На правах рукописи

ШЕВЦОВ

АРТЕМ РАШИДОВИЧ

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕОБРАЗОВАНИЯ В СЕЛЕЗЕНКЕ КРЫСЫ ПРИ СИНДРОМЕ ДЛИТЕЛЬНОГО СДАВЛЕНИЯ И В УСЛОВИЯХ КОРРЕКЦИИ

БИОФЛАВОНОИДАМИ МАНЖЕТКИ ОБЫКНОВЕННОЙ

14.00.15 - патологическая анатомия 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7 2 1

Новосибирск^- 2008

Работа выполнена в ГОУ ВПО Новосибирском

государственном медицинском университете Росздрава

на кафедре топографической анатомии и оперативной хирургии

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор Головнев Владимир Андреевич,

Доктор медицинских наук, профессор Голубева Ирина Александровна.

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Надеев Александр Петрович

Кандидат медицинских наук Потапенко Мария Михайловна

Ведущая организация: ГОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет

Росздрава, г. Барнаул.

Защита состоится « » 2008 г. в часов на заседании Диссертационного совета Д 208.062.05 при ГОУ ВПО Новосибирском государственном

медицинском университете Росздрава, 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Новосибирского государственного

медицинского университета Росздрава по адресу: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52.

Автореферат разослан « » 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор А.В. Волков

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Углубленное теоретическое исследование проблемы патогенеза синдрома длительного

сдавления и патологических состояний, связанных с ним, всегда имело чрезвычайную

важность и остроту, а особенно, в последние годы. Природные стихийные бедствия,

технологические катастрофы, вооруженные конфликты унесли десятки тысяч человеческих

жизней. Эти события (Арзамас, Башкирия, Свердловск, Армения, Япония, США, Сахалин,

Югославия, Ливан, Юго-Восточная Азия) еще раз показали, что медицинская помощь

пострадавшим в катастрофах существенно отличается от традиционной (Шиманко И.И. и др.,

1993; Молочный В.П., 2001, Better O.S., 1997). На основании анализа многочисленных данных

у 40-68% наблюдаемых при этом больных диагностируется синдром длительного сдавления

(СДС), (Савицкий Г.Г. и др., 1989; Ery D.E., 1992).

Синдром длительного сдавления, относящийся к одному из видов травматической

болезни, характеризируется как специфическими, так и универсальными реакциями

организма на травму (Нечаев Э.А., Савицкий Г.Г., 1989; Ефремов А.В., 1992; Калиниченко

А.В., 1993; Власенко A.M., 1993; Нечаев Э.А. и др., 1993; Кричевский А.Л., 2005, Oda J, 1997,

Stein H; Hocrer D; 2000). Для СДС характерны интенсивное поступление в лимфатическую

систему продуктов распада, причем, раньше, чем в кровь; нарушение дренажной функции

лимфатических капилляров и барьерной роли лимфоузлов, лимфотромбоз, нарушение

состояния лимфы и др. (Бородин Ю.И., Григорьев В.Н., 1986; Ефремов А.В., 1992, Бородин

Ю.И., 1994,СамсоноваЕ.Н., 2005).

Исследования последних 10 - 15 лет, проведенные А.В.Ефремовым (1992), Ефремовым

А.В. и др., 2005, А.В.Калиниченко (1993), А.М.Власенко (1993), А.В.Карповым (1995),

Д.В.Макаровым (1996), В.В.Летешной (1997), Е.Н.Самсоновой (1997, 2005), В.В.Козловым

(1998), А.Н.Папантонопуло (1999), Кричевский А.Л., 2005, Border J.R., 1992, Kamei К., Nimyra

Y., Nagino M., et all, 2002, были посвящены изучению роли лимфатической системы в пато- и

саногенетических реакциях организма в посткомпрессионном периоде. Эти исследования,

раскрыв ряд важных звеньев в патогенезе СДС, оставили много нерешенных проблем. В

частности, в доступной нам литературе мы не нашли работ, связанных с изучением значения и

роли селезенки, как одного из периферических органов иммуногенеза в течении СДС; степени

ее участия в развитии патологического процесса в различные периоды декомпрессии при СДС

и, особенно, в период восстановления на фоне фармакологической коррекции.

- 3 -

Цель исследования. Выявить закономерности структурно-клеточных преобразований

селезенки при синдроме длительного сдавления и в условиях фармакологической коррекции

препаратом полифенолов манжетки обыкновенной.

Задачи исследования:

1. Изучить микроанатомическую организацию селезенки в норме и в различные сроки

посткомпрессионного периода экспериментального СДС.

2. Выявить характер цитологических преобразований структурно-функциональных зон

селезенки в норме и в различные сроки посткомпрессионного периода

экспериментального СДС.

3. Изучить микроанатомическую организацию селезенки в различные сроки

посткомпрессионного периода экспериментального СДС в условиях фармакологической

коррекции манжеткой обыкновенной.

4. Изучить цитологические преобразования структурно-функциональных зон селезенки в

различные сроки посткомпрессионного периода экспериментального СДС в условиях

фармакологической коррекции манжеткой обыкновенной.

Научная новизна результатов исследования. Использование объективных и

информативных методов исследования патоморфологических изменений (световая

микроскопия, морфометрия) для изучения морфо-функционального состояния селезенки крыс

позволило впервые охарактеризовать структурно-клеточные преобразования в ней в

различные сроки посткомпрессионного периода экспериментального СДС.

