1. Pendahuluan
Pada beberapa dekade terakhir ini, teknologi reproduksi manusia
telah berkembang dengan sangat pesat. Seperti contohnya dalam ruang
lingkup teknologi reproduksi mulai dikenal metode vitrifikasi
sebagai salah satu cara alternative untuk meningkatkan dan
mengembangkan sel oosit manusia, embrio, sperma, dan jaringan gonad
untuk perencanan program bayi tabung atau IVF (In Vitro
Fertilization).
Metode vitrifikasi ini digunakan saat embrio yang diproduksi
secara in vitro berjumlah lebih agar dapat digunakan kembali untuk
mentransfer embrio dikemudian hari dengan cara dibekukan atau
cryopreservation. Vitrifikasi mempunyai dua metode yakni
pendinginan secara cepat dan secara lambat. Metode ini umum
dilakukan karena mudah dan sederhana, tetapi juga diperlukan
keterampilan secara khusus. 2.1 Pengertian
Vitrifikasi adalah suatu proses pembentukan embrio yang
dilakukan secara cepat pada temperature -196 C dengan menggunakan
krioprotektan konsentrasi tinggi sehingga dapat menghindari
terbentuknya kristal es yang dapat merusak membran sel saat
pembekuan.
Saat ini vitrifikasi mempunyai dua teknik pengembangan, yaitu
metode pendinginan secara cepat dan pendinginan secara lambat.
Secara kolektif pengembangan vitrifikasi mengacu kepada pendinginan
secara cepat. Pendinginan secara cepat dilakukan langsung dari suhu
>0 celcius sampai dengan titik dibawah nol derajat (`135C)
dengan menggunakan freezer atau 196 C dengan menggunakan liquid
nitrogen. 2.2 Metode Vitrifikasi
Metode melibatkan 25 pasangan dengan 30 sempel embrio yang
dilakukan metode vitrifikasi dan slow freeze. Sempel di bagi
menjadi 3 jenis donor:
1. Donor embrio dari pasangan
2. Donor oosit
3. Inseminasi dan vitrifikasi ulang dari embrio
prosedur
Selanjutnya di bagi menjadi 2 prosedur:
1. Prosedur pemindahan embrio di tunda setelah slow freeze
embrio di biakan, lalu embrio di vitrifikasi 2 jam kemudian.
2. Semua sempel pada fase oosit pasien dibiakan dan di pilih
salah satunya untuk di transfer, sisa lainnya di simpan dan pasien
bisa memilih cikal bakal embrio terbaik yang bisa di tempatkan di
rahim pasien.
Persiapan bahan slow freeze dan vitrifikasi
Prosedur vitrifikasi menggunakan protokol media M199 dan dengan
cairan 10% heat-in activation serum pasien atau 10 mg/ml human
serum albumin (HSA) dari (sage biofarma, Australia), jika serum
pasien tidak tersedia.Embrio di simpan dalam wadah clefage media
pada suhu 37C. embrio di vitrifikasi tunggal dengan cryosolution
yang mengandung 7,5% dimetilsulfooksida (DMSO), 7,5% etilglikol
dalam media M199 + HSA selama 15 menit, sebelum di pindahkan ke
cryosolution akhir (15% DNSO dan 15% etilglukol pada media yang
sama).
Embrio selanjutnya di simpan pada cryosolution akhir selama 50
detik sebelum di pindahkan ke cryotop tool, selanjutnya sempel
embrio di tempatkan pada liquid nitrogen.Proses pemanasan
selanjutnya sempel di pindahkan secara cepat ke larutan pertama
selama 30 detik yang berisi (1 mol/l sukrosa) pada suhu 37C,
selanjutnya di larutkan dengan larutan 0,5 mol/l sukrosa selama 3
menit dengan temperatur ruangan yang sama, kemudian di cuci dengan
larutan tanpa sukrosa selama 5 menit pada suhu yang sama.
Dan embrio di hangatkan pada (HD scientific work station)
sebelum di bilas pada media prenuklear atau blastosit (pada hari ke
3 atau ke 5).
Selanjutnya embrio di kultur pada media prenuklear atau
blastosit pada mineral oil (6% Co2, 5% O2 dan nitrogen setara) pada
suhu 37C di dalam inkubator MINC.Pada hari ke 3 embrio atau
blastosit di pindahkan ke media transfer yang berisi blastosit
kultur media di tambah dengan 10 HSA. Jika pemindahan di lakukan
pada hari yang sama dengan pemanasan di beri jeda waktu antara 3
menit sampai 3 jam.
Pronuklear stage embrio di kultur pada clevage-stag media dan di
pindahkan pada hari ke 2 atau 4.
Persiapan kehamilan
Semua pemindahan dilakukan di bawah regimen hormon replacemen
terapi (HRT) yaitu di mulai dengan 6 mg oestradiol folera tablet
(Progunova, 2mg 3x1 pada hari pertama siklus menstrulasi).
