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aguas residuales
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UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOLOGA
Determinacin de cepas bacterianas enteropatgenas en los
principales manantiales del municipio de Banderilla, Veracruz
TESIS
TRABAJO DE EXPERIENCIA RECEPCIONAL
QUE PRESENTA:
MAGDIEL ALEJANDRA RAMREZ BARRAGN
DIRECTOR:
Biol. S. Augusto Hernndez Rivera
XALAPA, VER. 2009
CONTENIDO
RESUMEN
I.- INTRODUCCIN Y ANTECEDENTES... 4
1.1.- La contaminacin.4
1.2.- El problema de la contaminacin en los cuerpos de agua ......5
1.3.- Contaminacin bacteriana en el agua subterrnea......6
1.4.- Microorganismos patgenos: Indicadores de contaminacin ... 9
1.5.- Bacterias de importancia clnica en el agua de consumo . 11
II.- OBJETIVOS. 14
III.- MATERIALES Y MTODOS... 15
3.1.- rea de estudio........................ 15
3.2.- Determinacin de los manantiales muestreados.............. 18
3.3.- Material biolgico............ 19
3.4.- Determinacin de coliformes totales y fecales.................... 20
3.5.- Obtencin, aislamiento y purificacin de bacterias......... 21
3.6.- Determinacin de gneros bacterianos........ 21
3.7.- Pruebas diferenciales para la familia Enterobacteriaceae........ 22
3.8.- Pruebas diferenciales para el gnero Vibrio spp. 24
3.9.- Pruebas diferenciales para el gnero Pseudomona spp.. 25
IV.- RESULTADOS... 26
4.1.- Palenquillo....... 26
4.2.- Ocotita..... 28
4.3.- lamos 1...... 30
4.4.- La fragua......... 32
4.5.- La mistela.... 34
4.6.- Poza verde... 36
4.7.- Boquern 2...... 38
V.- DISCUSIN ........ 43
VI.- CONCLUSIONES . 47
VII.- ANEXOS. ..... 48
VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS..... 52
RESUMEN
La contaminacin del agua se ha vuelto un problema a nivel mundial, ya que en las ltimas
dcadas se ha observado el incremento de contaminantes en los mares, ro, lagos y acuferos.
El presente trabajo tuvo como objetivos evaluar la calidad bacteriolgica, aislar y obtener cepas
bacterianas, as como la determinacin de bacterias patgenas en loas principales manantiales
del municipio de Banderilla, Veracruz.
El trabajo se realiz en los meses de Enero, Marzo, Abril, Mayo y Junio del ao 2008. Se
analizaron 34 muestras de agua de los principales manantiales del municipio de Banderilla,
Veracruz. De estas muestras se aislaron los gneros pertenecientes a la familia de las
Enterobacteriaceae, entre los que destacan Salmonella spp., Escherichia spp., Enterobacter spp.,
Citrobacter spp. y Serratia spp., as como el gnero Pseudomona spp. Tambin se encontraron
Klebsiella spp., Proteus spp., Providencia spp., Aeromona spp. y Vibrio spp. En conclusin, se
encontraron coliformes totales y fecales en la mayora de los manantiales as como gneros
bacterianos patgenos, por lo cual la calidad del agua se considera deficiente. El manantial La
fragua se encontr libre de coliformes, sin embargo, se logr aislar el gnero Pseudomona spp.,
conocido como patgenos oportunistas, el cual puede causar un efecto daino en las personas
que llegasen a ingerirlas por medio del agua.
I.- Introduccin y Antecedentes
El agua es un lquido imprescindible para la vida, adems de ser ampliamente utilizada en
actividades diarias, se encuentra distribuida en la tierra de manera dulce y salada, esta ltima
ocupando ms del 97% del total y distribuida en los mares y ocanos, el 3% restante es agua
dulce, pero casi toda esta congelada en los polos y en los glaciares. El agua congelada representa
el 69.7% del agua dulce, el agua subterrnea representa el 30% y en los ros y en los lagos
solamente encontramos el 0. 3% de agua dulce (Guerrero, 1991). Mxico posee una gran riqueza
de agua superficial, ya que cuenta con 39 ros importantes cuyas cuencas ocupan el 58% de la
extensin territorial continental por los que escurre el 87% del agua, as como pequeos ros y
lagos importantes (CONAGUA, 2007).
Independientemente de la importancia que representa mantener este lquido, lo relevante es
conservar su calidad natural para poder garantizar su aprovechamiento; sin embargo, los niveles
de contaminacin en los cuerpos de agua se han incrementado considerablemente, esto en gran
medida al aumento de la poblacin (Arcos et al., 2005), a la sobreexplotacin del recurso, la
contaminacin por desechos industriales, as como el uso de agroqumicos en la agricultura
(Bruzzone, 2004).
1.1.- La contaminacin
Actualmente el problema de la contaminacin es uno de los principales temas de atencin y
discusin, sin embargo, esta se presenta en mayor magnitud en las grandes ciudades, debido a
que las concentraciones poblacionales hacen que los desechos que generan las actividades
sociales y productivas se manifiesten con mayor incidencia y peligrosidad en el medio ambiente
(Rivera et al., 2006).
La contaminacin, en trminos generales, es la introduccin de un contaminante en el medio,
puede ser un agente fsico, qumico o biolgico en lugares, formas y concentraciones que pueden
ser perjudiciales para la salud o reducen la capacidad de las reas afectadas para mantener la vida.
Si bien es cierto que el suelo y el aire presentan niveles de contaminacin; el agua, ya sea esta en
corrientes subterrneas o a cielo abierto en nacimientos y ros, por estar sometida de manera
constante a la accin de las actividades antropognicas y disminuyendo de manera significativa
su calidad, cobra mayor importancia (Fernndez y Fernndez, 2007).
La contaminacin del agua puede observarse desde dos puntos de vista: la contaminacin
antropognica y contaminacin natural. La contaminacin antropognica puede ser dividida en
tres tipos: bacteriolgica, inorgnica, y orgnica. La contaminacin natural esta relacionada
principalmente con reas donde se encuentran elementos o compuestos naturales que son txicos
como el plomo o arsnico (Marn, 2004).
1.2.- El problema de la contaminacin en los cuerpos de agua
El agua, es un medio que puede convertirse en un vehculo para la adquisicin de diversas
enfermedades (Snchez et al., 2000). El peligro ms comn y difundido, relacionado con el agua
de consumo humano, es el de su contaminacin microbiana, si esta contaminacin es reciente y
se hallan microorganismos patgenos, es posible que dichos microorganismos se encuentren
vivos y con capacidad de producir enfermedades (Martnez y Garca, 2002). Las aguas
superficiales son las que estn ms expuestas a una amplia gama de factores que pueden alterar
su calidad y tener diferentes niveles de intensidad (Aurazo, 2004). Sin embargo, este tipo de
aguas pueden limpiarse por medio de procesos de depuracin, pero no as el agua subterrnea,
la cual tiene el problema de que su movimiento natural es lento, su tiempo de renovacin es corto
y por lo tanto tiene mayor tiempo de residencia, por lo que el contaminante no desaparece tan
fcilmente (Perdomo, 2001).
El agua subterrnea se encuentra debajo del suelo, donde pasan por filtracin lluvia, nieve
derretida, arroyos u otra fuente de agua superficial, que funcionan como la recarga de estos
acuferos, posee de manera natural cierta calidad, ya que filtra, diluye, transforma o destruye
contaminantes naturales y humanos en el subsuelo (McQuillan et al., 2000) por lo que su uso
principal es la de consumo. El origen de la contaminacin del agua subterrnea es muy variado,
siendo el ms importante el vertido de desechos urbanos (Martnez y Garca, 2002), como
ejemplo la presencia de los microorganismos que llegan a los cursos de agua a travs de esta va
y en menor nivel de drenajes de lluvias, desechos de industrias alimentarias y corrales ganaderos
(Aurazo, 2004). De acuerdo a la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) el agua debe ser
adecuada para el consumo humano y para todo uso domstico habitual, en el caso de
microorganismos patgenos y oportunistas no deben estar presentes en el agua potable destinada
al consumo, preparacin de alimentos, bebidas e higiene personal (Soto et al., 2006).
1.3.- Contaminacin bacteriana en el agua subterrnea
El problema de la contaminacin del agua no solo se circunscribe a los pases en vas de
desarrollo si no a nivel mundial. El continente Europeo se encuentra en un estado grave, ya que
de sus 55 ros, solo 5 no estn contaminados y en cuanto a aguas subterrneas, el estudio
realizado por Powell et al. (2003) en el Reino Unido, muestra que la calidad de las aguas
subterrneas depende de la profundidad de los pozos de donde se adquiere esta agua, ya que
existe vulnerabilidad de los mismos por fisuras o ranuras presentes en las profundidades y debido
a la corriente tan lenta que presentan estos cuerpos de agua, no logran limpiarse de manera
natural por lo que la parte ms profunda resulta ser la ms afectada, llegando a esta conclusin al
observarse coliformes fecales. En Espaa, Vendrell et al. (1998) realizaron estudios en aguas
termales, que adems de su uso teraputico, son utilizados para procesos relacionados con los
alimentos; determinando que exista contaminacin en el agua por la presencia de coliformes
totales y fecales, probablemente ocasionada por infiltraciones de las aguas de desecho de los
habitantes que estn a los alrededores, mezclndose con el agua de las fuentes, as tambin,
aislaron especies como Sthaphyloccocus aureus, Enteroccocus y Pseudomona aureginosa, que de
acuerdo a la ley en ese pas, el agua de consumo no debe de contener ninguno de los
microorganismos antes mencionados. En cuanto a Asia, los ros de la India estn totalmente
contaminados al igual que el ro Amarillo y las aguas subterrneas de China. En Australia la
sobreexplotacin de los ros y de las reservas de agua subterrnea estn concentrando grandes
cantidades de sal en la superficie, frica, a pesar de poseer 2 enormes acuferos esta en estado
crtico, todos sus ros y lagos estn contaminados por la sobreexplotacin humana.
