UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE …La medicina tradicional ha ido evolucionando a lo largo del tiempo su desarrollo ha ocasionado que grandes industrias farmacéuticas

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

“EVALUACIÓN IN VITRO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL ACEITE

ESENCIAL DE LANTANA CAMARA SOBRE EL MICROORGANISMO

STAPHILOCOCCUS AUREUS”.

Autor: Valencia Cantuña Verónica Obdulia

Tutor: Dra. Ma. Isabel Zambrano

Quito, abril 2018

FACULTAD DE ODONTOLOGÍA

CARRERA DE ODONTOLOGÍA

iv

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL

El tribunal constituido por: Dra. Mariela Balseca

Dra. Gabriela Tapia

Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del título (o

grado académico) de Odontóloga presentado por la señorita Verónica Obdulia Valencia

Cantuña.

Con el título:

“EVALUACIÓN IN VITRO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO DEL ACEITE ESENCIAL DE LANTANA CAMARA SOBRE EL MICROORGANISMO STAPHILOCOCCUS AUREUS”

Emite el siguiente veredicto: (aprobado/reprobado) ______________________________

Fecha: _________________________________

Para constancia de lo actuado firman:

Nombre y Apellido Calificación Firma

Presidente Dra. Mariela Balseca __________ _______________

Vocal 1 Dra. Gabriela Tapia __________ _______________

Vocal 2 ____________________ __________ _______________

v

DEDICATORIA

En primera instancia a Dios quien inspiro mi espíritu al darme paciencia y sabiduría

para lograr este reto.

A mis padres, quienes han sido mi guía y un ejemplo a seguir como personas

incansables, apoyándome todo este tiempo y permaneciendo junto a mí en aquellos

momentos de intranquilidad y agotamiento ante las circunstancias de mi vida, también a

mis hermanas, por sus concejos y palabras de aliento y optimismo.

A José, amigo y confidente, por su apeo y confianza en todo mi trayecto académico.

A todos los que me apoyaron para concluir esta etapa de mi vida, para ellos es esta

dedicatoria, pues es a ellos a quienes se las debo por su apoyo incondicional.

vi

AGRADECIMIENTO

Una inmensa gratitud por el apoyo incondicional que me ha brindado la Dra. Ma. Isabel

Zambrano mi tutora y docente, gracias por los consejos el tiempo y paciencia invertidos

en la revisión de este trabajo.

Mi eterno agradecimiento a la Dra. Mercedes Almagro Directora Médica del Hospital

de Especialidades Eugenio Espejo, la persona que ha hecho que este trabajo sea posible.

A la Lcda. Yolanda Andrade del laboratorio de microbiología de la Facultad de

Odontología de la Universidad Central del Ecuador, por compartir sus experiencias y

conocimientos en el manejo de microorganismos.

A su vez agradezco al Dr. Darwin Rondan quien me ayudó en la elaboración del aceite

esencial de la planta Supirosa en la Facultad de Ingeniería Química de la Universidad

Central del Ecuador.

Por último, a mi Decana la Doctora Blanca Real, pues gracias a ella y su buen corazón

fue posible la culminación de esta etapa.

vii

CONTENIDO

©DERECHOS DE AUTOR ................................................................................................................ ii

AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL ............................................................................. ii

APROBACIÓN DEL TRABAJO DE TITULACIÓN POR PARTE DEL TUTOR ......................................... iii

APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL .................................................................iv

DEDICATORIA ................................................................................................................................ v

AGRADECIMIENTO ........................................................................................................................vi

CONTENIDO .................................................................................................................................. vii

LISTA DE TABLAS............................................................................................................................ ix

LISTA DE FIGURAS.......................................................................................................................... x

LISTA DE GRÁFICOS ....................................................................................................................... xi

LISTA DE ANEXOS ......................................................................................................................... xii

RESUMEN .................................................................................................................................... xiii

ABSTRACT .................................................................................................................................... xiv

INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................. 1

CAPITULO I .................................................................................................................................... 2

MARCO TEÓRICO ........................................................................................................................... 2

1.1. FITOTERAPIA ................................................................................................... 2

1.2. FITODONTOLOGÍA ......................................................................................... 2

1.3. LANTANA CAMARA ........................................................................................ 2

1.3.1. Descripción Taxonómica y Botánica .......................................................... 3

1.3.2. ESTRUCTURA Y COMPOSICIÓN ......................................................... 3

1.3.3. USOS MEDICINALES ............................................................................... 3

1.4. Ecología de la Cavidad Bucal ............................................................................. 5

1.5. Reseña histórica del Genero Staphylococcus .................................................... 5

1.6. Staphilococcus aureus ......................................................................................... 6

1.6.1. Morfología Y Características ..................................................................... 6

1.6.2. Factores De Virulencia ................................................................................ 7

CAPITULO II ................................................................................................................................. 12

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .............................................................................................. 12

2. PROBLEMA .......................................................................................................................... 12

2.1. OBJETIVO ......................................................................................................................... 13

2.1.1. Objetivo General ......................................................................................................... 13

2.1.2. Objetivos específicos ................................................................................................... 13

2.2. JUSTIFICACIÓN ................................................................................................. 14

viii

2.3. HIPÓTESIS ........................................................................................................... 16

CAPITULO III ................................................................................................................................ 17

METODOLOGÍA............................................................................................................................ 17

3. Tipo de Diseño de la Investigación ...................................................................................... 17

3.1. POBLACIÓN Y MUESTRA ................................................................................ 18

3.1.1. Población ............................................................................................................ 18

3.1.2. Tamaño de la muestra ....................................................................................... 18

3.1.3. UNIDAD DE MUESTRA ................................................................................. 18

3.2. Criterios de inclusión y exclusión......................................................................... 18

3.2.1. Criterios de inclusión ........................................................................................ 18

3.2.2. Criterios de exclusión ........................................................................................ 18

3.2.3. Variables ............................................................................................................ 19

3.2.4. Conceptualización de las variables .................................................................. 19

3.2.5. Ejecución de variables ...................................................................................... 20

3.3. Procedimientos y técnicas ..................................................................................... 21

3.3.1. Materiales y Métodos ........................................................................................ 21

3.3.2. Preparación del aceite esencial de Lantana camara (Supirosa) ..................... 21

3.3.3. Materiales para realizar el cultivo ................................................................... 24

3.3.4. Materiales para realizar el estudio microbiológico ........................................ 24

3.3.5. Procedimiento y técnica .................................................................................... 25

3.4. Aspectos éticos ....................................................................................................... 31

CAPITULO IV ................................................................................................................................ 32

4.1.1. Análisis de resultados ........................................................................................ 32

CAPITULO V ................................................................................................................................. 42

Discusión ..................................................................................................................................... 42

CAPITULO VI ................................................................................................................................ 44

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ...................................................................................... 44

CONCLUSIONES ........................................................................................................................... 44

RECOMENDACIONES ................................................................................................................... 45

Referencias bibliográficas ........................................................................................................... 46

ANEXOS ....................................................................................................................................... 49

ix

LISTA DE TABLAS

Tabla 1 Cuadro de la ejecución de variables .............................................................................. 20 Tabla 2 Sensibilidad definida por Duraffourd ............................................................................ 29 Tabla 3 Tabla de resultados ........................................................................................................ 32 Tabla 4 Pruebas de normalidad .................................................................................................. 33 Tabla 5 Comparación entre 24H y 48H ...................................................................................... 33 Tabla 6 Comparación a las 24H .................................................................................................. 35 Tabla 7 Comparación a las 48 H ................................................................................................ 39

x

LISTA DE FIGURAS

Fig. 1 Lantana camara "Supirosa" ............................................................................................... 2 Fig. 2 Staphilococcus aureus ........................................................................................................ 6 Fig. 3 Supirosa después de 3 semanas ........................................................................................ 21 Fig. 4 Supirosa Recolectada ........................................................................................................ 21 Fig. 5 Trituración manual de las hojas y flores (Supirosa) ......................................................... 22 Fig. 6 Proceso de las hojas .......................................................................................................... 22 Fig. 7 Hidrodestilación por arrastre de vapor de agua ................................................................ 22 Fig. 8 Obtención del aceite ......................................................................................................... 23 Fig. 9 Aceite esencial de Supirosa al 100% ................................................................................ 23 Fig. 10 Staphylococcus aureus ATCC 29213 ............................................................................. 25 Fig. 11 Discos de filtro blancos .................................................................................................. 25 Fig. 12 Hisopos ........................................................................................................................... 25 Fig. 13 Cultivo en tubo de ensayo............................................................................................... 26 Fig. 14 Medios de cultivo en agar sangre ................................................................................... 26 Fig. 15 Cajas en la Cabina de seguridad biológica ..................................................................... 27 Fig. 16 Inoculación del Staphilococcus aureus ........................................................................... 27 Fig. 17 Colocación de los Discos ................................................................................................ 28 Fig. 18 Incubación ...................................................................................................................... 28 Fig. 19 Medición del Halo de inhibición .................................................................................... 29 Fig. 20 Halo de inhibición del Staphilococcus aureus ................................................................ 29 Fig. 21 Cajas Petri en autoclave .................................................................................................. 30 Fig. 22 Almacenamiento Temporal ............................................................................................ 30

xi

LISTA DE GRÁFICOS

Gráfico 1 Pueba de Wilcoxon ................................................................................................... 34 Gráfico 2 Comparación de medidas .......................................................................................... 36 Gráfico 3 Muestras Independientes a las 24H ........................................................................... 37 Gráfico 4 Prueba de dos a dos ................................................................................................... 38 Gráfico 5 ComparacIón de medidas a las 48 H ......................................................................... 39 Gráfico 6 Muestras independientes a las 48 H .......................................................................... 40 Gráfico 7 Prueba dos a dos a las 48 H ....................................................................................... 41

xii

LISTA DE ANEXOS

Anexo 1 Renuncia Al Trabajo Estadístico .................................................................................. 49 Anexo 2 Solicitud Al Hospital De Tercer Nivel Y De Especialidades Eugenio Espejo Para

