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*qPCR 関連商品のキャンペーンは、 2013 年 6 月 24 日から既に開始しております。
期間 : 2013年7月17日 ~ 2013年9月30日 [ご注文分]
対象品目
TOYOBOTOYOBO
● KOD PCRプロダクトのTAクローニング
● 高性能PCR酵素
● 汎用PCR酵素
● 部位特異的変異導入キット
● 高効率逆転写酵素
● 組換え用試薬
● 核酸抽出キット
● DNAマーカー
● 制限酵素
● 免疫反応促進試薬
● リアルタイムPCRマスターミックス
● 高効率PCR 酵素( KODシリーズ) KOD FXシリーズ、 KOD -Plus-シリーズ
● リアルタイムPCR用cDNA合成キット
P3
P2
P2
P3
P1~2
P4
P4
P4
P5
P5
P6~7
P8~10
P11
30~50%OFF !!
高効率PCR 酵素( KODシリーズ)ズ)
● KOD DNA polymerase は強い校正活性と高い伸長性をもつ
KOD DNA polymerase は、 ポリメラーゼ活性に加え、 強力な 3’ -5’ エキソヌクレアー
ゼ活性 (校正活性) を有し、 誤って取り込まれた塩基を除去しながら合成を行うため、
校正活性のない Taq DNA polymerase などに比べ、 飛躍的に高い正確性で DNA 合成
を行うことができ、 クローニング等の用途に適しています。
また、 KOD DNA polymerase の DNA 複製速度は、 約 130 base / sec. と Taq DNA polymerase の約 2 倍であり、 高効率 ・ 高速 PCR にも適しています。 KOD DNA polymerase の立体構造解析から、 他のポリメラーゼに比べ Thumb 領域が
弛緩した状態であることが分かっており、 そのダイナミックな構造変化が速く正確な複製に
関与していると推察されています。
それらの性質を利用して、 様々な製品が開発されました。 ここでは、 KOD -Plus- シリー
ズと KOD FX シリーズを主にご紹介いたします。
KOD Neo シリーズには伸長エンハンサー技術が使われています
PCR 酵素による遺伝子増幅において、 20 サイクル目以降、 基質の消耗 ・ 劣化や酵素の失活、 副生成物による阻害など様々な要因によって、 増幅産物がそれ以上増えにく
くなる、いわゆる 「プラトー現象」 が問題となっていました。 TOYOBO では、プラトー現象を抑える効果のある物質を見出し、KOD Neo シリーズに応用することに成功しました。
伸長エンハンサーの添加により、 20 サイクル以降も増幅が効率的に継続するため、 飛躍的な増幅効率の向上が期待できます。 特に、 長いターゲットの増幅効率が飛躍的に
向上し、 また高速条件 ( 伸長時間 30 sec./kb) を実現しました。
2030
40
伸伸長エンハンサーの効果の効果
プラトー現象
従来のPCR酵素のPCR酵素
Cycle Number
KOD NeoKOD NeoシリーズシリーズKOD Neoシリーズ
KOD -Plus-Neo
KOD -Plus-(従来品)
Cycle numbers
X15 X20 X25 X30 X35 X40 X45 X50X15 X20 X25 X30 X35 X40 X45 X50
強い校正活性
KOD -Plus- シリーズ
KOD FX シリーズ優れた DNA 合成活性
阻害物質に強い
・ 遺伝子クローニング・ 迅速検出 等
・ ジェノタイピング・ 高難易度 PCR 等
用 途
用 途
(保存・輸送温度:-20℃)*使用回数は50 μl反応時の回数を記載しています。
ホットスタート対応
KOD FX200 U×1 本(200 回用)
高成功率 PCR 酵素KFX-101 ¥35,000 ¥21,000
KOD FX Neo200 U×1 本(200 回用)
高効率・高成功率 PCR 酵素KFX-201 ¥35,000 ¥21,000
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
KOD DNA polymerase は、
今中忠行先生らのグルー
プにより、 鹿児島県小宝
島の硫気孔から分離され
ました。。
KOD FXシリーズ
● クルードサンプルに強い
● 細胞壁を有する微生物からの直接増幅に強い
● 難配列に強い (High GC%, AT%、 Long targets)
土壌植物マウステール
・血液・ つめ
・ヒレ (魚)・食品 など
KOD FX シリーズは、 阻害を受けにくいという酵素の特性をさらに引き出す
ことにより、 今まで困難だった核酸を含むクルードサンプルからの高効率な
増幅が可能となりました。
KOD FX Neo はゲノム DNA から最大 40 kb の増幅が可能です。
KODの性能を引き出す 2xBuffer
・増幅効率を向上します・クルード成分(多糖やヘムなど)の阻害を緩和します・細胞壁の溶解を促進します
この濃厚な成分が効くんです
PCR 阻害成分
伸長エンハンサー
KOD DNA polymerase
・プラトー現象を抑え増幅効率を高めます・ 長距離 PCR の効率を高めます・増幅スピードを速めます
タンパク性の伸長エンハンサーが PCR 阻害成分を抑えます
KOD FXシリーズは、 優れた増幅成功率、増幅効率、伸長性を示し、クルードサンプルを
用いるジェノタイピングをはじめ、難配列ターゲットの増幅など、時間の短縮やトラブルシュー
ティング的な使い方ができる、有用な酵素です。 特に、 マウステールや植物サンプルから
のジェノタイピングは、 短時間の処理によって得られたライセートから直接PCR可能であり、
煩雑な抽出作業をスキップすることができます。
- 1 -
☆待望のクルード ・ 難配列用
PCR 酵素!