En el continente americano la situacin es similar, millones de personas dependen del agua
subterrnea. Estudios realizados en acuferos de Canad, mostraron que existe susceptibilidad de
estos cuerpos de agua debido al tipo de tierra y rocas que los conforman, ya que dependiendo de
estas, ser la facilidad con la que logre penetrar algn contaminante al agua (Conboy y Goss,
2000), lo cual es preocupante, ya que ms de un cuarto de canadienses se abastecen de agua
subterrnea para uso domstico y en algunas regiones, el agua se usa con mayor rapidez que con
la que se recargan los acuferos. E.U.A. tiene el 40% de sus ros y lagos contaminados y en
diversas partes del pas el agua subterrnea es la nica fuente disponible de agua potable, como es
el caso de Nuevo Mxico, donde sus habitantes dependen nicamente de agua subterrnea para
todas sus necesidades (McQuillan et al., 2000). En Amrica central y del sur abundan ros y
acuferos, sin embargo, los proyectos hdricos se encuentran en manos de inversionistas que no
cubren el total de los acuferos existentes (Bruzzone, 2004). Existen estudios, como el realizado
por Valiente y Mora (2002) en Costa rica basado en un brote de enfermedades diarreicas que
afectaron a una parte del pas, en el cual, se evalu el papel que tuvo el agua como va de
transmisin de los potenciales agentes causantes, los resultados mostraron que parte de la
responsabilidad del brote haba sido el agua de consumo. En Uruguay, Perdomo et al. (2001)
realizaron anlisis para determinar la calidad de las aguas subterrneas, esto debido a la cercana
de los pozos a las fosas spticas de la zona y el mayor consumo de agua de los mismos,
mostrando as, el grado de contaminacin en el que se encuentra el cuerpo de agua al hallar
coliformes fecales y nitritos.
Mxico tambin enfrenta diversos problemas de abastecimiento de este recurso debido a que las
soluciones para el tratamiento de los residuos slidos y lquidos no son las adecuadas (Rivera et
al., 2006), ocasionando la escasez y contaminacin de los cuerpos de agua. A finales del ao
2001, ms del 70% de los cuerpos de agua superficiales y subterrneas del pas presentaban
indicios de contaminacin (Carabias y Landa, 2005). Existen alrededor de 653 cuerpos de agua
subterrnea o acuferos, de los cuales 104 estn sometidos a sobreexplotacin (INEGI, 2008), sin
embargo, el mayor problema de contaminacin que presenta Mxico es la bacteriolgica, ya que
va asociado a la falta de tratamiento de las aguas residuales. Ejemplo de ello es la Pennsula de
Yucatn, la que hasta hace algunos aos, ms del 60% de las muertes de nios menores a cinco
aos, era causada por patgenos transportados por el agua subterrnea. En un estudio realizado
por Pacheco et al. (2000) a un acufero krstico de Yucatn, que funciona como nica fuente de
abastecimiento de agua y receptor de las aguas de desecho, se determino la presencia de
coliformes totales y fecales as como de diferentes gneros bacterianos pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae, entre los que destacan Klebsiella, Enterobacter, Salmonella, Shigella,
Serratia y Escherichia, presentndose con mayor frecuencia los gneros Escherichia, Serratia y
Enterobacter, los cuales son responsables de algunos cuadros clnicos de gastroenteritis. Debido
al uso y consumo de esta agua sin ningn tratamiento los habitantes han presentado problemas de
salud.
En Chiapas, a pesar de la cantidad de recursos hidrolgicos con los que cuenta el estado, se sufre
de la disponibilidad de agua de ptima calidad; en cuanto a enfermedades infecciosas y
parasitarias, es uno de los estados con mayor incidencia en el pas, causando mortalidad y estando
asociadas algunas al consumo de agua (Snchez et al., 2000). Por otra parte, anlisis realizados
por Isaac et al. (1994) en la ciudad de Campeche, se enfocaron en conocer la calidad de las
fuentes de abastecimiento de agua, obteniendo que ms del 50% de los suministros de agua de la
ciudad de Campeche, presentan niveles de organismos coliformes no permisibles en aguas para
consumo humano, demostrando la deficiente calidad de los suministros y su entorno, poniendo en
riesgo la salud de la poblacin.
De manera similar, Mazari et al. (1997) realizaron estudios en la ciudad de Mxico enfocados a
determinar la calidad del agua de consumo en 5 pozos que se encuentran en la zona metropolitana
de la ciudad, mostrando contaminacin por la presencia de coliformes fecales y totales en la
mayora de los pozos.
En la parte norte del pas, tambin se han efectuado estudios para observar la calidad del agua de
consumo, por ejemplo, en el estado de Sonora, Sols et al. (2005) realizaron una evaluacin de la
calidad del agua subterrnea en los pozos de abastecimiento de agua de consumo en dos pocas
del ao en diferentes poblados, detectando coliformes fecales y totales en concentraciones no
aptas para su consumo de acuerdo a la NOM-127-SSA1-1994.
En Sinaloa, especficamente Culiacn y Navolato, Soto et al. (2006) determinaron la presencia
de coliformes totales y fecales, logrando aislar tambin patgenos oportunistas como
Pseudomona aeruginosa y Aeromona que tienden a pasar desapercibidos debido a que su
presencia no se detecta por los mtodos comnmente usados para la determinacin de la calidad
del agua, por lo que el agua no es apta para su consumo.
El estado de Veracruz se caracteriza por disponer de una gran cantidad de recursos hdricos, en
comparacin con otras entidades del pas. La precipitacin media anual representa casi el doble
de la media nacional y por sus cauces fluye un tercio del escurrimiento total del pas. En cuanto a
los mantos acuferos, Veracruz tambin dispone, aunque no en la misma forma ni en toda su
extensin, de abundantes recursos subterrneos, en condiciones ptimas para su
aprovechamiento, aun cuando algunos acuferos costeros presentan intrusin salina.
La abundancia de recursos hdricos en el estado ha propiciado la dispersin de la poblacin, ya
que prcticamente en cualquier zona en la que se establece una comunidad, tiene en su entorno
una fuente que le proporciona el volumen requerido para cubrir sus necesidades mnimas; sin
embargo, en gran medida esta disponibilidad es relativa, ya que la mayora de las veces, las
fuentes responden a periodos estacionales, lo que reduce sus gastos considerablemente durante el
estiaje. Aunado al crecimiento de las propias comunidades y junto con la modificacin de sus
patrones de aprovechamiento, incrementaron el volumen requerido. Por otra parte, en algunos
casos los procesos contaminantes en zonas aguas arriba de las comunidades, han afectado la
calidad del agua que tradicionalmente utilizaban.
Los estudios existentes en materia de calidad del agua de los principales ros del estado, revelan
que en los 14 ros ms importantes se registran niveles importantes de contaminacin, en cuanto a
los acuferos, se realizan mediciones del nivel del agua subterrnea con cierta periodicidad, sin
embargo, la actualizacin de los estudios de stas no se realiza con frecuencia, al igual que los
censos de aprovechamiento (CSVA, 2005).
El municipio de Banderilla posee una gran diversidad de manantiales que proveen de agua en
tiempo de escasez o falta total del servicio de agua potable para consumo humano y los diversos
usos para los que es destinada, por ello es indispensable mantenerlos en buenas condiciones
(Landa, 2006). Estudios previos realizados a los manantiales mostraron concentraciones mnimas
o nulas de coliformes totales y fecales, pero no as de bacterias patgenas, las cuales representan
un serio riesgo para la salud pblica y es prioritario eliminarlas del agua de consumo humano,
debido a que su ingestin podra traer consecuencias para la salud de la poblacin .
1.4.- Microorganismos patgenos: indicadores de contaminacin.
Los microorganismos en general, son encontrados en agua, suelo y aire. La cantidad de ellos va a
depender de ciertos factores, como lo son la temperatura, la humedad y los nutrientes (Marchand,
2002).
Determinar el tipo de microorganismos presentes en el agua y su concentracin, proporciona
herramientas indispensables para conocer la calidad de la misma y para la toma de decisiones en
cuanto su conservacin y uso, evitando as el riesgo de contaminacin de las personas y el
ambiente (Arcos et al., 2005). La gran variedad de microorganismos patgenos que pueden
encontrarse en una muestra de agua, as como la complejidad de la mayor parte de las tcnicas de
enriquecimiento para el aislamiento e identificacin, hacen inviable el control rutinario de todos
estos microorganismos (Soto et al., 2006), por lo que la presencia de organismos coliformes es
determinante como grupo indicador de contaminacin fecal en el agua, lo que se fundamenta en
el hecho de encontrarse presentes en el intestino y en las heces de los seres humanos y en los
animales de sangre caliente, en mayor nmero que las bacterias patgenas (Isaac et al., 1994).
De acuerdo a la Norma Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994, los organismos coliformes son
aquellos capaces de crecer aerbicamente a 35 1C a 37 1C en un medio de cultivo lquido
lactosado con produccin de cido y gas dentro de un perodo de 48 h, mientras que los
coliformes fecales (termotolerantes) son organismos que tienen las mismas propiedades
fermentativas como los ya mencionados, pero crecen a 44 0.5C.
