14 microtomos

PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN

CFGS Anatomía Patológica y Citología 62

UNIDAD DIDÁCTICA 14

MICROTOMOS Y SUS CLASES. MICROTOMÍA. CONFECCIÓN DE CORTES.

1.- INTRODUCCIÓN. 2.- DIFERENTES TIPOS DE MICROTOMOS.

2.1.- Microtomo tipo MINOT. 2.2.- Microtomos de corredera. 2.3.- Microtomo de deslizamiento 2.4.- Microtomos de congelación. 2.5.- Criostato o criotomo. 2.6.- Ultramicrotomo.

3.- CONFECCIÓN DE CORTES. 4.- INCIDENTES Y CONTRATIEMPOS MÁS COMUNES EN MICROTOMÍA. http://www.casaalvarez.com



1.- INTRODUCCIÓN. El microtomo es un instrumento mecánico con el que se realizan secciones tisulares de espesor micrométrico y, por lo tanto, lo suficientemente delgadas para permitir su ulterior observación microscópica. 2.- DIFERENTES TIPOS DE MICROTOMOS. Existen diferentes tipos de micrótomos, los más usuales son los que describiremos a continuación, todos ellos poseen idénticos principios básicos de funcionamiento, sea el modelo que sea:

Un soporte para el bloque.

Un soporte para la cuchilla.

Una cuchilla, que debe estar bien afilada y suavizada, hay diferentes tipos de cuchillas dependiendo de su utilización:

De acero: desechables, prácticas para trabajos de rutina y finos (hoy

se trabaja con ellas, desplazando a las del filo de afilado).

Acero permanentes, que las clasificaremos según el filo en planas (parafina, congelación), plana de una sola cara (plástico o parafina dura) plano-cóncava (celoidina y parafina blanda).

De vidrio o diamante (resinas sintéticas) estudios de microscopia

electrónica.

Un mando de avance macrométrico, para el devastado.

Un mando de avance micrométrico, para el corte.

Un sistema de avance a veces a través de l porta bloques o del porta cuchillas, de tipo rotativo, por deslizamiento o térmico.

El micrótomo debe conservarse limpio de parafina y bien engrasado, no sobrepasar la señal de seguridad del porta bloques. El porta bloques en el que apoya el material que se va a cortar avanza discontinuamente sobre una cuchilla gracias a un mecanismo regulable de cremallera. De forma periódica se hace incidir el bloque sobre la cuchilla, obteniéndose secciones tisulares de espesor equivalente al seleccionado previamente en el tornillo micrométrico que controla el avance.



2.1.- Micrótomo tipo MINOT (1885). En este microtomo, la cuchilla está fija a un pedestal del aparato, el bloque de inclusión (parafina o celoidina) está fijada a un brazo móvil llamado pinza porta bloques, colocado en posición vertical, se mueve de arriba y abajo delante del filo de la cuchilla. Cuando el movimiento de rotación del brazo del micrótomo se convierte en lineal produce además el avance automático constante de porta bloques. Un volante movido a mano, da a las oscilaciones verticales una buena regularidad, el Micrótomo debe limpiarse todos los días y ser cuidadosamente liberado de la parafina caída estos micrótomos permiten obtener cortes de 3/5 micras de espesor. Ventajas: Su mecanismo (rotación y traslación) le confiere gran precisión y producir secciones seriadas muy finas Inconvenientes: Elevado precio, debido a la complejidad del mecanismo de avance, la imposibilidad de cortar con él tejidos incluidos en celoidina gelatina y propilenglicol.

2.2.- Microtomo de CORREDERA. En los cuales las cuchillas movidas directamente a mano, se desplazan horizontalmente sobre una o dos correderas, tiene un rendimiento bajo, pero nos permite hacer grandes o extensos cortes aunque un poco gruesos, se suele utilizar para hacer cortes geográficos de cerebros incluidos en celoidina, pero también se puede utilizar para realizar cortes de productos incluidos en parafina (muy poco uso).