PCR 酵素( KODシリーズ)
KOD DNA polymerase の特性を余すことなく利用したい。TOYOBOはそう考えました 40%OFF40%OFF
評価用サンプルございます
評価用サンプルございます
高性能PCR 酵素
KOD PCRプロダクトのTAクローニングーニンググ
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
KOD Dash
Blend Taq®
Blend Taq® -Plus-
250 U×1 本(100 ~ 200 回用)
250 U×1 本(200 回用)
250 U×1 本(200 回用)
高効率 PCR 酵素
高性能 Taq ポリメラーゼ
高性能 Taq ポリメラーゼ (ホットスタート対応)
LDP-101 ¥25,000 ¥15,000
¥11,400
¥12,600
¥19,000
¥21,000
BTQ-101
BTQ-201
● 伸長時間を 30 sec./kb に設定可能 (迅速検出)
● 長鎖ターゲットを高効率に増幅
● コロニーダイレクト PCR に最適
● スタンダードな高性能 Taq として使用可能
● 長鎖ターゲットを高効率に増幅
● コロニーダイレクト PCR にも最適
KOD Dash Blend Taq®
KOD Dash と Blend Taq®は、 それぞれ KOD DNA polymerase (exo-) と Taq DNA polymerase に、 校正活性を有する PCR 酵素を微量混合すること
により、 取り込みエラーによる複製の停止を防止し、 長鎖 PCR の効率を高めるという方法 (Barnes らの方法) を用いています。
M 1 2 3 4rTaq DNA polymerase
M 1 2 3 4Blend Taq®
(保存・輸送温度:-20℃)*使用回数は50 μl反応時の回数を記載しています。
10×A-attachment Mix 25 回用TA クローニング用 A 付加試薬 (KOD 用)
TAK-301 ¥12,000 ¥7,200
TArget CloneTM -Plus- 10 回用高効率 TA クローニングキット (KOD 用)
TAK-201 ¥16,000 対象外
10×A-attachment Mix は、 KOD -Plus- シリーズ、 KOD FX シリーズ等で増幅した未精製の PCR 産物に添加することで、平滑末端に A を
導入する試薬です。
本試薬には、抗 KOD DNA polymerase 中和抗体と Taq DNA polymerase が含まれており、効果的に DNA 末端に A を付加することがで
きます (Taq が A を付加し、抗 KOD 抗体が KOD 残留校正活性による平滑化を防止します)。
Aを導入した産物はLigation high Ver.2 (Code No. LGK-201)[キャンペーン対象品 ]を用いて、任意のTベクターと連結することができます。
また、同一原理で T ベクターやリガーゼを含むフルキット『TArget CloneTM -Plus- (Code No. TAK-201)』(キャンペーン対象外)もございます。
【A-attachment Mixの原理】 (保存・輸送温度:-20℃)
KOD -Plus-シリーズ
KOD FX Neo
KOD -Plus-
KOD FX
Pfu DNA polymerase
A 社 Long PCR 酵素Taq DNA polymerase
0 25 50 75 100 125 150Mutation frequency
(100,000 塩基あたりのエラー塩基数)
各酵素における PCR エラー率の比較
KOD -Plus- Neo
ホットスタート対応
(保存・輸送温度:-20℃)*使用回数は50 μl反応時の回数を記載しています。
KOD -Plus- Neo
KOD -Plus- Ver. 2
KOD -Plus-
200 U×1 本(200 回用)
200 U×1 本(200 回用)
200 U×1 本(200 回用)
高正確・高効率・高速 PCR 酵素
高正確・高効率 PCR 酵素
高正確 PCR 酵素
KOD-401 ¥30,000 ¥18,000
¥18,000
¥18,000
¥30,000
¥30,000
KOD-211
KOD-201
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
KOD -Plus-シリーズは、 KOD DNA ポリメラーゼのもつ
高いProof-reading 活性 (3’ -5’ エキソヌクレアーゼ活
性) を活かし、 ホットスタート法をはじめ様々な改良を
加え、 Taqの約80倍という高い正確性を保ちながら、
PCR効率を向上させています。
昨年発売された最新バージョンKOD -Plus- Neoは、
新規な伸長エンハンサーを添加することで、 微量サン
プルからの増幅や長鎖ターゲットの増幅効率を向上さ
せています。 また、 伸長時間を30 sec./kbと短縮し、
高速化にも成功しました。
正確性はTaqの約80倍!クローニング用酵素の決定版!