La presencia de indicadores de contaminacin usualmente va acompaada de patgenos, como
las bacterias (Schaffer y Parriaux, 2002). Las bacterias patgenas se definen como aquellas que
tienen la capacidad para producir dao a la salud del husped y de la resistencia o susceptibilidad
del mismo (Brock, 1978).
Las bacterias patgenas de transmisin hdrica provienen de seres humanos y de animales de
sangre caliente (animales domsticos, ganado y animales silvestres), estos microorganismos,
llegan a los cursos de agua a travs de descargas de aguas residuales, drenaje de lluvias, etc. Sin
embargo, no todas las bacterias patgenas que se transmiten por el agua tienen el mismo impacto
en la salud, ya que la presencia de algunas representa un serio riesgo y su eliminacin del agua
de consumo humano es de alta prioridad y otras se presentan en forma natural en las aguas y
normalmente no son patgenas, pero pueden afectar a personas con un sistema inmune dbil,
ancianos y nios, por lo que a estas bacterias se les denomina bacterias patgenas oportunistas
(Aurazo, 2004).
1.5.- Bacterias de importancia clnica en el agua de consumo
Estudios realizados, evidencian la importancia de bacterias de inters clnico, destacando las
pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, como Escherichia coli (Thorn y Coxon, 1992 y
Close y Dann, 2005), Shigella spp. y Salmonella spp. (Bitton et al., 1984 y Pac Sa et al., 1998)
as como Vibrio spp. perteneciente a la familia Vibrionaceae (Garca et al., 2006 y Paris, 2005)
y algunas del grupo de las no fermentadoras, como es el caso de Pseudomona spp. (Vendrell et
al., 1998, Soto et al., 2006 y Marchand, 2002).
Con la finalidad de tener un conocimiento ms detallado sobre estos gneros, mencionaremos a
continuacin algunos aspectos relevantes sobre estos organismos.
Los organismos de la familia Enterobacteriaceae son bacilos gram negativos que con frecuencia
residen en el colon del hombre sin causar dao a la salud y tambin se encuentran en la
naturaleza, pero debido a esta ubicuidad dentro y fuera del cuerpo a menudo causan infecciones
oportunistas en personas debilitadas. Como grupo, la familia Enterobacteriaceae es responsable
de una tercera parte de los aislamientos en las bacteriemias, de dos tercios de los aislados en
gastroenteritis y de tres cuartas partes de los aislamientos en infecciones del tracto urinario.
Escherichia coli es una bacteria que coloniza de manera natural el tracto digestivo de los
animales y del hombre. Produce infeccin en personas sanas, siendo la puerta de entrada ms
comn la va urinaria ocasionando la mayora de las bacteriemias e incluso otros sntomas
clnicos. En los ltimos aos, E. coli ha sido considerada como la causa ms frecuente de la
diarrea del viajero (gastroenteritis bacteriana) asociada con los viajes a pases de riesgo. Las
infecciones entricas causadas por E. coli pueden ser debidas a 5 variedades distintas que actan
por mecanismos diferentes (Almirante, 2002, Aguado y Lumbreras, 1998).
Las especies del gnero Shigella son bacilos gram negativos inmviles y no fermentan lactosa;
causantes de la shigelosis, la cual es la diarrea bacteriana conocida como disentera bacilar. Esta
es la gastroenteritis con mayor riesgo de contagio, ya que se ha demostrado que menos de 200
bacterias viables pueden producir enfermedad en adultos sanos. La shigelosis es una infeccin
de distribucin universal, que afecta principalmente a nios de edad inferior a 10 aos. Algo
distintivo de este gnero, es que el hombre es el nico reservorio. La mayora de los casos de
shigelosis se producen por transmisin de persona a persona a travs de la va fecal-oral. Pueden
observarse brotes epidmicos si se produce contaminacin de alimentos o agua con heces de
enfermos, teniendo en cuenta que estas bacterias pueden sobrevivir durante meses (Almirante,
2002).
El gnero Salmonella pertenece a la familia de las enterobacterias al igual que el gnero Shigella,
pero a diferencia de este ultimo, los reservorios de Salmonella son principalmente los animales y
en menor medida, el ser humano (Pac Sa et al., 1998). Es una bacteria no muy resistente ante las
condiciones adversas del ambiente (pH, temperatura, luz, etc.), sin embargo, le resulta fcil
adaptarse a los animales y seres humanos colonizando as el intestino, iniciando la infeccin con
una serie de sntomas indicativos. Tanto las personas enfermas, como los animales y personas no
enfermas pero que tienen salmonela en su intestino son sus portadoras por un periodo que puede
abarcar desde unos pocos meses hasta aos. Es decir, la materia fecal de individuos enfermos, e
incluso de los portadores, contiene una elevada concentracin de este patgeno (Rodrguez,
2006).
Dentro de la familia Vibrionaceae se encuentra el gnero Vibrio, el cual se encuentra constituido
por bacilos gram negativo, algunos mviles y unos cuantos inmviles, tolerantes a la sal y
anaerobios facultativos. Es el principal agente patgeno conocido que se transmite por el agua,
basta recordar la pandemia ms reciente que se esparci por todos los pases latinoamericanos
ocasionada por esta bacteria en su entrada por Per en 1991, con ms de 1.3 millones de casos y
12 000 muertes (Valiente y Mora, 2002). Las especies que se asocian a diarrea son el Vibrio
parahaemolyticus, V. cholerae, V. mimicus, V. hollisae, V. fluviales y V. frunc. Por su parte, el V.
vulnificus causa septicemia e infeccin de heridas en pacientes inmunodeprimidos (Paris, 2005).
Tambin existen bacterias consideradas patgenas oportunistas, por ejemplo el gnero
Pseudomona, el cual se presenta de forma natural en las aguas y el suelo. El gnero es
perteneciente a la familia de las Pseudomonadaceae y se encuentra formado por bacilos gram
negativos (Soto et al., 2006), presentan flagelos para su locomocin que pueden producir un
pigmento fluorescente, son oxidasa positivo, utilizan la glucosa oxidativamente y no forman gas.
Pueden ocasionar enfermedades a individuos cuya salud es precaria o inmunodeprimidos, as
como ancianos, nios y pacientes que estn recibiendo terapias que disminuyen las defensas.
Estas bacterias pueden producir una variedad de infecciones que ingresan por la piel, las
membranas mucosas de los ojos, odos y la nariz, por va oral e inhalacin y tienen resistencia
entre leve y moderada al cloro (Aurazo., 2004). Algunas de las especies ms importantes son: P.
aeruginosa, P. fluorescens, P. putida, P. maltophila y P stutzeri (Arcos et al., 2005, Marchand,
2002).
Lo antes mencionado, permite tener un panorama amplio de la importancia que resguarda el
cuidado del medio ambiente y que asegure la no contaminacin de las fuentes de abastecimiento
del agua, ya que al verse alterada la calidad de la misma, el impacto que suele tener en la salud de
las poblaciones que las consumen puede verse afectada de manera considerable. Por ello, con el
fin de evitar algn dao posterior a la poblacin, es importante la determinacin de cepas
bacterianas patgenas presentes en los principales manantiales del municipio de Banderilla, ya
que una nica exposicin a un agente patgeno puede bastar para provocar una enfermedad.
ll.- OBJETIVOS:
General:
Caracterizacin de cepas bacterianas patgenas presentes en los manantiales del
municipio de Banderilla, Veracruz.
Particulares:
Determinar conforme al nmero de microorganismos presentes, la calidad bacteriolgica
del agua para consumo humano.
Obtener y aislar cepas bacterianas presentes en las aguas de los manantiales.
Realizar pruebas qumicas y bioqumicas a las cepas bacterianas aisladas.
Determinar el gnero de las cepas aisladas
lll.- MATERIALES Y MTODOS
3.1.- rea de estudio
El municipio de Banderilla se localiza en la zona centro del Estado de Veracruz, en las
coordenadas 19 35 latitud norte y 95 56 longitud oeste, a una altura de 1600 metros sobre el
nivel del mar. Limita al norte y noreste con Jilotepec, al este y sur con Xalapa, al suroeste y oeste
con Rafael Lucio. Tiene una superficie de 22.21 km2, cifra que representa un 0.03 % del total del
Estado (Fig 1).
Fig.1.- Mapa de Veracruz donde se observa la ubicacin del municipio de Banderilla (INEGI,
2008).
Orografa
El Municipio se encuentra ubicado en la zona central del Estado en el eje neovolcnico, en las
estribaciones ltimas del Cofre de Perote, por lo que su topografa es irregular, pero sin
accidentes de importancia. El cerro de mayor consideracin es el de La Martinica.
Hidrografa
Al municipio lo riegan pequeos ros tributarios del ro Sedeo, que a su vez es tributario del ro
Actopan.
Clima
Su clima es fro-hmedo con una temperatura promedio de 18 C; su precipitacin pluvial media
anual es de 1 500 mm.
Principales Ecosistemas
Los ecosistemas que coexisten en el municipio son el de bosque mesfilo, un ejemplo es el rea
protegida la Martinca, en el cual se puede observar flora y fauna nativa del lugar, en donde las
trepadoras leosas son abundantes y las especies caractersticas del estrato arbreo son: Carpinus
caroliniana (pipinque), Clethra mexicana (marangola), Liquidambar styraciflua (liquidmbar),
Calocedrus decurrens (cedro blanco), Manilkara zapota (zapotillo) y Ulmus minor (olmo), as
como helechos arborescentes del gnero Cyathea en peligro de extincin. Esta rea es la nica del
pas en la que se pueden observar ms de 140 especies de helechos. La fauna esta compuesta por
poblaciones de Meles meles (tejon), Didelphis virginiana (Tlacuache), Mephitis mephitis
(zorrillo), Oryctolagus cuniculus (conejo), Dasypus novemcinctus (armadillo) y Eutamias
sibiricus (ardilla).