2.3.- Microtomo de DESLIZAMIENTO. Existen dos tipos fundamentales de micrótomos de deslizamiento, según que se movilice el porta bloques sobre la cuchilla, permaneciendo esta fija, o viceversa. En ambos casos, el movimiento que produce el corte es el avance y retroceso de la parte móvil del micrótomo sobre unas guías metálicas Ventajas Pocas averías por su diseño sencillo, control directo por el operador sobre la inercia del corte, puede seccionar bloques titulares de mayor tamaño, permite efectuar cortes sobre tejido incluido en celoidina



Inconvenientes No permite realizar cortes seriados (proceso más lento), la exposición de la cuchilla favorece la producción de accidentes, los cortes no pueden ser inferiores a 8 micras.

2.4.- Microtomo de CONGELACIÓN.

Tienen el mismo tipo de construcción que los anteriores, tanto de corredera como del tipo Minot. Se utiliza para efectuar secciones de tejido congelado y no deshidratado. La diferencia más grande e importante estriba en que estos micrótomos, unas veces funcionan a temperatura ambiente de los laboratorios y otras a unas temperaturas de -15/20ºC y están contenidos dentro de unas cámaras congeladas (criostatos o criotomos). En los primeros (temperatura ambiente), se suele utilizar la congelación por CO2 y en los segundos, la congelación instantánea por inmersión en nitrógeno líquido. Según autores, unos consideran o recomiendan la congelación de la cuchilla, y otros preconizan además, la congelación de todo el instrumental necesario. Este tipo de micrótomo ha sido desplazado por el criostato, salvo cuando se precisan secciones de gran para estudio simultáneo arquitectural e histoquímica (técnicas del sistema nervioso).

2.5.- Criostato o criotomo. Consta de un microtomo de tipo Minot, semejante al convencional de parafina, incluido en una cámara de congelación. El volante de inercia que controla la realización del corte permanece en el exterior, mientras que la cuchilla y el mecanismo de avance están situados dentro de la camera fría (normalmente a -20ºC) pese ala disposición horizontal de la cuchilla, la obtención de secciones seriadas es posible gracias ala existencia de un sistema antienrollamiento, que obliga al corte a deslizarse sobre la cuchilla. Frente al microtomo convencional de congelación, el criostato puede realizar cortes de 4 micras, y en manos experimentadas hasta dos micras; en AP este micrótomo es de uso común no solo para biopsias intraoperatorias, también para estudios histoenzimáticos o inmunohistoquímicos que se practican en tejido congelado. Los criostatos deben ser objeto de muy atentos cuidados. Deben descongelarse con regularidad, y durante el deshielo secados y engrasados a fin de absorber la condensación acuosa y evitar la oxidación (aceite especial fluido a baja temperatura). Dentro de la cámara de algunos criostatos hay incorporado un dispositivo de gas freón, lo cual permite la



congelación en 1 ó 2 minutos. La experiencia demuestra que este plazo es demasiado largo y provoca, como corriente de CO, distorsiones titulares perjudiciales para el buen estudio citológico y topográfico, la inmersión de la pieza en isopentano y después en nitrógeno líquido, asegura una congelación mas rápida y de mas calidad. La congelación por nieve carbónica o aerosoles (freón, cloruro de metilo) está desaconsejada.

2.6.- Ultramicrotomo. Es un micrótomo tipo Minot para cortes de parafina, aunque dotado de numerosas mejoras, vamos a enumerar algunas:

Permite efectuar secciones en nanómetros de espesor a partir de material incluido en plástico.

Sistema de iluminación múltiple con luz incidente sobre el bloque, transluminación de éste y campo oscuro.

Acople a un microordenador que permite el ajuste digital. Platina regulable y apta para cuchillas de vidrio o diamante. Sistema óptico con microscopio esteroscópico incorporado.