高正確
40%OFF40%OFF
40%OFF40%OFF
- 2 -
評価用サンプルございます
抗KOD DNAポリメラーゼ抗体
PCR 産物
dAの付加AA
KOD DNAポリメラーゼ
エキソヌクレアーゼの阻害
Taq DNA polymerase
セット購入でお得!
・ 包装 : 100 μl×10 本
・ Code No. DNA-903
●109 cfu/μg (pBR322) と高効率です。●SOC 培地が添付されており、 すぐに形質転換が可能です。
- 3 -
Code No.
DNA903/DTM101 ¥14,000
( BR322) と高
組換え用試薬
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
(保存・輸送温度:-20℃)※1 回の使用量を 15 μl とした場合、 50 回用として、 7.5 μl とした場合、 100 回用としてご使用いただけます。
Ligation high Ver.2 LGK-201 ¥22,000 ¥13,200
¥12,000¥20,000LGK-101
750 μl×1 本
375 μl×2 本Ligation high
-20℃保存での試薬の状態
Ligation high Ver.2Ligation high●-20℃で凍結しないため、 便利にお使いいただけます。
●TA クローニング効率がアップ。
● 1 液タイプのライゲーション試薬です。
● 高効率にライゲーションできます。※A-attachment mix [Code No. TAK-301] を併用することで、 KOD -Plus- シリーズで増幅した DNA 断片の任意のベクター への導入効率を飛躍的に高めることができます。
● 高効率ライゲーション試薬
Ligation highVer.2
汎用PCR 酵素
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
Quick Taq® HS DyeMix
1.25 ml×2 本(100 回用)
(1.25 ml×2本)×10(1,000回用)
ホットスタート対応・色素入りTaq Master Mix DTM-101 ¥9,800 ¥5,880
対象外¥44,000DTM-101X10
サンプル( DNA溶液・大腸菌コロニーなど )
PCR (ホットスタート対応)
そのままゲルにアプライ可能
Quick Taq® HS DyeMix は、 2× 濃度に調整されています。 プライマーと滅菌水を加えて反応液を簡単に調製できます。
凍結融解 30 回、 4℃保存 3 ヵ月において安定性を確認しています。
(保存・輸送温度:-20℃)*使用回数は50 μl反応時の回数を記載しています。
ホットスタート対応
コロニーダイレクトPCRに最適です。
40%OFF40%OFF
40% ~ OFF40% ~ OFF
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
DNA溶液
5min.
約10分
1min.