Recursos Naturales
Su riqueza esta representada por minerales como el gilsonita, cales y bauxita.
Caractersticas y Uso del Suelo
Su suelo es de tipo coluviosol e in-situ derivado de roca volcnica y con poca suceptibilidad a la
erosin. Sus principales actividades son la agricultura y la ganadera (INDM, 2005).
3.2.- Determinacin de los manantiales muestreados:
Se efectu un reconocimiento preliminar en la zona con la finalidad de tener la ubicacin
exacta de cada manantial (Fig. 2).
De los 22 manantiales existentes en el municipio, se eligieron 7, ya que se observ que
eran representativos de la ciudad por el fcil acceso a sus tomas y por lo tanto, ms usados
(Tabla 1) (Cruz et al., 2006).
Fig. 2.- Localizacin de los manantiales en el municipio de Banderilla, Veracruz (INEGI, 2008).
lamos
1 Poza Verde
Ocotita
La mistela
Palenquillo
La fragua
El boquern 2
Tabla 1. Ubicacin de los manantiales en el municipio de Banderilla.
Punto Nombre del manantial Ubicacin
1M Palenquillo Privada Fidel Cruz
2M Ocotita Prolongacin 20 de Mayo
3M lamos 1 Prol. Palenque Esq. Priv. Vicente Guerrero
4M La fragua Benito Jurez No. 79
5M La mistela Calle Agua Azul
6M Poza verde Calle Palenque
7M Boquern 2 Km. 1 Carretera a Jilotepec.
3.3.- Material biolgico:
Se obtuvieron 34 muestras de agua en total, tomadas de los principales manantiales de Banderilla,
que comprenden los meses de Enero, Marzo, Abril, Mayo y Junio.
Las muestras de agua de los manantiales se tomaron dejando fluir el agua de 2- 5 minutos de
manera que se limpiara la lnea de conduccin, un recipiente estril (vaso copropack) se coloc
debajo de la llave hasta que se llenara parcialmente, de tal manera que se pudiera mezclar
(Mazari et al., 1997). Se evit escurrir o salpicar el recipiente. Las muestras fueron registradas
para su identificacin con los siguientes datos: Nombre del manantial, fecha y hora del muestreo
(Cruz et al., 2006). Tambin se registraron los valores de 3 parmetros fisicoqumicos in situ con
el Check mate 90 : pH, temperatura y oxigeno disuelto.
Las muestras fueron transportadas en un recipiente limpio donde se mantuvieron a una
temperatura de 4C aproximadamente (Sols et al., 2005) hasta llegar al laboratorio del Instituto
de Investigaciones Biolgicas en el rea de Microbiologa para su posterior anlisis.
3.4.- Determinacin de Coliformes totales y Fecales
Para realizar la determinacin se procedi de acuerdo a la NOM- 112- SSA1- 1994. [Bienes y
servicios. Determinacin de bacterias coliformes. Tcnica del Nmero Ms Probable (NMP)].
El mtodo se basa en que las bacterias coliformes, fermentan la lactosa incubadas a 35 1C
durante 24 a 48 horas, resultando una produccin de cidos y gas el cual se manifiesta en las
campanas de fermentacin. Para ello se observan dos pruebas, la presuntiva y la confirmativa, las
cuales se realizan con caldos enriquecidos en donde se observara el crecimiento de las bacterias
coliformes si estn presentes.
Pruebas para la determinacin de coliformes totales
Prueba presuntiva.- Esta se realiz con caldo lactosado y se distribuyeron en tubos de 16 x 160
mm. Se colocaron dentro de los mismos, unos tubos que sirvieron como indicadores para
observar la formacin de gas, posteriormente se esterilizaron en autoclave a 121C durante 15
minutos.
Inoculacin.- Se agit la muestra de tal manera que se homogenizara y se transfirieron volmenes
de 1ml a la serie de tres tubos con su duplicado, 0.1 ml y 0.01 ml de muestra a otras series de
tubos que contenan caldo lactosado tambin con su replica. Se incubaron los tubos a 35 C y se
observaron a las 24 2 h para ver la formacin de gas, aquellos que no la presentaron se
incubaron por otras 24 2 h.
Prueba confirmativa.- De cada tubo de la prueba presuntiva que mostr formacin de gas, se
agit y se tomaron 3 asadas para inocular en tubos que contenan caldo lactosa bilis verde
brillante , tambin conteniendo tubos como indicadores para la formacin de gas. Se incubaron a
35 por 24 2 horas y posteriormente se observ la presencia de gas o turbidez y los que no
presentaron, se incubaron por 24 2 horas ms.
Para determinar coliformes fecales (termotolerantes)
Para confirmar la presencia de organismos coliformes termotolerantes, se incubaron otros tubos
de caldo lactosa bilis verde brillante, pero a 44C durante 24 hr. Se observ si haba produccin
de gas.
3.5.- Obtencin, aislamiento y purificacin de bacterias
El mtodo utilizado para la obtencin, aislamiento y purificacin de las cepas encontradas, fue
el sealado en el manual de Bergeys (Hendricks y Holt, 1994) y el de Cowan (Cowan y Steel,
1993).
Se agreg 1 ml. aproximadamente de muestra a cajas petri que contenan agar de soya y
tripticasena (TSA) y con un asa estril se esparci por toda la caja, y se incubaron a 30C por 24
hr. Una vez crecidas las colonias, se realiz la siembra individual en agar EMB aislando las
colonias que presentaran color y formas diferentes, posteriormente se metieron a incubacin. Se
realizaron las siembras necesarias para lograr la purificacin de las bacterias.
Una vez purificadas las colonias bacterianas, se sembraron por estra en tubos inclinados con agar
TSA para la conservacin de las colonias (cepario) y su posterior uso.
3.6.- Determinacin de gneros bacterianos.
A las cepas bacterianas purificadas, se les realizaron 6 pruebas qumicas y bioqumicas bsicas
de acuerdo al manual de Bergeys (Hendricks y Holt, 1994), las cuales nos indicaron a que grupo
podran pertenecer. Las pruebas fueron:
Tincin gram: Con la cual se observ a que grupo gram pertenecen, gram positivas o negativas.
La prueba tambin mostr la forma que presentaban las bacterias, ya sean bacilos o cocos.
Movilidad.- Se realiz en el medio MIO, en el cual se observa la movilidad por la turbidez o
forma de abanico que presenta la puncin realizada al medio con la cepa en estudio.
Catalasa.- En un portaobjetos se coloc la cepa y se agreg 1 gota de una solucin de perxido de
hidrgeno (H202) al 3%. La presencia de burbujas (efervescencia) confirma la positividad de la
reaccin.
Oxidasa.- En papel filtro se coloc una porcin de cultivo puro y se le agreg 1 gota del reactivo
de oxidasa (Kovacs). La prueba se tom como positiva al aparecer un color negro o morado, si no
se presentaba el color, la prueba era negativa.
Produccin de acidez.- Se realiz con diferentes tipos de azcares en diferentes tubos con agar
inclinado. El cambio de color del medio a amarillo indica un resultado positivo a esa prueba.
Oxidacin - Fermentacin (Prueba de Hugh- Leifson).- Esta prueba ayuda a la determinacin de
microorganismos que degradan los azcares por la va fermentativa u oxidativa. Se sembraron 2
tubos con la cepa a identificar, cada uno con su replica, uno se cubra con aceite mineral,
mientras el otro no. La bacteria que creci en el tubo cubierto con aceite mineral mostr que el
carbohidrato era degradado por la va fermentativa, sin embargo, el microorganismo que creci
en el tubo que no se encontraba cubierto con aceite mineral mostr que degradaba el carbohidrato
por la va oxidativa.
De acuerdo al libro de pruebas bioqumicas de MacFaddin et al. (2003) y el libro de diagnstico
microbiolgico clnico de Koneman et al. (1998), se realizaron las pruebas diferenciales para la
determinacin de los gneros de la familia Enterobacteriaceae y posteriormente se realizaron
pruebas diferenciales para los gneros Vibrio y Pseudomona.
3.7.- Pruebas diferenciales para la familia Enterobacteriaceae.
Las pruebas diferenciales permitieron determinar diferentes gneros de la familia. Uno de los
medios utilizados para determinar la presencia de enterobacterias, fue el agar TSI, el cual es un
medio que permite diferenciar gneros por medio de las reacciones que se observan en el. Este
medio se siembra por puncin y estra superficial. Las cepas sembradas que produjeron un
cambio de color del medio a amarillo, ya sea en todo el tubo, en el fondo del tubo o en la
superficie inclinada se tom como reacciones hechas por posibles enterobacterias, algunas cepas
produjeron gas y tambin cido sulfhdrico (H2S). A las bacterias que se sospechaban eran
enterobacterias se les realiz pruebas diferenciales para determinar el gnero de las mismas. Las
pruebas diferenciales realizadas fueron:
Indol.- Algunos gneros bacterianos tienen triptfano, el cual puede ser hidrolizado por la enzima
triptofanasa si esta presente y producir indol. Esta prueba se basa en la reaccin producida por el
agregado del reactivo de Kovacs a un cultivo puro de 24 hrs. en caldo de triptona y la formacin
de un anillo rojo o fucsia como resultado del mismo. NOTA: Para esta prueba tambin se puede
utilizar el medio MIO y observar esta reaccin despus de observar la descarboxilacin de la
Ornitina y la movilidad.