Впервые проведено сравнительное морфометрическое исследование структурно-

клеточной организации селезенки в различные сроки посткомпрессионного периода при СДС.

Выявлены закономерности преобразования морфометрических параметров и

цитоархитектоники основных структурных компонентов селезенки при СДС.

Впервые дана количественная характеристика структурно - клеточным

преобразованиям в селезенке в различные сроки посткомпрессионного периода СДС в

условиях применения полифенолов манжетки обыкновенной.

Впервые с морфологических позиций показано, что фармакологическая коррекция,

проведенная полифенолами манжетки обыкновенной, способствует снижению

- 4 -

повреждающего влияния токсинов на селезенку и стимулирует процессы восстановления

лимфоидной ткани.

Практическая и теоретическая значимость. Полученные результаты могут быть

использованы для лучшего понимания общих закономерностей восстановления структурно-

клеточного состояния лимфоидных органов в условиях токсемии и токсиколимфии в

различные сроки посткомпрессионного периода при СДС. Сравнительный анализ

патоморфологических изменений в структурно-клеточном составе селезенки в период

восстановления при СДС способствует объективизации прогнозирования состояния

дренажной и детоксикационной функций как отдельного лимфоидного органа, так и

лимфатической системы в целом.

Значение данного исследования для практической медицины заключается в том, что на

основании углубленного количественного исследования структурно-клеточного состояния

селезенки в посткомпрессионный период экспериментального СДС, показана возможность

применения растительных полифенольных соединений из манжетки обыкновенной в качестве

адаптогена и лимфопротектора.

В результате проведенных исследований показана возможность направленного

восстановления структуры и функции селезенки с помощью растительных полифенольных

соединений из манжетки обыкновенной, что способствует формированию научного

направления - восстановительной функциональной морфологии лимфоидной ткани, а также к

практическому управлению функциями лимфатической системы и внедрению полученных

данных в клинике экстремальных состояний.

Положения, выносимые на защиту:

1.В условиях экспериментального синдрома длительного сдавления в селезенке у крыс

вьивляются преобразования структуры и клеточного состава. К концу эксперимента

морфофункциональное состояние селезенки полностью не восстанавливается.

2.Восстановление морфологии селезенки при синдроме длительного сдавления при

направленном использовании адаптогена растительного происхождения с лимфотропным

действием в виде комплекса полифенольных соединений из манжетки обыкновенной

начинается раньше и происходит быстрее по сравнению с группой животных с СДС без

коррекции.

- 5 -

Апробация результатов исследования Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседаниях: Международной

конференции «Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на

внутреннюю среду организма» (Чолпон-Ата, 2005, 2007), Международной конференции

«Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии»

(Новосибирск, 2004, 2006); Ежегодном конкурсе-конференции студентов и молодых ученых

«Авиценна», (Новосибирск, 2004, 2005, 2006, 2007); проблемной комиссии «Морфология»

53.06, Новосибирск, 2007.

Публикации: По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, одна в журнале, рекомендуемом ВАК для публикации результатов диссертационных исследований.

Внедрение результатов исследования

Основные положения диссертационной работы внедрены в учебную программу

лекций и практических занятий на кафедрах патологической анатомии, анатомии человека,

топографической анатомии с оперативной хирургией и патофизиологии Новосибирского

государственного медицинского университета.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 165 страницах компьютерного набора на русском языке и

содержит 83 фотографии и 4 таблицы. Состоит из введения, обзора литературы, главы

материалы и методы исследования, четырех глав собственных исследований, главы

обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка

литературы, включающего 272 отечественных и иностранных источников.

Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован

лично автором.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Только в условиях эксперимента можно попытаться воспроизвести то или иное заболевание и,

следовательно, приблизиться к пониманию путей его возникновения и развития в

действительности.

В качестве экспериментальных животных были выбраны крысы-самцы линии Wist

массой тела 180-200 г. в количестве 130, в возрасте 5-6 месяцев. Выбор животных крыс

самцов диктовался необходимостью получения стабильных результатов, исключая влияни

циклических изменений, характерных для организма самок (Сахаров П.П. и др., 1952

- 6 -

Западнюк И.П., 1974; Rogers P.A., Gannon B.J., 1981). Крысы имели свободный доступ к корму и воде.

Все животные были разбиты на 3 группы: первая группа - интактные животные (10 крыс); вторая группа - животные с СДС без лечения (60 крыс); третья группа - животные с СДС, получавшие препарат полифенолов манжетки обыкновенной (60 крыс); (см. таблицу 1).

Таблица 1

Количество животных и взятых у них ткани селезенки для морфометрических и цитологических исследований при синдроме длительного сдавления

Сроки исследования

интактные

1 сутки

3 суток

7 суток

14 суток

Всего:

Итого :

Контроль

10

-

-

-

-10

115(15)*

Селезенка при СДС без коррекции

-

10(5)*

12(3)*

13(2)*

13(2)*

48(12)*

Селезенка при СДС и коррекции полифенолами манжетки обыкновенной

-

13(2)*

14(1)*

15(0)*

15(0)*

57(3)*

Примечание : ( )* - число погибших животных в эксперименте Площадь сдавливающих конечностей около 5 см2. Тиски накладывались на 4 часа на

левую тазовую конечность параллельно пупартовой связке. Закручивание тисков

производилось до упора с последующим подкручиванием в течение 15-20 минут (Кулагин

В.К., 1956; 1961; 1965; 1978; Криворучко В.И., 1964; Барышников Н.Т., 1970; Выренков Ю.Е.

