Guia laboratorio biologia 2012 1 - copia

GUIacuteA DE LABORATORIO

BIOLOGIacuteA GENERAL

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERIacuteA

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES E INGENIERIacuteA ALIDA MARCELA GOacuteMEZ RODRIacuteGUEZ BIOLOGIacuteA GENERAL

NORMAS DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO

NORMAS DENTRO DEL LABORATORIO

Siga las siguientes recomendaciones que son generales a tener en cuenta en un laboratorio

1 GENERALES

Mantenga las luces apagadas si no hay necesidad de su utilizacioacuten

Los grifos de agua se deben manejar con cuidado a fin de no romperlos y cerciorarse que no se estaacute perdiendo agua inuacutetilmente

Las llaves de gas que abastecen los mecheros deben estar cerradas en caso de fugas informar al Monitor o al profesor directamente Si hay fuerte olor a gas cohiacutebase de encender fuego hasta tanto no desaparezca el olor a gas Terminada la praacutectica cierre correctamente las llaves de paso

Estar puntual a la hora de entrar al laboratorio recuerde ese adagio que dice ldquoUno llega tarde porque se sabe que lo esperan si sabe que no lo esperan uno no llega tarderdquo Se da un margen maacuteximo de 5 minutos para su llegada

Estaacute prohibido comer beber o fumar dentro del laboratorio esto genera indisposicioacuten general y no ayuda al desarrollo armoacutenico de las praacutecticas

No se permite juegos ni indisciplina dentro del laboratorio eacuteste es un sitio donde el respeto y la academia nos debe ayudar a formar integralmente

No pierda tiempo trabaje raacutepido y con cuidado sea diligente dentro del proceso de las distintas praacutecticas

Evite el deambular por el espacio fiacutesico del laboratorio sin motivo aparente ceacutentrese en su trabajo con el grupo de compantildeeros el cual le correspondioacute De esta manera el trabajo rinde y se hace maacutes armoacutenico

Finalizada la praacutectica la mesa de trabajo debe quedar en buen estado y aseada

Entregue el material de laboratorio asignado en perfecto estado y de manera limpia En caso que por accidente se haya fraccionado algunos de los materiales dados debe hablar con el profesor de la materia o en su defecto con el monitor Es claro que debe reponer el material que averioacute

2 MATERIAL DEL LABORATORIO

Dentro del laboratorio siempre utilizar bata de manga larga blanca preferiblemente de algodoacuten

Cuide los lentes del microscopio para que no se manchen con colorantes

Una vez dentro el laboratorio lave y seque correctamente el material que previamente le han entregado procurando no ocasionar fracturas del mismo

Todo el material especialmente los aparatos delicados como lupas y microscopios deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos

Jamaacutes pipetee aacutecidos o Bases fuertes sustancias toxicas o volaacutetiles

Nunca arroje materiales soacutelidos (papeles foacutesforos vidrios etc) en los sumideros o vertederos utilice los implementos adecuados para ello

Evite instalaciones o montajes inestables de aparatos durante las distintas praacutecticas

No pipetear nunca con la boca Se debe utilizar la bomba manual una jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro

Las pipetas se cogeraacuten de forma que sea el dedo iacutendice el que tape su extremo superior para regular la caiacuteda de liacutequido

Al enrasar un liacutequido con una determinada divisioacuten de escala graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal

Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen liacutequidos debe evitarse la ebullicioacuten violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras El tubo de ensayo se acercaraacute a la llama inclinada y procurando que eacutesta actuacutee sobre la mitad superior del contenido y cuando se observe que se inicia la ebullicioacuten raacutepida se retiraraacute acercaacutendolo nuevamente a los pocos segundos y retiraacutendolo otra vez al producirse una nueva ebullicioacuten realizando asiacute un calentamiento intermitente En cualquier caso se evitaraacute dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona

Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despueacutes de haberlos calentado con el fin de evitar roturas

Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen

3 EVITAR ACCIDENTES

Sofoque cualquier principio de incendio con un trapo mojado

Evite inhalar vapores de manera directa de cualquier material Si es absolutamente necesario porque la practica asiacute lo requiere opere arrastrando los vapores con la mano hacia la nariz

Lea con atencioacuten las etiquetas que estaacuten adosadas a los envases de las sustancias quiacutemicas evite accidentes por consumo de sustancias quiacutemicas del laboratorio

Cercioacuterese antes de coger cualquier material de vidrio hierro y porcelana que estos se encuentran a la temperatura ambiente para evitar posibles quemaduras

En caso de quemaduras con sustancias quiacutemicas o materiales expuestos a altas temperaturas vaya directamente con el docente a fin de utilizar alguacuten paliativo para la quemadura

Evite por si solo hacer combinaciones de sustancias Hable con el docente si es procedente hacer algo al margen de lo manifestado en la guiacutea de laboratorio

Evite cortarse con vidrio cumpliendo las siguientes instrucciones

a Nunca trate de insertar tubos de vidrio termoacutemetros embudos o cualquier otro objeto de vidrio en tapones de caucho o cualquier otro objeto sin humedecer el tapoacuten y el objeto de vidrio

b Proteja sus manos con una toallac Para reducir el palanqueo que se ejerce sobre el vidrio mantenga una mano

en el tapoacuten y con la otra tome el material de vidrio muy cerca del extremo que se va a insertar haga presioacuten y el objeto de vidrio se ira introduciendo lentamente

Los productos inflamables (gases alcohol eacuteter etc) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos se haraacute al bantildeo Mariacutea nunca directamente a la llama Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama

Cuando se manejan productos corrosivos (aacutecidos aacutelcalis etc) deberaacute hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos Nunca se verteraacuten bruscamente en los tubos de ensayo sino que se dejaraacuten resbalar suavemente por su pared

Cuando se quiera diluir un aacutecido nunca se debe echar agua sobre ellos siempre al contrario aacutecido sobre agua

Cuando se vierta un producto liacutequido el frasco que lo contiene se inclinaraacute de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre liacutequido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco

RECOMENDACIONES PARA EL EacuteXITO DE LAS PRAacuteCTICAS DE LABORATORIO

Antes de realizar una praacutectica debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo fundamento y teacutecnica Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan

Cada grupo de praacutecticas se responsabilizaraacute de su zona de trabajo y de su material

Llevar el material solicitado en las distintas praacutecticas

Trabajar con diligencia y de manera armoacutenica de tal forma que no se malgaste el tiempo y pueda terminar la practica en el tiempo estipulado

Conformar grupos de trabajo de acuerdo a las indicaciones del Docente o Monitor y presento los informes de laboratorio con el grupo de trabajo con quien realizo la practica

PREGUNTAS PRELABORATORIO

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS (Se entregan ocho diacuteas despueacutes de hacer este laboratorio)

1 Defina

Residuo solido Residuo peligroso Residuo combustible Residuo corrosivo Residuo reactivo Residuo explosivo Inflamabilidad Residuo patoacutegeno Residuo volaacutetil Residuo cortopunzante Biodegradable Biosanitario Metales pesados Recalcitrante

De acuerdo con la clasificacioacuten de residuos disentildee una tabla que incluya clase de residuo (NO PELIGROSOS reciclables vidrio) contenido baacutesico (toda case de vidrio no contaminado) color (blanco) y etiqueta

PRESENTACIOacuteN GENERAL DEL INFORME DE LABORATORIO

El desarrollo praacutectico de la asignatura Biologiacutea General se realiza a traveacutes de cuatro laboratorios Todas las praacutecticas requieren del manejo del microscopio para observar diferentes tipos de sistemas bioloacutegicos unicelulares pluricelulares bacterianas protista hongo animales y vegetales Las guiacuteas de biologiacutea inician con un conocimiento sobre microscopiacutea resaltando la importancia del microscopio como instrumento fundamental para la observacioacuten y estudio de la diversidad celular y otros campos importantes de la Biologiacutea microscoacutepica continuacutea con el estudio de la ceacutelula como entidad estructural y funcional de todos los sistemas vivos destacando la variabilidad que se presenta en cuanto a forma tamantildeo y tipos celulares

Las actividades de laboratorio estaacuten disentildeadas con el objetivo de llevar a la praacutectica los conceptos fundamentales que se imparten en teoriacutea y de esta manera involucrarse experimentalmente con la ciencia

En los instructivos de cada praacutectica encontraraacute una introduccioacuten objetivos procedimiento y cuestionario los cuales deben ser resueltos antes de ingresar al laboratorio ya que contienen aspectos indispensables para comprender la praacutectica Todas las praacutecticas indican queacute material equipo o reactivo se utilizaraacute y el procedimiento a seguir para llevar a cabo los experimentos

Forma de presentar el laboratorio

El estudiante deberaacute presentar en un cuaderno de laboratorio cada una de las praacutecticas desarrolladas (no se reciben laboratorios en computador)

El laboratorio se presenta en tipo artiacuteculo cientiacutefico Tiacutetulo resumen abstract introduccioacuten metodologiacutea (materiales y meacutetodos) resultados (graacuteficas figuras graacuteficos) discusioacuten de resultados conclusiones y bibliografiacutea

Las personas que no asistan a las praacutecticas no podraacuten entregar informe de laboratorio

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO OacutePTICO COMPUESTOPRAacuteCTICA No 1

INTRODUCCIOacuteN

El microscopio oacuteptico es el instrumento principal en el laboratorio de biologiacutea ya que este nos ayuda a observar cosas que no podemos ver a simple vista

