实验八 重金属离子胁迫下植物组织膜脂过氧化产物的测定

—— （ MDA 法）

一，实验目的与要求掌握比色法测定植物组织 MDA 含量的方法和步骤；观察重金属胁迫下植物组织膜脂过氧化的程度。

二，实验原理　 MDAMDA 是植物细胞膜脂过氧化反应的最终产是植物细胞膜脂过氧化反应的最终产物之一。物之一。

逆境胁迫导致自由基（ O ·2 、 OH • 等）积

累，诱导细胞膜中的不饱和脂肪酸发生过氧化反应。

MDAMDA的积累加剧对细胞的伤害。的积累加剧对细胞的伤害。

MDA 可与蛋白质、核酸等结合使之失去其活性 , 从而进一步破坏了生物膜及细胞内物质的结构与功能 , 最终导致植物受伤害 , 甚至死亡。

在酸性酸性和高温高温条件下， MDA 可以与硫代巴比妥酸（ TBA ）反应生成红棕色的三甲氚，在 532nm532nm 处有最大光吸收。

排除干扰： 蔗糖与 TBA 反应后，在 450nm 有最

大光吸收，在 532nm 也有光吸收，通过公式排除干扰。

三，实验材料与试剂材料

Cd 2+ 处理 7d 的菹草叶片；试剂

10% 三氯乙酸（ TCA ）； 0.6% 硫代巴比妥酸（ TBA ）。

四，实验步骤1. MDA 的提取：

0.1g 植物叶片洗净、擦干、剪碎，置于研钵中加少许石英砂、 5mLTCA （分次），研磨匀浆后转移至离心管。 4000 rpm 离心 10min ，上清液即为样品提取液。

2 ，显色反应与测定

2mL 提取液 +2mL TBA ，混匀，沸水浴 15min ，迅速冷却。

　　另取２ mLTCA+2mLTBA 同样操作，为对照液。

　　反应液 3500rpm 离心 15min ，取上清液，测量体积（Ｖ），以对照液调零，测定 532nm 、 600nm 、 450nm 处的光吸收值。

3 ，计算含量MDA 的浓度：

　Ｃ (µmol/L) ＝ 6.45(A532-A600)-0.56A450

MDA 的含量 含量 ( µmol/g FW) =2.5*C (µmol/L) *V(L)/M(g F

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