и др., 1976; Ефремов А.В., 1992; Власенко A.M., 1993; Козлов В.В., 1998).

Силу и время сдавления конечности подобрали в эксперименте такие, чтобы в

результате возникла клиническая картина СДС средней степени тяжести. Это позволяет

стандартизировать условия проведения морфологических исследований, проследить процессы

поражения и восстановления.

- 7 -

Известно, что в период компрессии мягких тканей полностью исключается сдавленная

конечность из кровообращения (Лысый Л.Т., 1989). Однако целостность крупных сосудов не

нарушается, поэтому в период декомпрессии постепенно восстанавливается гемо - и

лимфоциркуляция (Оксман Т.М., 1971; Берток Л., Орбан И., Регеш Я., 1959; Кричевский А.Л.,

1991, 2005). Последнее обстоятельство в корне отличает данную экспериментальную модель

от других.

Наибольшие изменения в организме при СДС наступают после извлечения из завалов,

то есть в период декомпрессии. Выбранные нами сроки исследования в клинической картине

поражения;соответствуют определенным периодом развития СДС (Стоматин СИ.,1971). Так,

к 1 часу декомпрессии развиваются максимальные клинические признаки; от 1 до 3 суток -

ранний период; от 7 до 14 суток - поздний период клинической картины.

В работе нами учитывались биологические, годовые и суточные изменения

лимфоидных органов (Летягин А.Ю., 1984; Бородин Ю.И. Летягин А.Ю., 1989), и поэтому все

экспериментальные воздействия, как и забор селезенки, проводили в осенне-зимний период, в

первой половине дня с 9 до 14 часов.

Для фармакологической коррекции СДС использовали введение полифенольных

соединений из манжетки обыкновенной (Alchimilla Vulgaris L., LD=302,0 мг/кг). Водный

раствор манжетки вводили крысам через зонд в дозе 25 мг/кг массы за один прием

энтерально. Первое введение полифенолов манжетки проводили через 5-10 минут после

снятия тисков, последующие - через одни и двое суток.

Животных умерщвляли под эфирным наркозом методом мгновенной декапитации

через 1, 3, 7, 14 суток после декомпрессии. Эти сроки выбраны нами, исходя из того, что они

соответствуют определенным периодам СДС (Стоматин СИ., 1971; Кричевский А.Л.,1991,

2005; Самсонова Е.Н., 2005).

Объектом исследования служила селезенка, взятая у животных после воспроизведения

у них СДС, с последующей декапитацией и забором исследуемого материала. Контролем

служила селезенка интактных животных. Далее материал фиксировали в растворе

Теллесницкого (100 мл. этилового спирта, 5 мл. - концентрированной уксусной кислоты, 5

мл. - 40 % раствора формальдегида) в течение 24 часов. Затем обезвоживали в серии спиртов

возрастающей концентрации и заключали в парафин - воск. С помощью ротационного

микротома готовили полусерийные срезы толщиной 5-6 мкм.

Для изучения морфоцитоархитектоники срезы окрашивали гематоксилином Майера и

эозином, азур-2-эозином и заключали их в канадский бальзам. Указанные выше методы

описаны в руководствах Б.Ромейса (1954), В.Г.Елисеева и др. (1972), Р.Лилли (1969),

А.Ф.Киселевой и др. (1983), R.L. Ridgway (1986).

- 8 -

С помощью стандартной окулярной сетки (256 точек) методом точечного счета при 32-кратном увеличении в микроскопе МБС - 10 определяли общую площадь срезов и площади всех структурных компонентов селезенки в 10 полях зрения. Каждая структурно-функциональная зона учитывалась отдельно (Афанасьев Ю.И., 1987).

Морфометрию площадей структурных компонентов органов проводили по методу Г.Г. Автандилова (1980, 1990, 2002). При этом выполняли основное требование: на структуры, занимающие наименьшую площадь, приходилось не менее одной точки (Христолюбова Н.Б. и др., 1974; Ташке К., 1980; Непомнящих Л.М. и др., 1984).

При исследовании селезенки определяли площадь белой пульпы (периартериальной муфты, лимфоидных фолликулов (центров размножения и мантии), маргинальной зоны), красной пульпы (общая площадь синусов и тяжей), центральной артерии, капсулы.

Цитоархитектонику (малые, средние лимфоциты и бластные формы клеток,

ретикулярные клетки, плазмоциты зрелые и незрелые, клетки Мотта, тучные клетки,

нейтрофильные и эозинофильные гранулоциты, эритроциты, макрофаги и митотически

делящиеся клетки, погибшие клетки) изучали в структурах селезенки (центре размножения,

периартериальной муфте, маргинальной зоне, тяжах и синуса красной пульпы) на

гистологических срезах с помощью морфометрической вставки, представляющей собой

закрытую квадратную тестовую систему. При увеличении в 1000 раз (объектив 100 -

масляная иммерсия, окуляр 10) подсчитывали абсолютное количество разных видов клеток

на стандартной площади 3200 мкм .

В процессе дифференцировки и анализа клеточных форм возникла необходимость

вывести показатель, или индекс репаративной (физиологической) регенерации, как

отношение количества митотически делящихся клеток к количеству погибших клеток и

обозначили его как Мит/Пог (Овсянко Я.У., 1999).

Для всех морфометрических данных вычисляли абсолютные и относительные

показатели. При заборе материала, его фиксации, проводке и заливке в блоки, а также при

получении срезов все манипуляции в максимальной степени стандартизировали.