Existen tres tipos de microscopios en el laboratorio de biologiacutea

1 - Microscopio estereoscoacutepico este nos sirve para observar muestras vegetales y muestras animales y consta de 2 objetivo uno de 2 ldquoxrdquo y otro de 4 ldquoxrdquo por lo tanto su aumento seraacute de 20 y 40 veces

2 - Microscopio de luz polarizada este se utiliza para observar metales tiene 5 objetivos y un solo ocular

3 - Microscopio oacuteptico este es el que se utiliza de manera maacutes comuacuten en las praacutecticas de laboratorio de biologiacutea este microscopio consta de tres sistemas

a)Sistema mecaacutenico son todas las partes que sirven de soporte al microscopio el brazo el pie o soporte el carro o la platina

b) Sistema de iluminacioacuten las fuentes de luz el condensador y el espejo

CLASES DE MICROSCOPIOS

Existen dos tipos de microscopios simples y compuestos

1048766 Microscopios simples Consta de un solo sistema de lente1048766 Microscopios compuestosConstan de dos (2) sistemas de lentes el objetivo y el ocular

El microscopio compuesto es un instrumento que aumenta considerablemente la imagen de los objetivos que en eacutel se observan Entre las variedades de eacuteste microscopio encontramos el electroacutenico y el fotoacutenico u oacuteptico Este uacuteltimo tipo de microscopio estaacute formado por una parte mecaacutenica y una parte oacuteptica

Parte Mecaacutenica

a Pie o Base Generalmente en forma de herradura o rectangular es el apoyo de las

demaacutes piezas del microscopio El pie debe ser soacutelido y pesado para asegurar su estabilidadb Columna o Brazo Este elemento relaciona el tubo del microscopio con el pie sostiene la platina y el condensador y de ella se agarraraacute el microscopio cuando se traslada durante los trabajos En algunos c Tubo del Ocular Estaacute colocado en la parte superior del microscopio donde estaacuten acoplados los oculares que pueden tener movimiento vertical con ayuda de una cremallera sobre la columna En algunos microscopios el tubo del ocular es inclinado y se mantiene fijo en este caso se mueve la platinad Revoacutelver o Disco Giratorio Estaacute debajo del tubo ocular donde estaacuten acoplados los objetivos presenta movimiento giratorio para facilitar el cambio de un objetivo a otroe Platina Es una placa que puede ser cuadrada circular o rectangular con un orificio central que permite el paso de la luz a traveacutes de ella Su funcioacuten es sostener las placas con los preparados bioloacutegicos que se van observarf Carro es un dispositivo ubicado sobre la platina cuya funcioacuten es sujetar y mover la placa que se va a estudiar Posee dos tornillos que permiten movimientos horizontales (hacia adelante hacia atraacutes hacia la derecha y hacia la izquierda) del portaobjetoCuando la platina carece del anterior dispositivo lleva dos soportes para fijar las placas llamadas ganchos o untildeasg Mecanismos de Movimiento Estaacute integrado por el tornillo macromeacutetrico y el micromeacutetrico1048766 Tornillo Macromeacutetrico Acerca o aleja raacutepidamente el objetivo del preparado a observar su funcioacuten es lograr un enfoque maacutes o menos claro o aproximado del objeto1048766 Tornillo Micromeacutetrico Acerca o aleja el objetivo del preparado pero lentamente casi imperceptiblemente permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo del ocular Durante la observacioacuten y enfoque este tornillo debe estarse moviendo permanentemente su funcioacuten es darle nitidez al enfoque

Parte oacuteptica

Esta integrada por los objetivos oculares y el aparato de iluminacioacuten (espejo diafragma condensador y filtros) Estos elementos son los que permiten la iluminacioacuten ampliacioacuten y la visioacuten aumentada del objetivoa Objetivo Es la pieza maacutes importante del microscopio Ellos se acoplan mediante roscas estaacutendar al revoacutelver y pueden ser cambiados de posicioacuten con soacutelo rotarlos Reciben el nombre de objetivos porque son los lentes que estaacuten maacutes cerca del objeto La mayoriacutea de los microscopios tienen tres o cuatro objetivos Las lentes de los objetivos son de aumentos diversos los maacutes usados sonObjetivos de pequentildeos aumentos 35x 4x 5x 6x 8x y 10x objetivos de grandes aumentos 40x 45x 50x y objetivos de inmersioacuten 90x 95x y 100x

Las lentes de inmersioacuten se emplean con aceite de inmersioacuten para conectar la lente frontal

(lente inferior del objetivo) al porta-objeto Entre el objetivo y el objeto se produce una peacuterdida de luz por reflexioacuten que se corrige adicionando al preparado unas gotas de aceite de cedro (aceite de inmersioacuten) cuyo iacutendice de refraccioacuten 1515 es proacuteximo al cristal Este aceite tambieacuten reduce o suprime por completo la refraccioacuten de los rayos de luz provenientes de la fuente luminosa b Ocular Estaacuten colocados en la parte superior del tubo ocular Estaacute formado por dos sistemas de lentes dispuestos de un cilindro Su finalidad es aumentar la imagen dada por el objetivo y eventualmente corregir algunos defectos de la misma Reciben dicho nombre porque son las lentes que se encuentran maacutes cerca del ojo Hay oculares de 35x 5x 63x 10x 125x 15x 20x y 25x

El aumento de la imagen de un objeto observado a traveacutes de un microscopio se calcula multiplicando el nuacutemero de aumento del objetivo con el cual se estaacute trabajando por el nuacutemero de aumento del ocular que se estaacute utilizando

c Aparato de iluminacioacuten Estaacute conformado por la fuente de luz el diafragma el condensador y los filtrosd Fuente de luz Puede ser natural o artificial cuando es natural (solar) o procede de un foco luminoso situado fuera del microscopio un espejo recoge la luz del medio y la refleja a traveacutes del objeto y del sistema de lentes La luz artificial la constituye generalmente un bombillo ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eleacutectrico de bajo voltajee Diafragma Estaacute ubicado entre la fuente de luz y el condensador inmediatamente debajo de la platina su funcioacuten es regular la intensidad de luz que atraviesa el objeto El diafragma tiene una palanquita que al moverla hacia delante o hacia atraacutes agranda o achica el orificio central dejando pasar mayor o menor cantidad de luz respectivamentef Condensador Es un elemento coacutenico que posee un sistema de dos lentes convergentes que recogen o concretan los rayos luminosos para enviarlos al objetivo por el agujero de la platinaExiste un tornillo manual que permite guardar la altura del condensador Esta graduacioacuten es importante cuando se trabaja con objetivos de gran aumento (40x 100x) ya que en la medida que se trabaja con eacutestos objetivos el condensador debe subirse Lo contrario sucede cuando se trabaja con objetivos de menor aumento (4x 10x)g Filtros Entre la fuente de luz y el condensador de algunos microscopios existe un portafiltros en el cual se puede colocar filtros a voluntad del observador Los filtros son elementos de cuarzo o de vidrio pueden ser de color azul amarillo o verde Ellos interceptan el haz de rayos luminosos antes de entrar al condensador esto se hace con el objeto de seleccionar un tipo de luz determinada para una experiencia dada

LENTESLas lentes son el componente maacutes importante del microscopio se fabrican de vidrio u

otros materiales transparentesPueden ser convexas o coacutencavas en ambas superficies planas en una cara o tener cualquier combinacioacuten de eacutestas dos formas en su superficieLas lentes son de dos tipos positivas y negativas1048766 Lentes Positivas Hacen converger los rayos de luz es decir los concentra para formar una imagen real1048766 Lentes Negativas Hacen divergir los rayos de luz sin formar ninguna imagen real

PREPARACIONES MICROSCOacutePICASDebemos tener en cuenta que a traveacutes del microscopio solamente se pueden observar objetos que dejan pasar rayos de luz por esta razoacuten el preparado debe ser lo maacutes delgado y transparente posible pues un preparado grueso solo nos permite observar una mancha negra Los detalles solo se observan si la preparacioacuten es lo suficientemente delgada para que sea transparente con la luz que recibe Para realizar preparaciones microscoacutepicas los porta y cubre-objetos deben limpiarse antes de usarse Un buen meacutetodo es guardarlos en alcohol y antes de utilizarlos secarlos con un pantildeo limpio y libre de grasa Los cubre-objetos deben limpiarse con mucho cuidado porque son fraacutegilesLas preparaciones microscoacutepicas pueden ser acuosas o en seco

Las preparaciones acuosas son las maacutes simples y faacuteciles usadas para examinar cualquier objeto fluido como agua de estanque o sangre Se deposita una gotita del liacutequido que se desea observar en el centro del porta-objeto se coloca el cubreobjeto sobre el porta forme con las dos laacuteminas un aacutengulo de 45 grados y luego deje caer suavemente la laminilla cubre-objeto sobre el preparado evitando la formacioacuten de burbujas

El liacutequido no debe rebosar los bordes del cubre-objeto en caso de que suceda seque cuidadosamente el liacutequido sobrante usando papel absorbente o papel toalla La preparacioacuten queda asiacute lista para la observacioacuten Estas preparaciones son de corta duracioacuten porque se secan raacutepidamente para hacerlas maacutes duraderas debe cerrarse hermeacuteticamente los bordes del cubre objeto la duracioacuten de eacutesta preparacioacuten no es indefinida Los bordes se pueden cerrar con vaselina o esmalte

