Vigilancia Epidemiológica de fiebre Zika basada en · PDF fileprevención y control del Dengue Componentes técnicos: ... • Tiene un genoma de RNA de cadena positiva, de cadena

Vigilancia Epidemiológica de

fiebre Zika basada en Laboratorio

Instituto de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos“Dr. Manuel Martínez Báez”

Gestión Integrada para la prevención y control del Dengue

Componentes técnicos:

1.Epidemiología -> Vigilancia integrada y preparación a

brotes

2.Laboratorio (incluye la vigilancia para CHIKV y

ZIKAV)

3.Atención al paciente

4.Manejo Integrado de Vectores (MIV)

5.Gestión del ambiente

6.Vacuna (preparación ante la eventual introducción)

• El virus Zika (ZIKAV) es un arbovirus del género flavivirus; filogenética y antigénicamente

muy relacionado con DENV, virus de la Fiebre Amarilla, VON y de la Encefalitis de San Luis

• Pertenece a la Familia Flaviviridae

• Es transmitido por mosquitos del genero Aedes

• Esta filogenéticamente y antigénicamente relacionado con el virus Spondweni Presencia de

tropismo neurológico = Sindrome de Gullain Barré

• Tiene un genoma de RNA de cadena positiva, de cadena sencilla de aproximadamente 10.7

Kb

• Se han identificado tres linajes: Asiático, Oeste de África y Este de África

Generalidades del virus

Plourde AR, Bloch EM. Emerg Inf Dis 2016; 22 (7): 1185-1992

Generalidades del virus

• El ZIKAV fue aislado por primera vez en 1947, en un mono Rhesus centinela (No.

766), en la selva de Zika, cerca de la cuidad de Entebbe, Uganda, a un costado de

Lago Victoria

• En 1948 fue aislado por primera vez a partir de vector Aedes africanus, como

resultado de vigilancia entomovirológica

• La infección en seres humanos se demostró por estudios serológicos en 1952

(Uganda y Tanzania) y en 1968 se logró aislar el virus a partir de muestras de suero

humano en Nigeria

• Actualmente en el Continente Americano esta circulando el linaje Asiático.

Genoma de Flavivirus.“Primer reto”

WNVDENVESLZIKAYF

Reacción cruzada presente enreacciones serológicas pero

ausente en protocolos de Biología Molecular

Filogenia de Flavivirus

Cercanía filogenética con Spondweni: = Factor de asociación a casos con daño neurológico

Segundo reto: Clínica: ZIKA vs DEN-CHIK

Fuente: adaptado de Halstead SB et al. Et de la plaquette du Yap State. Department of Helath Services

Síntomas Dengue Chikungunya Zika

Fiebre ++++ +++ +++

Mialgias/artralgias +++ ++++ ++

Edema de extremidades 0 0 ++

Erupción maculopapular ++ ++ +++

Dolor retroocular ++ + ++

Conjuntivitis 0 + +++

Linfadenopatías ++ ++ +

Hepatomegalia 0 +++ 0

Leucopenia/trombocitopenia +++ +++ 0

Hemorragias + 0 0

Tercer reto: Innovación y desarrollo en la Vigilancia por Laboratorio de Arbovirus

• El Tiempo real es la metodología de elección y es la que se está usando en

México

• InDRE - CDC acordaron utilizar protocolo de trabajo unificado

• InDRE promoverá utilizar también RT-qPCR “DUPLEX” (CHIKV-DENV; ZIKAV-

DENV)

• Se desarrollan métodos para detección de hasta 10 marcadores diferentes en

reacciones de amplificación independientes

• Plataforma de ultima generación utilizando microfluidos y proceso único y

cerrado (extracción y amplificación)

• Las metodologías en desarrollo incluyen el utilizar plataformas en las cuales se

puedan extraer ARN y al mismo tiempo amplificar, metodologías que serán

utilizadas para analizar también bacterias (Rickettsias, Leptospira).

DGE/InDRE

Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos

División Biología Molecular/Innovación y Desarrollo

A

B

CD

E

Arbovirus y virus hemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y Desarrollo

DGE/InDRELaboratorio de Arbovirus y Virus HemorrágicosDivisión Biología Molecular/Innovación y Desarrollo

Ante la ausencia de sondas especifica:Identificación de especificidad mediante analisis de “High Resolution Melting” (HRM)

Control Positivo

Curvas de Disociación(Control Negativo)

Curvas de Disociación(Control positivo)

Curvas de disociacióndel Control positivo)

Curvas de disociacióndel control

Negativo

Curvas del Control positivo) Curvas del

Control negativo)

Curvas del Control positivo

(Duplicado)

Curvas del Control positivo

(Duplicado)

