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一、实验目的 学会鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法 。. 二、实验原理 ( 1 )鉴定实验设计的理念: 某些化学试剂 + 生物组织中有关有机化合物,产生 特定的颜色反应。 ( 2 )基本原理 ①可溶性还原糖 + 斐林试剂→ 砖红色沉淀 (水浴) ②蛋白质 + 双缩脲试剂→ 紫色反应 ③ 脂肪小颗粒 + 苏丹 Ⅲ 染液→ 橘黄色小颗粒 (脂肪小颗粒 + 苏丹 Ⅳ 染液→ 红色小颗粒 ). (显微镜). 三、实验材料用具. 1 、实验材料 : 苹果、花生种子、鸡蛋蛋白 - PowerPoint PPT Presentation
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一、实验目的一、实验目的 学会鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法 。二、实验原理二、实验原理( 1 )鉴定实验设计的理念: 某些化学试剂 + 生物组织中有关有机化合物,产生 特定的颜色反应。( 2 )基本原理 ①可溶性还原糖 + 斐林试剂→砖红色沉淀(水浴) ②蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应 ③脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒 (脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅳ染液→红色小颗粒)
(显微镜)
三、实验材料用具三、实验材料用具1 、实验材料 : 苹果、花生种子、鸡蛋蛋白
2 、实验仪器:水浴锅 , 双面刀片 , 试管 , 试管架 , 试管夹 , 烧杯 , 小量筒 , 滴管 , 水浴锅,玻璃漏斗 , 研钵 , 石英砂 , 纱布 , 培养皿,载玻片 , 盖玻片 , 吸水纸 , 显微镜
3 、实验试剂:
斐林试剂 甲液 :0.1g/mL 的 NaOH溶液,乙液 : 0.05g/mL 的CuSO4 溶液 )
双缩脲试剂 A 液 :0.1g/mL 的 NaOH溶液 , B 液 : 0.01g/mL 的CuSO4 溶液
苏丹Ⅲ染液酒精溶液 体积分数为 50%
蒸馏水
选材:含糖量较高的白色或近于白色的植物组织 ( 排除色素 对显色的干扰,苹果、梨最好)
1.1. 可溶性还原糖的鉴定 可溶性还原糖的鉴定
制备组织样液:制浆:去皮、切块、研磨,过滤:(用单层纱布)样液
显色反应
现象:
水浴2min
2mL斐林试剂
2mL组织样液
①斐林试剂必须现配现用,甲液和乙液( 1:1)混合后再使用。②不能在量筒中直接制备斐林试剂。③水浴加热时试管底部不要碰到水浴锅底部,试管口不要向着有人的地方。
2.2. 蛋白质的鉴定 蛋白质的鉴定 选材 : 鸡蛋蛋清稀释液(或黄豆组织样
液)取一个鸡蛋 →敲破一小块蛋壳→吸取 0.5mL蛋清→加入 5mL蒸馏水→搅拌均匀
显色反应
现象:
制备组织样液 :
( 创设碱性条件 ) ( 提供 Cu2+) 2mL组织样液
2mL双缩脲A 液
3-4滴双缩脲B 液
在加双缩脲试剂时,先加 A 液,后加 B 液
3.3. 脂肪的鉴定 脂肪的鉴定 取材:花生种子(浸泡3-4 h ),去皮,将子叶削成薄片
制片:
① 选取最薄的薄片移至载玻片中央 ② 在薄片上滴加苏丹Ⅲ染液 2 - 3 滴,染色2-3
min③ 滴加体积分数为 50%的酒精溶液 1—2滴, 1-2min洗去浮色
④ 吸去余液,滴 1-2滴蒸馏水,盖上盖玻片,制成临时装片显微观察:先在低倍镜下找到已着色的薄片,后用高倍镜观察
现象:
①注意花生子叶徒手切片方法(书本 17页右下角)。②染色后一定要用 50%的酒精溶液洗去浮色,染色和 洗浮色时间不宜过长。③注意显微镜的使用。
苹果
1.可溶性还原糖的鉴定 研磨
匀浆过滤
样液水浴2min 观察
2.蛋白质的鉴定 鸡蛋蛋清稀释液 2mL
双缩脲试剂 A 液2mL
摇匀 双缩脲试剂B 液 3~4滴观察 观察
3.脂肪的鉴定 花生种子 去皮 子叶 切片 取最薄片于
载玻片中央
苏丹Ⅲ染液2~3滴染色
2~3min
50%的酒精溶液 1—2滴
洗去浮色
1~2min
吸去余液,滴1~2滴蒸馏水,盖上盖玻片
临时装片 显微镜观察
样液2mL
+
刚配制的斐林试剂 2mL
(甲液:乙液 =1:1)
斐林试剂与双缩脲试剂的比较:
试剂组成
检验结果
试剂用法
检测对象
双缩脲试剂斐林试剂
还原性糖 蛋白质
甲液 :0.1g/mLNaOH乙液 :0.05g/mLCuSO4
A 液 :0.1g/mLNaOHB 液 :0.01g/mLCuSO4甲液与乙液先混再用,
且现配现用,需加热 先加 A 液,再加 B 液,不需加热
生成砖红色沉淀 溶液变成紫色