On ice
Heatshock(42℃)
Competent QuickDH5α
プレートへ播種Competent Quick DH5α DNA-913 ¥29,000 ¥17,400100 μl×20 本
(保存温度:液体窒素・輸送温度:-80℃)
● サブクローニング用コンピテントセル
Competent Quick DH5α
● 約 10 分で形質転換が完了します。
● -80℃で 3 ヵ月間保存することができます。
●108 cfu/μg (pBR322) と高効率です。●20 本入りでお得です。
[Competent Quick DH5α]
Competent high DH5α
(Code No. DNA-903)
Quick Taq HS DyeMix
(Code No. DTM-101)
通常価格 : \17,000
通常価格 : \9,800
ix
1)
\14,000キャンペーン ( セット) 価格
品名 ( セット品)
Competent high DH5α/ Quick Taq® Set
キャンペーン価格
● クローニング用コンピテントセル
Competent high DH5α
部位特異的変異導入キットト
核酸抽出キット
高効率逆転写酵素
Transform E.coli
CH3CH3
CH3
CH3
CH3CH3Template(Plasmid)
CH3CH3
CH3
CH3
CH3CH3
Mutant
PCR 増幅産物
Dpn Iによって断片化された鋳型Plasmid
PCR PrimerX 変異導入箇所CH3 メチル化部位
Inverse PCR (5 ~ 10 サイクル)<0.5 ~ 2hr>
Dpn I による鋳型 Plasmid の分解<37℃ 1hr>
PCR 産物の Self-ligation (Kinase / Ligase)<16℃ 1hr>
変異が導入された
Plasmid
Templateplasmid
置換
or
挿入欠失
KOD -Plus- Mutagensis Kit は、 KOD -Plus-の高い正確性を活かした Inverse PCR 法に基づく部位特異的変異導入キットです。 通常の一塩基置換に加え、 欠失や挿入など、 幅広い変異導入が可能です。 また、 NNN のように連続したランダム変異を持つライブラリーの作製などにも適しています。
変異導入フロー
KOD -Plus- Mutagenesis Kit
A社キット(非PCR法)
配列確認を試みたクローン数
16 15 94%
16 0 0%
目的とした変異体の割合
目的の変異を有していたクローン数
●His-Tag (18 bp) 挿入における効率比較
※本試薬には以下の試薬が含まれています。 KOD -Plus-, 10xBuffer for iPCR, 2mM dNTPs, Dpn I, T4 Polynucleotide Kinase, Ligation high, Control plasmid, Control primer#1, Control primer#2
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
(保存・輸送温度:-20℃)
KOD -Plus- Mutagenesis Kit部位特異的変異導入キット
20 回用 SMK-101 ¥38,000 ¥22,800
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
(保存・輸送温度:-20℃)
RNase H ドメインポリメラーゼドメインRTase activity RNase H activity
点変異により伸長性アップ点変異によりRNase H活性を低減
M-MLV RTase
42~60℃におけるcDNA合成効率の比較
ReverTra Ace®
42 50 55 609.497.46
4.402.37
1.35
反応温度(℃)
A 社酵素 B 社酵素
42 50 55 60 42 50 55
M-MLV RTaseをベースとして開発された高効率逆
転写酵素です。 タンパク質工学技術により、 ポ
リメラーゼドメインとRNase Hドメインを改変するこ
とで、 伸長性と高温反応性が向上しています。
ReverTra Ace® 10,000 U×1 本 TRT-101 ¥17,000 ¥10,200高効率逆転写酵素
- 4 -
40%OFF40%OFF
40%OFF40%OFF
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
MagExtractorTM - Genome -
MagExtractorTM - Plant Genome -
Magical Trapper
100 回用
100 回用
1 個
ゲノムDNA抽出キット
植物ゲノムDNA抽出キット
磁性スタンド
NPK-101 ¥28,000 ¥19,600
¥19,600
対象外
¥28,000
¥38,000
NPK-501
MGS-101
(保存・輸送温度:4℃ [ MGS-101: 室温] )
磁性シリカビーズを用いて、様々なサンプルからゲノムDNAを抽出する試薬です。
MagExtractorTM -Genome-
血液 (全血) や培養細胞、 組織などから高純度ゲノム DNA を抽出するためのキットです。
MagExtractorTM -Plant Genome-
