el efecto de la crema a base de Myrciaria dubia con el efecto

antibiótico de la crema de sulfadiazina argéntica. Fue un estudio

experimental aleatorizado incompleto. Contaron con 15 ratas Holtzman

hembras de 9-10 semanas a las cuales se les produjo quemaduras de

segundo grado, cuadrada de 1cm2 de piel del dorso usando un cautín

modificado para producir tres quemaduras térmicas por cada animal. Se

seleccionó aleatoriamente la herida para cada tratamiento. La crema a

base de camu-camu se elaboró con una extracción etanólica al 5% para

mezclarla con Sepigel 350® a una concentración de 5%. Las heridas

recibieron administración cada doce horas durante cinco días. Luego, el

promedio de la reducción de la cicatriz en el grupo camu-camu es de 69,4

± 52,85, mientras que en el grupo sulfadiazina argéntica es de 69,26 ±

53,66. Microscópicamente se observó similar infiltración leucocitaria en la

dermis y en el estrato seroso en los grupos camu-camu y sulfadiazina

argéntica, y ambas fueron menores que en la del grupo control. Se utilizó

la prueba ANOVA, se observó que, a pesar de que la cantidad de

fibroblastos en el grupo camu-camu era ligeramente mayor que en la de

sulfadiazina argéntica, la diferencia no era estadísticamente significativa.

Y gracias a la presencia de epidermis en el grupo Camu-Camu, a

diferencia de los demás grupos, se puede deber a una mayor de

activación de células basales o a una detención de los procesos

oxidativos debido a la propiedad antioxidante de este fruto.

b. Propiedades prooxidantes de Myrciaria dubia (Camu Camu): El

siguiente estudio fue realizado en el 2005 en la Universidad Nacional

Mayor de San Marcos que tuvo como objetivo determinar el efecto del ion

férrico sobre las propiedades prooxidantes de Myrciaria dubia (Camu

Camu). Fue un estudio analítico, experimental, prospectivo y longitudinal.

Se evaluó las propiedades prooxidantes de Myrciaria dubia, fruto

caracterizado por tener un elevado contenido de vitamina C, frente a

Fe(III), etilendiamino tetraacético (EDTA), tiourea y manitol. Tuvo como

resultado que el camu camu en presencia de Fe-III en tampón fosfato a

pH 7,4 incrementó notablemente la generación de radicales libres a través

de una cinética de saturación, efecto que fue dependiente de la

concentración del metal. La presencia de tiourea o manitol, compuestos

de conocida acción antioxidante, inhibieron la formación de radicales

libres, en cambio el EDTA lo incrementó. Esto llevó a la conclusión que el

camu camu incrementa la generación de radicales libres en presencia de

Fe(III) y EDTA.

c. Efecto citoprotector de Myrciaria dubia (Camu Camu) en tres líneas

celulares de ratón expuestos in vivo a bromato de potasio: El

siguiente estudio fue realizado en Diciembre del 2010 en la Universidad

Nacional Mayor de San Marcos, se evaluó in vivo la capacidad

citoprotectora del fruto de Myrciaria dubia frente al daño mutagénico

producido por bromato de potasio sobre tres líneas celulares de ratón

(hígado, riñón y células sanguíneas). Se utilizó ratones divididos en tres

grupos los cuales bebieron ad libitum, a los diez días se inyectó una dosis

única de KBr03 (68,5 mg/kg peso corporal) vía intraperitoneal, a los grupos

TII y TIII. El tratamiento con camu-camu continuo 35 días más, luego los

ratones fueron eutanizados para determinar la frecuencia del daño al DNA

mediante el protocolo del ensayo cometa alcalino. El grupo TII mostró en

todas las líneas celulares el efecto citoprotector del camu-camu. El efecto

dañino al DNA por la acción oxidativa del KBrO3 es inhibido por el extracto

acuoso del fruto de camu camu, probablemente por la presencia de los

agentes antioxidantes como el Acido ascórbico y los flavonoides.

III. HIPÓTESIS Y VARIABLES

3.1 HIPÓTESIS

3.1.1 Hipótesis nula: El área de las heridas se reduce por la aplicación

tópica del extracto etanólico de Myrciaria dubia (Camu Camu).