Rojo de Metilo.- Una de las caractersticas taxonmicas que se utilizan para identificar los
diferentes gneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporcin de productos de
fermentacin que se originan por la fermentacin de la glucosa. El rojo de metilo es un indicador
de pH con un intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la
produccin de cidos por la va de fermentacin cido mixta. Las bacterias que dieron positivo a
esta prueba tomaron un color rojo, aquellas que conservaron un color anaranjado o amarillento,
se tomaron como negativas.
Voges- Proskauer.- El acetil-metil-carbinol (o acetona) es un producto intermediario en la
produccin de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada a
diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia. Para realizar esta
prueba, se requiri de un cultivo puro de 24 hr, se le agregaron los reactivos A y B, dejando
reposar por 15 minutos a 4 hrs, se tom como positiva la prueba cuando se present un color rojo
en el medio de cultivo, los tubos que no presentaron este color se tomaron como negativos.
Utilizacin del citrato.- Algunas enterobacterias pueden utilizar el citrato como nica fuente de
carbono. Por estriado, se sembr un cultivo fresco en cajas de agar citrato de Simmons, el
crecimiento o cambio de color en el medio indic que el microorganismo utilizaba el citrato y por
lo tanto daba positivo a esta prueba.
Ureasa.- La ureasa es una enzima que poseen muchas especies de microorganismos que pueden
hidrolizar urea con liberacin de amonaco y dixido de carbono. Se sembr por estriado
superficial una pequea porcin de la cepa a identificar en agar urea de Christensen y se incub.
El cambio de color del medio a un rosado indica la presencia de la enzima. Algunas
enterobacterias tienen la facilidad de hidrolizar la urea en 24 hr. y otras requieren de mayor
tiempo hacindolo hasta 7 das despus.
Descarboxilacin de un aminocido.- La descarboxilacin de aminocidos es llevada a cabo por
descarboxilasas y se forman aminas y CO2. Cada descarboxilasa es especfica para un
aminocido y la reaccin es completa e irreversible. Para determinar la descarboxilacin de la
ornitina se utiliz el medio MIO y se observ al cambiar el color del medio a morado o lila, la
prueba era negativa si el medio mantena su color normal o cambiaba a un color amarillo, a causa
de la acidez. Para la descarboxilacin de lisina se utiliz el caldo de Meller, un resultado
positivo de la prueba fue el cambio de color a lila o prpura, fue negativo al presentarse un color
amarillo en el medio.
Reduccin de nitratos.- Esta prueba se realiz para observar la capacidad de las bacterias para
reducir los nitratos a nitritos. Se sembr en el caldo nitratado una porcin de cultivo puro y se
incub por 24 hr. Para determinar si el nitrato fue reducido a nitrito, se agreg a los cultivo 2
gotas de los reactivos A y B de Griess. La aparicin de un color rojo indic la reduccin de
nitratos a nitritos, al caldo que no present un cambio de color se le agreg una pequea cantidad
de polvo de zinc puro, la reaccin fue negativa completamente al aparecer un color rojo o
anaranjado sealando que el nitrato fue reducido, de no presentarse el cambio de color despus
del agregado de zinc, signific que el nitrato fue reducido a nitrgeno gaseoso (desnitrificacin).
3.8.- Pruebas diferenciales para el gnero Vibrio spp.
A las cepas bacterianas presuntivamente del gnero Vibrio spp. se les realizaron las siguientes
pruebas comprobatorias:
Crecimiento en agua peptonada.- Aquellas cepas que se tomaron como posibles vibrios se
sembraron en agua peptonada con diferentes concentraciones de NaCl (0%, 7%, 11% y 13%), ya
que el gnero Vibrio no crece en concentraciones de NaCl arriba del 6%.
Crecimiento en carbohidratos.- El gnero Vibrio no crece en un medio que contiene solo el
carbohidrato lactosa, por lo que se realiz la prueba de carbohidratos con lactosa, sacarosa y
manitol, solo para confirmar lo ya observado en prueba anteriores.
Algunas cepas, debido a sus reacciones en las pruebas bsicas, fueron sembradas en agar TSI,
estas no produjeron gas, un color amarillo por el descenso de pH o produccin de cido
sulfhdrico, por lo que fueron catalogadas como no fermentadoras y se les realizaron pruebas
diferenciales para determinar la presencia de Pseudomona spp.
3.9.- Pruebas diferenciales para la determinacin de Pseudomona spp.
Crecimiento en agar PIA.- Este medio no permite el crecimiento de otras bacterias que no sean
Pseudomonas. Una caracterstica de este gnero es el olor que pueden desprender, como a frutas
o maz (nixtamal).
Fluorescencia.- Algunas cepas de Pseudomonas, pueden presentar fluorescencia ya sea por el
contenido de piocianna o fluorescena. El medio TECH permite observar esta caracterstica por
medio de luz ultravioleta.
Tambin se les realizaron pruebas como reduccin de nitratos a nitritos y desnitrificacin, indol,
utilizacin de citrato, ureasa y descarboxilacin de aminocidos ya descritos anteriormente.
lV.- RESULTADOS
De los cuatro muestreos llevados a cabo, se obtuvieron34 muestras en total de las cuales 28
resultaron positivas para coliformes totales y 20 para coliformes fecales. A continuacin, se
muestran los resultados obtenidos en cada manantial:
4.1.-Palenquillo
Determinacin de coliformes totales y fecales.
Los coliformes totales se determinaron en los meses de Marzo, Abril, Mayo y Junio. Solo en los
meses de Marzo y Junio se observ la presencia de coliformes fecales (tabla 2).
Tabla 2.- Presencia de coliformes totales y fecales en el manantial Palenquillo de Banderilla, Veracruz.
Organismos Enero Marzo Abril Mayo Junio
Coliformes totales
(NMP/ 100 ml)
0 7 4 4 15
Coliformes fecales
(NMP/ 100 ml)
0 3 0 0 7
El aislamiento de las cepas bacterianas por medio de agares selectivos ayudo a una mejor
diferenciacin por la forma y el color que tomaron las colonias y a lograr una mejor purificacin
(fig. 3). De acuerdo a las pruebas que se les realiz a las cepas, algunas daban positivo para el
gnero Salmonella, por lo que se sembr en agar Sulfito y bismuto, en donde las colonias de este
gnero toman un color y forma caracterstico (fig.4).
Fig. 4.- Placa de agar Sulfito y Bismuto sembrada con una cepa del gnero Salmonella.
Fig. 3.- Purificacin de
cepas bacterianas en agar
TSA.
Determinacin de gneros bacterianos
En este manantial se obtuvieron cepas bacterianas y en los meses de Marzo, Abril, Mayo y junio
y ninguna en el mes de Enero. Se realizaron las pruebas correspondientes y se determinaron los
gneros que se mencionan en la tabla 3.
Tabla 3.- Gneros bacterianos presentes en el manantial Palenquillo, Banderilla, Veracruz.
Gn
eros
bacte
rian
os
Enero Marzo Abril Mayo Junio
No se
obtuvieron
cepas
Escherichia
spp.
Enterobacter
spp.
Enterobacter
spp.
Enterobacter spp.
Escherichia
coli
Citrobacter spp. Proteus spp.
Eschericha coli
Aeromona spp. Citrobacter spp.
Salmonella spp.
Pseudomona spp.
4.2.- Ocotita
Determinacin de coliformes totales y fecales
En este manantial se observ la presencia de coliformes totales en todos los meses y
coliformes fecales solo en los meses de Abril, Mayo y Junio, sin embargo, las
cantidades son mnimas (Tabla 4).
Tabla 4.- Presencia de coliformes totales y fecales en el manantial Ocotita de Banderilla,
Veracruz.
Organismos Enero Marzo Abril Mayo Junio
Coliformes totales
(NMP/ 100 ml)
3 7 11 4 11
Coliformes fecales
(NMP/ 100 ml)
0 0 4 3 7
Para la determinacin de una cepa de Escherichia coli se realizaron pocas pruebas,
entre las que destacan la positividad a la prueba de rojo de metilo (fig. 5) y la no
utilizacin del citrato como nica fuente de carbono (fig. 6). En medios como el agar de
Eosina y azul de Metileno (EMB), las colonias tomas un color verde metlico
observando la caja a contraluz (fig. 7), sin embargo, existen pruebas comunes que
comparte con los gneros pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, como la prueba
de oxidasa (fig. 8) y la reduccin de nitratos a nitritos (fig. 9)
Fig.5.- Prueba de rojo
de metilo positivo
Fig. 6.- Placa de agar
citrato de Simmons donde
no se observa crecimiento
bacteriano.
Determinacin de bacterias patgenas
De este manantial se obtuvieron cepas en prcticamente todos los meses. En el mes de
Abril tambin se observ la presencia de hongos. Los gneros encontrados en el
manantial se muestran en la tabla 5. El gnero Pseudomona se observa en la mayora de
los muestreos excepto el mes de Enero.
Tabla 5.- Gneros bacterianos presentes en el manantial Ocotita de Banderilla, Veracruz.
Gn
eros
bacte
rian
os
Enero Marzo Abril Mayo Junio
Enterobacter
spp.
Enterobacter
spp.
Salmonella spp. Proteus spp. Enterobacter
spp.
Pseudomona
spp.
Pseudomona
spp.
Pseudomona
spp.
Pseudomona
spp.
Escherichia spp.