葉 ・ 種子などの植物組織や植物培養細胞などから高純度のゲノム DNA を抽出するためのキットです。 回収した DNA は、 PCRなどの酵素反応に直接使用できます。
主な対応サンプル
血液
培養細胞
組織
マウステール
収量
2 μg / 100 μl 全血
3 μg / 5×105 cells (HeLa cell)
5 μg / 5 mg ( 組織)
3 μg / 2 mm テール
収量
2 ~ 3 μg / 100 mg
3 ~ 5 μg / 100 mg
1μg / 100 mg
2 μg / 25 mg
主な対応サンプル
タバコ (培養細胞)
イネ (葉)
シロイヌナズナ (葉)
大豆 (凍結乾燥)
●Magical Trapper (キャンペーン非対象品)
磁性ビーズを使用した核酸やタンパク質の
マニュアル法での精製に最適な磁性
チューブスタンドです。
●1.5 ~ 2ml マイクロチューブ 10 本、
15 ml チューブ 1 本 (背面) を保持することが可能です。
●従来の磁性スタンドに比べ軽量設計になっています。
MagExtractorTM - Genome -
30%OFF30%OFF
制限酵素
DNA マーカー
*2
100 bp DNA Ladder[DNA-035, DNA-135]
*1 500bp のバンドは強調されています。
*2 色素別添タイプはマーカー 5μl と色素 1μl を
混合し、 ロードします。 Ready-to-use タイプは
そのまま 6μl をロードします。
*5,000bp のバンドが強調されています。
*1,000bp のバンドが強調されています。
1 kb DNA Ladder[DNA-032]
200 bp DNA Ladder
● DNA 濃度の推定が容易
各バンドの DNA 量が厳密に調整されています。
●明瞭なバンド
全体のバンド強度のバランスを整えることにより、従来品に比べバンドが判別しやすくなりました。
[DNA-131] [DNA-031]
マイクロチップキャピラリー電気泳動解析結果
<色素別添タイプ>
<色素別添タイプ><Ready-to-useタイプ>
品名 包装 Code No. 通常価格キャンペーン
価格
< 色素別添タイプ > : 6 X Loading Dye が添付されています。
DNA Ladder Markers, 100 bp DNA LadderDNA Ladder Markers, 200 bp DNA LadderDNA Ladder Markers, 1 kb DNA LadderDNA Size Markers, λ/Hind III digestDNA Size Markers, φX174/Hae III digestDNA Size Markers, λ/Hind III digest -φX174/Hae III digest
<Ready-to-use タイプ > : Loading Dye があらかじめ混合されています。
Loading Quick® 100 bp DNA LadderLoading Quick® 200 bp DNA LadderLoading Quick® DNA Mass LadderLoading Quick® λ/Hind III digestLoading Quick® φX174/Hae III digestLoading Quick® λ/Hind III digest - φX174/Hae III digest
100回用 ×1本100回用 ×1本300回用 ×1本120μg×1本15μg×1本25μg×1本
100回用 ×1本100回用 ×1本100回用 ×1本40μg×2本20μg×1本20μg×1本
DNA-035DNA-031DNA-032DNA-010DNA-012DNA-017
DNA-135DNA-131DNA-134DNA-110DNA-112DNA-117
¥14,000¥20,000¥22,000¥9,000¥9,000
¥17,000
¥14,000¥15,000¥27,000¥10,000¥18,000¥20,000
¥7,000 ¥12,000 ¥13,200
¥5,400 ¥5,400
¥10,200
¥7,000 ¥9,000
¥16,200 ¥6,000
¥10,800 ¥12,000
1,500bp 10
100bp 25
200bp 15
400bp 10
1,000bp 10
800bp 10
600bp 10500bp*1 30
300bp 10
700bp 10
900bp 10
DNA濃度(ng/6μl)
1,000 bp2,000 bp3,000 bp4,000 bp5,000 bp6,000 bp7,000 bp8,000 bp9,000 bp
10,000 bp
*
200 bp 200 bp
200 bp間隔
6,600 bp
1,000 bp2,200 bp4,000 bp
1,000 bp
~
~
200 bp間隔200 bp間隔
200 bp間隔
~
~
*
*
Alu I
BamH I
Bcl I
Bgl I
Bgl II
Dde I
Dpn I
EcoR I
EcoRV
Hind III
Hinf I
Mlu I
Mro I
Msc I
500U×1本12,000U×1本500U×1本1,000U×1本6,000U×1本500U×1本1,000U×1本12,000U×1本4,000U×1本12,000U×1本2,000U×1本1,000U×1本40U×1本40U×1本