3.1.2 Hipótesis alterna: El área de las heridas no se reduce por la aplicación

tópica del extracto etanólico de Myrciaria dubia (Camu Camu).

3.2 IDENTIFICACIÓN DE VARIABLES

3.2.1 Variable Independiente: Extracto de Myrciaria dubia (Camu Camu)

3.2.2 Variable Dependiente: Tejido epitelial poliestratificado plano

queratinizado.

variable Definición

conceptual

dimensiones Indicador Criterio de

medicion

Herida Discontinuidad

del tejido

epitelial plano

poliestratificado

no qeratinizado

Estructura Forma Regular

Irregular

Superficie Regular

Irregular

Integridad Irrigación Disminuido

Regular

Aumentado

Secreción Purulenta

No purulenta

IV. DISEÑO METODOLÓGICO

4.1. TIPO DE ESTUDIO: Estudio experimental preclínico de corte

longitudinal.

4.2. ÁREA DE ESTUDIO: Los ensayos serán realizados en las instalaciones

del Laboratorio de Investigación de Farmacología y la Unidad de Bioterio

de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Ricardo Palma.

4.3. MUESTRA

La población motivo de estudio, estará conformado por 15 ratones

albinos, obtenidas del Instituto Nacional de Salud y quienes serán

albergadas a temperatura ambiental en la Unidad de Bioterio durante todo

el periodo del estudio.

4.4. MATERIALES Y EQUIPOS

4.4.1. Material Biológico

a) Ratones albinas jóvenes

b) Fruto de la Myrciaria dubia “Camu Camu” (Cáscara, pulpa y pepa).

4.4.2. Material Farmacológico y Reactivos

a) Pentobarbital sódico

b) Crema para depilar

c) Alcohol metílico al 96%

d) Agua destilada

4.4.3 Equipos y otros

a) Jeringas de 1ml descartables.

b) Estuche de disección.

c) Guantes descartables.

d) Papel filtro.

e) Material de vidrio.

f) Pinza.

g) Jaulas.

h) Mortero y pilón.

i) Sacabocado.

j) Cámara Fotográfica.

k) Soporte para fotografiar heridas.

l) Alimento balanceado.

4.5. MÉTODOS Y TÉCNICAS PROCEDIMENTALES

4.5.1 Recolección y desecación del material botánico

Se comprará 3Kg de fruta fresca en el Mercado de Magdalena; siendo 1.5Kg

de fruto de la planta en fase arbustácea y otro 1.5Kg de fruto de la panta en

fase arbolácea.

Se procederá a moler la fruta en el mortero con el pilón y se separará la pulpa y

la cáscara de la pepa. Luego se llevará a secar en un ambiente oscuro y con

ventilación mecánica (ventilador a baja potencia) durante 6 días.

.4.5.2 Obtención del extracto etanólico de Myriciaria dubia (Camu Camu)

Se realizará la extracción del principio activo del secado de Myrciaria dubia

empleándose la siguiente técnica: 500 gramos de fruta seca por cada litro de

Alcohol al 96% en frascos de vidrio oscuro para su maceración a temperatura

ambiente por 7 días. Lo mismo se realizará con las pepas, por cada 500

gramos de pepas se colocará 1 litro de alcohol al 96%. Finalmente las

soluciones serán filtradas en un embudo Buchner y papel filtro,

El extracto etanólico se verterá en una fuente de vidrio plano para su respectiva

evaporación a temperatura ambiente, evitando la luz solar, que durará

aproximadamente otros 7 días (esto depende de la temperatura y el porcentaje

de humedad del ambiente)

4.5.4 Preparación de los animales Ejecución de las Heridas

Los animales serán alojados en jaulas metálicas de crianza para su

aclimatación por 1 semana previa al experimento, con libre acceso a agua y

alimento. La temperatura ambiental deberá oscilar entre 21-25 ºC y 50-60% de

humedad con 12 horas luz/oscuridad.

4.5.5 Ejecución de las heridas

Se emplearán ratones albinos obtenidos del Instituto Nacional de Salud (INS).

Después de una semana de adaptación al ambiente de Laboratorio, los

animales serán distribuidos aleatoriamente en 2 grupos de 4 animales:

Grupo Control (n=1): 4 animales

Grupo Experimental 1% (n=2): 4 animales.