Petición Del Microrganismo Staphilococcus Aureus, Cepa ATCC 29213 ................................. 50 Anexo 3 Solicitud Para El Uso De Microbiología De La Facultad De Odontología De La

Universidad Central Del Ecuador. .............................................................................................. 51 Anexo 4 Certificado Del Uso Del Laboratorio De Química De La Universidad Central Del

Ecuador ....................................................................................................................................... 52 Anexo 5 Solicitud Para El Manejo De Deshechos ...................................................................... 53 Anexo 6 Certificado Del Subcomité De Ética De La Universidad Central Del Ecuador ........... 54 Anexo 7 Certificado Del Sistema Antiplagio URKUND ........................................................... 55 Anexo 8 Certificado Del Abstract ............................................................................................... 56 Anexo 9 REPOSITORIO ........................................................................................................... 57

xiii

Tema: Evaluación in vitro del efecto antibacteriano del aceite esencial de lantana

camara sobre el microorganismo staphilococcus aureus.

Autor: Verónica O Valencia Cantuña


RESUMEN

El propósito de este estudio fue demostrar el efecto antibacteriano o inhibitorio del aceite

esencial de la especie Lantana camara “Supirosa”, por encontrarse en gran cantidad en

nuestro país y al formar parte de la medicina tradicional de la cultura indígena

ecuatoriana, en ésta ocasión se demostró su efectividad sobre cepas del microorganismo

Staphilococcus aureus. (ATCC® 29213™), en una evaluación in vitro. Se evaluó la

actividad antimicrobiana en 15 cultivos en cajas Petri y en cada uno de ellos se colocó 3

discos de papel filtro, el primer disco impregnado del extracto del aceite esencial de la

planta al 100%, el segundo embebido con el control positivo Clorhexidina 0.12%, y el

tercero impregnado con suero fisiológico al 0.9%, se realizó mediante el método de

difusión en disco para determinar la sensibilidad bacteriana a través de halos de inhibición

tanto a las 24 y 48 horas de estar expuesta. Los resultados demostraron que es posible la

extracción de aceite esencial de esta especie de Verbenaceae, además se comprobó que

el aceite de Lantana camara ocasionó efecto antibacteriano del 12.47 mm de diámetro a

las 24 horas y del 16.86 mm de diámetro a las 48 horas frente a cepas de Staphilococcus

aureus. (ATCC® 29213™). Como conclusión se encontró que existe un efecto inhibitorio

positivo de alto rango por el aceite esencial de Supirosa en contra de Staphilococcus

aureus. (ATCC® 29213™).

PALABRAS CLAVE: LANTANA CAMARA, STAPHYLOCOCCUS AUREUS, VERBENACEAE

xiv

Subject: In vitro Evaluation of antibacterial effect of lantana camara essential oil over

staphilococcus aureus microorganism.

Author: Verónica O Valencia Cantuña


ABSTRACT

The purpose of this research was to demonstrate the antibacterial or inhibitory effect of

the essential oil of the special Lantana camara(“Supirosa”) because it is found in large

quantities in our country and because it is part of the traditional medicine of the

Ecuadorian indigenous culture; this time it was demonstrated its effectiveness on strains

of the microorganism Staphylococcus aureus. (ATCC ®29213™) in an in vitro

evaluation. The antimicrobial activity was evaluated in 15 cultures in Petri dishes; in each

one of them three discs of filter paper were placed; the first disc impregnated with the

extract of the essential oil of the plant at 100%, the second one imbibed with the positive

control Chlorhexidine 0.12%, and the third impregnated with 0.9% physiological saline

solution; it was carried out using the disk diffusion method to determine bacterial

sensitivity through inhibition halos both al 24 and 48 hours after exposure. The results

showed that it is possible to extract essential oil from this species of Verbenaceae; it was

proved that Lantana camara oil produced an antibacterial effect of 12.47mm at 24 hours

and 16.86mm al 48 hours against strains of Staphylococcus aureus. (ATCC ®29213™)

In conclusion, it was found that there is a positive inhibitory effect of high rank by the

essential oil of “Supirosa” against Staphylococcus aureus (ATCC ®29213™).

KEY WORDS: LANTANA CAMARA, STAPHYLOCOCCUS AUREUS,

VERBENACEAE

1

INTRODUCCIÓN

La medicina tradicional ha ido evolucionando a lo largo del tiempo su desarrollo ha

ocasionado que grandes industrias farmacéuticas se concentren en buscar nuevos

principios activos para expresar en forma legítima el uso terapéutico de una planta y sus

beneficios.

En los últimos años a nivel mundial se puede apreciar una tendencia al consumo de

productos naturales, es un fenómeno de cambio de actitud hacia lo natural, sumado a esto,

numerosas investigaciones indican el efecto antibacteriano que tienen los aceites

esenciales extraídos de plantas y especias. De esta forma el control microbiano mediante

el uso de aceites esenciales se ha convertido en una de las áreas de investigación más

importante teniendo como finalidad la sustitución de conservadores sintéticos por lo

orgánico o natural. (1)

Existen variedades de plantas medicinales que presentan propiedades terapéuticas y que

han sido ampliamente estudiadas, en éste caso hablaremos de la familia Verbenácea que

tiene 51 géneros, entre los que se encuentra el género Lantana con 160 especies,

destacándose Lantana cámara , conocida como “Supirosa” en Ecuador, estudios han

reportado actividad antimalárica, antibacteriana, antitumorales y antihipertensivos. (2)

La cavidad oral alberga innumerables microorganismos, es un ecosistema de complejidad

considerable. Estos microorganismos constituyen la flora oral del ser humano, la cual es

altamente diversa, son parte importante en la salud y la enfermedad oral; por lo tanto, es

de vital importancia buscar nuevas sustancias para ayudar a controlar la proliferación de

los mismos.

El staphilococcus aureus, es una bacteria grampositiva coagulasa positiva, importante

agente causal de lesiones cutáneas y mucosas que al proliferar puede causar patologías.

(3)

Por lo tanto, este trabajo de investigación se enfoca en determinar la acción antibacteriana

del aceite esencial de Lantana camara sobre las cepas del microorganismo

Staphilococcus aureus.

2

CAPITULO I

MARCO TEÓRICO

1.1. FITOTERAPIA

Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), refiere el concepto de fitoterapia

como una ciencia encargada del estudio de productos vegetales ya sea en tisanas,

extractos, zumos, ungüentos, jarabes, aceites esenciales, para su posterior utilización en

la terapia de estados patológicos. (7) Definiéndolo como un tratamiento médico de algunas

enfermedades basado en el empleo de plantas medicinales y sustancias vegetales. (8)

1.2.FITODONTOLOGÍA

Rogério Cavalcante investigador brasileño, define en su libro que la Fitodontología es

una parte de la fitomedicina que se preocupa de estudiar y aplicar de forma científica a

las plantas medicinales en fitomedicamentos para usarlos en el área odontológica. (9)

1.3.LANTANA CAMARA

Fig. 1 Lantana camara "Supirosa"

Fuente: V. Valencia, 2017

3

1.3.1. Descripción Taxonómica y Botánica

Según Carvajal (2) la descripción es la siguiente

Familia: Verbenácea

Nombre científico: Lantana camara L.

Nombre común en Ecuador: Supirosa.

Nombre en inglés: common lantana, shrub verbena.

Origen: introducida.

Lugar de origen: América Central.

Estado UICN: No registrada en la lista roja de especies amenazadas de la UICN

(2013.2).

Hábito: arbusto.

Usos: Ornamental y como cercas vivas.