ALU-101
BAH-111
BCL-101
BGL-101
BGL-211
DDE-101
DPN-101
ECO-111
ER5-101W
HND-311
HNF-101W
MLU-101
MRO-101
MSC-101
¥9,000
¥8,000
¥9,000
¥8,500
¥13,000
¥10,000
¥11,000
¥9,000
¥12,000
¥9,000
¥8,000
¥9,000
¥11,000
¥10,000
¥5,400
¥4,800
¥5,400
¥5,100
¥7,800
¥6,000
¥6,600
¥5,400
¥7,200
¥5,400
¥4,800
¥5,400
¥6,600
¥6,000
Nco I
Nhe I
Not I
Pst I
Pvu I
Pvu II
Sac I
Sal I
Sfi I
Sma I
Spe I
Sph I
Xho I
200U×1本250U×1本1,000U×1本12,000U×1本200U×1本5,000U×1本5,000U×1本5,000U×1本2,000U×1本3,000U×1本200U×1本600U×1本3,000U×1本
NCO-101
NHE-101
NOT-111X
PST-111
PVU-101W
PVU-211
SAC-111
SAL-111
SFI-111
SMA-111
SPE-101
SPH-111
XHO-101
¥5,500
¥5,500
¥15,000
¥9,000
¥10,000
¥16,000
¥14,000
¥13,000
¥15,000
¥15,500
¥7,500
¥13,000
¥7,000
¥3,300
¥3,300
¥9,000
¥5,400
¥6,000
¥9,600
¥8,400
¥7,800
¥9,000
¥9,300
¥4,500
¥7,800
¥4,200
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格 品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン
価格
(保存温度:-20℃・輸送温度:4 ℃)
(保存・輸送温度:-20 ℃)
- 5 -
40 ~ 50%OFF40 ~ 50%OFF
40%OFF40%OFF
50%OFF
50%OFF
免疫反応促進試薬
品名及び内容 包装 Code No. 通常価格
Can Get Signal ® Immunoreaction Enhancer Solution
Solution 1 for primary antibodySolution 2 for secondary antibody
各 250ml×1 本 NKB-101 ¥30,000 ¥18,000
Can Get Signal ® Solution 1 250ml×1 本 NKB-201 ¥10,200¥17,000
Can Get Signal ® Solution 2
PVDF Blocking Reagent for Can Get Signal ® 250ml×1 本
500ml×1 本
NKB-301
NYPBR01
¥10,200
対象外
¥17,000
¥13,500
キャンペーン価格
ウェスタンブロット・ELISA ・免疫染色等の感度不足・
特異性で お困りの方、 是非一度お試しください。
● 酵素標識、及び蛍光標識抗体で使用可能です。● 現在お使いのブロッキング試薬や検出試薬を 変更する必要はありません。
Can Get Signal ®
ウェスタンブロット・ELISA 用
※ Solution 1 と 2 は、 それぞれ 1 次抗体と 2 次抗体に対応しています。 ※多くの場合において、 使用する抗体の量を減らすことができます。 (保存・輸送温度:4℃)
Antigen
Antibody
I E ( immunoreaction enhancing ) technologyI E ( immunoreaction enhancing ) technology I E ( immunoreaction enhancing ) technology PCR 用バッファーはポリメラーゼの活性や特異性を引き出すために種々の工夫 PCR 用バッファーはポリメラーゼの活性や特異性を引き出すために種々の工夫
が重ねられてきました。 一方、 ウェスタンブロット用の反応液 (抗体希釈液) はが重ねられてきました。 一方、 ウェスタンブロット用の反応液 (抗体希釈液) は
汎用バッファー (TBS-T, PBS-T) やブロック剤溶液などが使われるだけでした。汎用バッファー (TBS-T, PBS-T) やブロック剤溶液などが使われるだけでした。
そこで、 TOYOBO は多変量解析法を用いて そこで、 TOYOBO は多変量解析法を用いて、 抗原抗体反応を最適条件で行うた抗原抗体反応を最適条件で行うた
めの条件を絞り込みめの条件を絞り込み、 Can Get SignaCan Get Signal® を開発しました。を開発しました。
PCR 用バッファーはポリメラーゼの活性や特異性を引き出すために種々の工夫
が重ねられてきました。 一方、 ウェスタンブロット用の反応液 (抗体希釈液) は
汎用バッファー (TBS-T, PBS-T) やブロック剤溶液などが使われるだけでした。