COLORANTES Los colorantes son sales compuestas por un aacutecido y una base Se clasifican en aacutecidos baacutesicos y neutros seguacuten la parte de los mismos que imparta el color En los colorantes aacutecidos el grupo cromoacuteforo el que imparte el color es el componente aacutecido el componente baacutesico es incoloro Lo contrario sucede con los colorantes baacutesicos Los colorantes neutros tienen coloreado el componente aacutecido y el baacutesico

La mayoriacutea de los colorantes son sinteacuteticos aunque se emplean todaviacutea algunos

Partes de un microscopio oacuteptico

naturales La hematoxilina y el carmiacuten son los colorantes naturales maacutes importantes para la tincioacuten de tejidos El carmiacuten es producido por la conchinilla (Coccus cacti) La hematoxilina se extrae de la madera de un aacuterbol de Meacutexico el palo Campeche

Otro colorante es la orceiacutena que se extrae de liacutequenes Existen tres teacutecnicas de tincioacuten de uso general la coloracioacuten seca o de tejidos muertos la coloracioacuten vital o de tejidos vivos y la histoquiacutemica en la cual se utilizan las reacciones de los colores para hacer visible los elementos estructurales de las ceacutelulas y de los tejidos

RESUMEN PARTES DE UN MICROSCOPIO OacutePTICO

SISTEMA OacutePTICO

OCULAR Lente situada cerca del ojo del observador Ampliacutea la imagen del objetivo OBJETIVO Lente situada cerca de la preparacioacuten Ampliacutea la imagen de eacutestaCONDENSADOR Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacioacutenDIAFRAGMA Regula la cantidad de luz que entra en el condensadorFOCO Dirige los rayos luminosos hacia el condensador

SISTEMA MECAacuteNICO

SOPORTE Mantiene la parte oacuteptica Tiene dos partes el pie o base y el brazoPLATINA Lugar donde se deposita la preparacioacutenCABEZAL Contiene los sistemas de lentes oculares Puede ser monocular binocularREVOacuteLVER Contiene los sistemas de lentes objetivos Permite al girar cambiar los objetivosTORNILLOS DE ENFOQUE Macromeacutetrico que aproxima el enfoque y micromeacutetrico que consigue el enfoque correcto

I MANEJO DEL MICROSCOPIO OacutePTICO

1 Colocar el objetivo de menor aumento en posicioacuten de empleo y bajar la platina completamente Si el microscopio se recogioacute correctamente en el uso anterior ya deberiacutea estar en esas condiciones

2 Colocar la preparacioacuten sobre la platina sujetaacutendola con las pinzas metaacutelicas 3 Comenzar la observacioacuten con el objetivo de 4x (ya estaacute en posicioacuten) o colocar el de

10 aumentos (10x) si la preparacioacuten es de bacterias 4 Para realizar el enfoque

a Acercar al maacuteximo la lente del objetivo a la preparacioacuten empleando el tornillo macromeacutetrico Esto debe hacerse mirando directamente y no a traveacutes del ocular ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacioacuten pudieacutendose dantildear alguno de ellos o ambos

b Mirando ahora siacute a traveacutes de los oculares ir separando lentamente el objetivo de la preparacioacuten con el macromeacutetrico y cuando se observe algo niacutetido la muestra girar el micromeacutetrico hasta obtener un enfoque fino

5 Pasar al siguiente objetivo La imagen deberiacutea estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromeacutetrico para lograr el enfoque fino Si al cambiar de objetivo se perdioacute por completo la imagen es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacioacuten desde el paso 3 El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacioacuten y por ello es faacutecil que ocurran dos

tipos de percances incrustarlo en la preparacioacuten si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersioacuten si se observa una preparacioacuten que ya se enfocoacute con el objetivo de inmersioacuten

6 Empleo del objetivo de inmersioacuten a Bajar totalmente la platinab Subir totalmente el condensador para ver claramente el ciacuterculo de luz que nos

indica la zona que se va a visualizar y donde habraacute que echar el aceitec Girar el revoacutelver hacia el objetivo de inmersioacuten dejaacutendolo a medio camino entre

eacuteste y el de x40d Colocar una gota miacutenima de aceite de inmersioacuten sobre el ciacuterculo de luze Terminar de girar suavemente el revoacutelver hasta la posicioacuten del objetivo de

inmersioacutenf Mirando directamente al objetivo subir la platina lentamente hasta que la lente

toca la gota de aceite En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente

g Enfocar cuidadosamente con el micromeacutetrico La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersioacuten y la preparacioacuten es miacutenima aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande

h Una vez se haya puesto aceite de inmersioacuten sobre la preparacioacuten ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona pues se manchariacutea de aceite Por tanto si desea enfocar otro campo hay que bajar la platina y repetir la operacioacuten desde el paso 3

i Una vez finalizada la observacioacuten de la preparacioacuten se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revoacutelver En este momento ya se puede retirar la preparacioacuten de la platina Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersioacuten en posicioacuten de observacioacuten

j Limpiar el objetivo de inmersioacuten con cuidado empleando un papel especial para oacuteptica Comprobar tambieacuten que el objetivo 40x estaacute perfectamente limpio

II MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1 Al finalizar el trabajo hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicioacuten de observacioacuten asegurarse de que la parte mecaacutenica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda

2 Cuando no se estaacute utilizando el microscopio hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dantildeen las lentes Si no se va a usar de forma prolongada se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo

3 Nunca hay que tocar las lentes con las manos Si se ensucian limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o mejor con un papel de oacuteptica

4 No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se estaacute utilizando el microscopio

5 Despueacutes de utilizar el objetivo de inmersioacuten hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pantildeuelos especiales para oacuteptica o con papel de filtro (menos recomendable) En cualquier caso se pasaraacute el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (73) o xilol No hay que abusar de este tipo de limpieza porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dantildear las lentes y su sujecioacuten

6 No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromeacutetrico micromeacutetrico platina revoacutelver y condensador)

7 El cambio de objetivo se hace girando el revoacutelver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacioacuten para prevenir el roce de la lente con la muestra No cambiar nunca de objetivo agarraacutendolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se estaacute observando a traveacutes del ocular

8 Mantener seca y limpia la platina del microscopio Si se derrama sobre ella alguacuten liacutequido secarlo con un pantildeo Si se mancha de aceite limpiarla con un pantildeo humedecido en xilol

9 Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesioacuten praacutectica y al acabar el curso encargar a un teacutecnico un ajuste y revisioacuten general de los mismos

EL DIBUJO EN BIOLOGIA debe tener las siguientes caracteriacutesticas Objetividad y claridad Deben representarse los objetos tal como son y con

nitidez Exactitud Proporcionalidad entre el objeto y su representacioacuten graacutefica en toda su

estructura Trazos niacutetidos y firmes Con ausencia de sombras y colores Nombres Todas las estructuras que aparecen deberaacuten llevar su nombre por

fuera del dibujo en forma ordenada

RECORDEMOS

Usar eficientemente el microscopio y los elementos y equipos a su disposicioacuten Estudiar e interpretar criacuteticamente el material bioloacutegico para el estudio

microscoacutepico Registrar las imaacutegenes microscoacutepicas para ilustrar y discutir los resultados

obtenidos El examen microscoacutepico proporciona informacioacuten fundamental en investigacioacuten

Mucha de esta informacioacuten soacutelo puede ser obtenida a traveacutes de esta herramienta por lo tanto se debe poner el maacuteximo intereacutes en la adquisicioacuten de una

informacioacuten lo maacutes amplia y profunda posible sobre la estructura microscoacutepica y los meacutetodos de trabajo utilizados para su observacioacuten y estudio

Objetivos

Identificar cada una de las partes que conforman el microscopio oacuteptico y conocer los cuidados que se deben tener para su manejo

Manejar los mecanismos de enfoque del microscopio Comprender la importancia del microscopio como herramienta fundamental en

biologiacutea celular

Materiales (descripcioacuten de equipos reactivos materiales de vidrio plaacutestico y acero especificar los materiales que deben llevar los estudiantes)

Microscopiofrac14 hoja de papel perioacutedico PortaobjetosCubreobjetosTijerasPapel seda bancoGoteroXilolFibras de lana o algodoacuten de diferentes colores Granos de polen

Metodologiacutea ndash Procedimiento

1 Cortar un pedazo de papel perioacutedico de 1 cm2 de aacuterea y colocarlo sobre un cubre limpio y seco

2 Adicionar con el gotero un poco de agua sobre el papel hasta humedecer y poner el cubre objeto sobre el evitando que se formen burbujas

3 Observar la muestra en el microscopio para ello se debe colocar la muestra e la platina aseguraacutendola con las pinzas

4 Realizar las observaciones con los objetivos de 10x 40x 100x5 Ajustar las observaciones con los tornillos macromeacutetrico y micromeacutetico6 Realizar los esquemas de cada una de las observaciones7 Realizar el mismo procedimiento con fibras de lana o algodoacuten de diferentes

colores y con Granos de polen8 Despueacutes de utilizar el microscopio limpiar suavemente el microscopio y las lentes

con xilol y papel seda 9 Cubrir y guardar debidamente el microscopio

Cuestionario

iquestCoacutemo se puede definir un microscopio iquestCuaacuteles son las diferencias entre un microscopio simple y uno compuesto iquestCuaacuteles son las diferencias al observar la muestra con diferentes tipos de lentes

de aumento iquestQue dificultades tendriacuteas si al iniciar un trabajo lo hicieras con la lente de mayor

aumento Cuando utilizas el objetivo de inmersioacuten iquestpor que es necesario utilizar un aceite

con este nombre Por que el objetivo necesita un iacutendice Cuaacuteles son los poderes del microscopia Cuaacutel es el iacutendice de refraccioacuten del agua y del aceite Cuaacuteles pueden ser las causas de las rupturas de los micropreparados iquestQueacute importancia tiene el microscopio en la biologiacutea celular Investiga si es lo mismo amplificacioacuten y resolucioacuten iquesty de que factores depende

cada una de ellas

CEacuteLULAS VEGETALES Y CEacuteLULAS ANIMALESPRAacuteCTICA No 2INTRODUCCIOacuteN