Ubicación principal en la parroquia de Pomasqui y al sur de Quito: viviendas varias,

creciendo de forma natural en terrenos baldíos. (10)

1.3.2. ESTRUCTURA Y COMPOSICIÓN

La Lantana camara perteneciente a la familia de las Verbenáceas, es un arbusto

considerado como una maleza de elevada y probada toxicidad para el ganado, además de

presentar propiedades medicinales, así como plaguicida, también ha sido utilizada como

planta ornamental en diferentes países. (8) (Fig. 1).

La planta tiene forma de arbusto mide entre 1 a 3 metros de alto, presenta tallos

usualmente con espinas, tiene hojas de 2 a 12 cm de longitud y de 0.5 a 6 de ancho, sus

flores son en forma de cabezuela de 0.5 a 3 cm de diámetro de colores amarillo, rojas,

naranjas, morado y una raíz pivotante. (11)

1.3.3. USOS MEDICINALES

Al tener en cuenta que estas plantas ocupan vastas extensiones de tierra en el planeta. El

aceite esencial que se obtiene a partir de sus hojas, flores, frutos y raíces ha sido utilizado

tanto en perfumería como de uso médico. (11)

4

En el uso médico la Lantana camara ha sido usada como:

Antihipertensivo (2)

Tiene actividad biológica incluyendo efectos antibacterianos. (2)

Ha sido usado como antitumoral (2)

Utilizada para el tratamiento de malaria. (11)

Usada para tratar el reumatismo. (2)

Lesiones en piel. (11)

Gracias a las propiedades de su corteza presenta actividad antipirética. (2) (11)

Funciona como cicatrizante. (12)

Actúa como antiinflamatorio. (11)

Eficaz para tratar la diarrea (11)

Usada para tratar la conjuntivitis, la dermatitis, la faringitis y ulceras bucales. (11)

(13)

Reduce la presión arterial. (13)

Ayuda a controlar el dolor de los cólicos menstruales. (13)

Afecciones gastrointestinales. (13), catarro, resfriados, tos. (11)

Propiedades antiasmáticas. (13)

Demuestra ser un potente calmante o sedante que actúa directamente sobre el

sistema nervioso. (14)

Según José Fernando Caroprese (9) en su investigación nos indica que el alcaloide

lantamina, obtenido de la corteza de las ramas y de las raíces de L. camara, muestra una

intensa actividad antipirética y antiespasmódica, propiedad comparable con la quinina.

(11)

Sin embargo, Romeu Carlos (12)nos indica que las hojas de la Lantana camara son muy

utilizadas en la medicina popular para el tratamiento de enfermedades como el tétano, el

reumatismo y la malaria, es una importante fuente de fósforo y potasio, por poseer

propiedades farmacológicas, incluyendo la bactericida, insecticida, antimutagénica y su

acción repelente contra insectos vector de la malaria. (11) (12)

En una investigación realizada por Zaida Carvajal y cols. (2), nos informa que el género

Lantana camara ha reportado actividad antimalárica y de las hojas de esta especie se han

aislado diferentes principios activos, que poseen diversas actividades biológicas

incluyendo efectos antibacterianos. (2)

Alan Venegas del Castillo y María N. Vásquez (13) en su investigación afirman que los

resultados obtenidos y basándose en trabajos anteriores el S. aureus presenta mayor

inhibición del crecimiento frente al aceite de L. camara y que este efecto inhibitorio contra

5

bacterias Gram positivas se debería a los componentes propios del aceite, quedando

demostrado que la familia del género Verbenácea presenta un potencial efecto

antimicrobiano en bacterias de interés clínico. (16)

1.4.Ecología de la Cavidad Bucal

Según Negroni, (17) la ecología de la cavidad bucal comprende el estudio de las relaciones

entre los microorganismos y el ambiente, su conocimiento radica en determinar el proceso

que involucra fundamentalmente la etiopatogenia de las enfermedades bucales y como

consecuencia su prevención, también contribuye a identificar las complicaciones

sistémicas para la microbiota bucal.

1.5.Reseña histórica del Genero Staphylococcus

Los cocos se asocian por primera vez a enfermedades humanas cuando fueron observados

en materiales purulentos provenientes de abscesos humanos. (17) En 1880 el cirujano

escocés Alexander Ogston demostró que cocos agrupados en forma de racimos eran la

causa de ciertos abscesos piógenos en humanos. Louis Pasteur llegó a una conclusión

similar al mismo tiempo, pero en París. En el año 1882, Ogston llamo a estos cocos

“Staphilococcus”, derivando el nombre de los termino griegos staphile (racimo de uvas)

y kokkus (frutilla). Morfológicamente, Ogston propuso ese término de manera de poder

diferenciarlo de los estreptococos, formadores de cadenas. Además, Ogston demostró que

la inyección a ratones de pus conteniendo estos cocos producía los mismos síntomas

observados en el humano. También observo que, si calentaba el pus y lo trataba con fenol,

la enfermedad se prevenía. (17) (18)

Según Negroni las bacterias de tipo staphilococcus se encuentran ampliamente

distribuidas en la naturaleza, especialmente en la piel, las glándulas cutáneas y las

mucosas, el tracto intestinal, genitourinario y el aparato respiratorio superior.(20)

Son un amplio grupo de bacterias Gram-positivas, cuyo diámetro oscila entre 0.5 y 1.5

micras. Este género posee alrededor de 35 especies de las cuales se destacan:

6

Staphylococcus aureus. (18)(Fig.2)

Staphylococcus epidermidis. (18)

Staphylococcus saprophyticus. (18)

1.6.Staphilococcus aureus

Fig. 2 Staphilococcus aureus

Fuente: Investigación – V. Valencia 2017

1.6.1. Morfología Y Características

Socorro y cols. (19), sugieren en su investigación que el Staphilococcus aureus es un coco

Gram positivo, aerobio facultativo, inmóvil, de 0.5 a 1 micrómetro de diámetro, que no

forma esporas, no posee capsula formar grupos de células irregulares semejantes a

7

racimos de uvas. En extendidos de supuración los cocos aparecen solos, en pares, en

racimos o en cadenas cortas. (4)

1.6.2. Factores De Virulencia

El Staphilococcus aureus tiene un metabolismo de tipo fermentativo y anaerobio

facultativo, catalasa positiva y oxidasa negativa. Poseen un antígeno específico el

Polisacárido A que unido al mucopéptido que se encuentra presente en su pared celular

en donde también está la Proteína A que se une a la región Fc de la Inmuno globulina

(IgG) le da la actividad fagocítica. (20)

Un peptidoglucano de la pared celular actúa como una endotoxina atrayendo los

leucocitos PMN y activa la lisozima, hidrolizando el complemento.

Los ácidos teicoicos favorecen la adhesión al igual que la capa de slime, constituida por

hidratos de carbono y proteínas extracelulares. Esta capa es muy importante ya que

facilita la adhesión e inhibe la quimiotáxis y la fagocitosis. (10)

Entre las enzimas las más conocidas es la coagulasa o factor clumping la cual formaría

un coágulo que internalizaría el microorganismo haciéndolo más difícil de fagocitar. (16)

La hemolisina estafilocócica o toxinas α, β, γ, δ se diferencian por el tipo de eritrocito que

lisan, así como también actuando sobre otras células: (18)

La toxina α daña el músculo liso, las células de la piel los macrófagos y las

plaquetas.

Las toxinas β o esfingolielinasa C son especialmente para las células con

esfingomilelina.

Las toxinas γ actúan sobre los fosfolípidos de las membranas.

Las toxinas δ es toxica para muchas células polimorfonucleares, macrófagos

linfocitos y plaquetas.

La leucocidina presenta dos compuestos que en forma sinérgica actúan dañando PMN y

macrófagos y al parecer altera la permeabilidad de la membrana celular.

Las hemolisinas destruyen a los eritrocitos por medio de canales proteicos.

Toxina epidermolítica o exfoliatina, son A y B codificadas por un plásmido y producen

la dermatitis aguda exfoliativa que es una lesión cutánea.

8

Toxina del síndrome del shock tóxico o toxina pirogénica, puede causar una lesión

escarlatiniforme. No le encuantra en todos los casos de shock séptico estafilocócico. (17)

ESTAPHYLOCOCCUS AUREUS Y SU RELACION EN LA CAVIDAD ORAL

Como se ha mencionado anteriormente el S. aureus es una bacteria que provoca

comúnmente infecciones se en la piel como foliculitis, impétigo, forúnculos y celulitis y

que gracias a las toxinas que libera puede llevar a episodios de infecciones alimenticias o

síndrome de choque tóxico.