Во всех опытах для каждого из этапов экспериментов использовались 10-15 животных.

От каждого животного получали соответственно 10-15 блоков образцов селезенки. Всего в

эксперименте бьшо использовано 130 животных, 15 из которых погибли при моделировании

СДС и его коррекции препаратом манжетки обыкновенной, в основном в ранние его сроки

(табл. 1).

Подготовку исследуемого материала, планирования и проведения морфометрических

исследований выполняли в соответствии, со ставшими теперь общепринятыми, принципами и

методами, опубликованными в ряде отечественных и зарубежных руководств (Катинас Г.С.;

- 9 -

Полонский Ю.З., 1970, Христолюбова Н.Б., 1974; Шилов А.Г., 1974; Автандилов Г.Г. и др.,

1981,1984; Автандилов Г.Г., 1990,2002, Weibel E.R., 1979).

Статистическая обработка материала осуществлялась пакетом прикладных программ

Excel 7,0 на PC Pentium-100 с использованием средней арифметической, ошибки средней,

критерия Стьюдента, корреляционного анализа (Гончаров A.M., 1996; Додж М., Кайнет К.,

1996). При этом достоверными результаты считались при Р<0,05.

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Исходя из патогенеза СДС и определяющей в нем роли ишемии и токсемии, тяжесть

посттравматического процесса во многом определяется состоянием лимфатической системы.

Ухудшение общего состояния пострадавшего при СДС связано с освобождением длительно

ишемизированной конечности от компрессии. В момент декомпрессии токсические вещества

поступают в лимфоток и далее с лимфой проникают в лимфатические узлы, которым

принадлежит защитная и барьерная функции. При их дисфункции токсиканты прорываются в

кровь, вызывая значительные патологические изменения в организме. Ю.И.Бородин (2000,

2007) справедливо полагает, что при многих патологических состояниях в лимфу раньше, чем

в кровь, поступают как экзогенные, так и эндогенные токсины. При этом при токсемии и

токсиколимфии ухудшаются условия гемомикроциркуляции, проявляющиеся нарушениями

микроциркуляторного гомеостаза.

В норме паренхима селезенки крысы представлена белой и красной пульпой в

соотношении 1:1,87 с сильной отрицательной корреляцией (г = - 0,82). На долю

тимусзависимой периартериальной муфты приходится более 10% общей площади среза

органа. Имеются немногочисленные лимфоидные фолликулы. Капсула и центральная артерия

хорошо выражены. Цитоархитектоника центров размножения лимфоидных фолликулов белой

пульпы селезенки в контроле свидетельствует о том, что преобладающим клеточным

элементом являются средние и малые лимфоциты. Содержание макрофагов и ретикулярных

клеток примерно равно.

Проведенное исследование показало, что синдром длительного сдавления оказывает

существенное влияние на морфофункциональное состояние селезенки. Через 1 сутки после

создания экспериментального синдрома длительного сдавления летальность

экспериментальных животных составила 3,85 %.

Максимальное среди всех сроков данной серии эксперимента увеличение в 1,5 раза по

сравнению контролем площади среза селезенки и преобразования микроанатомической

организации органа на 1 сутки СДС связано, по-видимому, с развитием отека селезенки

вследствие возникающего эндотоксикоза после снятия тисков. На 1 сутки эксперимента у - Ю -

животных в селезенке происходит перераспределение процентного соотношения в сторону

увеличения доли красной пульпы и снижения доли белой пульпы в 4,43 раза. Показатель

соотношения красной и белой пульпы в эксперименте больше контрольных цифр в 6,3 раза,

коэффициент корреляции между ними равен -0,84 (сильная отрицательная зависимость).

Исследование цитоархитектоники селезенки на данном сроке эксперимента выявило

однонаправленность клеточных изменений. Во всех изученных зонах органа с разной

степенью достоверности снижается доля малых лимфоцитов. Характерной особенностью

морфологических изменений в преобладающем числе структурно-функциональных зон

селезенки на 1 сутки периода декомпрессии было увеличение относительного количества

погибших клеток, макрофагов, ретикулярных клеток, появление или увеличение числа

эозинофильных и нейтрофильных гранулоцитов.

Уменьшение индекса соотношения клеток с фигурами митозов и погибших клеток в

центрах размножения лимфоидных фолликулов белой пульпы в 1,8 раза и тяжах красной

пульпы селезенки в 7,5 раз на 1 сутки СДС по сравнению с контролем свидетельствует о

снижении процессов репаративной регенерации в органе. Увеличение процента содержания

зрелых и незрелых плазматических клеток в различных структурных компартментах

селезенки можно расценить как морфологический маркер появления антигена в паренхиме

органа.

Через 3 суток после создания экспериментального синдрома длительного сдавления

летальность среди крыс составила 2,34%. Анализ выявленных микроанатомических

преобразований на 3 сутки СДС показал наличие некой волнообразности в изменении

относительных площадей структурных компонентов селезенки на данном сроке

эксперимента. Площадь среза селезенки по сравнению с контролем оставалась увеличенной в

1,16 раза, но уменьшилась в 1,29 раза по сравнению с предыдущим сроком эксперимента. При

сравнении с полученными результатами исследования органа на 1 сутки СДС сохраняется та

же направленность морфологических преобразований, но она менее значима по степени

выраженности. Выявленное максимальное среди всех сроков СДС увеличение относительной

площади зоны центральной артерии в 2,1 раза по сравнению с контролем возможно за счет

раскрытия «резервных» сосудов. Полученные морфологические данные не противоречат

предложенной ранее классификации А.В.Ефремова (1992): (1 сутки - лимфостаз, 3 сутки -

лимфостаз с развитием коллатералей, 7 сутки - начало разрешения лимфостаза, 14 сутки -

разрешение лимфостаза), основанной на морфологических преобразованиях в регионарных

подколенных лимфоузлах при СДС и прижизненной непрямой лимфорентгенографии.

