Методы работы с ДНК презентация Сириус · 2020-06-03 · До...

История изучение ДНК

ДНК

А=ТГ≡Ц

(в РНК А=У)

Биосинтез

Синтез ДНК

Репликативная вилка

Полимеразы• Виды

ДНК зависимая ДНК полимеразаДНК зависимая РНК полимеразаРНК зависимая ДНК полимераза

• Особенностинаправление движения толькодобавляет нуклеотида только кконцунекоторые обладаюткорректирующей активностью

ДНК полимераза

Транскрипция

движется по молекуле ДНК внаправлении →

Синтез белка Трансляция

При каждом движении рибосомы от кконцу мРНК считывается один кодон

Промотер

мРНК

Полицистронная мРНК

Стоп кодоны● УАГ● УГА● УАА

Перенос генов

Варианты переноса генов убактерий

Плазмиды

Джошуа Ледерберг

ПЦР

Открыта в году Кэри Муллисомлауреат

ПЦР

Применение• Секвенирование ДНК

КриминалистикаУстановление отцовстваМедицинская диагностикаПерсонализированная медицина

• Мутагенез• Клонирование

Стратегии молекулярного клонирования

Классический Вектор сВставкаРестриктазыЛигазы

РестриктазыЭндонуклеазы рестрикции

Рестриктазы го типаРестриктазы го типаРестриктазы го типа

Эндонуклеазы≠Экзонуклеазы

бактериофаги атакуюбактериальную клетку

Рестриктазы ого типа

Получили наибольшее применение в прикладной молекулярной биологии

Лигазы

T4 Бактериофаг

Электрофорез

Принцип метода

Физиотерапия

Двумерный гельэлектрофорез белков Электрофорез

ДНК

Электрофорезбелков в

П И Страховым и Ф Ф Рейссом вгоду

Ванночка дляэлектрофореза

Заливочныйстолик

Лабораторный блок питания

Электрофорез ДНК в Агарозном геле

Электрофорез ДНК в Агарозном геле

Загрузочныйбуффер имолекулярныйстандарт

Агароза

Движение плазмиды в агарозномгеле

Схема движения плазмиднойДНК в агарозном геле

Релаксированная форма

Линейная

Ковалентно связанная

Суперскрученная

Одноцепочечная

Линейная

До разрезания Порезанная

Необходимо● Вектор куда будет производиться клонирование● Вектор с интересующей последовательностью

или ПЦР фрагмент● Рестриктазы и● Лигаза● Антибиотик

Стандартное клонирование