Aunque rara vez estas infecciones causadas por estos microorganismos, pueden

ocasionalmente volverse graves cuando existe una ruptura en la piel o mucosa

permitiendo que las bacterias ingresen a la circulación sanguínea, compromete

articulaciones, corazón, sangre y sistema nervioso central. Generalmente estas

infecciones afectan a las personas que presentan un sistema inmune deprimido o que se

encuentran en tratamiento con medicamentos quimioterapéuticos. (21)(23)

Existe una extensa literatura sobre el Stafilococus aureus, sin embrago, todavía hay poca

evidencia que demuestran aspectos cualitativos y cuantitativos que indiquen colonización

e infección oral por estos microorganismos, de forma general se sabe que estas

infecciones incluyen queilitis angular, algunas infecciones endodónticas, parotiditis y

más recientemente una forma de mucositis oral en pacientes mayores dependientes de

nutrición parenteral, niños inmunocomprometidos pacientes con enfermedades

sistémicas como artitis reumatoide y diabetes mellitus. (23) (24)

Patologías relacionadas con el Staphilococcus aureus.

Queilitis angular

Conocidas como “boqueras” es un tipo de estomatitis que involucra inflamaciones de

fisuras o grietas radiales dispuestas en las comisuras labiales ya sea unilaterales o

bilaterales, son dolorosas, tiene una evolución crónica con brotes de agudización.

Aparecen cubiertas por una pseudomembrana cremosa blanquecina o amarillenta, en

ocasiones la lesión puede extenderse a la mucosa retrocomisural. Podemos reconocer

factores de causa local como puede ser la disminución o la pérdida de la dimensión

vertical de la cara en aquellas personas con edentulismo o portadores de prótesis

inadecuadas. También pueden estar relacionadas con la edad avanzada y aparición de

https://www.propdental.es/protesis-removibles/

9

arrugas en la zona comisural, facilitándo la colonización en estos pliegues de patógenos

oportunistas como Staphilococcus aureus. (13)

El tratamiento es un proceso doble que consiste en identificar los factores predisponentes

y erradicar la infección local, la combinación antifúngica y antibiótica suelen ser eficaces

para tratar la queilitis angular según lo expresa Philip Sapp (24)

Según Wood (25) una de sus causas fundamentales parece ser la infección por C. albicans,

asociada en algunos casos a una mezcla de otros microorganismos, por ejemplo

Stafilococus aureus

La deficiencia nutricional

La deficiencia nutricional también se ha implicado en la causa de la queilitis angular. Este

factor lleva a una falta de vitamina B y hierro, es la causa más común de la queilitis

angular en el tercer mundo o países en desarrollo. La deficiencia de hierro sin embargo

no tiene una conexión directa con la ocurrencia de queilitis pero se cree que reduce la

capacidad del sistema inmunitario que luego puede permitir la infección por S. Aureus.

Generalmente el resultado de la desnutrición, incluso la dieta que no incluye el consumo

de alimentos que contienen vitamina B, también puede ser secundaria a enfermedades

subyacentes, tales como trastornos gastrointestinales.

La dermatitis de contacto irritante

Se incluye en los factores que causan la queilitis angular, y se caracteriza por el daño a la

superficie de la piel tan rápidamente como antes que la piel puede ser capaz de reparar el

daño. Saliva o babeo en las esquinas de los labios o que continuamente entran en contacto

con los labios está implicada en la aparición de la queilitis. La saliva ayuda en el proceso

de digestión a través de su composición de enzima digestivo. La enzima digestiva puede

dañar los tejidos blandos de la boca, especialmente en las comisuras de los labios, donde

gran parte de la saliva es constantemente puesta en común. La constante acumulación de

saliva en las comisuras de la boca y la zona adyacente puede conducir a la maceración, el

potencial de crecimiento y las infecciones por hongos y bacterias.

10

Enfermedades sistémicas

Los trastornos gastrointestinales pueden conducir a la deficiencia nutricional, que a su

vez puede provocar la aparición de queilitis. La granulomatosis orofacial es un trastorno

que causa la ampliación de los labios potenciales para la distorsión anatómica o alteración

que también pueden afectar a las esquinas de la boca y posteriormente llevar a la queilitis.

Pulpitis

La pulpitis se define como un proceso inflamatorio que afecta a la cavidad pulpa del

diente, y que pasa por varias etapas (pulpitis reversible e irreversible) antes de llegar a

una necrosis pulpar, como consecuencia de caries e infecciones por diferentes causa entre

ellas las yatrogenias, traumatismos y bacterias como la presencia de Staphilococcus

aureus. (14)

Absceso periapical

Complicación por caries dental y también puede resultar por un trauma a la pieza dental.

Las aberturas en el esmalte dental permiten que las bacterias infecten el centro del diente

(la pulpa). La infección puede propagarse desde la raíz del diente hasta los huesos que lo

sostienen.

Es la lesión que se presenta inicialmente cuando las circunstancias son adversas.

Probablemente es el proceso más doloroso para los pacientes y posiblemente uno de los

más peligrosos, a menudo es el resultado de una pulpitis aguda cuyo exudado se extiende

hacia los tejidos blandos y duros adyacentes. Dado que contiene una o más cepas de

microorganismos bacterianos virulentos, el exudado suele tener exotoxinas y enzimas

líticas capaces de destruir las barreras tisulares, además no existe un orificio que permita

el drenaje desde la pulpa a través de la corona hacia la cavidad bucal, produciéndose una

presión interna dentro de la membrana periodontal que origina la extrusión del diente de

su alveolo y la rápida extensión del exudado por todo el hueso medular subyacente. (24)

La infección ocasiona una acumulación de pus (tejido muerto, bacterias vivas y muertas,

glóbulos blancos) e inflamación de los tejidos internos del diente. Esto causa un dolor

intenso. Si la pulpa del diente muere, el dolor se puede detener, a menos que se desarrolle

11

un absceso. Esto es especialmente válido si la infección sigue estando activa y continúa

diseminándose y destruyendo tejido. (15)

Sinusitis Maxilar

La sinusitis maxilar puede ser aguda o crónica, puede provocar tumefacción sobre el seno

y la eminencia molar, así como dolor infraocular. La palpación sobre el maxilar

incrementa el dolor, y los dientes con raíces adyacentes al seno suelen doler o ser

sensibles a la percusión, el dolor también puede referirse a otros dientes de la arcada y al

oído, y en la sinusitis crónica existen normalmente secreciones nasales y postnasales

acompañada de respiración fétida y obstrucción o dolor vago en el lado facial afectado

(16)

Osteomielitis

La osteomielitis es una infección bacteriana del hueso para un número alarmante de

pacientes que son admitidos en hospitales, el Staphilococcus aureus es un patógeno

bacteriano prominente y el agente causal aislado más frecuente de la osteomielitis

inducida por infección. El tratamiento de las infecciones por osteomielitis es un desafío

debido a una variedad de factores, incluyendo la baja biodisponibilidad de los antibióticos

en el tejido óseo, el aumento de la resistencia a los antibióticos en patógenos bacterianos

y las propiedades similares al biofilm de la infección. En muchos casos, los médicos se

dejan con el desbridamiento quirúrgico como la única opción para eliminar las bacterias

invasoras y lograr un sitio estéril. Cuando se trata de una articulación protésica infectada,

a menudo se requiere la extracción y el reemplazo de la articulación. Debido a estos

desafíos, la osteomielitis es devastadora para muchos pacientes con consecuencias

dolorosas a largo plazo y limitadas opciones de tratamiento. (17)

12

CAPITULO II

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

2. PROBLEMA

Frente a la velocidad con la que las bacterias logran desarrollar resistencia a fármacos

tradicionales y ya que la producción de nuevas moléculas es lenta, el uso de plantas con

fines terapéuticos es de gran utilidad, ya que de ellas son obtenidas innumerables

sustancias químicas. Estudios recientes han demostrado que los vapores generados por

los aceites esenciales de plantas poseen efectos antibacterianos, siendo estas nuevas

alternativas eficaces para el control de las infecciones bacterianas. (1)

La medicina natural es considerada como una de las alternativas terapéuticas en todo el

mundo, especialmente en países tercermundistas en donde el uso empírico de las plantas

ha sido una opción por su bajo costo y fácil acceso.