El día del experimento los ratones serán anestesiados con pentobarbital con

una dosis de 30mg/kg vía Intraperitoneal.

Se realizará una herida experimental con un sacabocado de aproximadamente

1cm2 en el dorso del tórax del animal.

4.5.6 Registro del área de la herida

Inicial: se describirá las características de las heridas según las variables

(estructura e integridad) y se fotografía, empleando el soporte para la

cámara fotográfica y colocando a cada ratón en la tabla objetivo del soporte.

Final: se sacrifica a los ratones por sobredosis de Pentobarbital, se

describen las características de las heridas según las variables (estructura e

integridad) y se las fotografía, empleando el soporte para la cámara

fotográfica y colocando a cada ratón en la tabla objetivo del soporte.

4.5.7 Aplicación del tratamiento

Durante 5 días se monitoreará el estado de las heridas, se les aplicará la

crema y se alimenta a los animales y se les proporciona alimento y agua.

4.5.8 Análisis de los datos:

Para la medición de las heridas se utilizará el programa Autodesk AutoCAD

18.0.

Para la tabulación se utilizará el programa Microsoft Office Excel 2010.

El análisis estadístico para determinar las diferencias significativas entre los

grupos se realizará mediante la prueba t student.

Los datos serán expresados como promedio +-DE, un p<0,05 será

considerado significativo.

4.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO.

Los resultados serán expresados como la media ± desviación estándar para

todas las mediciones obtenidas.

Se realizará las medidas de las áreas con el programa Autodesk AutoCAD

18.0, programa de diseño asistido por computadora.

4.7 CONSIDERACIONES ÉTICAS

El presente proyecto deberá ser evaluado por el Comité de Ética de la Facultad

de Medicina de la URP para la aprobación del uso de animales de

experimentación, así como el modelo empleado en el proyecto.

Por otro lado, la eutanasia de los animales deberá permitir una rápida pérdida

de conciencia sin dolor o miedo, seguido por un alivio progresivo hasta la

muerte del animal.

Para efectos de este experimento se elegirá el método de eutanasia inducido

por una solución anestésico vía intraperitoneal; considerado un método

aceptable para roedores por el Report of the AVMA Panel on Eutanasia (1993)

y el Euthanasia of Experimental Animals, de la Unión Europea (1995).

Se empleará como anestésico pentobarbital sódico intraperitoneal 60 mg/Kg,

para inducir la muerte de los animales.

V.- PRESUPUESTO

Presupuesto

Material Soles/Unidad Total Soles/Cantidad

Ratones 4.5/8 36 / 8 ratones

Crema depiladora 14 / crema 14 / 1 cremas

Alimento Balanceado Donación Donación

Jeringa de Tuberculina 0.5 / jeringa 4.5/9 unidades

Alcohol 8 / frasco 16 / 2 frascos

Camu Camu 10 / 1 kg 30 / 3 kg

Total 100,5

VI .- REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

1. Castañeda C., B., Ramos Ll., E., Ibañez V., L. Evaluación de la capacidad

antioxidante de siete plantas medicinales. Revista Horizonte Médico.

Volumen 8, N° 1, Julio 2008. Págs. 56-72

2. Flores, Diana. Uso Histórico: Camu Camu Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc

Vaugh. Proyecto Biocomercio Perú. Agosto 2010. Págs. 1-25.

3. H. Guija, L. Troncoso, E. Guija. Propiedades prooxidantes del camu camu

(Myrciaria dubia). An Fac Med Lima 2005; 66(4) Pags. 261-268

4. K. Pacci-Salazar, L. Nureña-Noriega, J. Vásquez-Cerro, G. Araujo-

Espinoza, M. Gálvez-Niño. Eficacia tópica de Myrciaria dubia en la curación

de quemaduras de segundo grado en ratas Holtzman. CIMEL 2009, Vol.14,

N° 1

5. Kember M, Reng E. Usos medicinales de plantas de uso la popular en la

amazonía peruana. AECI y IIAP, Lima- Perú. 1995.

6. R. Alvis, J. Pino, J. Gonzáles, J. Francia y B. Shiga. Efecto citoprotector del

camu-camu Myrciaria dubia en tres líneas celulares de ratón expuestos in

vivo a bromato de potasio. Facultad de ciencias biológicas UNMSM.

Diciembre 2010.