Tinción de Ziehl Neelsen - Fundación Ziehl-Neelsen 1) Colorante 1º: fucsina fenicada (carbolfucsina)…

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  • TINCIN DE ZIEHL NEELSEN

    Trinidad Sabalete Moya

    Centro de Enfermedades Infecciosas y Salud Internacional Granada- IAMA Mlaga

    FUNDACIN IO

  • Objetivos

    Determinar la cido alcohol resistencia de las

    micobacterias en muestras clnicas

    Diagnostico de pacientes bacilferos

    Control del tratamiento

  • Tinciones

    Ziehl-Neelsen1) Colorante 1: fucsina fenicada (carbolfucsina)

    2) Contracolorante: azul de metileno o verde malaquita

    3) Visualizacin con x1000

    4) BAAR de 1-10m de largo y 0.2-0.6m de ancho

    Variante de Kinyoun

    1) Cuerpos tensioactivos sin necesidad de calentar el colorante

    Auramina

    1) Colorante 1:fluorocromo

    2) Los microorganismos bajo luz UV aparecen

    fluorescentes

    1) Visualizacin x250

    Tincin de Gram:bacteria gram+ dbil o como bacilos incoloros

  • 1-lpidos externos

    2-cido miclico

    3-polisacridos (arabinogalactano),

    4-peptidoglicano (molculas de N-acetilglucosamina y cido N-glucolilmurmico ),

    5-membrana plasmtica

    6-lipoarabinomanano (LAM),

    7-fosfatidilinositol manosido

    Escasa permeabilidad:

    Acido alcohol resistencia

    Esquema de la pared celular

  • Material necesario para tincin de

    Ziehl Neelsen

    Porta

    Carbolfucsina

    Decolorante (Alcohol cido)

    Azul de metileno

    Aceite de inmersin

    Fuente de calor

  • Preparacin del frotis

    Porcin de saliva

    Porcin purulenta

  • Extensin de la muestra

  • Grosor adecuado

  • Fijacin

  • 10

    AAR No AAR

    carbolfucsina

    decolorante

    Tincin de contraste

  • Carbol fucsina

  • Calentar hasta la emisin de vapor

    Mantener el calor 10 minutos

    Evitar la ebullicin

    Dejar enfriar

  • Resultado del tiempo de carbol fucsina en la intensidad de AAR

    13

    2 min 3 min

    5 min

  • Lavar con agua

  • Decoloracin con alcohol cido

    Mximo 3 minutos

    Lavar con agua posteriormente

  • Tincin de contraste: azul de metileno

    1 MINUTO

  • Enjuagar

  • Secado

  • Examen sistemtico de la extensin 19

    100 campos. 1000x

  • Buena calidad de la tincin

  • BAAR AISLADOS

  • BAAR AGRUPADOS

  • WHO Escala de clasificacin

    Resultado BAAR visualizados

    Negativo Ausencia de BAAR en al

    menos 100 campos

    Nmero real 19 BAAR / 100 campos

    1+ 1099 BAAR / 100 campos

    2+ 110 BAAR / al menos 50

    campos

    3+ Ms de 10 BAAR / al menos

    20 campos

    23

  • Sensibilidad

    Muestra

    Cantidad

    Origen

    Concentracin de

    microorganismos

    105

    Tipo de tincin

    Auramina

    Ziehl NeelsenKinyoun

    Especie Experiencia del observador

    Especificidad

    Nocardia

    Rhodococcus

    Tsukamurella

    Gordona

    Cryptosporidium

    Isospora

    Sarcocystis

    Cyclospora

  • Errores

    Falsos negativos: muestra no representativa,

    errores en la tcnica de extensin y tincin.

    Falsos positivos: restos de comida, precipitados del

    colorante, contaminacin del portaobjetos

  • Tincin de mala calidad

  • Excesivo calor en la fijacin del frotis

  • Uniformidad de la extensin

    Bien Bien

    Desprendido Desigual

  • Grosor del frotis

    Correcto

    Demasiado grueso

    Demasiado fino

  • Causas de palidez de AAR

    30

    Concentracin de CF

  • Insuficiente decoloracin

  • Importancia de una correcta decoloracin

    Insuficiente Correcta

  • Causas de contratincin excesiva33

    Dejar actuar el colorante ms de un minuto

    Concentracin de azul de metileno > 0.3%

  • Buena calidad de contratincin

  • Efectos de una excesiva contratincin

    Nucleos demasiados oscuros

    Fondo demasiado marcado