Escherichia coli Providencia
spp.
Eschericha coli
Citrobacter spp. Citrobacter spp.
Providencia spp.
Aeromona spp.
Serratia spp.
Aeromona spp.
+
)
-
)
Fig. 7.- Escherichia coli en un
placa de agar EMB.
Fig. 8.- Prueba de la oxidasa
positiva.
Fig.9.- Prueba para la
reduccin de nitratos (derecha negativa, izquierda positiva).
4.3.- lamos 1
Determinacin de coliformes totales y fecales
Este manantial es uno de los ms usados por los habitantes y se encuentra en una zona
de fcil acceso, sin embargo, en todos los meses se observa la presencia de coliformes
totales y en los meses de Marzo, Mayo y Junio se encontraron coliformes fecales,
presentndose en mayor cantidad el ltimo mes (Tabla 6).
Tabla 6.- Presencia de coliformes totales y fecales en el manantial lamos 1 de Banderilla,
Veracruz.
Organismos Enero Marzo Abril Mayo Junio
Coliformes totales
(NMP/ 100 ml)
3 11 7 7 93
Coliformes fecales
(NMP/ 100 ml)
0 4 0 3 23
Una de las primeras pruebas diferenciales que se realiz para la identificacin de las
enterobacterias fue sembrar las cepas en agar de hierro y triple azcar (TSI) debido a los
cambios de color que producen en este medio. La especie Escherichia coli produce un
viraje de color del medio a amarillo y produccin de gas (fig. 10), especies
pertenecientes al gnero Enterobacter pueden solo producir acidez en la parte inferior
del tubo y permanecer alcalina la parte superior (fig. 11), mientras que el grupo de las
no fermentadoras solo hacen que se alcalinice el medio de manera que se observe un
color rojo (fig. 12) o simplemente no hay cambio de color del medio.
Fig. 10.- Tubo
de agar TSI con
produccin de
cidez
Fig. 11.- Tubo de
agar TSI donde
se observa una
reaccin alc- c
Fig. 12.- Tubo de agar
TSI sembrado con una
cepa del gnero
Pseudomona
Determinacin de bacterias patgenas
En todos los meses se observ la presencia de enterobacterias como se muestra en la
tabla 7.
Tabla 7.- Gneros bacterianos presentes en el manantial lamos de Banderilla, Veracruz.
Gn
eros
bacte
rian
os
Enero Marzo Abril Mayo Junio
Escherichia
spp.
Escherichia
coli.
Citrobacter spp. Escherichia coli Eschercichia coli
Enterobacter
spp.
Enterobacter
spp.
Enterobacter spp.
Enterobacter spp.
Escherichia spp. Serratia spp.
Serratia spp.
Aeromona spp. Aeromona spp.
Providencia spp.
Pseudomona spp
Edwarsiella spp..
Vibrio spp.
Salmonella spp
4.4.- La fragua
Determinacin de coliformes totales y fecales
Este manantial es el ms usado por los habitantes del municipio y su aspecto refleja el
cuidado que se le tiene. Fue el nico manantial que no present coliformes totales o
fecales en ningn mes (Tabla 8).
Tabla 8.- Presencia de coliformes totales y fecales en el manantial La fragua de Banderilla,
Veracruz.
Organismos Enero Marzo Abril Mayo Junio
Coliformes totales
(NMP/ 100 ml)
0 0 0 0 0
Coliformes fecales
(NMP/ 100 ml)
0 0 0 0 0
El gnero Pseudomona es uno de los gneros que no suele ser exigente ante las
condiciones ambientales que le rodean por lo que tiene una amplia distribucin. Cuando
se sembr en agar TSI se distingui por darle un color rojo a todo el tubo, caracterstico
de las no fermentadoras (fig. 13), el crecimiento en agar PIA (fig. 14) as como la
movilidad (fig. 15) y la reduccin de nitratos a nitritos y la desnitrificacin (fig. 16),
indicaba que corresponda al gnero Pseudomona, adems de ser capaz de utilizar el
citrato como nica fuente de carbono (fig. 17).
Fig. 13.- Cepa
del gnero
Pseudomona
sembrada en
agar TSI
Fig. 14.- Cepa
bacteriana
sembrada en
agar PIA
Fig. 15.- Medio
MIO donde se
observa la
movilidad del
organismo.
Determinacin de bacterias patgenas
No se aislaron cepas bacterianas en los meses de Enero y Mayo, y solo se obtuvieron
cepas pertenecientes al gnero Pseudomona, las cuales fueron encontradas en los meses
de Marzo, Abril y Junio (Tabla 9).
Tabla 9.- Gnero bacteriano encontrado en el manantial La fragua de Banderilla, Veracruz
Gn
eros
bacte
ria
nos Enero Marzo Abril Mayo Junio
Pseudomona
spp.
Pseudomona
spp.
Pseudomona
spp.
Fig. 16.- Prueba para
observar la reduccin del
nitrato (a la izquierda el
nitrato se redujo a nitrito
y a la derecha hay
desnitrificacin).
Fig. 17.- Placa de agar citrato
de Simmons donde se observa
el cambio de color por el
crecimiento de la bacteria.
4.5.- La mistela
Determinacin de coliformes totales y fecales
Este manantial presenta condiciones deplorables, ya que no esta cubierto y se encuentra
en el suelo sin que algo lo proteja, adems de que una corriente de aguas domsticas
pasa a su lado. Por ello, es evidente la presencia de coliformes totales y fecales en la
mayora de los muestreos, a excepcin del mes de Enero donde no se encontraron
coliformes fecales (Tabla 10).
Tabla 10.- Presencia de coliformes totales y fecales en el manantial La mistela, municipio de
Banderilla, Veracruz.
Organismos Enero Marzo Abril Mayo Junio
Coliformes totales
(NMP/ 100 ml)
7 7 14 15 23
Coliformes fecales
(NMP/ 100 ml)
0 3 4 4 15
Aparte de los gneros bacterianos que se encontraron en los muestreos, se observ la
presencia de hongos, esto en las cajas de agar EMB (fig. 18), el cual sirvi como un
medio selectivo para las enterobacterias al igual que el agar TSI (fig. 19) y poderlas
aislar.
a)
Fig 18.- Placa de agar EMB, donde se observa crecimiento de hongos.
Fig 19.- Tubo de agar TSI en el cual se
observa la presencia de gas causando la
separacin del medio.
Determinacin de bacterias patgenas
En todos los meses se encontraron gneros pertenecientes a la familia de las
enterobacterias y Pseudomona spp. se encontr en los 2 ltimos muestreos. Tambin se
encontr hongo en los meses de Abril y Junio (Tabla 11).
Tabla 11.- Gneros bacterianos encontrados en el manantial La mistela de Banderilla, Veracruz.
Gn
eros
bacte
rian
os
Enero Marzo Abril Mayo Junio Enterobacter
spp.
Enterobacter
spp.
Enterobacter
spp.
Salmonella spp. Enterobacter spp.
Escherichia spp.
Escherichia coli Escherichia
spp.
Escherichia coli
Escherichia coli
Aeromona spp. Aeromona spp.
Aeromona spp.
Providencia spp.
Edwarsiella
spp.
Citrobacter spp. Serratia spp.
Vibrio spp. Pseudomona spp Pseudomona spp.
Proteus spp. Proteus spp.
Vibrio spp.
4.6.- Poza verde
Determinacin de Coliformes totales y fecales.
Los resultados para observar la calidad del agua no varan mucho. Es uno de los
manantiales con ms uso en la ciudad por que es el encargado de proporcionar el agua a
los lavaderos que se encuentran junto a l y siendo tambin fuente de abasto a muchas
personas que la consumen. En el mes de Mayo no hubo agua, por lo que no se pudo
obtener una muestra y en los meses de Marzo, Abril y Junio, se observ la presencia de
hongos (Tabla 12).
Tabla 12.- Presencia de coliformes totales y fecales en el manantial Poza verde de Banderilla,
Veracruz.
Organismos Enero Marzo Abril Mayo Junio
Coliformes totales
(NMP/ 100 ml)
3 7 3 -------- 21
Coliformes fecales
(NMP/ 100 ml)
0 3 3 -------- 7
Existen gneros, como Proteus, que poseen caractersticas relevantes que ayudaron
mucho a su identificacin. Este gnero posee una gran movilidad (fig. 20) adems de ser
uno de los gneros que posee la enzima ureasa (fig. 21) y la degrada con rapidez. Otras
pruebas para su identificacin es la negatividad para la prueba de Voges- Proskauer (fig.
22) y la utilizacin del citrato (fig. 23).
+
-
+
-
Fig. 20.- Tubos de
medio MIO (a la
derecha organismo
mvil, a la izquierda
organismo inmvil)
Fig. 21.- tubos con
agar urea de
Christensen (a la
izquierda tubo negativo y a la
derecha postivo).
Determinacin de gneros bacterianos
Los gneros que ms predominaron en los muestreos de este manantial fueron los
gneros Escherichia spp. y Pseudomona spp. Solo en el mes de Abril se encontr el
gnero Vibrio spp. en el agua de este manantial (Tabla 13).
Tabla 13.- Gneros bacterianos encontrados en el manantial Poza verde de Banderilla, Veracruz.
Gn
eros
bacte
rian
os
Enero Marzo Abril Mayo Junio
Enterobacter
spp.
Enterobacter
spp.
Proteus spp. No hubo
agua en el
manantial.
Enterobacter
spp.
Citrobacter
spp.
Escherichia spp. Escherichia
spp Escherichia
spp.