Ecuador es una región privilegiada en el mundo por presentar una biodiversidad

enriquecida con innumerables especies vegetales, estos últimos años han sido

investigadas numerosas especies de plantas y han reportado efectos fitoterapéuticos. Es

el caso de la Lantana camara que gracias a investigaciones en varios países como

Colombia, Venezuela y Cuba se ha utilizado como antimicrobiano, antifúngico,

antiasmático, etc. Es por ello que con la presente investigación se pretende utilizar su

aceite esencial como alternativa antibacteriana para preservar la salud de la cavidad oral

frente a microorganismos, tales como el Staphilococcus aureus. (3)

El Staphilococcus aureus, conocido comúnmente como estafilococo áureo o dorado, es

una bacteria anaerobia facultativa grampositiva productora de coagulasa y catalasa que

se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo, estimándose que una de cada

tres personas se halla colonizadas, pero no infectadas. Puede producir una amplia gama

de enfermedades, que van desde infecciones cutáneas y de las mucosas relativamente

benignas, hasta enfermedades de riesgo vital. Además, también puede afectar al aparato

gastrointestinal, ya sea por presencia física de Staphilococcus aureus o por la ingesta de

la enterotoxina estafilocócica secretada por la bacteria. (4)

13

2.1. OBJETIVO

2.1.1. Objetivo General

Determinar el efecto inhibitorio del aceite esencial de la planta Lantana camara

“Supirosa” sobre el microorganismo Staphilococcus aureus.

2.1.2. Objetivos específicos

Obtener aceite esencial de las hojas y flores de la planta Lantana camara mediante la

técnica de hidrodestilación.

Evaluar el halo de inhibición del microorganismo Staphilococcus aureus frente al aceite

esencial de Lantana camara al 100% en la caja Petri a las 24 horas.

Evaluar el halo de inhibición del microorganismo Staphilococcus aureus frente al aceite

esencial de Lantana camara al 100% en la caja Petri a las 48 horas.

Comparar el halo de inhibición del aceite esencial de Lantana camara al 100% de

concentración frente al Gluconato de Clorhexidina al 0.12%.

14

2.2.JUSTIFICACIÓN

A lo largo del último siglo la comunidad científica ha logrado grandes avances en la

creación de nuevos compuestos químicos cuyo objetivo ha sido la inhibición y evitar la

proliferación de bacterias, su resultado ha hecho que disminuyan ciertas enfermedades

que muchas veces han ocasionado verdaderas epidemias.

Es un hecho que estas investigaciones han tenido éxito y se han prolongado a todas las

áreas de la salud, en Odontología se han implementado sustancias naturales en enjuagues

bucales, pastas dentales, cambiando de esta forma la actitud hacia lo ecológico y natural.

(29) Es por ello, que con el presente trabajo se busca recolectar información actual de

extractos de sustancias naturales que actúen sobre microorganismos que afectan la

cavidad oral, así como también que sirva de base para los profesionales en Odontología

para aplicar en la práctica profesional.

La mayoría de las plantas contienen propiedades medicinales y efectos fisiológicos

múltiples, debido a que poseen más de un principio activo, estos corresponden a

compuestos químicos propios de la planta, es por esto que existe un gran interés por parte

de los investigadores en descubrir los métodos y sustancias naturales que posean

propiedades antibacterianas. (30)

Con el afán de encontrar diferentes alternativas para combatir las enfermedades causadas

por bacterias podemos determinar que las plantas producen compuestos con propiedades

antimicrobianas y pueden ser empleadas como agentes biosidas sobre cierto tipo de

microorganismos es por eso que esta investigación propone evaluar el efecto

antibacteriano in vitro del aceite esencial de “Lantana Camara” (Supirosa), sobre el

Staphilococcus aureus, un agente que normalmente puede encontrárselo en cualquier

zona anatómica del cuerpo humano (mucosas, piel), pero al proliferar puede volverse

patógeno produciendo diferentes afecciones a nivel de la cavidad oral como queilitis

angular, algunas infecciones endodónticas, parotiditis y más recientemente una forma de

mucositis oral en pacientes mayores dependientes de nutrición parenteral, niños

inmunocomprometidos, pacientes con enfermedades sistémicas como artitis reumatoide

y diabetes mellitus,(23) (24) también es causante de foliculitis, impétigo, forúnculos y

celulitis.(3)

15

Los seres humanos son un reservorio natural del Staphilococcus aureus, entre el 30 y el

50% de los adultos sanos están colonizados, y entre el 10 y el 20% se mantienen

colonizados permanentemente. Esta bacteria forma parte de la microbiota normal del ser

humano y tiene colonización selectiva de narinas, pliegues intertriginosos, perineo, axilas

y vagina, no obstante, las personas colonizadas tienen un riesgo mayor de sufrir

infecciones. (5)

La observación, identificación, descripción e investigación experimental de los efectos

de las drogas utilizadas en la medicina tradicional es un concepto reciente de la

etnofarmacología, surgido en la década de los 60’s en el ámbito de los agentes

psicoactivos que han ayudado a grandes farmacéuticas hacer uso de las plantas y su

potencial para obtener agentes terapéuticos que ayuden al tratamiento de algunas

enfermedades de gran prevalencia entre la población. (3)

En el Ecuador se la conoce como Supirosa es un arbusto que se utiliza como ornamental

y como cercas vivas, se originó en América Central y en el Ecuador se encuentra ubicada

principalmente en la parroquia de Pomasqui y al sur de Quito, también creciendo de forma

natural en terrenos baldíos. (3)

El aceite esencial es obtenido de las partes de la planta como hojas, flores, tallos y frutos,

la composición y nivel antimicrobiano que alcanza varía de acuerdo a estas. (6)

En el caso de la Lantana camara sus hojas y flores fueron las que se usaron para extraer

el aceite esencial y con esto su compuesto activo diclorometano, el mismo que es usado

en la industria farmacéutica, para la fabricación de esteroides, antibióticos, y vitaminas.

El presente proyecto demostró que el componente principal del aceite esencial de esta

planta tiene propiedades antibacterianas y estudios realizados en diferentes países como

Colombia, Perú y Cuba demuestran el poder bactericida contra microorganismos como el

Staphilococcus aureus. (3)

https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Colonizaci%C3%B3n_bacteriana&action=edit&redlink=1

https://es.wikipedia.org/wiki/Microbiota_normal

https://es.wikipedia.org/wiki/Narina

https://es.wikipedia.org/wiki/Perineo

https://es.wikipedia.org/wiki/Axila

https://es.wikipedia.org/wiki/Vagina

16

2.3.HIPÓTESIS

a. H1: La eficacia antibacteriana del aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de

concentración tiene efecto inhibitorio sobre Staphilococcus aureus.

b. H0: La eficacia antibacteriana del aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de

concentración no tiene efecto inhibitorio sobre Staphilococcus aureus.

c. H2: El aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de concentración tiene efecto

inhibitorio sobre Staphilococcus aureus en 24 horas de exposición

d. H0: El aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de concentración no tiene efecto


e. H3: El aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de concentración tiene efecto


f. H0: El aceite esencial de “Lantana camara” al 100% de concentración no tiene efecto


17

CAPITULO III

METODOLOGÍA

3. Tipo de Diseño de la Investigación

Basándonos en las características de la investigación y por los objetivos planteados se

determina un estudio de tipo experimental “in vitro”, transversal, prospectivo, analítico y

bibliográfico.

Investigación experimental: se debe a que se trabajó con tres discos de papel blanco

humedecidos con aceite esencial de Lantana camara al 100%, otro disco blanco

humedecido de Gluconato de clorhexidina al 0,12% y por ultimo con suero fisiológico al

0.9%.

In vitro: debido a que ésta investigación incluyó modelos prácticos en cultivo

bacteriológicos enriquecidos y fueron analizados en un laboratorio.

Transversal: se recolectaron datos sobre la investigación en un solo momento y en un

tiempo único.

Prospectivo: los datos se registraron en un periodo de tiempo determinado desde el

desarrollo del estudio en el presente hacia su posterior evolución y se midió halos de

inhibición para saber si existe efecto antibacterial o inhibitorio.

Analítico: porque se investigó y analizó las causas del efecto antibacteriano de la Lantana

camara sobre el Staphilococcus aureus.

Bibliográfico: porque se basó en varios autores de textos, libros, revistas y artículos que

nos aportaron información confiable.

18

3.1.POBLACIÓN Y MUESTRA

3.1.1. Población

Conformadas por un número infinito de cepas de Staphilococcus aureus ATCC 29213.

3.1.2. Tamaño de la muestra

La selección de la muestra se realizó de manera intencional y de tipo no probabilístico ya

que los elementos elegidos son a conveniencia del investigador y no al azar.

Se realizó la siembra del microorganismo puro; Staphilococcus aureus ATCC 29213, con

la asesoría y ayuda de la profesional del laboratorio de microbiología. Se efectuaron 15

inoculaciones en un tiempo de exposición de 24 y 48 horas, con tres repeticiones en cada

caja Petri (aceite esencial de Lantana camara al 100%, gluconato de clorhexidina al

0,12% y suero fisiológico al 0.9% como control negativo.).

3.1.3. UNIDAD DE MUESTRA

Se trabajó con una cepa de Staphilococcus aureus ATCC 29213 donado e identificado por

el laboratorio clínico microbiológico del Hospital de Tercer nivel y de Especialidades

Eugenio Espejo.