Характерной чертой морфологических преобразований для структурно-

функциональных зон селезенки на 3 сутки СДС в отношении контроля является уменьшение

-11-

доли клеток лимфоидного ряда на фоне увеличения количества макрофагов, плазматических

клеток (особенно незрелых), ретикулярных и погибших клеток, нейтрофильных и

эозинофильных гранулоцитов. Доказано, что именно лимфоциты следует рассматривать как

центральное звено специфических иммунных реакций, как предшественников

антителообразующих клеток и как носителей иммунологической памяти (Baer W. et al., 2001).

Показатель индекса репаративной регенерации отражает преобразования клеточного состава

и еще больше понижен по отношению к норме (в 3,2 раза). Это является, по нашему мнению,

морфологическим маркером сниженных адаптационных возможностей селезенки на данном

сроке эксперимента в условиях развивающегося эндотоксикоза. Выявленная структурно-

клеточная перестройка отражает реакцию селезенки на поступление циркулирующих

реагентов, попавших в кровоток после снятия тисков у экспериментального животного на 3

сутки развития синдрома длительного сдавления.

Через 7 суток после создания экспериментального синдрома длительного сдавления

летальность среди крыс составила 1,54 %. Площадь среза селезенки по сравнению с

контролем оставалась увеличенной в 1,4 раза, и увеличилась в 1,2 раза по сравнению с

предыдущим сроком эксперимента. Выявленные изменения микроанатомии селезенки на 7

сутки эксперимента мы рассматриваем как период наибольших проявлений компенсаторно-

адаптационных возможностей органа. На данном сроке эксперимента с одной стороны

выявлена однонаправленность цитологических преобразований с 1 сутками СДС, но с

большей степенью выраженности. С другой стороны, мозаичность преобразований

цитоархитектоники среди структурно-функциональных зон селезенки подтверждает наше

предположение о максимальном воздействии на орган циркулирующих антигенов и токсинов

на данном сроке эксперимента, поступающих в кровоток после снятия тисков у

экспериментальных животных. Повсеместное увеличение числа плазматических клеток

именно с 7 суток периода декомпрессии, по-видимому, можно объяснить с точки зрения

классификации Ефремова А.В. (1992), где он обозначен как "начало разрешения лимфостаза".

Увеличение количества плазматических клеток в данный период декомпрессии СДС можно

связать с усиленным поступлением в селезенку с кровью и лимфой аутоантител, токсинов и

продуктов распада тканей. Индекс репаративной регенерации остается пониженным с разной

степенью достоверности (аналогично предыдущим срокам эксперимента), что отражает

сохранение сниженных компенсаторных возможностей селезенки в ответ на развивающийся

эндотоксикоз к 7 суткам периода декомпрессии. По нашему мнению, совокупность

выявленных морфологических преобразований структуры и клеточного состава селезенки,

минимальное количество клеток лимфоидного ряда, а особенно малых лимфоцитов, на фоне

достоверных высоких значений числа погибших клеток, макрофагов и плазматических клеток

-12-

является проявлением снижения компенсаторных возможностей селезенки на пик агрессивного антигенного воздействия, приходящегося именно на 7 сутки эксперимента. Можно согласиться с А.А.Пузыревым и др. (1997), что совокупность компенсаторно-приспособительных реакций определяется гетерохронностью развивающихся изменений на всех иерархических уровнях биологической системы, которая определяется индивидуальной чувствительностью животных и асинхронностью развития первичных реакций на уровне клеток и органелл. Последнее приводит к мозаичности строения клеток в составе ткани: наряду с деструктивно измененными клетками выявляются элементы, находящиеся на различных этапах функциональной активности и внутриклеточной репарации.

Через 14 суток после создания экспериментального синдрома длительного сдавления летальность среди крыс составила 1,54 %. Преобразования в микроанатомической картине селезенки характеризуются перестройкой паренхиматозно-стромальных отношений в сторону увеличения доли белой пульпы над красной пульпой на фоне сохраненной повышенной площади среза органа. Площадь среза селезенки по сравнению с контролем оставалась увеличенной в 1,3 раза, но уменьшилась в 1,2 раза по сравнению с предыдущим сроком эксперимента. Таким образом, сохранилась волнообразность в изменении данного параметра органа. В отличие от предыдущих сроков периода декомпрессии по сравнению с контролем доля красной пульпы уменьшилась в 1,4 раза, а белой - увеличилась в 1,5 раза. При этом коэффициент корреляции между содержанием белой и красной пульпы показал наличие сильной отрицательной зависимости (г = - 0,81).

Полученная картина цитологических преобразований на фоне повышающегося значения индекса репаративной регенерации, по нашему мнению, косвенно может судить о снижении поступления антигенного материала в орган к 14 суткам после снятия тисков либо активизации компенсаторных возможностей селезенки. В общем, преобразования клеточного состава структурно-функциональных зон селезенки крыс на этот срок СДС можно охарактеризовать как период начала некой "стабилизации" морфофункционального состояния органа, которое к концу эксперимента полностью не восстанавливается.

