Каталитические активности абзимов у больных...

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства

здравоохранения и социального развития Российской Федерации, г. ТомскНИИ психического здоровья СО РАМН, г. Томск

Институт химической биологии и фундаментальной медицины, г. Новосибирск

Каталитические активности абзимов у больных шизофренией

Докладчик: студент 4 курса МБФ Фаттахов Николай

Сергеевич

Научные руководители:Смирнова Л.П., к.м.н., н.с. НИИПЗ СО РАМНБунева В.Н., д.б.н., г.н.с. ИХБФМ СО РАН

Шизофрения – тяжелое психическое заболевание с неизвестной до сих пор этиологией и патогенезом, протекающее с полиморфной симптоматикой и приводящее к особому дефекту личности.

Гипотезы шизофрении: Индоламиновые (при участии серотонина и его производных) Катехоламиновая: 0-метилирования и дофаминовая Генетическая Аутоинтоксикационная Иммунологическая (аутоиммунная)

Механизмы тардивной (поздней) дискинезии у больных шизофренией

Постсинаптические дофаминовые

рецепторы

Абзимы (AntiBody enZYMES)

IgG Б. Дженкс, 1969 г.

Актуальность исследования

Открытие природных абзимов поставило много вопросов об их возможной биологической функции.

Остается неясным, являются ли каталитические антитела, обнаруживаемые при патологиях, реальными эффекторами патогенного иммунного ответа, или же их образование вторично после нарушения гомеостаза иммунных сетей.

Исследования каталитической активности антител крови больных психическими расстройствами и, в частности шизофренией, ранее не проводились.

Цель

Исследовать каталитическую активность иммуноглобулинов класса G, выделенных из крови больных шизофренией

Объект исследования

Для выделения Ig G бралась кровь 20 больных шизофренией, находящихся на лечении в отделении эндогенных расстройств НИИ психического здоровья СО РАМН, и 15 здоровых лиц.

Методы исследования

Иммуноглобулины G выделены из сыворотки крови здоровых доноров и больных шизофренией методом аффинной хроматографии на колонке Protein-G Sepharose.

ДНКазную активность антител определяли по степени превращения суперскрученной формы ДНК плазмиды pBluescript в кольцевую и линейную формы (электрофорез в агарозном геле)

Протеолитическую активность оценивали по степени гидролиза одного из пептидов основного белка миелина (ОБМ) методом тонкослойной хроматографии.

Методом ИФА (наборы ORGENTEC ANTI-dsDNA, ANTI-ssDNA) определяли титр IgG к в одно- и двунитевой ДНК в сыворотке крови

Расчет активности велся по анализу электрофореграмм в программе Image Quant 5.2., cтатистическую обработку полученных данных осуществляли с помощью программы Statistica 6.0.

Дизайн исследованияVacuette С АКТИВАТОРОМ ОБРАЗОВАНИЯ СГУСТКА

CЫВОРОТКА КРОВИ

АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА PROTEIN-G SEPHAROSE

IgG

ИЗМЕРЕНИЕ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ

АКТИВНОСТИ

Анализ ДНКазной активности препаратов Ig G

1 2 3 4 5 6 к к

lin

sc

со

sc, co, lin – суперскрученная, кольцевая и линейная формы ДНК–плазмиды pBluescript;Дорожки 1 - 6 - препараты IgG больных шизофренией;К – контроль

Анализ протеолитической активности

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 К

Короткаяпоследовательно

сть основного белкамиелина

( ) ОБМ

Продукты гидролиза

ОБМ

Дорожки 1 - 14 - препараты IgG больных шизофренией; К – контроль

Электрофоретический анализ гомогенности препаратов IgG

170

116

73

53

220

AT MАТ – антитела крови больных шизофренией

М- высокомолекулярные маркеры молекулярной массы белков

Окраска серебром

Определение ДНКазной активности во фракциях IgG в условиях кислого шока

2

43

1

Высокоэффективная гель-фильтрация IgG сыворотки крови одного из больных шизофренией на Superdex-

200 в Gly-HCl, pH 2,6

Удельная ДНКазная активность IgG

Относительная протеолитическая активность IgG

% протеолиза

*

* - достоверность различия при сравнении больных шизофренией с ТД и группы контроля (p<0,05)

0

2

4

6

8

10

12

Ед/мл

Больные шизофренией безтардивной дискинезии

Здоровые доноры

Больные шизофренией стардивной дискинезией

Титр IgG к двунитевой ДНК в сравниваемых группах

* - достоверность различия при сравнении больных шизофренией с ТД и группы контроля (p<0,05)

*

0

5

10

15

20

25

30

Ед/мл

Больные шизофренией безтардивной дискинезии

Здоровые доноры

Больные шизофренией стардивной дискинезией

Титр IgG к однонитевой ДНК в сравниваемых группах

*

**

* - достоверность различия при сравнении больных шизофренией с ТД и без ТД (p<0,05)** - достоверность различия при сравнении больных шизофренией с ТД и группы контроля (p<0,05)

Сравнение исследуемых показателей в группах

Титр IgG к однонитевой ДНК, Ед/мл

ДНКазная активность, пМ ДНК/мкг АТ/ч

Протеолитическая активность, % протеолиза

Больные шизофренией с тардивной дискинезией

12,29 2,17 89%

15,59 2,92 31,6%

Больные шизофренией без тардивной дискинезии

5,37 0,032 0,8%

5,9 0,022 8,3%

Здоровые доноры

11,58 0,001 1,8%

7,8 0,014 0

УВЕЛИЧЕНИЕ ДНК-ГИДРОЛИЗУЮЩИХ

СВОЙСТВ IG G

БОЛЬШОЕ КОЛИЧЕСТВО ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ДНК В КРОВИ

БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ (В ОСОБЕННОСТИ,

ОДНОНИТЕВОЙ)ПОЯВЛЕНИЕ В СЫВОРОТКЕ

КРОВИ БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ БОЛЬШОГО

КОЛИЧЕСТВА РАЗРУШЕННЫХ ИЛИ

ПОВРЕЖДЁННЫХ БЕЛКОВ

УВЕЛИЧЕНИЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ IG G

ТАРДИВНАЯ ДИСКИНЕЗИЯ

Выводы Впервые показано, что антитела сыворотки крови больных

шизофренией обладают ДНКазной и протеолитической активностью.

Проверка основных критериев принадлежности ДНКазной активности антителам показала, что она является их собственным свойством.

У IgG больных шизофренией с тардивной дискинезией обнаружены более высокие удельная ДНКазная (примерно в 2 раза) и относительная протеолитическая (примерно в 5 раз) активности, чем у иммуноглобулинов класса G больных шизофренией без тардивной дискинезии.

Титр антител к двунитевой ДНК в группе больных шизофренией с тардивной дискинезией повышен в 2 раза в сравнении со здоровыми донорами и больными без неё, титр IgG к однонитевой ДНК у больных с тардивной дискинезией в 3 раза выше по сравнению с теми же группами.

Благодарю за внимание!