Escherichia coli
Escherichia
coli
Escherichia
coli
Pseudomona
spp.
Pseudomona
spp. Pseudomona
spp.
Aeromona spp. Aeromona spp.
Providencia
spp. Edwarsiella
spp.
Vibrio spp. Serratia spp.
Salmonella
spp.
- a)
-
+
-
-
Fig. 22.- Prueba de Voges - Proskauer
+
-
-
+
Fig. 23.- Utilizacin del citrato
4.7.- Boquern 2
Determinacin de coliformes fecales y totales
El manantial Boquern 2 present en todos los muestreos coliformes fecales y totales,
en diferentes cantidades (Tabla 14), sin embargo, esto es predecible debido a que se
encuentra a la orilla de la carretera que lleva a Jilotepec, y esta a cielo abierto. Algunas
personas que consuman el agua dejaron de hacerlo por las enfermedades que les
ocasiono, sin embargo, no dejan de utilizarla para otras actividades.
Tabla 14.- Presencia de coliformes totales y fecales en el manantial Boquern 2 de Banderilla,
Veracruz.
Organismos Enero Marzo Abril Mayo Junio
Coliformes totales
(NMP/ 100 ml.)
9 15 28 32 93
Coliformes fecales
(NMP/ 100 ml.)
7 9 14 22 28
Las pruebas realizadas a las cepas que probablemente pertenecan al gnero Vibrio,
fueron basadas en que no fermentan la lactosa (fig.24) y que crecen en concentraciones
no muy elevadas de sal (fig. 25).
-
- - + +
Fig. 24.- Agua peptonada con
sal (a la izquierda concentracin
de 0%, a la derecha del 11%).
Fig. 25.- Tubos de agar inclinado
con lactosa.
Para la determinacin del gnero Salmonella se realizaron las cuatro pruebas bsicas
para los gneros pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, la utilizacin del citrato
(fig. 26), la positividad al rojo de metilo (fig. 27), la negatividad al indol (fig. 28) y la
movilidad (fig. 29). El agar Sulfito y Bismuto sirvi como complemento a los resultados
arrojados por las pruebas, ya que las cepas que de acuerdo a las pruebas pertenecan al
gnero Salmonella, fueron sembradas en este medio, confirmando el resultado y
observando un medio negruzco por la produccin de cido sulfhdrico (fig. 30).
Fig. 26.- Placa de agar
citrato de Simmons.
Fig. 27.- Tubos con
caldo RM-VP
Fig. 28.- Prueba de Indol
negativa
Fig. 29.- Tubo con
medio MIO sembrado
con una bacteria mvil.
Fig. 30.- Placa de agar
Sulfito y Bismuto con
una cepa del gnero Salmonella.
+ - C
Determinacin de gneros bacterianos
Como se mostr en el cuadro pasado, es el manantial que posee mayor cantidad de
bacterias, en cuanto a gneros, se observa una gran diversidad. Los gneros con mayor
incidencia fueron Pseudomona spp., Escherichia spp., Citrobacter spp. y Enterobacter
spp.( Tabla 15).
Tabla 15.- Gneros bacterianos presentes en el manantial El boquern 2 de Banderilla,
Veracruz.
Gn
eros
bacte
rian
os
Enero Marzo Abril Mayo Junio
Enterobacter spp. Enterobacter spp. Enterobacter spp. Enterobacter spp. Enterobacter spp.
Escherichia coli
Escherichia coli
Escherichia coli
.
Escherichia coli
Escherichia coli
Escherichia spp. Providencia spp. Escherichia spp Citrobacter spp
Escherichia spp.
Pseudomona spp. Pseudomona spp.
Pseudomona spp. Pseudomona spp. Pseudomona spp.
Aeromona spp. Aeromona spp. Aeromona spp. Aeromona spp.
Citrobacter spp. Klebsiella spp. Klebsiella spp.
.
Providencia spp.
Providencia spp
Salmonella spp. Salmonella spp.
Vibrio spp.
Vibrio spp.
Meses Enero
Marzo
Abril
Mayo
Junio
Manantiales No se obtuvieron bacterias
1M
2M
3M
4M No se obtuvieron bacterias
No se obtuvieron bacterias
5M
6M No hubo muestra de
agua
7M
G
ner
os
bac
teri
ano
s Enterobacter spp.
Escherichia spp
Escherichia coli.
Citrobacter spp.
Proteus spp.
Aeromona spp.
Salmonella spp.
Pseudomona spp.
Providencia spp.
Serratia spp.
Vibrio spp. Edwarsiella spp.
Klebsiella spp.
Hongo
Tabla 16.- Concentrado de los gneros presentes en los manantiales de Banderilla, Ver.
V.- DISCUSIN
De acuerdo a los estudios realizados a travs de anlisis bacteriolgicos a los
manantiales Palenquillo, Ocotita, lamos 1, La fragua, La mistela, Poza verde y El
boquern 2, del municipio de Banderilla, Veracruz y siguiendo los lineamientos
establecidos por la Norma Oficial Mexicana NOM -127-SSA1-1994, el agua de los
manantiales no cumple con los mismos, por lo que debe considerarse que su calidad en
la mayora de los casos no es apta para consumo humano. Lo anterior es coincidente con
lo reportado por Ramrez (2004) quien llev a cabo anlisis en estos cuerpos de agua y
reporta para los mismos, la presencia de coliformes totales y fecales a niveles mayores a
los permitidos. De igual manera, Landa (2006) seala en su estudio realizado en la
misma zona, la presencia de coliformes totales en todos los manantiales en los
diferentes muestreos y coliformes fecales, como en el caso de La mistela y lamos, a
niveles no aceptables en el agua y por lo mismo, no es apta para consumo humano, lo
cual reafirma los resultados que se reportan a la fecha en nuestros anlisis realizados,
sumndose a ello el reporte de la presencia de bacterias patgenas oportunistas como es
el caso de los gneros Klebsiella spp., Proteus spp., Providencia spp., Enterobacter
spp., Serratia spp., Citrobacter spp., Pseudomona spp y Aeromona spp., no reportados
en ningn trabajo realizado para el mismo, y que pueden ser causantes de daos a la
salud de quienes las consuman, lo que denota la importancia de poder reportar estos
gneros.
Lo anterior guarda coincidencia con trabajos realizados por investigadores en otros
pases, quienes llevaron acabo estudios sobre calidad del agua, como los presentados
por Powell et al. (2003) en acuferos del Reino Unido y Close y Dann (2005) en aguas
subterrneas en zonas de Nueva Zelanda y en nuestro pas por Isaac et al. (1994) en
suministros de agua para consumo humano en Campeche y de igual manera Mazari et
al. (1997) en la zona geohidrolgica del sur de la ciudad de Mxico, los cuales muestran
concentraciones elevadas de coliformes tanto totales como fecales, que ponen en riesgo
la salud de quien las consume, lo que tiene similitud con los resultados que se reportan
en este trabajo.
En la mayora de las muestras tomadas en nuestros estudios a los 7 manantiales, se
observ la presencia de bacterias pertenecientes a los gneros Enterobacter spp.,
a) c) c)
Escherichia spp., Providencia spp., Citrobacter spp., Serratia spp., Pseudomona spp. y
Aeromona spp., as como la especie Escherichia coli, situacin similar a lo reportado
por Lamka et al. (1980) en su estudio a agua de consumo humano en una zona rural
cercana a Oregn, donde no solo encontr coliformes totales y fecales, tambin
determin la existencia de diversas especies, entre las que destacan Citrobacter freundii,
Klebsiella pneumonie y Escherichia coli, adems de otros gneros bacterianos como
Pseudomona spp, Aeromona spp, Sthaphylococcus y Moraxella spp, entre otros;
resultados similares presenta Pacheco et al. (1999) en aguas subterrneas de Yucatn,
mostrando la presencia de coliformes totales y fecales que sobrepasaban los lmites
permisibles para una buena calidad del agua, as como los gneros bacterianos
Citrobacter spp., Enterobacter spp., Serratia spp., Klebsiella spp. y Escherichia spp.,
considerados dentro de los coliformes totales y que son considerados microorganismos
oportunistas demostrando que daan la salud de quienes consumen estas aguas
provocando gastroenteritis, septicemias y diversas infecciones. Por otro lado, Pac Sa et
al. (1998) en su estudio sobre un brote de gastroenteritis aguda en una zona rural de
Castelln, Espaa, el cual se asoci al consumo de agua de una acequia; mostr, por
medio de anlisis qumicos y bacteriolgicos, la presencia de contaminacin fecal y se
evidenci la presencia de especies pertenecientes al gnero Salmonella, cuyos
resultados confirman nuestro estudio, ya que tambin se logr aislar cepas
pertenecientes al gnero Salmonella spp. en los manantiales Palenquillo, lamos 1, La
mistela, Poza verde y El boquern.
En los manantiales, objeto de estudio, los anlisis permitieron identificar cepas
pertenecientes al gnero Pseudomona, lo cual es semejante a lo reportado por Vendrell
et al. (1998) en los estudios realizados a manantiales de aguas termales en OTinteiro en
Oruense, Espaa, que muestran la existencia de contaminacin por coliformes totales y
fecales, as como por Pseudomona spp. y Enterococcus, en ms de un punto
muestreado; as tambin Soto et al. (2006) en estudios realizados en nuestro pas a
aguas subterrneas que surten a travs de pozos a zonas de Navolato y Culiacn,
Sinaloa, observaron la presencia de coliformes totales y fecales que sobrepasan de
manera negativa su presencia en esta agua, las cuales por estos motivos, no son aptas
para consumo humano, del mismo modo, obtuvieron los gneros Pseudomona spp. y
Aeromona spp., considerados como patgenos oportunistas, causantes de diversas
infecciones en nios, adultos mayores y personas enfermas. De manera similar, el
estudio realizado por Garca et al. (2006) a aguas subterrneas en pozos tubulares
(extrada por bombas manuales) y con reservorio en las localidades de Santa y Coishco
en la Costa Central del Per, muestra la presencia de especies como Vibrio cholerae No
01, Aeromona caviae y Aeromona hidrophyla en ms de un pozo, estas ltimas en
mayor cantidad, lo que coincide con el presente trabajo, ya que tambin se lograron
identificar los gneros a los que pertenecen estas especies en los manantiales analizados.
