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HIV… = Human Immunodeficiency virus

et le sida

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La pandémie du sida

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La pandémie du sida

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1. Le virus

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1.1. Les découvreurs

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1.2. Le virus au MET

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1.3. Analyse biochimique du virus

Marqueurs de masse molaire

Après marquagede la glucosamine

Après marquagedes acides aminés

électrophorèse sur gel de polyacrylamide à 12 %

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1.4. Représentation du virusgp120

gp41

p24

2 RNA monocaténaires

identiques

Transcriptase réverse

enveloppe

nucléocapside

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1.5. Les protéines de surface

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1.6. Le génome du HIV

Transcriptase réverseProtéase

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V.1.1. Arbre phylogénétique Cette figure illustre le fait que les virus VIH-1 et VIH-2 ont des origines mèlées à celles des SIV simiens et forment plusieurs groupes. Cela indique qu’ils sont issus de plusieurs transmissions du singe à l’homme. Le groupe le plus important du VIH-1, responsable de la pandémie actuelle, est le groupe M. Celui-ci s’est divisé en de multiples types au cours de l’évolution chez l’homme. Le type dominant aux EU et en Europe est le type B, bien qu’en Belgique de nombreux types soient présents. Les différents types ont donné naissance à des formes recombinantes appelées CRF (circulating recombinant forms). Le VIH-2 est issu de deux transmissions indépendantes à partir d’un foyer simien, donnant les groupes A (le plus commun) et B.http://www.afd-ld.org/~fdp_viro/content.php?page=sida

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2. Cycle de multiplication

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Le cycle en movie

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La replication du HIVRNA

DNA

RNA

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3. La maladie

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3.1. Transmission, symptômes, formes de la maladie

La maladie est clairement liée à une IMMUNODÉPRESSION SÉVÈRE qui se traduit par des infections à :

• champignons (

• parasites (

• bactéries (

• virus

Et des cancers (sarcome de Kaposi)

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3.1. Transmission, symptômes, formes de la maladie

Transmission :

• sexuelle

• mère enfant

• parentérale

• drogue

• produits sanguins

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3.2. Paramètres

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Le sida : autres évolutions possibles

Évolution classique

Évolution explosive

Évolution lentissime

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4. Diagnostic

Le diagnostic du sida concerne deux virus HIV1 et 2.

Les techniques sont :

• la recherche des anticorps

• la recherche des antigènes :

• protéines virales comme p24

• RNA viral

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4.1. Isolement du virus

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4.2. Recherche d’anticorps

savonnette

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immunoenzymologie

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immunochromatographie

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Western-blot

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4.3. Recherche d’antigène

Ex : p24/Vidas, recherche combinée

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Charge virale

Détecter le virus ne suffit pas pour adapter le traitement;

La biologie moléculaire permet d’aller plus loin avec la mesure de la charge virale (nombre de copies de l’acide nucléique viral par mL de plasma)

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Échantillon + 3 contrôles internes

RNA

Extraction des RNA

RNA et DNAc

Addition de RNAse

DNAc du HIV

Addition de T7 RNA polymérase

Environ 100 copies RNA du DNAc

Nouveaux cycles à température constante

Environ 109 copies RNA du DNAc

Rétrotranscription avec des amorces spécifiques du virus (gag pol)

Addition de sondes spécifiques(pour les contrôles et le RNA viral) Mesures de luminescence pour les

contrôles et le virus

Les trois contrôles internes sont des RNA qui diffèrent de l'ARN du HIV par 20 nucléotides.

Limite de détection de :

• 400 copies en partant de 1 mL de sérum, et

• 4000 en partant de 100 µL.

Technique NASBA (Nucleic

acid sequence based amplification ) exemple pour HIV avec QR System(Organon Teknika)

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Technique PCR quantitative (dite en temps

réel ) exemple pour HIV avec Amplicor HIV-1 monitor (Roche Diagnostic

Systems)

Échantillon + contrôle interne

RNA

Extraction des RNA

RNA et DNAc

Addition de RNAse ????

DNAc du HIV

Cycles de PCR(avec la même polymérase

Nombreuses copies du DNAc

Dépôt, dans des microplaques, de l’échantillonou de ses dilutions.

Les puits comportent des sondes spécifiques biotinyléessoit du virus HIV soit du contrôle interne.

Rétrotranscription avec des amorces biotinylées spécifiques du virus (gag)

Détection des amplicons par addition de PAL liée à l’avidine

Le contrôle interne est de concentration connue en RNA.

Limite de détection de :

• 400 copies en partant de 100 µL.

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Technique capture-amplification du

signal exemple pour Quantiplex HIV RNA

(Chiron)

Échantillon

RNA

Extraction des RNA

RNA viral fixé dans les puits

Addition de sondes de DNA branchées marquées à la PAL

Sondes DNA-Pal fixées sur le RNA viral retenu dans le puits

Addition de subtrats

Dépôt dans les puits d’une microplaque contenant des sondes fixées (gène pol)

Mesure par chimiluminescence

(amplification obtenue de 1800 fois par RNA viral)

Conclusion avec la courbe d’étalonnage réalisée dans les

mêmes conditions sur des RNA de concentration connue

Limite de détection de :

• 10 000 copies en partant de 1 mL.

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5. Prévention et traitement

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Elle est fondée sur :

• la détection des séropositifs pour limiter la transmission

• le traitement des séropositifs pour réduire le « stock » de virus

• il n’y a malheureusement pas de vaccin possible actuellement

5.1. Prévention

Le péril sexuel

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5.2. Traitement

AZT

• inhibiteurs de • inhibiteurs de

Les multithérapies

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6. Autres rétrovirus

Les HTLV1 et HTLV2 (Human T Cell Leukemia Virus) identifiés chez l'homme comme responsables de leucémies des lymphocytes T appartiennent à cette famille. Ce sont des oncovirus à RNA.(voir Virus et cancers)

Pr GALLO

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Fin