Las ceacutelulas son la porcioacuten maacutes pequentildea de materia viva capaz de realizar todas las funciones de los seres vivos es decir reproducirse respirar crecer producir energiacutea etc Existen dos tipos de ceacutelulas con respecto a su origen ceacutelulas animales y ceacutelulas vegetales

En ambos casos presentan un alto grado de organizacioacuten con numerosas estructuras internas delimitadas por membranas La membrana nuclear establece una barrera entre el material geneacutetico y el citoplasma Las mitocondrias de interior sinuoso convierten los nutrientes en energiacutea que utiliza la planta

Tanto la ceacutelula vegetal como la animal poseen membrana celular pero la ceacutelula vegetal cuenta ademaacutes con una pared celular de celulosa que le da rigidez La ceacutelula vegetal contiene cloroplastos organelos capaces de sintetizar azuacutecares a partir de dioacutexido de carbono agua y luz solar (fotosiacutenteis) lo cual los hace autoacutetrofos (producen su propio alimento) y la ceacutelula animal no los posee por lo tanto no puede realizar el proceso de fotosiacutentesis Pared celular la ceacutelula vegetal presenta esta pared que estaacute formada por celulosa riacutegida en cambio la ceacutelula animal no la posee soacutelo tiene la membrana citoplasmaacutetica que la separa del medio Una vacuola uacutenica llena de liacutequido que ocupa casi todo el interior de la ceacutelula vegetal en cambio la ceacutelula animal tiene varias vacuolas y son maacutes pequentildeas

Las ceacutelulas vegetales pueden reproducirse mediante un proceso que da por resultado ceacutelulas iguales a las progenitoras este tipo de reproduccioacuten se llama reproduccioacuten asexual Las ceacutelulas animales pueden realizar un tipo de reproduccioacuten llamado reproduccioacuten sexual en el cual los descendientes presentan caracteriacutesticas de los progenitores pero no son ideacutenticos a eacutel

CEacuteLULAS VEGETALES

MATERIALES

Una cebolla cabezona Viruta de madera Semillas de durazno y cereza Un tomate Una arracacha yuca papa y banano Una hoja de lirio elodea Laacuteminas porta y cubres Cuchilla o bisturiacute Papel absorbente Aguja de diseccioacuten

Pincel

PROCEDIMIENTO

MONTAJE HUMEDO DE EPIDERMIS DE CEBOLLA (Allium cepa)En un porta objetos coloque dos muestras de epidermis de cebolla Uno con agua y otro con lugol Observe la forma de la ceacutelula y su disposicioacuten en el tejido Identifique Pared celular membrana celular citoplasma vacuola nuacutecleo nucleolos Cuaacutentos nuacutecleos y nucleolos presenta la ceacutelula Diferencie entre las dos preparaciones Cuaacuteles son las ventajas de utilizar colorantes Queacute organelos celulares se colorean con lugol

MONTAJE HUMEDO DE EPIDERMIS DE LIRIO- ElodeaColoque un segmento de hoja de lirio en el porta objetos coloree con azul de metileno Observe al microscopio y diga cuaacutentos tipos de ceacutelulas observa y queacute forma tienen identifique y esquematice en las ceacutelulas epideacutermicas las siguientes estructuras pared celular membrana celular citoplasma vacuolas y nuacutecleo Identifique un estoma sentildeale el ostiolo y diga su funcioacuten De cada una de las estructuras anteriores diga su funcioacuten

MONTAJE HUMEDO DE EPIDERMIS DE TOMATE (Lycopersicum esculentum Millar)Raspe la epidermis de tomate sobre la laacutemina porta objetos lavando con agua hasta que la epidermis esteacute translucida Agregue tionina y observe La forma de las ceacutelulas su coloracioacuten pared celular la laacutemina media y los plasmodesmos que fraccionan o seccionan la pared celular Diga queacute son y cuaacutel es su funcioacuten

OBSERVACIOacuteN DE CLOROPLASTOSTome una hoja de elodea (Egeria densa) y ubique el aacutepice foliar Pase a 40X y diga coacutemo se llaman los organelos de color verde que se observan doacutende se localizan y cuaacutel es su funcioacuten Describa el tipo de movimiento de los organelos y coacutemo se llama este tipo de movimiento Dibuje lo observado

OBSERVACIOacuteN DE AMILOPLASTOSTome un trozo de papa (Solanum tuberosum L) y con el bisturiacute o cuchilla haga un raspado y deposiacutetelo sobre el portaobjetos agregue una gota de lugol cubra y lleve al microscopio Observe la forma de los amiloplastos Repita la misma operacioacuten con banano (Musa sapientum L)

OBSERVACIOacuteN DE CROMOPLASTOSTome una muestra de pulpa roja (mesocarpo) de tomate extienda sobre la laacutemina porta objetos agregue una gota de agua y lleve al microscopio Observe las ceacutelulas grandes y transparentes con una pared delgada dentro se encuentran unas granulaciones de color rojo que pueden agruparse alrededor del nuacutecleo o estar dispersos en el citoplasma

CEacuteLULAS ANIMALES

gota de sangre

METODOLOGIacuteA

Muestra de sangre

Con la lanceta esteacuteril realizar una puncioacuten en un pulgar

Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos

Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina peliacutecula de sangre El porta absorbe la gota y la arrastra pero sin pasar nunca por encima de ella para no dantildear los hematiacutees

Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincioacuten y antildeadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacioacuten

Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos Evitar la desecacioacuten del colorante agregando maacutes liacutequido

Lavar la preparacioacuten y antildeadir unas gotas de eosina dejaacutendola actuar 1 minuto

Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante Dejar secar aireando el porta

Observar al microscopio

OBSERVACIOacuteN MICROSCOacutePICA

Al microscopio se veraacuten con un dominio predominante los gloacutebulos rojos hematiacutees o eritrocitos tentildeidos de color rojo por la eosina No tienen nuacutecleo y son maacutes delgados por el centro que por los bordes

Los gloacutebulos blancos o leucocitos se identifican faacutecilmente por la presencia de nuacutecleo tentildeido de morado por la hematoxilina Hay varias clases de leucocitos

Linfocitos de tamantildeo aproximado al de los gloacutebulos rojos tienen un solo nuacutecleo que

ocupa casi todo el gloacutebulo

Monolitos son los leucocitos mayores poco frecuentes normalmente nuacutecleo grande redondo son los maacutes moacuteviles y su funcioacuten principal es la fagocitosis

Polimorfonucleares nuacutecleo fragmentado o arrosariado Pueden ser eosinoacutefilos con abundantes granulaciones tentildeidas de rojo por la eosina neutroacutefilos y basoacutefilos

Las plaquetas no son visibles ya que precisan una teacutecnica especial de tincioacuten

Muestra de protozoarios

-Agregar una gota de muestra de agua estancada (con gotero) en el portaobjeto poner el cubreobjeto con la precaucioacuten de que no se formen burbujas observar en los objetivos de 10x y 40x

Actividad Complementaria

En el siguiente cuadro marca las estructuras que pudiste observar

10 X 40X 10 X 40X 10 X 40X 10 X 40X 10 X 40X

Nuacutecleo

Membrana celularPared celular

Citoplasma

Vacuolas

Elodea Sangre Protozoarios

Muestras organelos

Ceacutelulas Vegetales Ceacutelulas Animales

Cebolla Tomate

POST LABORATORIO

1 Indique las principales diferencias entre ceacutelulas vegetales y ceacutelulas animales (realice un cuadro comparativo)

2 Porque los organelos celulares son de diferente formas y color3 Describa los organelos celulares que diferencias los dos tipos de ceacutelulas de

estudio4 Revise diferentes tipos de teacutecnicas que se utilizan para estudia ceacutelulas vegetales

y animales

OBSERVACIOacuteN MICROSCOacutePICA DE HONGOSPRAacuteCTICA 3

INTRODUCCIOacuteN

Los hongos constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descrito aproximadamente 500000 pero se estima que pueden existir entre 1 y 15 millones de especies) que presentan una amplia distribucioacuten en la naturaleza contribuyendo a la descomposicioacuten de la materia orgaacutenica (Figura 1) y participando en los ciclos bioloacutegicos Un pequentildeo nuacutemero son patoacutegenos de animales y plantas Figura 1 Estructura de Hongos estructuras para la degradacioacuten de materia orgaacutenicaInicialmente los hongos fueron clasificados dentro del Reino Plantae ya que fueron considerados organismos inmoacuteviles presentando estructuras que se asientan firmemente en el sustrato sobre el que creciacutean Sin embargo cuando se ha aplicado la biologiacutea molecular en los estudios taxonoacutemicos se ha observado que los hongos estaacuten maacutes proacuteximos al Reino Animalia que al Plantae En el sistema de clasificacioacuten de los seres vivos en cinco reinos los hongos se encuentran clasificados en el Reino Fungi que se divide en cuatro Phyla denominados Ascomycota (el maacutes extenso que comprende el 50 de los hongos conocidos y aproximadamente el 80 de los hongos patoacutegenos Basidiomycota Zygomycota y Chytridiomycota encontraacutendose en los tres primeros los hongos patoacutegenos humanos Los hongos en los que no se conoce su reproduccioacuten sexual constituyen un grupo heterogeacuteneo denominado Deuteromicetos hongos imperfectos o mitospoacutericos que representa el segundo grupo maacutes numeroso y que tambieacuten incluye patoacutegenos humanos