3.2.Criterios de inclusión y exclusión

3.2.1. Criterios de inclusión

Microorganismos libres de contacto con soluciones antimicrobianas.

Cepa pura de Staphilococcus aureus.

Aceite esencial de Lantana camara “Supirosa”.

3.2.2. Criterios de exclusión

Cultivos manipulados por el investigador

Cajas Petri plásticas

19

3.2.3. Variables

3.2.4. Conceptualización de las variables

Variables independientes

Extracto esencial de Supirosa (Lantana camara) al 100% sustancia obtenida por medio

de destilación de partes de planta silvestre. (16)

Variable dependiente

Inhibición de Staphilococcus aureus que representa la sensibilidad del microorganismo

frente al antimicrobiano (2)

Variables de control

Gluconato de clorhexidina al 0.12% es un agente antiplaca con alto grado de confiabilidad

demostrada por la estructura química que posee, utilizado de una manera racional aporta

un medicamento a tener en cuenta en sus múltiples aplicaciones en afecciones

odontológicas. (28)

Suero fisiológico al 0.9%, es una disolución acuosa de sal de mesa en agua, hasta cierto

grado compatible con los organismos vivos. (26)

https://es.wikipedia.org/wiki/Disoluci%C3%B3n

https://es.wikipedia.org/wiki/Ser_vivo

20

3.2.5. Ejecución de variables

VARIABLE DEFINICIÓN TIPO CLASIFICACIÓN

INDICADOR CATEGÓRICO

ESCALA DE

MEDICIÓN

Aceite esencial (Lantana

camara)

Elemento

obtenido por

destilación de

hojas y flores de

la planta. (1)

Independ

iente

Cuantitativa

Concentración del

aceite esencial de

lantana camara al

100%

24 horas

48 horas

Nominal

1

2

Gluconato de clorhexidina

Potente

antiséptico

usado para el

control de placa

bacteriana (29)

Independ

iente

Cuantitativa

Concentración al

0.12%

Nominal

1

Suero Fisiológico

Disolución

acuosa

compatible con

los organismos

vivos (26)

Independ

iente

Cuantitativa

Concentración

0.9%

Nominal

1

Inhibición de

Staphilococc

us aureus

ATCC 29213

Sensibilidad del

microorganismo

frente al

microbiano

Dependie

nte

Cuantitativa

Diámetro del halo

de inhibición en

(mm)

Nula (-) hasta

8mm Sensible (+)

9-14mm Muy

sensible (++) 15-

19mm Sumamente

sensible (+++)

mayor de 20mm

Ordinal

Tabla 1 Cuadro de la ejecución de variables

Fuente: V. Valencia 2017

21

3.3.Procedimientos y técnicas

3.3.1. Materiales y Métodos

3.3.2. Preparación del aceite esencial de Lantana camara (Supirosa)

Fue realizado en el laboratorio de la Facultad de Química de la Universidad Central del

Ecuador, los materiales usados para el proceso fueron:

Balón de dos bocas

Manta calefactora

Refrigerante longo

Cabeza de destilación

Termómetro

Nevera

Pinzas

Colector

Matraz Erlenmeyer

Embudo de presión compensada

Soportes

Reactivos Hojas y flores trituradas de Supirosa (Lantana camara)

Procedimiento Se utilizaron 5 kilos de hojas y flores adquiridas de los parques de Pichincha-

Quito (Ecuador), las mismas que fueron escogidas y clasificadas, luego se las

limpió para dejarlas secar por un periodo de 3 semanas, después se las trituró como

se muestra en las figuras 3,4 y 5.

Fig. 4 Supirosa Recolectada

Fuente: Investigación – V.

Valencia 2017

Fig. 3 Supirosa después de

3 semanas


Valencia 2017

22

El siguiente paso fue la extracción del aceite esencial de la Supirosa mediante el método

de hidrodestilación por arrastre de vapor de agua como muestran las figuras 6, 7, 8 y 9.

Fig. 5 Trituración manual de las

hojas y flores (Supirosa)


Valencia 2017

Fig. 6 Proceso de las hojas


Valencia 2017

Fig. 7 Hidrodestilación por

arrastre de vapor de agua


Valencia 2017

23

Fig. 8 Obtención del aceite


Valencia 2017

Fig. 9 Aceite esencial de Supirosa al 100%


24

3.3.3. Materiales para realizar el cultivo

3.3.4. Materiales para realizar el estudio microbiológico

Fue realizado en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología

de la Universidad Central del Ecuador, los materiales y sustancias que se usaron

fueron:

Estufa

Incubadora

Muestra biológica de cepas del microorganismo Staphilococcus aureus ATCC

29213

Cajas Petri plásticas de 90x21mm (#15)

Medios de cultivo agar sangre (#15)

Pinzas

Mechero

Micropipetas desechables

Discos de papel filtro de 6 mm estériles

Hisopos estériles

Discos de papel absorbentes

Gradilla

Refrigeradora

Cabina de Seguridad Biológica

Aceite esencial de Lantana camara “Supirosa”

Suero fisiológico

Clorhexidina al 0.12%

Tubos de ensay0

Gradilla

Utilería

Gorro

Mascarilla

Mandil

Guantes

Libreta de apuntes

Ficha para lectura de los halos

Regla milimetrada

25

3.3.5. Procedimiento y técnica

Activación de la cepa Staphilococcus aureus ATCC 29213

La cepa de Staphilococcus aureus ATCC 29213, fue obtenida gracias a la donación

realizada por el Hospital de Tercer nivel y de Especialidades Eugenio Espejo y fue

conservada a temperatura de 2 a 80C para su posterior activación en el laboratorio de

Microbiología de la Facultad de Odontología de la Universidad Central. Se realizó el auto

clavado durante media hora a 1210 C de los discos de control blancos y los hisopos, así

como también se realizó la activación de la cepa de Staphilococcus aureus ATCC 29213

(Figuras 10,11, 12 y 13)

Fig. 12 Hisopos


Fig. 10 Staphylococcus aureus

ATCC 29213


Valencia 2017

Fig. 11 Discos de filtro blancos


26

Una vez esterilizados los materiales para la activación de la cepa Staphilococcus aureus

ATCC29213, se procedió a realizar el cultivo en un tubo de ensayo que contenían caldo

de nutriente (Fig. 13) y la bacteria que se encontraba en pequeñas porciones (Fig. 14). La

activación se realizó mediante la técnica de contacto (Fig. 15).

Preparación e inoculación en los medios de cultivo

Se realizó un medio de cultivo en 15 cajas Petri con agar sangre para el microorganismo

Staphilococcus aureus. (Figura 14)

Fig. 14 Medios de cultivo en agar sangre


Fig. 13 Cultivo en tubo de ensayo

que contenía caldo de nutrientes


27

Fueron colocadas las 15 cajas en la cabina de seguridad biológica para proceder a la

siembra o inoculación, se hizo uso de hisopos estériles y se procedió a sembrar con el

método de siembra por estrías en placa y el método de extensión en placa, para ello con

el hisopo se toma una muestra y a continuación se hacen estrías en zigzag sobre toda la

superficie solida del agar de la caja Petri. (Figura 15)

Fig. 15 Cajas en la Cabina de seguridad biológica


Fig. 16 Inoculación del Staphilococcus aureus


28

Colocación de los discos en las placas inoculadas

Haciendo uso del método de antibiograma de difusión en agar Kirby- Bauer se colocaron

con una pinza estéril 3 discos de papel filtro en cada caja Petri continuando el siguiente

orden: (Figuras 17)

Disco de papel filtro impregnado con el aceite esencial de lantana camara al 100%

Disco de papel filtro impregnado con gluconato de clorhexidina al 0.12%

Disco de papel filtro impregnado con Suero fisiológico al 0.9%

Posteriormente se incubó 15 cajas Petri inoculadas con Staphilococcus aureus a una

temperatura de 35± 2 0 C por 24 horas y subsiguientemente por 48 horas. (Figura 18)

Fig. 18 Incubación


Fig. 17 Colocación de los Discos


29

Lectura e interpretación de los resultados

Pasado el período de incubación se procedió a realizar la lectura del diámetro de los halos

de inhibición alrededor de los discos como una interpretación de tipo cuantitativa,

mediante la técnica de observación directa y con la ayuda de una regla milimetrada

flexible, la distancia de éste círculo es igual a la actividad inhibitoria de las sustancias.

Tomando como reseña la escala de sensibilidad definida por Duraffourd. (Figuras 19,20)

Sensibilidad definida por Duraffourd.