Escala logarítmica

Escala lineal

Control Negativo

RT-PCR y RT-qPCRSYBR Green - ZIKA

Duplex DENV-ZIKAV

A

B

CD

E

Gráfico de amplificación reacción dual (Controles positivos en la misma mezcla de reacción): A) DENV-1, B) DENV-2, C) DENV-3, D) DENV-4 Y E) ZIKAV. Escala lineal Arbovirus y virus hemorrágicos

División Biología Molecular/Innovación y Desarrollo

• En una sola reacción detección

de cinco virus

• Ahorro de insumos

• Ahorro de tiempo

Duplex DENV-ZIKAV

Gráfico de amplificación reacción dual (Controles positivos en la misma mezcla de reacción): A) DENV-1, B) DENV-2, C) DENV-3, D) DENV-4 Y E) ZIKAV. Escala logarítmica

A

B

C

D

E


DENV-1/ZIKA

A

B

A

B

Gráfico de amplificación reacción dual (Controles positivos en la misma mezcla de reacción): A) DENV-1 y B) ZIKAV

Escala lineal Escala logarítmica


DENV-2/ZIKA

A

B

A

B




DENV-3/ZIKA

A

B

A

B




DENV-4/ZIKA

A

B

A

B




Vigilancia por Laboratorio

Linaje circulando en América.

CDC confirma a InDRE hace 15 días que se pueden utilizariniciadores promovidos por CDC de Fort Collins – R. Lanciotti

Sonda para “SINGLEPLEX” y para “DUPLEX”

Sonda marcada con Texas Red óanálogo y con Quasar 705

Solicitar de manera inmediata a su proveedor de Applied ajustar

Termocicladorpara utilizar el quinto canal

(Quasar 705)

ZIKA - Algoritmo en fase agudaPara búsqueda intencionada –Con circulación autóctona

RT-qPCR

Muestra de suero de 0-5 días de

iniciados los síntomas, según definición de caso

emitido por DGE

+-

DIFERENCIAL

ZIKAV

Se descarta caso

Se confirmacaso

Denv, ChikvLeptospira

Rick, Paludismo

-

VERSION 1.0

ZIKA - Algoritmo en fase aguda para búsqueda intencionada – Con circulación autóctona

• La muestra necesaria para la confirmación de

infección por virus Zika, debe tomarse por

venopunción (5 ml sin usar anticoagulante) entre los

días 0 y 5 de iniciados los síntomas,

• Enviar al LESP 2.5 ml de suero en red de frío (2-8°C),

acompañadas con el formato de estudio

epidemiológico correctamente llenado

• El llenado incorrecto del formato es motivo de

rechazo definitivo

Objetivos de la toma , manejo y envío de muestras al LNR o al LESP

• Realizar Vigilancia Epidemiológica basada en laboratorio de calidad para Entrega de

resultados confiables, en tiempo y forma

• Definir los lineamientos para la toma, manejo y envío de muestras para diagnóstico

de Zika

Toma, manejo y envío de Calidad

= Diagnóstico por laboratorio

de Calidad

Tipo de muestras

Suero, sangre

completa*, LCR

Moscos TejidosOtros (RNA, cDNA)

Tipo de muestras analizadas en laboratorio para Arbovirus (Zika)

* RT-qPCR

Proceso

Tipo de muestra

( Suero, sangre completa*, LCR,

moscos)

Red fría

Documentos completos

Formato de envío con datos clínicos epidemiológicos

completos

Casos especiales para envío a

CCOMS (CDC).

Triple embalaje

(CLASE A)

CALIDAD TOTAL…… DE INICIO A FIN

* RT-qPCR

Experiencias

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Rechazos y justificación del rechazo en la RNLSP de MéxicoTotal Lipémica Hemolizada insuficiente Días de tránsito Sin Registro

20112012 2013

20142015

Mejora continua en la RNLSP reflejo de la disminución de rechazos

Coordinación de Vigilancia Epidemiológica por Laboratorio/DDYR/InDRE/DGE

Experiencias. No cumplir con criterios de aceptación…..

RECHAZOS DEFINITIVOS

VEV vs ARBOVIRUS

Necesario intensificar la vigilancia entomo-

virológica

Aprovechar la ventaja de esta vigilancia.

Búsqueda anticipaday preventiva

ZIKA

ENTOMOLÓGICA

VIROLÓGICA

Perspectivas

DENV (CUATRO SEROTIPOS, GENOTIPOS)

CHIKV

ZIKA

WNV

MAYARO……….

Reto para laSalud Pública

y para el diagnóstico

por laboratorio

“Insumos”InDRE cuenta con insumos

para 1200 reacciones

Perspectivas a mediano plazo

RT-qPCR genérico Dengue

RT-qPCR Chikungunya

RT-qPCR Zika

RT-qPCR FNO

Cuatro canales en termociclador

Propuesta realizada a CDC y OPS en agosto del presente año

Documentos de referencia

Laboratorio de Arbovirus y Virus Hemorrágicos

CISCO: 59410, [email protected]

GRACIAS

mailto:[email protected]




Documents

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