SPOED FISH APL

Een snelle diagnostiek van FISH op beenmergsmears voor de detectie van acute promyelocytenleukemie

Naam: Kristiaan Huijbers

Inhoud

• Wat is APL?

• De nieuwe FISH methode

• Resultaten

• Waarom een snellere diagnostiek?

APL• APL = acute promyelocyten leukemie

• Leukemische/ Oncologische ziekte • Aangedane cel: promyelocyt• Ontstaan van maligniteit: beenmerg• Mediane leeftijd: 30-40 jaar.

• Ontstaan van maligne aandoening:• Chromosomale translocatie (15;17)

• Morfologisch herkenbaar• Auerse staven (‘takkenbosjes’)

Morfologie promyelocyt

Normaal Afwijkend

De translocatie (15;17)• In 99% van de gevallen gevonden

• Betrokken genen: • PML en RARα

• Detectie met FISH

FISH• Directe uitstrijk op ongekweekt materiaal• beenmergsmear

• Voorbehandelen• Pepsinebehandeling• Wasstappen ter verbetering FISH resultaat

• Opbrengen probe• Vysis PML-RARA t(15;17) Dual Color Dual Fusion

FISH• Hybridiseren• 3 minuten denatureren, 76 °C• 120 minuten hybridiseren, 37 °C

• Posthybridisatiewassen• Stap 1: wassen op hoge temperatuur: 76 °C• Stap 2: wassen op kamertemperatuur

• Tijdschema• Inzetten: 4 uur (inclusief hybridiseren)

FISH• Analyseren

Normaal afwijkend

Resultaten• Validatie:• 5 patiënten (indicatie AML) getest zonder voorbehandeling. • Resultaat: bij 1/5 preparaten, storende achtergrond.

• Tweede validatie:• 5 patiënten (indicatie AML) getest met voorbehandeling.• Resultaat: 5/5 preparaten van voldoende kwaliteit.

• Ontbrekende positieve controle

Waarom deze snellere diagnostiek?

• De patiënt heeft baat bij een snelle behandeling• ATRA (vitamine A afgeleide) en chemotherapie

• Na snelle en juiste behandelwijze, gunstige prognose• 12 jaars overleving van 70%

Tijdschema• Tijdschema SPOEDFISH APL

• Beenmergsmears maken 20 minuten• 2 stuks

• Voorbehandelen en probe opbrengen 45 minuten• Denatureren en hybridiseren 125 minuten• Posthybridisatiewassen 20 minuten

• Analyseren van preparaat 30 minuten• Superviseren van preparaat 15 minuten

• Totaal benodigde tijd: 4 uur en 15 minuten

SOP

• Van deze is SPOED methode is een SOP opgesteld:• SOP: M06035: ‘SPOEDFISH APL.’