Finalmente, Marchand (2002) concluye en su estudio en Lima, Per con la importancia
de la determinacin del gnero Pseudomona spp. y los Estreptococos fecales, como
indicadores complementarios de la calidad del agua para consumo humano debido a los
daos en la salud que pueden causar, especficamente Pseudomona, ya que el no
detectar coliformes totales o fecales, no indica totalmente la buena calidad del agua, lo
cual reafirma el resultado obtenido en nuestro estudio del manantial La fragua, ya que
en ningn muestreo se observ la presencia de coliformes totales o fecales, sin embargo,
se obtuvieron cepas pertenecientes al gnero Pseudomona spp. en los meses de Marzo,
abril y Junio.
Como lo muestran nuestros resultados, la ubicacin en la que se encuentran las tomas
de agua de los manantiales se ve reflejada en la calidad del agua, ya que se observa una
mayor cantidad de coliformes totales y fecales as como diversidad de gneros en
aquellos donde la proteccin es deficiente, como La mistela y El boquern 2, en este
ltimo, logrndose aislar el gnero Klebsiella, el cual no se registro en otro manantial y
los cuales se encuentran protegidos y limpios sus alrededores. Las temporadas
estacionales tambin influyen en los resultados, ya que a pesar de la seguridad en la que
se encuentra el manantial lamos 1, en el mes de mayo se disminuyo la cantidad de
agua regularizndose en el mes de junio, en el cual se observ un aumento considerable
de organismos coliformes, lo que hace pensar que posibles bacterias se adhieren a las
tuberas y crecen al presentarse condiciones adecuadas, al incrementarse el nivel del
agua del manantial las bacterias son arrastradas, reflejndose en los resultados
obtenidos. Por otro lado, las temperaturas registradas en el agua de los manantiales
representa una variante de importancia, ya que se observa que a menor temperatura,
menor cantidad de gneros presentes as como menores concentraciones de organismos
coliformes, por otro lado, el pH registrado en el agua de los manantiales no muestra
gran variacin durante las estaciones muestreadas, por lo que no marca influencia
alguna para la presencia o no de los gneros reportados.
Vl.- CONCLUSIONES
1. Los resultados obtenidos de los anlisis bacteriolgicos realizados en los
manantiales Palenquillo, Ocotita, lamos 1, La fragua, La mistela, Poza verde y
El boquern 2, permiten determinar que ms del 85% de los mismos, se
encuentran contaminados con la presencia de coliformes totales y fecales.
2. Conforme a los resultados obtenidos y de acuerdo a lo establecido por la Norma
oficial mexicana NOM-127-SSA1-1994, la calidad bacteriolgica del agua es
deficiente en los manantiales Palenquillo, Ocotita, lamos 1, La mistela, Poza
verde y El boquern 2, del municipio de Banderilla, Ver., debido a la presencia
de coliformes totales y fecales, los cuales deben estar ausentes en cada 100 ml.
de agua para consumo humano.
3. El manantial La fragua no present en ningn muestreo coliformes totales o
fecales, sin embargo, cultivos realizados de las muestras de aguas de este
manantial permitieron obtener cepas pertenecientes al gnero Pseudomona spp.
en los meses de Marzo, Abril y Junio. El gnero Pseudomona, esta compuesto
por diversas especies que son consideradas patgenos oportunistas, por lo que se
concluye que su presencia en las aguas de este manantial, por ser consumido por
poblacin asentada en sus cercanas, representa un riesgo para su salud.
4. An cuando el grupo de los coliformes totales no tiene una importancia clnica
relevante comparado con otros gneros, los gneros reportados en este trabajo
como Citrobacter spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp. Proteus spp.,
Providencia spp. y Serratia spp., (considerados patgenos oportunistas) pueden
ocasionar bacteriemia o septicemia, diarreas, gastroenteritis, infecciones en
heridas, piel y principalmente en vas urinarias, siendo los ms susceptibles a
adquirir estas enfermedades nios, adultos mayores y personas enfermas.
5. Los gneros reportados como Salmonella spp., Vibrio spp., y la especie
Escherichia coli, fueron identificados en ms de la mitad de las muestras motivo
de anlisis, mismos que son considerados como patgenos causantes de diversas
enfermedades como diarreas que van de leves a moderadas, gastroenteritis,
infecciones en piel, en el tracto respiratorio y urinario, bacteriemia, etc., por lo
tanto, dichas aguas no son aptas para consumo humano.
6. Se observa un incremento de coliformes totales y fecales en los meses en los
cuales las temperaturas son ms elevadas, lo que supone que las bacterias se
mantienen en un ambiente adecuado para su crecimiento.
7. Debido a la importancia que tienen los manantiales de Banderilla para la
poblacin, antes de consumir el agua, se sugiere sea sometida a diferentes
procesos que puedan garantizar una calidad en las mismas y que pongan a salvo
a la poblacin que las consume de cualquier tipo de enfermedad que atente
contra su salud.
VII.- ANEXOS
Agar Eosina y azul de metileno (EMB)
En un medio que se utiliza para el aislamiento y diferenciacin de coliformes de otras
enterobacterias de inters mdico y sanitario.
Agar de Soya y Tripticasena (TSA)
Es un medio slido muy rico en nutrientes. Permite la multiplicacin abundante y
satisfactoria de grmenes de desarrollo difcil y exigentes.
Agar de Hierro y Triple Azcar (TSI)
Este medio diferencial es utilizado para la diferenciacin e identificacin de
enterobacterias patgenas y saprfitas en los anlisis bacteriolgicos. Este medio se usa
como clave para iniciar la identificacin de enterobacterias.
Agar Sulfito y Bismuto
Es un medio de Wilson y Blair* modificado y altamente selectivo para aislar
Salmonella typhi, as como otros bacilos entricos.
Caldo RM- VP
Es un medio lquido empleado para efectuar las reacciones indicadas de rojo de metilo y
acetil metil- carbinol (Voges- Proskauer).
La prueba del rojo de metilo sirve para distinguir entre aquellos microorganismos que
producen y mantienen una concentracin alta de cidos, de aquellos que producen
inicialmente una menor cantidad y que adems son capaces de atacar a estos mismos
cidos, volviendo al medio neutro o alcalino, como Enterobacter.
La prueba de Voges- Proskauer muestra la oxidacin del acetil- metil- carbinol a
diacetilo, el cual a su vez reacciona con la peptona del medio dando un color rojo.
Para la realizacin de esta prueba, se necesita agregar el Indicador rojo de metilo y el
reactivo de Voges- Proskauer, compuesto por una solucin A y una B .
Caldo de triptona
Se utiliza para observar la presencia de indol. La prueba requiere que se le agregue el
reactivo de Kovacs.
Agar Citrato de Simmons.
Se utiliza para diferenciar las bacterias entricas gram negativas basndose en la
utilizacin del citrato.
Medio Movilidad- Indol- Descarboxilacin de la Ornitina (MIO).
El medio MIO se utiliza para la identificacin de enterobacterias sobre la base de
movilidad, la produccin de ornitina descarboxilasa y de indol.
Agar Urea de Christensen
Es un medio utilizado para la determinacin de la presencia de la enzima ureasa. El
medio se compone de dos partes, que se esterilizan por diferentes mtodos y luego se
mezclan de forma asptica que se distribuye en tubos estriles a 10 ml por tubo. Se
solidifica en posicin inclinada.
Caldo Nitratado
Este es un caldo que se realiza para probar la capacidad de las bacterias para reducir los
nitratos a nitritos y posiblemente hasta llegar a nitrgeno gaseoso.
Para realizar esta prueba, se le agrega el reactivo de Griess, el cual esta compuesto por 2
soluciones, A y B.
Agar PIA
Este agar es utilizado para el aislamiento de Pseudomonas.
Agar TECH
Es similar al agar PIA, ya que solo vara en la cantidad de glicerol que se agrega, sin
embargo, tienen el mismo fin y sirve para observar fluorescencia.
Grficas de temperatura y pH de los manantiales muestreados.
La grfica 1 muestra la temperatura que tenan los manantiales a la hora de ser
muestreados, se observa que la temperatura en general, no vara mucho en todos los
manantiales, solo el Boquern presento una alza importante en el mes de Mayo con
23.3C, y la temperatura mnima registrada, fue de 17C, presentadas en Enero.
La grfica 2 muestra el pH en los manantiales durante los meses muestreados, se
observa que no hay mucha variacin, sin embargo, en el mes de Junio se nota un alza en
el pH que llega arriba de los 9 en los manantiales Palenquillo y La mistela.
9.27
6.3
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Enero Marzo Abril Mayo Junio
pH
Meses
1M
2M
4M
5M
6M
7M
17
23.3
0
5
10
15
20
25
Enero Marzo Abril Mayo Junio
Tem
per
atu
ra
C
Meses
1 M
2 M
3 M
4 M
5 M
6 M
7 M
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