Si fue inferior o igual a 8 mm Nula (-)

Si fuera Igual o mayor de 9-14mm Sensible (=+)

Si fuera de 15-19mm Muy sensible (++)

Si fuera igual o superior a 20mm Sumamente sensible (+++)

Tabla 2 Sensibilidad definida por Duraffourd


Fig. 19 Medición del Halo de

inhibición

Fuente: Investigación – V. Valencia

2017

Fig. 20 Halo de inhibición del

Staphilococcus aureus

Fuente: Investigación – V. Valencia

2017

30

Eliminación de los deshechos

Al terminar con la lectura de lo halos de inhibición y obteniendo los resultados se procedió

a la eliminación interna de los deshechos, se colocó las 15 cajas Petri en la autoclave para

esterilizarlas, luego se colocó en una funda de color roja para deshechos infecciosos

indicando que es contaminante, por último, se colocó en un recipiente de almacenamiento

temporal, para finalmente trasladarlo a su disposición final. (Figura 21,22)

Fig. 21 Cajas Petri en autoclave


Fig. 22 Almacenamiento Temporal


31

3.4. Aspectos éticos

Por ser una investigación in vitro, se solicitó la aprobación de las autoridades

correspondientes tanto de la Facultad de Ingeniería Química como de la Facultad de

Odontología de la Universidad Central del Ecuador para la elaboración del trabajo

practico del laboratorio en cuanto a la extracción del aceite como de los cultivos

microbianos.

32

CAPITULO IV

ANALISIS E INTERPRETACION

4. RESULTADOS

4.1.1. Análisis de resultados

Con los datos obtenidos de los resultados de la medición de los halos de inhibición se

procedió a registrar los datos en una tabla de Excel para luego analizarlos mediante un

método estadístico con el fin de determinar si existen diferencias significativas entre las

diferentes sustancias y el microrganismo estudiado. Las pruebas que se usaron fueron No

paramétricas Mann Whitney, Kruskal Wallis, Wilcoxon las mismas que para cada prueba

de Hipótesis, se compara el valor de significación (Sig) con el valor 0,05 (95% de

confiabilidad)

Si el nivel de significación es superior a 0,05 se acepta Ho (hipótesis inicial)

Si el nivel de significación es inferior a 0,05 se acepta Ha (hipótesis alterna).

RESULTADOS DE INHIBICIÓN SOBRE STAPHYLOCOCCUS AUREUS

#1 #2 #3 #4 ACEITE ESENCIAL DE LANTANA CAMARA

REPETICIONES 100% (24H)

100% (48H)

SUERO FISIOLÓGICO

CLORHEXIDINA 0.12%

1 11 16 2 17

2 10 15 1 17

3 12 16 2 18

4 12 17 0 19

5 12 17 2 18

6 12 17 0 18

7 12 17 3 18

8 12 17 0 17

9 13 17 0 19

10 14 17 0 19

11 14 18 3 17

12 13 17 2 18

13 14 18 3 19

14 12 17 2 19

15 14 17 2 19

Tabla 3 Tabla de resultados


33

Prueba de Normalidad

Ho: Las muestras provienen de poblaciones con distribución Normal

Ha: Las muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal

En la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk, los valores del nivel de significación (Sig)

son inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), por lo tanto, se acepta Ha, esto es las

muestras NO provienen de poblaciones con distribución Normal, entonces para la

comparación de grupos se utiliza pruebas no paramétricas: Wilcoxon, Kruskal Wallis.

Pruebas de normalidad

Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk

Estadístico Gl Sig. Estadístico gl Sig.

LANTANA CÁMARA 100% (24H) 0,253 15 0,011 0,873 15 0,037

LANTANA CÁMARA 100% (48H) 0,371 15 0,000 0,780 15 0,002

SUERO FISIOLÓGICO 0,273 15 0,004 0,819 15 0,006

CLORHEXIDINA 0.12% 0,251 15 0,012 0,799 15 0,004

Tabla 4 Pruebas de normalidad


Pruebas no paramétricas de Wilcoxon: Comparación entre 24 horas y 48 horas

Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de

probabilidad (Medias, medianas similares)

Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las

poblaciones.

Estadísticas de muestras emparejadas

Media N

Desviación

estándar

Media de error

estándar

Par 1 LANTANA CÁMARA 100%

(24H) 12,47 15 1,187 0,307

LANTANA CÁMARA 100%

(48H) 16,87 15 0,743 0,192

Tabla 5 Comparación entre 24H y 48H

Fuente: Ing. Jaime Molina

34

Gráfico 1 Pueba de Wilcoxon


De la Prueba de Wilcoxon, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba

bilateral) = 0,000) es inferior a 0,05 (95% de confiabilidad), luego se acepta Ha, esto es,

existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones, mayores valores se

tienen a las 48 horas.

35

Prueba no paramétrica de Kruskal Wallis: Comparación a las 24 Horas




poblaciones.

Descriptivos

24 HORAS

N

Medi

a

Desviació

n estándar

Error

estándar Mínimo Máximo

LANTANA CÁMARA

100% 15 12,47 1,187 0,307 10 14

SUERO

FISIOLÓGICO 15 1,47 1,187 0,307 0 3

CLORHEXIDINA

0.12% 15 18,13 0,834 0,215 17 19

Total 45 10,69 7,077 1,055 0 19

Tabla 6 Comparación a las 24H Fuente: Ing. Jaime Molina

36

Comparación de medidas

Gráfico 2 Comparación de medidas


En la gráfica se observa que la media con los mayores valores es la de CLORHEXIDINA

0.12% con un valor de 18,13 mm, le sigue en valor la media de la LANTANA CAMARA

100% con un valor de 12,47 y al final el SUERO FISIOLÓGICO con una media de 1,47.

Para determinar si la diferencia es significativa se realiza la prueba no paramétrica

Kruskal Wallis

12,47

1,47

18,13

LANTANA CÁMARA 100% SUERO FISIOLÓGICO CLORHEXIDINA 0.12%

Comparacion de Medias24 Horas

37

Prueba de Kruskal Wallis:

Gráfico 3 Muestras Independientes a las 24H


De la Prueba de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba


existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las medias

de las muestras son similares.

38

Prueba de dos a dos Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos:

Gráfico 4 Prueba de dos a dos


Son similares (Sig. mayores a 0,05) Ninguna

No son similares (Sig. menores a 0,05) CLORHEXIDINA 0.12% no es similar a LANTANA CÁMARA 100%

SUERO FISIOLÓGICO no es similar a CLORHEXIDINA 0.12%

LANTANA CÁMARA 100% no es similar a CLORHEXIDINA 0.12%

39

Prueba no paramétrica de Kruskal Wallis: Comparación a las 48 Horas




poblaciones.

Descriptivos

48 HORAS

N Media

Desviación

estándar

Error

estándar Mínimo

Máxim

o

LANTANA CÁMARA

100% 15 16,87 0,743 0,192 15 18

SUERO FISIOLÓGICO 15 1,47 1,187 0,307 0 3

CLORHEXIDINA

0.12% 15 18,13 0,834 0,215 17 19

Total 45 12,16 7,716 1,150 0 19

Tabla 7 Comparación a las 48 H


Gráfico 5 ComparacIón de medidas a las 48 H

Autor: Ing. Jaime Molina

En la gráfica se observa que la media con los mayores valores es la de CLORHEXIDINA

0.12% con un valor de 18,13 mm, le sigue en valor la media de la LANTANA CAMARA

100% con un valor de 16,87 y al final el SUERO FISIOLÓGICO con una media de 1,47.

Para determinar si la diferencia es significativa se realiza la prueba no paramétrica

Kruskal Wallis:

Prueba de Kruskal Wallis:

16,87

1,47

18,13

LANTANA CAMARA 100% SUERO FISIOLÓGICO CLORHEXIDINA 0.12%

Comparacion de Medias48 Horas

40

Gráfico 6 Muestras independientes a las 48 H


De la Prueba de Kruskal-Wallis, el valor del nivel de significación (Sig. asintótica (prueba


existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las medias

de las muestras son similares.

41

Prueba dos a dos Para determinar cuáles son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos:

Gráfico 7 Prueba dos a dos a las 48 H


Son similares (Sig. mayores a 0,05) Ningunas

No son similares (Sig. menores a 0,05)

CLORHEXIDINA 0.12% no es similar a LANTANA CÁMARA 100%

SUERO FISIOLÓGICO no es similar a CLORHEXIDINA 0.12%

LANTANA CÁMARA 100% no es similar a CLORHEXIDINA 0.12%

42

CAPITULO V

Discusión

En la presente investigación, se decidió recolectar la especie Lantana camara (Supirosa),

basándonos en estudios de Carvajal (2) quien demostró que la L. camara. Y sus

componentes presentaron actividad antibacteriana en un rango de concentraciones

inocuas para células de mamíferos, también por encontrarse en grandes cantidades en

diferentes partes del país, lo que hace factible su uso en estudios in vivo como potenciales

agentes antibacterianos, después de determinar cuál o cuáles son los principios activos

responsables de esta actividad.