Los hongos son organismos eucariotas tiacutepicos (Figura 2) y poseen un nuacutecleo que contiene varios cromosomas (siete en Candida albicans ocho en Aspergillus nidulans y dieciseacuteis en Saccharomyces cerevisiae) delimitado por una membrana nuclear con nucleacuteolo rico en ARN y orgaacutenulos citoplaacutesmicos como mitocondrias vacuolas retiacuteculo endoplaacutesmico aparato de Golgi y ribosomas 80 S El citoplasma se encuentra limitado por la membrana citoplaacutesmica que es una doble capa de liacutepidos que contiene proteiacutenas y esteroles y que controla la permeabilidad celular y participa en la siacutentesis de la pared celular La estructura de las ceacutelulas de los hongos es muy diferente de la de las bacterias que son organismos procariotas Aunque comparten muchas estructuras las ceacutelulas de los hongos se diferencian de las de las plantas en la composicioacuten de la pared celular y en que carecen de cloroplastos y clorofila y de las humanas en que tienen pared celular y en la presencia de ergosterol en la membrana citoplaacutesmica Por el exterior de la membrana citoplaacutesmica presentan una pared celular que estaacute compuesta fundamentalmente por polisacaacuteridos y por diversas proteiacutenas Los polisacaacuteridos maacutes importantes son la quitina (poliacutemero de n-acetil glucosamina) el manano (poliacutemero de manosa) y el glucano (poliacutemero de glucosa)

Los hongos presentan baacutesicamente dos tipos de morfologiacuteas una multicelular denominada filamentosa y otra unicelular denominada levaduriforme Los hongos filamentosos (miceliares o mohos) representan el crecimiento maacutes tiacutepico de los hongos microscoacutepicos En medios de cultivo soacutelidos y tambieacuten sobre cualquier superficie en la que se desarrollen por ejemplo frutas u otros alimentos producen colonias algodonosas o pulverulentas que son muy caracteriacutesticas Al microscopio oacuteptico los hongos filamentosos presentan unas estructuras tubulares formadas por muacuteltiples ceacutelulas que se denominan hifas

Los hongos obtienen los nutrientes por absorcioacuten y tienen un metabolismo quimioheteroacutetrofo ya que obtienen la energiacutea y el carbono de compuestos orgaacutenicos sintetizados por otros organismos Este hecho condiciona su modo de vida ya que en la naturaleza se encuentran asociados a la materia orgaacutenica en descomposicioacuten participando en los ciclos naturales de reciclado del carbono y otros elementos naturales o Bial - Ariacutestegui 3 4 Rev Iberoam Micol 2002 como patoacutegenos oportunistas de los animales y plantas Los hongos pueden degradar una gran cantidad de componentes para lo que disponen de potentes exoenzimas que en algunos casos pueden servirles como factores de virulencia en el hospedadorEn el laboratorio los hongos crecen faacutecilmente en la mayoriacutea de los medios de cultivo necesitando una fuente de carbono orgaacutenica e iones amonio o nitrato como fuentes de nitroacutegeno Esta facilidad para crecer en cualquier medio de cultivo y la presencia de conidios en el aire hace que sean contaminantes habituales en el laboratorio Los hongos filamentosos son aerobios y los levaduriformes anaerobios facultativos Sus requerimientos de temperatura y de pH son poco exigentes y la mayoriacutea crecen en un rango de pH de 2 a 9 y a temperaturas entre 10 y 40 degC

La mayoriacutea de los hongos presentan reproduccioacuten sexual y asexual El estado sexual se denomina teleomorfo o meiospoacuterico y el asexual anamorfo o mitospoacuterico Es relativamente comuacuten que un mismo hongo tenga dos nombres el del estado anamorfo y el del estado teleomorfo ya que suelen haberse descubierto y nombrado de forma independiente En un grupo importante de hongos solamente se conoce la reproduccioacuten asexual bien porque no se conocen las condiciones adecuadas para que se desarrolle la forma sexual o porque eacutesta se ha perdido a lo largo de la evolucioacuten Aunque la reproduccioacuten asexual puede lograrse por fragmentacioacuten de las hifas ya que cada fragmento puede producir una nueva colonia normalmente los hongos se reproducen tanto sexual como asexualmente por medio de esporas Los hongos producen millones de esporas cada una con la capacidad para desarrollar una nueva colonia Las esporas sexuales se producen tras la fusioacuten de los nuacutecleos de dos hifas sexualmente compatibles o de dos levaduras y posterior meiosis La morfologiacutea de las esporas sexuales es muy variada y tiene gran intereacutes para la identificacioacuten fuacutengica ya que presentan diferencias caracteriacutesticas

OBJETIVOS

1 Conocer procesos de preparacioacuten en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de hongos

2 Observar la morfologiacutea de los hongos y distinguir las diferentes estructuras que presenta

3 Diferenciar los diferentes tipos de hongos seguacuten su origen y materia orgaacutenica que pueden degradar

Una semana antes de realizar el laboratorio se deberaacuten cultivar hongos los cuales seraacuten observados en el laboratorio

En diferentes frascos de vidrio de plaacutestico o vidrio de boca ancha colocar los

siguientes materiales a) un trozo de pan de marca o de panaderiacutea b) un trozo de tomate papaya u otros alimentos en descomposicioacuten Dejar la caja a la intemperie un diacutea en un lugar sombreado y despueacutes taparla Colocar los frascos de preferencia en un lugar fresco por cinco diacuteas y llevarla posteriormente al laboratorio

Materiales

Microscopio Agujas de diseccioacuten Solucioacuten salina al 1 Gotero Pinza de punta roma Lugol Cajas de Petri Azul de metileno Portaobjetos Cubreobjetos Cuchilla-bisturiacute Muestras de hongos Cinta transparente Champintildeoacuten

Procedimiento en el laboratorio

-Abrir los frascos y separa los diferentes productos colocaacutendolos en una caja de Petri

-Empleando el estereoscoacutepico observa cada uno de los productos y describe la apariencia que tienen los mohos o pelusas que se observan sobre ellos asiacute como las manchas que aprecies sobre los mismos

-En el cuadro que se presenta en la seccioacuten de resultados deberaacutes indicar que olor despiden los diferentes productos si es azucarado picante como vinagre rancio feacutetido etc Estas observaciones son subjetivas Igualmente deberaacutes indicar el color de los mohos manchas o pelusas si se ve como polvo o como gelatina

-Una vez descritos los productos observados con el estereoscoacutepico realizar una serie de preparaciones temporales y observar con el microscopio compuesto la estructura microscoacutepica que presentan antildeadir una gota de colorante y describir la estructura que logra identificar Elaborar los esquemas representativos de las observaciones y aneacutexala a este reporte En caso de no observar hifas conidioacuteforos o esporangioacuteforos sentildeala las caracteriacutesticas de forma y color que presentan conidioacutesporas y esporangioacutesporas

-Respecto al champintildeoacuten realizar con un bisturiacute un corte lo maacutes fino posible tanto en la cabeza del hongo como de su talo o estiacutepite colocarlo en el porta objeto antildeadir una gota de azul de metileno describir a traveacutes de un esquema las estructuras que observa

-Teacutecnica cinta adhesiva colocar sobre un portaobjetos una gota de solucioacuten de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacioacuten quede demasiado gruesa Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentracioacuten de esporas Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro

Una vez concluidas las observaciones trata de agrupar a los hongos observados de acuerdo a las caracteriacutesticas comunes

Completar en el siguiente cuadro y guiacutea

Sustrato o alimento

Olor que despide

Apariencia de las colonias

Estructuras observadas

Cuestionario

1 iquestEn queacute consisten las diferencias que presentan los hongos encontrados o desarrollados en los distintos materiales

2 iquestQueacute origen tienen olores que despiden los diferentes alimentos Sentildealar si eacutestos pueden indicar cuaacutel sustancia o compuesto degradan los hongos

3 Tras realizar las observaciones con el microscopio compuesto queacute estructuras se pueden identificar en los organismos observados

4 Con base en las caracteriacutesticas observadas en los diferentes organismos iquestCoacutemo se clasifican los organismos observados

5 Realizar un esquema con las divisiones del reino hongo o fungi

PREPARACIOacuteN DE UN FROTIS BACTERIANOPRAacuteCTICA No 4INTRODUCCIOacuteN

Para realizar el estudio microbioloacutegico ya sea humana o animal vegetal industrial o del medio ambiente se debe someter a una serie de procesos estandarizados de laboratorio que permitan reconocer los microorganismos Las coloraciones permiten diferenciar formas agrupaciones caracteriacutesticas tintoriales y estructuras de los diferentes microorganismos en las muestras

COLORACIONESLos colorantes bioloacutegicos tienen varias aplicaciones en microbiologiacutea se usan para clasificar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas tambieacuten para observar las diferentes estructuras microbianas como pared capsula espora flagelo nuacutecleo y graacutenulos tienen utilidad para la observacioacuten de levaduras y estructuras en medios de cultivo se emplean como indicadores o inhibidores selectivos