По нашему мнению адаптация тканей как эволюционно закрепленное явление, осуществляется постоянно в живом организме на всех структурных уровнях (Георгиевский А.Б., 1989). Независимо от природы воздействия в процессе адаптации наблюдаются общие закономерности развивающихся структурных изменений и определяющих направление, глубину и обратимость компенсаторно-приспособительных реакций. Они проявляются в первичности ответа на уровне внутриклеточных мембран, гетерохронии структурных и количественных изменений органелл и клеток, усилении процессов физиологической регенерации. Различные реакции клеток в составе одной ткани на неблагоприятный фактор

- 1 3 -

определяются степенью их дифференцировки и функциональным состоянием (Ефремов А.А. и др., 2005, Поздняков О.Б. 2006).

Через 1 сутки после снятия тисков с конечности крысы в группе использования полифенолов манжетки обыкновенной летальность составила 1,54 %, что ниже показателя аналогичного срока СДС без коррекции в 2,5 раза. Площадь среза селезенки была достоверно выше уровня контроля в 1,12 раза. Структурные преобразования селезенки на 1 сутки СДС в условиях применения полифенолов манжетки обыкновенной отличаются меньшей степенью выраженности морфологических изменений по сравнению с аналогичным периодом декомпрессии без введения препарата, и в количественном выражении более приближены к уровню контроля. Отсутствие значительных преобразований в структурно-паренхиматозных взаимоотношениях селезенки при введении манжетки на 1 сутки СДС свидетельствуют о лимфопротекторном действии полифенолов манжетки обыкновенной. В пользу этого действия препарата, по нашему мнению, говорит и меньшая степень дилятации кровеносных сосудов. По-видимому, расширение капиллярного русла селезенки является неспецифической реакцией на стрессовое воздействие в комплексе неспецифических морфологических изменений, возникающих в тканях и органах при экстремальных воздействиях, что согласуется с данными В.И.Янушевского, О.В.Качалка (1992), Манвелидзе Р.А.(2005), Самсоновой Е.Н. (2005).

Изучение клеточного состава структурно-функциональных зон селезенки на 1 сутки периода декомпрессии при введении препаратов манжетки в сравнении с контролем выявило общую направленность изменений: снижение содержании общего относительного числа клеток лимфоидного ряда и малых лимфоцитов в частности, индекса репаративной регенерации на фоне увеличения процента содержания плазматических клеток (особенно зрелых плазмоцитов), макрофагов и гибнущих клеток. Известно, что при защитных реакциях организма количество макрофагов значительно увеличивается (Новиков В.Д., Проваторов Г.В., 2003 Поздняков О.Б. 2006, Никитенко Л.Л., Колесников СИ. 2007). Макрофагальная реакция автоматична и филогенетически очень стара и при действии разнообразных факторов создаются условия автономности функций этих клеток. Представляя собой неспецифический фактор защиты, макрофаги послужили той основой, на которой в эволюции возник и развивался специфический иммунитет. Уменьшение численности лимфоидных клеток в исследованных зонах паренхимы селезенки на 1 сутки СДС при введении полифенолов манжетки может быть связано с усилением гибели клеток и снижением регенераторной активности. Уменьшение процента содержания малых лимфоцитов в тимусзависимой периартериальной муфте возможно связано со снижением процессов рециркуляции и миграции Т-лимфоцитов из тимуса. Увеличение количества плазматических клеток и, в

-14-

особенности зрелых плазмоцитов, можно охарактеризовать как морфологический маркер активизации гуморального звена иммунитета организма в ответ на усиленное поступление в селезенку антигенов и других продуктов распада тканей при СДС.

Таким образом, можно предположить, что введение препаратов манжетки обыкновенной на 1 сутки периода декомпрессии способствует морфологическим преобразованиям в селезенке, характеризующим его лимфопротекторное действие, так как выявлены структурно-клеточные преобразования, имеющиеся и в группе без лечения, но с меньшей степенью их проявлений. Известно, что под влиянием полифенолов манжетки обыкновенной в крови достоверно снижается количество тромбоцитов, увеличивается пул лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов и отмечается снижение содержания палочкоядерных нейтрофилов (Бородин Ю.И. и др., 2007).

Через 3 суток периода декомпрессии в группе использования полифенолов манжетки обыкновенной летальность составила 0,72 %, что ниже аналогичного показателя 3-х суток посткомпрессионного синдрома без коррекции в 3,25 раза. Была выявлена максимально увеличенными площадь среза селезенки в данной серии эксперимента по сравнению с контролем в 1,33 раза и объем микроциркуляторного русла селезенки, за счет увеличения общего числа площади зоны центральной артерии белой пульпы органа. По-видимому, можно предположить об активизации процесса ангиогенеза на введение манжетки, выявленного и другими исследователями (Горчаков В.Н., 1990; Головнев В.А., 1992; Обухова Л.А., 1998, Папантонопуло А.Н., 2001, Бородин Ю.И. и др., 2007). Соотношение красной и белой пульпы в селезенке не отличалось от уровня контроля. Эти структурные изменения отражают, по нашему мнению, лимфотропное действие полифенольньк соединений из манжетки обыкновенной. Выявленная умеренная дилятация микроциркуляторного русла, по-видимому, адекватна уровню повышенной функциональной активности органа.

Изменения клеточного состава структурно-функциональных зон селезенки на 3 сутки периода декомпрессии и при его коррекции свидетельствуют о том, что полифенольные соединения из манжетки обыкновенной оказывают стимулирующее влияние на пролиферативные процессы в органе. С этой позиции, по нашему мнению, возможно объяснить и усиление гибели лимфоидных клеток. Для поддержания гомеостаза в любой ткани необходимо равновесие между процессами пролиферации и гибели клеток.