3.- CONFECCIÓN DE CORTES. Una vez confeccionado el bloque de parafina, o de cualquier otro medio de inclusión, debe dividirse en cortes suficientemente delgados para ser estudiados por transparencia. La confección de estos cortes delgados, ha constituido durante largo tiempo el principal escollo de las técnicas histológicas. Este problema ha sido progresivamente resuelto, gracias por una parte a la impregnación y revestimiento de los tejidos fijados, dentro de sustancias de consistencia firme, INCLUSIÓN y por otra la creación de aparatos precisos capaces de hacer secciones sumamente delgadas, MICROTOMOS. Realizar los cortes convenientemente, requiere cuidado y destreza, luz adecuada y temperatura moderada. Se dispondrá de un juego de cuchillas (cuchillas de desbaste y de corte), una superficie obscura, sobre la que se colocaran los cortes obtenidos, una pinza plana, una espátula o pincel destinados a sostener y atraer con cuidado la extremidad de la tira, un juego de agujas para seccionar limpiamente los cortes mejores de la tira. Después de fijar sólidamente y orientar de forma conveniente mediante tornillos adecuados, el cuchillo y el porta bloques, se coloca con la mano el bloque casi en contacto con el filo de la hoja a fin de que desde los primeros avances automáticos la pieza esta encajada. El bloque es primeramente desbastado mediante algunos cortes gruesos efectuados con la cuchilla correspondiente. Después de reemplazar esta por la hoja de corte, y de regular el avance automático del microtomo (1/200 y 1/300 mm.) se empieza el corte propiamente



dicho del bloque dando vueltas con regularidad al volante del microtomo (empezar el corte, dándole a la manivela con movimiento firme y continuo no demasiado rápido, hasta obtener una tira). La velocidad del volante debe variar según el grosor de los cortes y la dureza de las piezas. En general es preferible ir lentamente para los bloques blandos y dar vueltas más rápidas para las piezas duras. Los movimientos alternativos del bloque sobre el filo de la cuchilla crean sobre la cinta una carga de electricidad estática ligera, pero suficiente para que se adhiera íntimamente a la superficie de la cuchilla. Este inconveniente lo eliminaremos sencillamente, proyectando el aliento sobre la cara del bloque a cortar con la boca muy abierta. Una vez formado el corte, o la tira, se recoge delicadamente con ayuda de la espátula, pincel o aguja y se deposita sobre el papel o superficie obscura, con el fin de seleccionar los cortes más finos y perfectos. Entre tira y tira, o después de haber realizado varios cortes, es útil limpiar el filo de la cuchilla de los pequeños restos de parafina que pueda haber y que nos van a producir problemas en la obtención de nuevos cortes o tiras. Una vez obtenidos los cortes, se pasarán por un baño de alcohol de 50º para producir un pequeño endurecimiento y posteriormente pasarán por un baño de agua a 37ºC para producir el estiramiento del corte y así poder ser depositado en el portaobjetos correspondiente. 4.- INCIDENTES Y CONTRATIEMPOS MÁS COMUNES EN MICROTOMÍA. CORTES DE DISTINTO GROSOR (delgado-grueso) etc. Ocurre como consecuencia de:

Juego en las correderas del micrótomo. Soporte mal fijado. Inclinación insuficiente de la hoja que frota sobre una amplia superficie al ascender

el bloque. Dientes usados.

Solución:

Fijar bien la cuchilla y el bloque. Comprobar temperatura ambiente, por si fuera elevada. Engrasar las correderas y comprobar dientes. Aumentar ligeramente la inclinación de la cuchilla.



EL CORTE ES DE ESPESOR IRREGULAR SEGUN EN QUE PUNTOS. Ocurre como consecuencia de:

Vibraciones de uno de los órganos del microtomo. Juego en las correderas. Vibraciones en la hoja de cuchilla demasiado delgada, como consecuencia de un

bloque de dureza desigual. Solución:

Bloquear bien lo tornillos del portacuchillas. Reglar o hacer reglar el microtomo. Tomar una cuchilla menos alta o de cabeza más larga.

LA CINTA SE INCURVA. Ocurre como consecuencia de:

Las aristas del bloque no son paralelas. Solución:

Recortar el bloque. LOS CORTES SE ENROLLAN Y NO FORMAN TIRA. Ocurre como consecuencia de:

La temperatura ambiente es demasiado baja o la parafina es demasiado dura. Solución:

Aumentar la temperatura ambiente. Hacer los cortes más delgados si es posible. Disminuir ligeramente la inclinación de la cuchilla. Cortar cerca de un foco de calor.

LOS CORTES ESTAN COMPRIMIDOS Y PISADOS. Ocurre como consecuencia de:

La cuchilla está. desafilada. La temperatura ambiente es demasiado alta. El bloque se encuentra en las proximidades de un foco de calor demasiado alto.

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