La morfologiacutea bacteriana se puede observar claramente por medio de coloracioacuten de las ceacutelulas En las teacutecnicas de coloracioacuten las bacterias estaacuten muertas por el hecho de fijar con calor la muestra a la laacutemina y por el mismo proceso de coloracioacutenAl aplicar un colorante a la preparacioacuten microbiana las bacterias se tintildeen hacieacutendolas resaltar con claridad debido a la composicioacuten quiacutemica tan diferente con respecto al medio que las rodea ademaacutes permite estudiar las caracteriacutesticas morfoloacutegicas y emplear mayores amplificaciones microscoacutepicas

Al poner en contacto una ceacutelula bacteriana con un colorante ocurre un intercambio de iones entre el colorante y los sitios activos de la superficie o del interior de la ceacutelula Los iones tenidos del colorante reemplazan a los iones de los componentes celulares por ejemplo el catioacuten azul de metileno reemplaza el catioacuten de sodio daacutendoles el colorSeguacuten la estructura que el colorante tintildee en la bacteria las coloraciones se han clasificado en

-Coloraciones simples En las que se emplea un solo colorante para el proceso por ejemplo azul de metileno cristal violeta fucsina baacutesica y safranina

-Coloraciones compuestas y diferenciales En estas se usa maacutes de un colorante y con la misma coloracioacuten las ceacutelulas se tintildeen de manera diferenteEjemplo Tincioacuten de Gram Ziehl Neelsen

-Coloraciones especiales permiten la observacioacuten de estructuras especiales de la bacteria como esporas glicocaacutelix caacutepsulas flagelos etc Ejemplo Wayson (esporo) Leifson (flagelo) rojo congo (coloracioacuten aacutecida) (glicocalix caacutepsula) Van Stoltemberg (graacutenulos metacromaacuteticos)

-Coloracioacuten de GramLa coloracioacuten de Gram fue descrita en 1884 por el citoacutelogo Christian Gram para tentildeir bacterias presentes en los tejidos Actualmente continuacutea siendo la maacutes empleada en microbiologiacutea esta clasificada como una coloracioacuten compuesta y diferencial debido a que en el proceso se utilizan dos colorantes el cristal violeta y la fuscina baacutesica y dependiendo del colorante que toma la pared bacteriana y dos grandes categoriacuteas denominadas Gram positivas (se tintildeen de cristal violeta) y las Gram negativas (toman el color de la fuscina baacutesica)

Esta diferenciacioacuten es fundamental para establecer especiacuteficamente el tratamiento con antibioacuteticos La reaccioacuten tintorial que presentan las bacterias al ser coloreadas con Gram demuestra una composicioacuten quiacutemica y estructural de la paredes pues se evidencia tambieacuten el comportamiento bacteriano especiacutefico frente a agentes fiacutesicos y quiacutemicosReaccioacuten de las ceacutelulas frente a los componentes de la coloracioacuten de Gram

COMPONENTES GRAM POSITIVAS (maacutes concentracioacuten de peptidoglicano)

GRAM NEGATIVAS (menos concentracioacuten de peptidoglicano doble capa lipiacutedica)

Cristal violeta (colorante baacutesico)

Bacteria de color violeta Bacterias de color violeta

Lugol (fijador) Se forma complejo CV-IBacteria de color violeta

Se forma complejo CV-IBacterias de color violeta

Alcohol acetona (decolorante)

Deshidratacioacuten de paredes celulares retraccioacuten de poros disminucioacuten de la permeabilidadPresencia del complejo CV-I Bacteria de color violeta

Extraccioacuten de liacutepidos de la pared mayor porosidad liberacioacuten del complejo colorante-fijador (CV-I) Bacteria incolora

Fucsina baacutesica Bacteria de color violeta Bacteria de color rosado

La pared celular es responsable de lo que le sucede al colorante utilizado en la tincioacuten de Gram (1884) Las propiedad de tentildeirse o no de violeta oscuro (Gram positivas o Gram negativas) por esta coloracioacuten es un criterio de clasificacioacuten importante correlacionable

con otras propiedades bacterianas Unos pocos organismos son Gram variables

Tanto las Gram positivas como las Gram negativas captan la misma cantidad de cristal violeta e yodo El complejo CV-I sin embargo es atrapado dentro de la ceacutelula Gram positiva por la deshidratacioacuten y la reduccioacuten del tamantildeo de los poros de la pared resultante del proceso de lavado con solvente En contraste en las Gram negativas la fina (y probablemente discontinua) capa de peptidoglicano no impide la extraccioacuten por el solvente del complejo

Avala lo antedicho el hecho que si despueacutes de su tincioacuten se tratan con lisosoma bacterias Gram positivas se ve que los protoplastos siguen tentildeidos pero pierden el colorante si se los trata con alcohol Esto indica que el colorante es fijado a nivel del protoplasto y que la pared celular de las bacterias Gram positivas es la que impide la extraccioacuten del colorante Corroborando esta suposicioacuten se observa que cuando B subtilis emerge de su espora su pared celular estaacute inmadura y se comporta como Gram negativas Cuando la pared celular adquiere su estructura final pasa a ser Gram positiva

La pared bacteriana estaacute compuesta por elementos comunes para la mayoriacutea de especies como son peptidoglucano aacutecido diaminopimeacutelico y componentes especiales que estaacuten presentes solo en algunas especies como aacutecido teicoico ndash teicuroacutenico en Gram positivas lipopolisacaridos en Gram negativas aacutecido micoacutelico ndash arabinogalactano en mycobacterias formas meso ndash levo de aacutecido diaminopimeacutelico o carencia de ellas como sucede en Actinomices Streptomyces y Nocardias ausencia de peptidoglucano en Micoplasma y Ureaplasma

Dichos componentes son aprovechados por la coloracioacuten de Gram que clasifica las bacterias en 4 grandes grupos Cocos Gram positivos Cocos Gram negativos Bacilos Gram positivos Bacilos Gram negativos Sin embargo algunos geacuteneros bacterianos no pueden ser incluidos dentro de la clasificacioacuten por la coloracioacuten de Gram porque no toman el colorante por su baja afinidad (Ricketsias) ausencia de pared (micoplasmas) diferente composicioacuten quiacutemica de la pared (mycobacteias Nocardias Actinomices) carcteriacutesticas especiales o no visibles al microscopio oacuteptico comuacuten por su reducido tamantildeo (Espiroquetas Mycobacterias entre otras) formas diferentes a las claacutesicas (Haemophilus fusoespirilos) Como coloraciones alternas para estos microorganismos esta Ziehl Neelsen Giemsa Wright fluorocromos e incluso microsocopiacutea electroacutenica

-Coloracioacuten de Wayson especial para endosporas estaacute clasificada como una coloracioacuten especial por demostrar la presencia de una estructura especial que caracteriza a la bacteria Que se pueda observar dicha estructura es de gran importancia para determinar el proceso de estudio que se va a seguir realizar el diagnoacutestico exacto y dar un tratamiento adecuado al agente infecciosoLas endosporas son cuerpos ovales de pared gruesa que se forman dentro de la ceacutelula vegetativa donde se recoge el material celular y la ceacutelula se deshidrata (se sintetiza dipicolinato de calcio y el endosporo se recubre de una serie de capas protectoras como el oxosporium) dentro de la cual se encuentra la cubierta de la espora que estaacute compuesta de una capa parecida a la de la pared celular por debajo de la cubierta de la espora se encuentra la corteza y dentro de ella el nuacutecleo o corazoacuten que contiene a la

pared celular usual Asiacute la espora difiere de la estructura de la ceacutelula vegetativa

Las endosporas dan a la bacteria alta resistencia a factores fiacutesicos y quiacutemicos desfavorables son caracteriacutesticas del geacutenero Bacillus y Clostridium-Coloracioacuten de rojo congo y tinta china (caacutepsula y glicocaacutelix) los glicocaacutelix son sustancias densas o pegajosas constituidas por glucanos solubles e insolubles que secretan la mayoriacutea de procariotas sobre su pared algunos forman una capa de poco espeso llamada microcaacutepsula otros forman capas de mayor diaacutemetro que constituyen una verdadera caacutepsula

El glicocaacutelix cumple la funcioacuten de fijar los microorganismos patoacutegenos a sus hueacutespedes los cuales son difiacuteciles de reconocer y destruir por fagocitosisEsta sustancia tiene especial importancia en la patogenicidad bacteriana y les da especial resistencia a la desecacioacuten

Las coloraciones utilizadas para la observacioacuten de estas estructuras son denominadas negativas (rojo congo nigrosina y tinta china) Tambieacuten se pueden utilizar colorantes baacutesicos como en la coloracioacuten de Hiss en la que la caacutepsula se colorea de azul paacutelido la bacteria de color puacuterpura y el fondo de color claro

Estas coloraciones por tener el ioacuten colorante cargado negativamente son rechazadas por la caacutepsula y el glicocaacutelix por eso la estructura queda incolora pero si se colorea el medio que a envuelve el resultado es un fondo coloreado sobre el cual se observan pequentildeos agujeros incoloros que corresponden a la caacutepsula cuando es de escaso diaacutemetro y al glicocaacutelix cuando el diaacutemetro es maacutes amplio Si en el proceso de coloracioacuten se incluye un colorante baacutesico este tintildee la pared de la bacteria que se observa coloreada dentro de la caacutepsula o del glicocaacutelix

Si se desea incrementar el contraste de las ceacutelulas para la microscopiacutea son suficientes procedimientos simples de tincioacuten El azul de metileno es un buen colorante simple que actuacutea sobre todas las ceacutelulas bacterianas raacutepidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares Es especialmente uacutetil para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales puesto que la mayor parte del material no celular no se tintildee