Los diversos estudios determinan la importancia del uso de las plantas medicinales para

los tratamientos de distintas patologías, a su vez, mencionan que de los componentes con

mayor características de efecto antimicrobiano, antinflamatorio y antifúngico son los

aceites esenciales que afirman que se pueden usar como una alternativa medicinal,

igualmente la presente investigación fue orientada a la medicina alternativa en

odontología. (35)

La actividad biosida del aceite esencial de Lantana camara ha sido probada en varios

microrganismos, Estreptococcus mutans, Echerichia coli, Enterococcus feacalis y

hongos como Cándida albicans. Sin embargo en esta investigación se comprobó el efecto

antibacteriano sobre S. aureus similar al estudio realizado en el artículo científico

elaborado por Anastasia Cruz Carrillo, (1) en donde reportó que el extracto de L. camara,

evaluado por la técnica de difusión en disco, posee actividad alta contra S. aureus con

halos de inhibición de 14,6 y 14,8mm de diámetro. En esta investigación, se pudo

encontrar efectividad intermedia ante S. aureus con zonas de inhibición de 12mm de

diámetro en promedio.

F. Reyes (33) en su artículo afirmar que los vapores generados por algunos aceites

esenciales de plantas como es el caso de la L. camara y de especias cumplen con la

actividad necesaria para ser considerados como antimicrobianos naturales, y al evaluar

su actividad frente a microorganismos de importancia odontológica como el del S.

aureus, un principal agente oportunista, se ha buscado nuevos tratamientos alternativos

ante esta especie microbiana, es por esto que dimos a conocer una sustancia natural que

puede enfrentarse a este patógeno.

Estudios realizados muestran que el método de hidrodestilado para la elaboración de

aceites esenciales, facilita la accesibilidad a un buen control del volumen de extracción,

en cuanto a la recuperación de sustancias a partir de plantas, lo que concuerda con esta

investigación, (37) ya que se extrajo un aceite esencial de alto rendimiento, muy útil y

demostrando en su porcentaje del 100% su efectividad sobre Staphilococcus aureus y

pruebas biológicas.

Por la alta demanda de medicamentos naturales ante los sintéticos, se comparó el efecto

de un producto natural frente a un producto químico a la vez, concordando con la

propuesta del estudio, (1) puesto que este estudio se comparó con el gluconato de

clorhexidina al 0.12%, siendo uno de los antimicrobianos muy utilizados en el área de

43

odontología. Este último fue necesario para determinar un control positivo y una

comparación a su efecto en relación a las sustancias naturales, enfrentándola a la cepa de

Staphilococcus aureus ATCC 29213, por el método de difusión en disco, en donde se

realizó 15 repeticiones, considerando que el efecto antimicrobiano debe evaluarse en un

tiempo determinado, coincidiendo con el estudio de Anastasia (1) en donde se utilizó S.

aureus frente a Lantana camara, cuyo efecto fue de alto grado a las 24 horas, lo que se

comprobó en nuestra investigación a las 24 y 48 horas.

De los resultados obtenidos se apreció la evaluación antimicrobiana de la sustancia

natural de Lantana camara ante Staphilococcus aureus, en donde las medidas inhibitorias

de concentración más altas entre las 24 y 48 horas fueron del gluconato de clorhexidina

al 0.12%, de 18.13mm de diámetro, además se realizó un análisis individual de las

repeticiones en donde se verifica una tendencia a la baja en relación al tiempo, seguida

del aceite esencial de Lantana camara al 100% con una medida de inhibición de 12.47mm

y 16.87mm de diámetro respectivamente, con un análisis de cada una de las repeticiones

en donde se demostró tener más tendencia a incrementar su efecto a las 48 horas.

44

CAPITULO VI

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

CONCLUSIONES

Se determinó que gracias a la técnica de hidrodestilación por vapor de arrastre es factible

la extracción del aceite esencial de las hojas y flores de la planta Lantana camara, así

como fue posible comprobar que el aceite esencial es más efectivo frente al extracto de

la misma planta.

Se comprobó el efecto inhibitorio del aceite esencial de Lantana camara en una

concentración del 100%, frente al Staphilococcus aureus, dándonos como resultado una

media de 12.47mm y 16.87mm de diámetro y el gluconato de clorhexidina al 0.12% con

una media de 18.13mm de diámetro, a las 24y 48 horas de exposición respectivamente.

También se estableció que al evaluar los halos de inhibición del microorganismo

Staphilococcus aureus ante el aceite esencial de Lantana camara a las 24 horas tubo

resultados favorables, pero a las 48 horas su actividad antibacterial aumento, siendo

similar al de la gluconato de clorhexidina al 0.12%.

Concluyendo de esta forma que el aceite esencial de la planta Supirosa tiene un buen

efecto inhibitorio frente al microorganismo Staphilococcus aureus. Sin embargo, aún no

se cuenta con información suficiente para poder darles aplicaciones reales, por lo que se

abre una puerta de oportunidad para seguir investigando y aplicarlas en el área

odontológica.

Relacionamos la efectividad antibacteriana del aceite esencial de la planta Lantana

camara al 100% frente al gluconato de clorhexidina al 0.12% como control positivo en

cultivos bacterianos de Stafilococus aureus a las 24 y 48 horas de exposición, en donde

el gluconato de clorhexidina al 0.12% a pesar de obtener porcentajes de acción más

elevado, no aumento su efecto a través del tiempo, mientras que el aceite esencial de

Lantana camara potencio su efecto a las 48 horas.

45

RECOMENDACIONES

Se recomienda el uso de este estudio como base para futuras investigaciones en cuanto a

los componentes, concentración, pruebas biológicas, que permitan establecer el uso de

los efectos antimicrobianos que posee la Lantana camara.

Es necesario la valoración de la especie vegetal Lantana camara, por ser parte de la

medicina tradicional, por lo tanto, se recomienda el uso de la misma en el área

Odontológica desde un punto de vista médico alternativa, dirigida principalmente a áreas

rurales en donde el consumo de medicamentos químicos es escaso ya sea por condiciones

económicas o geográficas.

Debido a la tendencia actual del uso de productos naturales se recomienda enfocar los

estudios a la implementación de los principios activos de las plantas naturales en

productos del cuidado oral, con el fin de disminuir el uso de químicos que ocasionalmente

causan resistencia bacteriana o alergias en personas que los consumen.

Para la extracción del aceite, se recomienda el uso de hojas grandes y secas para su

posterior preparación, ya que nos proporciona un mayor rendimiento, muy necesario para

el estudio biológico.

Es recomendable el uso del aceite esencial de Lantana camara como agente

antimicrobiano frente a otras bacterias causantes de patologías orales.

Gracias a los beneficios sobre el uso de productos naturales se recomienda informar a los

pacientes la utilización de las mismas como coadyuvante en los tratamientos

Odontológicos, y de esta manera ayudaremos a la disminución de la utilización de

químicos que son altamente tóxicos.

Se sugiere además que la planta Lantana camara puede ser utilizada como una sustancia

alternativa y eficaz en el tratamiento de infecciones estafilocócicas a nivel Odontológico

además que no posea efectos colaterales.

Se recomienda el uso de la Lantana camara como principio activo en colutorios o

empastes para uso de infecciones bacterianas.

46

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49

ANEXOS

RENUNCIA AL TRABAJO ESTADÍSTICO

Anexo 1 Renuncia Al Trabajo Estadístico

50

PETICION DEL MICROORGANISMO AL HOSPITAL EUGENIO ESPEJO

Anexo 2 Solicitud Al Hospital De Tercer Nivel Y De Especialidades Eugenio Espejo

Para Petición Del Microrganismo Staphilococcus Aureus, Cepa ATCC 29213

51

SOLICITUD PARA EL USO DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOÍA

Anexo 3 Solicitud Para El Uso De Microbiología De La Facultad De Odontología De

La Universidad Central Del Ecuador.

52

CERTIFICADO DEL USO DEL LABORATORIO DE QUÌMICA DE LA

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Anexo 4 Certificado Del Uso Del Laboratorio De Química De La Universidad Central

Del Ecuador

53

SOLICITUD PARA EL MANEJO DE DESHECOS

Anexo 5 Solicitud Para El Manejo De Deshechos

54

CERTIFICADO DEL SUBCOMITÈ DE ÈTICA

Anexo 6 Certificado Del Subcomité De Ética De La Universidad Central Del Ecuador

55

CERTIFICADO DEL SISTEMA URKUND

Anexo 7 Certificado Del Sistema Antiplagio URKUND

56

CERTIFICADO DEL ABSTRACT

Anexo 8 Certificado Del Abstract

57

Anexo 9 REPOSITORIO

58

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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE …La medicina tradicional ha ido evolucionando a lo largo del tiempo su desarrollo ha ocasionado que grandes industrias farmacéuticas