IRTA-CReSA. Col·laboració en tasques de laboratori

Programa Argó 2015

Ana Serrano, Olga Valero i Marina Nieves

Índex1. Haemophilus parasuis

2. Cultius bacterians

3. Tinció Gram

4. Procediment PCR,Eric-PCR, PCR de

virulència

5. Conclusió

Haemophilus parasuis-Colonitzador primari del tracte respiratori dels garrins.

-Agent causal de la malaltia de Glässer.

-Molt heterogeni (varietat de soques).

Diagnòstic

Objectiu: Generar cultius de colònies aïllades i observar el creixementProcediment: Estendre hisop en dues zones per la placa d’agar xocolata.

Deixar reposar el cultiu a l’estufa (37ºC, 5% CO2)

Resultat:

CULTIU BACTERIÀ 1

Objectiu: Caracteritzar les colònies cultivadesProcediment: A partir de les colònies aïllades cultivades intentem tornar a

generar un cultiu en plaques agar sang i agar xocolata. Deixem reposar 24 hores en les mateixes condicions.

Resultat:

CULTIU BACTERIÀ 2

Tinció Gram1. Agafem part del cultiu i el posem en el portaobjectes.

2. Tenyim la mostra en cristall violeta.

3. Afegim lugol per fixar-ho.

4. Hi introduïm alcohol.

5. Tenyim la mostra amb safranina.

Procediment PCRs1. Extracció DNA a partir dels cultius obtinguts

2. Preparació de la solució necessària PCR (H2O, MgCl2, Buffer,

primers, enzim Taq, nucleòtids)

3. Introduïm en diferents strips la solució i el DNA extret de cada

mostra.

4. Ho introduïm al termociclador seguint els temps i les temperatures

corresponents a cada PCR, i el posem en funcionament.

5. Correm el gel per poder observar els resultats.

Procediments PCRs

PCR PATOLÒGICA

Objectiu: Comprovació de la presència de Haemophilus parasuis a les mostres.

ERIC-PCR

Objectiu: Determinar el tipus de soca causant del cas clínic.

PCR DE VIRULÈNCIA

Objectiu: Determinar si la soca és virulenta o no virulenta.

NV NV - NV V V V Control Control

Conclusions• Podem concloure que els garrins estaven infectats per la bactèria

Haemophilus parasuis.

Gràcies per la vostra atenció