ELABORACION DEL FROTIS Si el frotis se va a realizar a partir de una muestra soacutelida se debe poner sobre una laacutemina limpia y desengrasada una pequentildea gota de agua con el asa recta esterilizada y con la punta del asa recta se toma ya sea una colonia bacteriana empleadas en este laboratorio se emulsiona con la gota de agua y luego se extiende sobre la laacutemina en un aacuterea no mayor de 05 cm de diaacutemetro de manera que sobre una misma laacutemina se pueden realizar hasta 3 frotis diferentes El frotis se deja secar a temperatura ambiente y nunca con calor debido a que se facilita la formacioacuten de abundantes aerosoles precipitados de colorantes y alteraciones de la forma de los microorganismos Si la muestra es liacutequida se emplea el asa con argolla y no se requiere emulsionar la muestra con agua sino que directamente se extiende en un aacuterea de 05 cm se deja secar a temperatura ambiente

FIJACION en el proceso de fijacioacuten del frotis consiste en pasar la laacutemina por el lado contrario de donde se hizo el frotis sobre la llama del mechero tres veces consecutivas evitando que se caliente la laacutemina para que no se dantildeen las estructuras celulares esto se hace debido a que tiene como fundamento matar y fijar a la laacutemina los microorganismos presentes en el frotis

MATERALES

OBLIGATORIO USO DE BATA DE MANGA LARGA

-Por grupos llevar una toalla y jaboacuten en polvo para lavar el material

Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Asa de siembra Cubeta de tincioacuten Pinzas Yogur Vinagre Palillos

Frasco lavador Mechero de alcohol Papel de filtro Cristal violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina

Bacterias del Yogur

1 Colocar una pequentildea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio Es necesaria muy poca cantidad de agua por lo que se puede usar el asa de siembra

2 Tomar una muestra (gota) de yogur y expandirla en el porta mezclarla bien col el agua

3 Dejar secar y fijar con metanol

4 Tentildeir 2 o 3 minutos lavar el exceso de colorante y dejar secar

5 Esperar hasta que el liacutequido se evapore o acelerar su evaporacioacuten acercando el porta a la llama del mechero En este caso hay que tener mucha precaucioacuten de no calentar demasiado el porta pues las ceacutelulas pueden deformarse o romperse

6 Observar en microscopio con los objetivos de 10x 40x y 100 x Para el objetivo de 100x aplicar aceite de inmersioacuten colocar cubre objetos y observar

Bacterias del Vinagre

8 Tomar una muestra (gota) de vinagre y expandirla en el porta

9 Dejar secar y fijar al calor

Bacterias del Sarro Dental

14 Tomar con una aguja enmanglada una porcioacuten del sarro dental y expandirla en el porta

FIJACIOacuteN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS

Por calor Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos Dejar enfriar el porta entre los pases

Con metanol (para bacterias procedentes de medio liacutequido) Antildeadir unas gotas de metanol sobre la extensioacuten completamente seca Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol Esperar a que el metanol se evapore completamente

Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias las preparaciones pueden ser observadas al microscopio aunque carecen de contraste Lo normal es continuar con el proceso de tincioacuten

RESUMEN

1 Preparar los frotis bacterianos 2 Tentildeir con cristal violeta 1min 3 Lavar con abundante agua el exceso de colorante 4 Cubrir con Lugol 1min 5 Lavar con agua el exceso de Lugol 6 Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la

preparacioacuten deje de perder color (30seg) 7 Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente 8 Tentildeir con safranina 1min 9 Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste 10 Secar la preparacioacuten 11 Examinar al microscopio fijaacutendose sobre todo en el color de cada preparacioacuten

Los tiempos de exposicioacuten a los colorantes son orientativos Cada vez que se prepara la bateriacutea de colorantes para realizar la tincioacuten Gram presentan algunas diferencias respecto a los preparados en otro momento por lo que puede ser necesario ajustar los tiempos

POST LABORATORIO

Describa las caracteriacutesticas maacutes importantes de las bacterias realizar esquemas de las formas que presentan y los tipos de agrupaciones que presentan

Realizar una revisioacuten de las aplicaciones de ceacutelulas bacterianas maacutes importantes a nivel ambiental e industrial

Busque en esquemas (dibujos) las formas y agrupaciones bacterianas y dibujelas De 3 razones por las que a una muestra se le debe realizar la coloracioacuten de Gram De acuerdo a la localizacioacuten y tamantildeo de las esporas como se clasifican Mencione 5 bacterias Gram positivas y 5 Gram negativas

PREPARACION Y ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVOPRAacuteCTICA No 5

INTRODUCCION

Los medios de cultivo son un sistema artificial que permite las condiciones oacuteptimas y necesarias (de cantidad de nutrientes temperatura) para el desarrollo de determinados microorganismos De acuerdo con esto encontramos diferentes requerimientos nutricionales distintos tipos de medios en cuanto a consistencia liacutequidos soacutelidos)

alrededor de 16 de agar) semisoacutelidos (08 de agar) que como se observa la consistencia depende de cantidad de agar o de su ausencia el agar es componente esencial que proviene de las algas rojas ademaacutes que es resistente a la accioacuten de degradacioacuten que realizan las bacterias El conocimiento de la nutricioacuten microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio Todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro y micronutrientes aunque ha quedado caro que la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras asiacute como la cantidad relativa de cada nutriente

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es una solucioacuten acuosa (bien como tal o bien incorporada a un coloide en estado de gel) en la que estaacuten presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un(os) determinados microorganismos Los medios de cultivo se pueden clasificar en primera instancia en tres grandes tipos

1 Medios complejos o indefinidos su composicioacuten quiacutemica exacta se desconoce ya que son el producto de realizar infusiones y extractos de materiales naturales complejosEjemplos Digeridos crudos de extracto de carne extracto de levadura peptona de carne extracto de levadura y caseiacutena (de la leche)

Con ellos se logra un tipo de medio rico nutricionalmente aunque indefinido quiacutemicamente Si lo que pretendemos simplemente es obtener un buen crecimiento bacteriano este tipo de medios es ideal ya que su confeccioacuten es faacutecil y raacutepida (basta pesar cierta cantidad del extracto desecado suministrado por casas comerciales disolverlo en agua y esterilizar en autoclave antes de inocular e incubar la bacteria con la que queramos trabajar) Estos medios contienen fuentes variadas de C y N orgaacutenicos sales minerales y micronutrientes Sin embargo con ellos no podemos tener un control nutricional preciso ya que desconocemos la composicioacuten quiacutemica y proporcioacuten exacta de los distintos nutrientes

2 Medios sinteacuteticos o definidos se obtienen disolviendo en agua destilada cantidades concretas de distintas sustancias quiacutemicas puras orgaacutenicas yo orgaacutenicas La composicioacuten concreta de un medio sinteacutetico dependeraacute de la bacteria que queramos cultivar loacutegicamente un medio definido para una bacteria con grandes capacidades biosinteacuteticas seraacute maacutes sencillo que el medio definido de otra bacteria con menores posibilidades biosinteacuteticas

3 En tercer lugar podemos fabricar un tipo de medio ldquomezclardquo de los anteriores denominado medio semisinteacutetico llevan algunas sustancias quiacutemicas cuya naturaleza y cantidad conocemos junto con sustancias de naturaleza y composicioacuten indefinidasCualquiera que sea el tipo de medio de los 3 que acabamos de citar podemos elaborar dos tipos de versiones seguacuten su estado aparente

-Medios liacutequidos

-Medios soacutelidos derivan de los liacutequidos simplemente antildeadiendo a la solucioacuten nutritiva

un coloide en estado gel que solidifica (da consistencia) a esta solucioacuten

En los primeros tiempos de la microbiologiacutea solo se conociacutea como sustancia gelificante la gelatina Sin embargo presenta muchos inconvenientes ya que funde a 25C (por encima de esta temperatura el medio se licuacutea) y ademaacutes muchas bacterias presentan gelatinasas que hidrolizan la gelatina

El gelificante maacutes usado es el agar-agar extraiacutedo de algas rojas (pej Gelidium) del cual existen versiones maacutes o menos purificadas (las maacutes puras estaacuten maacutes enriquecidas en el polisacaacuterido agarosa son las que se emplean para los medios definidos con el objeto de evitar la introduccioacuten de sustancias contaminantes inadvertidas que falseen las interpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la bacteria)

El agar presenta la ventaja de que una vez gelificado no funde hasta cerca de los 100C lo que permite su uso para la inmensa mayoriacutea de las bacterias que son mesoacutefilasPara cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioautoacutetrofos) se suele recurrir a un gelificante inorgaacutenico el silicagel o gel de siacutelice

Medios selectivos son aquellos que permiten seleccionar un tipo (unos pocos tipos) de microorganismos En el laboratorio se emplean mucho medios selectivos soacutelidos que incorporan ciertas sustancias que inhiben el crecimiento de ciertas bacterias pero permite el crecimiento de otras (p ej Medios que llevan violeta cristal inhiben el crecimiento de bacterias gran positivas)

Medios diferenciales son aquellos que permite distinguir a simple vista dos o maacutes tipos de bacterias en funcioacuten de su distinto comportamiento respecto de alguacuten nutriente del medio Este comportamiento diferencial se traduce normalmente en viraje de color de una sustancia indicadora presente en el medio