Изменения структурно-паренхиматозных отношений селезенки на 7 сутки после снятия тисков и при коррекции препаратом манжетки не подвержены выявленной ранее волнообразности преобразований ее морфологии без использования препарата. С другой стороны, так же как в серии эксперимента без использования полифенолов на 14 сутки СДС, именно на 7 сутки СДС выявляются морфологические изменения, имеющие наибольшую

- 1 5 -

степень проявления. Выявлен сохраненный эндотелиальный слой сосудов, умеренно разрыхленный интерстициальный слой, умеренный периваскулярный отек в сосудах артериального звена. Летальность среди животных данной группы эксперимента отсутствовала.

Сравнительный анализ клеточных преобразований в структурно-функциональных зонах селезенки крыс на 7 сутки с применением коррекции СДС и без нее показал, что после применения полифенольных соединений к 7 суткам эксперимента усиливаются процессы бласттрансформации и пролиферации в белой пульпе селезенки. Выявлено увеличение относительного содержания нейтрофилов. По современным представлениям, нейтрофилы не только участвуют в фагоцитозе, но и выделяют целый ряд веществ, влияющих на пролиферацию элементов кроветворения, стимулируют регенерацию тканей, повышают проницаемость сосудов. Давно известно об участии нейтрофилов в реализации иммунных реакций организма (Rytter M. et al., 1985). Таким образом, становится более ясной роль этих клеток при синдроме длительного сдавления. Активны процессы гибели клеток и их реутилизация макрофагами. Морфологически это проявлялось увеличением количества лимфоидных клеток с пикнотическими ядрами и числа макрофагов, содержащих фагоцитированные остатки их ядер. В литературе известно, что малые лимфоциты выполняют трофическую функцию (Меерсон Ф.З., 1995). При распаде лимфоцитов реутилизируются такие важные для организма вещества, как нуклеиновые кислоты и продукты белкового обмена, не только стимулируются лимфоцитопоэз, рост и регенерация тканей, но и создаются возможности передачи морфогенетической иммунной информации (Никитенко Л.Л., Колесников С.И.2007).

На 14 сутки СДС в условиях использования полифенолов манжетки летальность среди животных данной экспериментальной группы отсутствует. Направленность структурных преобразований аналогична 3 суткам посткомпрессионного синдрома с использованием полифенолов манжетки, но отличается большей степенью проявлений. Изменения структурно-паренхиматозных взаимоотношений в селезенке крысы на 14 сутки периода декомпрессии в условиях его коррекции препаратом полифенолов манжетки обыкновенной коррелируют с преобразованиями цитоархитектоники исследованных зон органа. К концу эксперимента не происходит полного восстановления структурно-функционального состояния органа, хотя такие предпосылки уже имеются. Например, количество малых лимфоцитов в периартериальной муфте и доля иммунобластов в центрах размножения фолликулов белой пульпы селезенки приближается к исходному значению. По выявленным результатам видно, что клеточный состав достаточно активно реагирует на проводящуюся коррекцию. Наши результаты не противоречат уже имеющимся в литературе данным, где

- 1 6 -

предлагается в качестве критерия завершенности восстановления структуры использовать показатели, которые в условиях хронического эксперимента восстанавливаются позже других (Александрова Л.И., 1995, Самсонова Е.Н. 2005). Так в клеточном составе предлагается учитывать помимо восстановления процентного соотношения лимфоцитов, возвращение к исходным значениям процента бластов. Изменения количественных соотношений клеток и доли бластов по мнению Г.В.Правоторова, В.Д.Новикова (1996) рассматривается как проявление реакции бластгрансформации в живом организме, которая служит предпосылкой развития иммуноморфологической пролиферативной реакции в лимфоидной ткани. Указанная пролиферативная реакция возникает не только при воздействии антигенных факторов и носит неспецифический характер.

Изменения клеточного состава свидетельствуют о том, что полифенольные соединения из манжетки обыкновенной стимулируют пролиферативные процессы в селезенке. Усиление процесса гибели лимфоидньгх клеток объясняется необходимостью поддержания равновесия между процессами пролиферации и гибели клеток для сохранения гомеостаза ткани. Анализируя клеточные преобразования зон селезенки к 14 суткам СДС мы пришли к заключению, что полифенолы манжетки обыкновенной обладают лимфопротекторным действием.

Таким образом, в результате проведенных исследований показаны существенные возможности направленного восстановления структуры и функции лимфоидного органа при синдроме длительного сдавления с помощью растительных полифенольных соединений из манжетки обыкновенной и, тем самым, сделан еще один шаг к дальнейшему познанию восстановительной функциональной морфологии лимфатического русла, а также к практическому управлению функциями лимфатической системы и внедрению полученных данных в клинике.

ВЫВОДЫ

1. В норме паренхима селезенки крысы представлена белой и красной пульпой в

соотношении 1 : 1,87, а при СДС этот показатель изменяется за счет увеличения доли красной

пульпы. Летальность при СДС без лечения выявлена во все сроки с убыванием к концу

эксперимента.

2. Морфологические преобразования в селезенке на 7 сутки периода декомпрессии

характеризуются минимальным числом малых лимфоцитов, пониженным значением индекса

репаративной регенерации при увеличенном содержании погибших клеток, макрофагов и

плазматических клеток среди всех сроков СДС.