Selanjutnya pada siklus hari ke 10 dosis dinaikan 12 mg (progunova,
4mg 3x1). Jika konsentrasi oestradiol mencapai kurang dari 1000
pmol/l terapi dilanjutkan sampai 5 atau 7 hari ke depan. Saat
konsentrasi oestradiol >1000 pmol/l ibu diberikan 20 mg vaginal
oestradiol (PIVET, yang mengandung 20 mg 17 oestradiol dalam asam
lemak basa) selama 5 hari sebagai pengganti oestradiol valerat.
Pada hari ke 10 penebalan endometrium dinilai dengan USG 3D, pada
hari ke 5 yaitu saat ketebalan endometrium sesuai ( 8 mm) atau jika
volume uterus 25 ml dosis oestradiol di ubah menjadi 20 mg. Dan
ketika ketebalan endometrium 8mm oestradiol di tambah dengan
progesteron di sesuaikan dengan fase luteal pada siklus
HRT.Kehamilan dinilai berdasarkan kadar -human gonado tropin 50
IU/l, jika diagnosis kehamilan sudah tegak regimen HRT dilanjutkan
sampai minggu ke 12 fase kehamilan.
Pemindahan embrio dilakukan antara hari ke 4 sampai hari ke 6
dengan posisi litotomi dengan panduan USG.
HASIL
Bahwa dari 31 sempel yang di hangatkan 30 sempel yang berhasil
siap di pindahkan yaitu: (16/16 prenuklear stage embrio, 14/15
blastosit, 1 blastosit gagal).
Dari 30 sempel yang di pindahkan didapatkan 13 kehamilan,(7
kehamilan dari kultur vitrifikasi kembali pada hari ke 3 (3/7) dan
hari ke 5 (4/13). 5 kehamilan dari prosedur slow freeze di tambah
vitrifikasi ulang pada hari yang sama, yaitu hari ke 3. 1 kehamilan
berhasil dari vitrifikasi ulang hari ke 5.
7 kehamilan berhasil dari sempel slow freeze pada fase
prenuklear dan kultur vitrifikasi kembali pada hari ke 3 (3/7) dan
pada hari ke 5 (4/13).
Terdapat 4 kehamilan pada usia kurang dari 35 tahun dan 9
kehamilan pada sempel wanita dengan usia 35 tahun.
11 dari 13 kehamilan berhasil di lahirkan, dan 2 kehamilan
mengalami keguguran pada minggu 8 dan 9.
Kesimpulanprosedur vitrifikasi pada hari ke 5 dibandingkan
dengan prosedur slow freeze dapat meningkatkan kelangsungan hidup
dan potensi inplantasi embrio. Teknik ini mungkin menjadi sumber
daya yang berguna untuk dipertimbangkan ketika mengembangkan
strategi manajemen untuk pasien dengan tingginya jumlah embrio di
cryostorage atau dalam situasi daruratLangkah-langkah prosedur yang
harus diperlukan dalam metode vitrifikasi pendinginan secara cepat
ini adalah sebagai berikut; 1. paparan awal dengan cryoprotectant,
bahan yang digunakan untuk mengurangi kerusakan seluler yang
disebabkan karena kristal es
2. mendinginkan suhu hingga dibawah 0 celcius.3. Penyimpanan
4. Pencairan kembali
5. Dilusi dan mengembalikan fisiologi dari microenvironment,
sehingga sel oosit bisa dikembangkan lebih jauh lagi.
Moment paling kritis pada fase awal adalah mempertahankan
kehidupan seluler dari pembekuan dengan suhu yang sangat rendah.
Apabila suhu rendah yang cukup telah dicapai (-196 C, suhu dari
liquid nitrogen), tidak akan memberikan pengaruh apapun pada
survival rate sel oosit tersebut. Ketika oosit didinginkan pada
suhu diantara -5c sampai -15c, pembentukan es pertama kali
diinduksi oleh media ekstaseluler sebagai proses yang dinamakan
dengan seeding. Saat suhu menurun, maka jumlah es akan meningkat
dan terlarut pada media ekstraseluler. Dari hasil ini biasa disebut
dengan gradien osmotik. Hasil gradient ini, air akan tertarik dari
sitoplasma ke media ekstraseluler, lalu sel akan menjadi lebih
kecil. Untuk sel yang bervolume rendah, seperti gamet, diperlukan
suhu pembekuan yang rendah agar mendapatkan aliran air dapat
mengalir keluar dari sel. Dengan cara seperti ini, Kristal es
intraselular yang terbentuk akan menjadi lebih sedikit sehingga
meminimalisir kerusakan pada komponen sel. Angka pembekuan yang
optimal juga bergantung pada komponen air sitosolik, perubahan
permeabilitas membran, permukaan membran, dan suhu.Tujuan dari
ulasan ini adalah untuk memberikan analisis kritis untuk
membandingkan hasil dari vitrifikasi dan pendinginan lambat oosit
dan embrio pada tahap perkembangan yang berbeda.
Vitrifikasi masih menjadi hal kontroversial didunia. Negara maju
melarang metode vitrifikasi karena ekperimental ini berbahaya dan
dapat menimbulkan penyakit.
2.3 Etiologi
Pembekuan sel oosit ini adalah teknik yang sangat berguna untuk
assisted reproductive technology (ART), terutama dalam kasus-kasus
penyakit ganas atau berbahaya, premature ovarium failure, dan
donasi oosit.