EjemplosEn el medio EMB (eosina azul de metileno) ciertos tipos de metaboacutelicos de bacterias producen aacutecidos por fermentacioacuten de ciertas fuentes de carbonoEl medio agar-sangre lleva un 5 de sangre de caballo o carnero lo cual revela la capacidad (y el tipo) de hemoacutelisis de ciertas bacterias

CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS

Antes de utilizar un medio de cultivo se debe realizar el control de calidad para comprobar si las caracteriacutesticas del medio estaacuten dentro de las especificaciones dadas por la casa comercial y si la metodologiacutea de preparacioacuten es satisfactoria Cada lote de medio preparado debe someterse a un programa miacutenimo de ensayo que asegure su aceptacioacuten y demuestre su actividad bacteriana tiacutepica

Valor de pH compruebe el pH del medio cuando este tenga la temperatura ambiente el cual debe coincidir con el sentildealado en la etiqueta

Esterilidad Tome al azar una muestra del 3 al 5 del lote preparado e incuacutebelo a 37C durante 2 a 5 diacuteas para observar si hay crecimiento microbiano Si hay presencia es indicativa de mala esterilizacioacuten y debe repetirse toda la preparacioacuten La esterilizacioacuten es el proceso mediante el cual se destruyen los microorganismos sea cual sean sus caracteriacutesticas (ceacutelulas viables esporas etc) patoacutegenos o no sobre el material o dentro de eacutel

Efectividad Que en el medio preparado efectivamente hay un desarrollo de microorganismos se pone el medio de cultivo al ambiente o sirviendo una muestraEstabilidad con cierta periodicidad compruebe los datos mencionados en el medio preparado y conservado para determinar si las condiciones de conservacioacuten son satisfactorias

MATERIALES

AutoclaveBalanzaEspaacutetulaErlenmeyerCajas de petriGradillasAgua destiladaPapel kraftProbetasErlenmeyerTaponesMedios de cultivo (agar y caldo)

METODOLOGIA

En la praacutectica se realizaraacute la preparacioacuten de medios de cultivo tales como agar nutritivo y caldo nutritivo

Realizar los caacutelculos correspondientes para la preparacioacuten de los medios teniendo en cuenta el recipiente en el que se va a ensayar el medio ya que los tubos de ensayo 13X100 tapoacuten algodoacuten se ponen 3 ml y en las cajas de petri se envasan 20 mlAgregar en un erlenmeyer el medio (gramos) y agregue la cantidad de agua calculada (ml) Agite el medio y poacutengalo a calentar con un tapoacuten algodoacuten ligeramente puesto deje hervir En el caso de los caldos no se calientan

Posteriormente esterilice en autoclave (calor huacutemedo) Es importante saber que hay condiciones que garantizan una verdadera esterilizacioacuten tiempo 15-30 minutos presioacuten de vapor 15 libraspulgadas cuadradas o 12 atmoacutesfera y temperatura de 121CDeje enfriar a temperatura cachete y sirva en cajas de petri en el caso de los tubos sirva 5 o 6 mililitros con la pipetaPara conservar los medios de cultivo se colocaraacuten en el refrigerador para evitar que se dantildeen y se contaminen Se recomienda guardar los medios dentro de bolsas de plaacutestico

selladas

Realizar la prueba de esterilidad para 2 cajas una como control sin esterilizar y una prueba de efectividad exponiendo la caja al ambiente

Queacute efecto tiene el calor sobre los microorganismos Queacute efecto tiene el meacutetodo de calor seco en la ceacutelula (microorganismos) Queacute efecto tiene la luz ultravioleta sobre la ceacutelula (microorganismos) Defina desinfectante antiseacuteptico bactericida

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

Haga un esquema del autoclave con sus partes y su funcioacuten Esquematice etapas de esterilizacioacuten en autoclave (en clase) Mencione los dos tipos principales de esterilizacioacuten y explique cada uno de ellos

PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA CELULAR FENOacuteMENOS DE DIFUSIOacuteN OSMOSIS Y PRESION OSMOacuteTICA

LABORATORIO No 6

Toda ceacutelula posee un sistema complejo de membranas cuya funcioacuten general es el intercambio de materiales entre la ceacutelula y el medio acuoso externo o fluido extracelular y entre los organelos y el citoplasma de las ceacutelulas Las membranas sirven igualmente para compartimentar enzimas y metabolitos celulares Estas poseen la propiedad funcional de PERMEABILIDAD SELECTIVA por ser permeables a las moleacuteculas de agua pero maacutes o menos impermeables a los solutos Sin embargo esta permeabilidad puede verse afectada por cambios de temperatura toacutexicos solventes orgaacutenicas y la composicioacuten quiacutemica del medio que rodea la ceacutelula

OBJETIVO Observar el efecto de la concentracioacuten del medio sobre las ceacutelulas y comprobar el proceso de oacutesmosis en un osmoacutemetro

PRIMERA PARTE

MATERIALES Azul de metilenoSolucioacuten rojo neutroSolucioacuten salina (NaCl) al 2 06Agua destiladaHieloTermoacutemetro

Tubos de ensayoGradillasPipetasVasos de precipitadoPinzas porta y cubreobjetos

PROCEDIMIENTO

DIFUSIOacuteN ESPONTAacuteNEA

Ponga 2 ml de agua destilada en 5 tubos de ensayo marcados respectivamente del 1 al 5 Tome la temperatura Agregue azuacutel de metileno a cada uno de los tubos asiacute Tubo 1 Una gota Tubo 2 Dos gotas Tubo 3 Tres gotas Tubo 4 Cuatro gotas Tubo 5 Cinco gotas Mida el tiempo de difusioacuten en cada uno de los tubos para ello registre el tiempo en el que colocoacute las gotas de azuacutel de metileno y el momento en que la distribucioacuten de eacuteste es uniforme Registre el tiempo de difusioacuten en una graacutefica (papel milimetrado) y diga queacute efecto tiene la concentracioacuten sobre la velocidad de difusioacuten

Tome cuatro tubos de ensayo marcados del 1 al 4 En el tubo 1 adicione 2 ml de agua a 0degC al tubo 2 adicione 2 ml de agua a temperatura ambiente al tubo 3 adicione 2 ml de agua a 45degC y en cuarto tubo 2 ml de agua a 75degC Inmediatamente despueacutes de adicionar el agua en los tubos coloque dos gotas de azul de metileno en cada uno de ellos y mida el tiempo de difusioacuten Registre graacuteficamente los resultados y diga el efecto que tiene la temperatura sobre la velocidad de difusioacuten (realice una tabla y una graacutefica)

OSMOSIS A TRAVES DE LA MEMBRANA CELULAR

Utilizando los eritrocitos como osmoacutemetros marque 3 tubos del 1 al 3 tres respectivamente y deposite en cada uno de ellos 2 ml de solucioacuten asiacute tubo 1 solucioacuten salina al 2 tubo 2 agua destilada tubo 3 solucioacuten salina al 06 Luego adicione 1 gota de sangre en los tres tubos de ensayo Transcurridos 2 minutos transfiera con una pipeta limpia a un portaobjetos previamente marcado (1 a 3) una gota de cada tubo y cuacutebrala con una laminilla Observe la muestra al microscopio y describa la forma que presentan los eritrocitos o gloacutebulos rojos Con el ocular micromeacutetrico indique el tamantildeo de los eritrocitos en cada caso y compare El tamantildeo promedio de un eritrocito humano es de 75 um Haga sus esquemas

PREGUNTAS

Queacute procesos se desarrollaron durante la praacutectica hubo hemoacutelisis o normalidad en cada caso

La solucioacuten era isotoacutenica hipotoacutenica o hipertoacutenica en cada caso Queacute le sucederiacutea a una persona si se le inyectara agua destilada en el torrente

sanguiacuteneo

SEGUNDA PARTE

DETERMINACIOacuteN DE LA CONCENTRACIOacuteN OSMOacuteTICA CELULAR Y CAacuteLCULO DE LA PRESIOacuteN OSMOacuteTICA MEDIANTE EL MEacuteTODO PLASMOLIacuteTICO

Coloque al lado izquierdo de una laacutemina dos gota de solucioacuten de sacarosa al 01M y sobre eacutesta una hoja de elodea Luego cubra el montaje con una laminilla Al lado derecho de la misma laacutemina coloque en una gota de agua de acuario otra hoja de tamantildeo semejante No permita que se seque el liacutequido en los montajes Observe al microscopio 20 ceacutelulas de la hoja y determine si se presenta plasmoacutelisis en algunas de ellas Para efectos praacutecticos se considera que una solucioacuten de determinada concentracioacuten produce plasmoacutelisis cuando el 50 estaacuten plasmolizadas Compare su observacioacuten con el montaje de control Repita el procedimiento con las soluciones restantes de sacarosa (02 03 04 y 05M) y registre sus resultados en una graacutefica Indique la (s) concentracioacuten (es) hipo-osmoacutetica iso-osmoacutetica e hiper-osmoacutetica Determine la concentracioacuten osmoacutetica de la ceacutelula y calcule la Presioacuten Osmoacutetica (PO)

Preguntas

Queacute factores determinan el paso de sustancias a traveacutes de las membranas celulares Explique por queacute las heladas afectan a los cultivos Indique algunos procesos bioloacutegicos en plantas y animales relacionados con la

oacutesmosis Queacute es transporte activo De un ejemplo de este proceso Queacute es diaacutelisis y de un ejemplo En que consiste la electrodiaacutelisis Deacute un ejemplo de una aplicacioacuten praacutectica de la diaacutelisis en el campo de la salud