- 1 7 -

3. К 14 суткам эксперимента доля белой пульпы преобладает над красной (увеличивается число лимфоидных узелков, площадь маргинальной зоны, периартериальной муфты). Увеличивается число делящихся клеток в 3,9 раза, значения индекса репаративной регенерации в 2 раза по сравнению с контролем.

4. На 7 сутки СДС в условиях применения манжетки обыкновенной летальность среди крыс отсутствует. Микроанатомические изменения селезенки приближаются к показателям контроля за счет всех структурных компонентов белой пульпы (лимфоидных узелков, периартериальной муфты, маргинальной зоны) Увеличивается число макрофагов, плазмоцитов, делящихся клеток и значения индекса репаративной регенерации.

5. Выявлено лимфотропное адаптогенное действие на селезенку полифенольных соединений из манжетки обыкновенной при синдроме длительного сдавления. К концу эксперимента (14 сутки СДС) количество малых лимфоцитов в периартериальной муфте и доля иммунобластов в центрах размножения фолликулов белой пульпы селезенки приближается к исходному значению, увеличивается доля периартериальной муфты, число делящихся клеток, значение индекса репаративной регенерации.

Практические рекомендации

В целях повышения объективизации диагностики патологических процессов в поврежденном организме при СДС необходим комплексный морфологический анализ лимфоидных органов - лимфоузлов, селезенки, являющихся одним из важных звеньев в патогенезе синдрома длительного сдавления.

При проведении лечения пострадавших с СДС наряду с традиционной терапией на ранних мстадиях его течения необходима дополнительная коррекция препаратами биофлавоноидами манжетки обыкновенной, которые способствуют снижению повреждающего влияния токсинов на селезенку и стимулирует процессы восстановления лимфоидной ткани.

- 1 8 -

Список работ, опубликованных по теме диссертации

I. Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Голубева И.А. Структурная организация селезенки при синдроме длительного сдавления / // Морфология и хирургия: сб. науч. тр. НГМА. -Новосибирск, 2003. -Вып. 4. -С.38.

2.Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Ефремов А.В., Голубева И.А. Характеристика структурно-клеточных изменений в селезенке при экспериментальном синдроме длительного сдавления // Медицина и образование в XXI веке: ежегод. науч.-практ. конф. с междунар. участием. -Новосибирск, 2004. -С.161-162.

3. Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Ефремов А.В., Голубева И.А. Особенности микроанатомических и цитологических преобразований в селезёнке при синдроме длительного сдавления / // Клинико-морфологические аспекты общепатологических процессов при социально-значимых заболеваниях: всерос. науч.-практ. конф., посвящ. памяти проф.Ю.Г. Целлариуса. - Новосибирск, 2004. - С.167-168

4. Шевцов А.Р. Селезёнка при экспериментальном синдроме длительного сдавления //Авиценна-2004: ежегод. конкурс-конф. студентов и молодых ученых. -Новосибирск, 2004. -С. 65.

5. Шевцов А.Р., Голубева И.А., Головнёв В.А. Влияние полифенолов манжетки обыкновенной на клеточный состав селезенки при экспериментальном синдроме длительного сдавления / // Морфология и хирургия: сб. науч. тр. НГМА.-Новосибирск, 2005. -Вып. 5. -С.85-87.

6. Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Ефремов А.В., Голубева И.А. Морфо-функциональные преобразования селезенки при синдроме длительного сдавления в эксперименте / // Медицина и образование в XXI веке: ежегодная науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию НГМА. -Новосибирск, 2005. -С.411-412.

7. Голубева И.А., Головнёв В.А., Ефремов А.В., Шевцов А.Р. Структура селезенки при экспериментальном синдроме длительного сдавления и после фармакологической коррекции манжеткой обыкновенной / // Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма: материалы 7-го междунар. симп. и 8-ой Чуйской науч.-практ. конф. -Чолпон-Ата, 2005. -С. 60-62.

8. Шевцов А.Р. Морфология селезенки на разных этапах синдрома длительного сдавления и при использовании лимфотропного препарата // Авиценна-2006: ежегод. конкурс-конф. студентов и молодых ученых. -Новосибирск, 2006. -С. 88-89.

9. Шевцов А.Р., Головнёв В.А., Голубева И.А. Морфология селезенки в норме, при моделировании синдрома длительного сдавления и в условиях применения полифенолов манжетки обыкновенной // Вестник НГУ. Серия: биология, клиническая медицина. 2006. -Т. 4, вып. 3. -С. 62-65.

10. Головнёв В.А., Голубева И.А., Шевцов А.Р. Цитоархитектоника селезёнки в условиях синдрома длительного сдавления и при коррекции // Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма: материалы 8-го междунар. симп. и 9-ой Чуйской науч.-практ. конф. -Чолпон-Ата - Бишкек. 2007. -С. 73-75.

II. Шевцов А.Р. Применение полифенолов манжетки обыкновенной при моделировании синдрома длительного сдавления. Авиценна-2007: ежегод. конкурс-конф. студентов и молодых ученых. -Новосибирск, 2007. -С. 89-90.

-19-

Корректор Тропина Любовь Михайловна

Подписано в печать 08.08.08. Формат 60х 84/16 Усл. печ. л. 1.0 Бумага офсетная.

Печать REX.ROTARY COPI PRINTER Тираж 100 экз. Заказ № 80

Отпечатано в типографии ОАО «12 ВОЕНПРОЕКТ» 630005 г.Новосибирск, ул. Мичурина, 20