そこで、 TOYOBO は多変量解析法を用いて、 抗原抗体反応を最適条件で行うた
めの条件を絞り込み、 Can Get Signal® を開発しました。
最適 +ー
塩
バッファー
界面活性剤
添加剤
その他
+ー
特異性アップ
反応性アップ
バックグラウンド低減
抗体の節約
40%OFF40%OFF
HeLa 細胞のライセートをサンプルとして、 ウエスタンブロット法によって Human
β-actin、 及び ERK-2 の検出を行いました。 その結果、 従来法 (TBS-T 使用)、他社試薬に比べ、 Can Get Signal® を用いた場合、 明らかなシグナルの増強と、
特異性の向上が見られました。
実施例 ウエスタンブロットによる各種タンパク質の検出
1 2 3 4 1 2 3 4
従来法(TBS-T)
Human β-actin ERK-2
42 kDa
A社試薬Can Get Signal® Can Get Signal®
1 2 3 4 1 2 3 4
B社試薬
1 2 3 4
1: 2-0 希釈2: 2-1 希釈3: 2-2 希釈4: 2-3 希釈
低感度
Can Get Signal ® で抗体を希釈
Membrane+
-Gel
ブロッキング 1次抗体反応
Solution 12次 ( 標識) 抗体反応
標識抗体のみのワンステップ検出の場合は、基本的にSolution 2を標識抗体のみのワンステップ検出の場合は、基本的にSolution 2を用いる検出をおすすめしています用いる検出をおすすめしています標識抗体のみのワンステップ検出の場合は、基本的にSolution 2を用いる検出をおすすめしています
Solution 2
MembraneMembraneGel
Prestained MarkerSamples
SDS-PAGE トランスファー
Membrane
検出検出 ・発色 ・発色 ・発光 ・発光 ・蛍光 ・蛍光
検出 ・発色 ・発光 ・蛍光
Membrane
室温・1h 室温・1h
洗浄 洗浄 洗浄 洗浄
■ 操作フロー (ウェスタンブロット)
室温・1hor 4℃・16h
● 使用方法は簡単● 使用方法は簡単!● 使用方法は簡単!1次抗体 2次抗体
抗体を直接希釈して使用するだけ!
Can Get Signal®
Solution 1
Can Get Signal®
Solution 2
※ 酵素標識、及び蛍光標識抗体で使用可能です。※ 現在お使いのブロッキング試薬や検出試薬を 変更する必要はありません。
非特異反応
「 PCR酵素に専用バッファーがあるように、 ウェスタンブロット にも 専用バッファー が必要なはず 」 そんなコンセプトから開発を行いました。
PVDF Blocking Reagent for Can Get Signal®
PVDF Blocking Reagent for Can Get
Signal ® はCan Get Signal ® を用いる
ウェスタンブロット解析に適した人工
合成ブロッキング試薬です。 日油株
式会社により専用製品として製造さ
れています。
- 6 -
評価用サンプルございます
免疫反応促進試薬
包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
Can Get Signal® immunostain Startar Set
Can Get Signal® immunostain
Can Get Signal® immunostain
Solution A, Solution B
Solution A
Solution B
各 5ml×1 本
20ml×1 本
20ml×1 本
NKB-401
NKB-501
NKB-601
¥12,000 ¥7,200
¥18,000
¥18,000
¥30,000
¥30,000
● 組織 ・ 細胞に対応
● パラフィン包埋切片 ・ 凍結切片に対応
● ABC 法やポリマーコンプレックス法などとの併用も可能
Can Get Signal ®
immunostain
免疫組織染色( IHC)用 ● 使用方法は簡単
1次抗体 2次抗体
抗体を直接希釈して使用するだけ!
Can Get Signal®
Solution A or B
品名及び内容
※ Solution A と B は、 それぞれ単品で使用いただく設計になっております。 1次抗体用、 2 次抗体用にそれぞれが対応しているわけではありませんのでご注意ください。
Solution A と B は免疫反応の促進作用が異なります。 最初にご使用いただく際に Startar Set (Code No. NKB-401) を用いてご検討いただくことをお薦めいたしております。
※多くの場合において、 使用する抗体の量を減らすことができます。
(保存・輸送温度:4℃)
- 7 -
Can Get Signal ® immunostain で抗体を希釈
ブロッキング
室温・1h 室温・1h 室温・30 min.室温・1hor 4℃・16h
Solution Aoror Solution B
Solution ASolution B
発色試薬
パラフィン切片
スライドグラス
洗浄洗浄脱パラフィン 洗浄 洗浄 洗浄
保存
蒸留水必要に応じて●内在性ペルオキシダーゼの 失活処理●抗原の賦活化処理
アビジン ・ビオチン複合体
1次抗体反応 2次 ( 標識) 抗体反応
● 操作フロー (ABC 染色)
従来法 (1% BSA/PBS 使用)
従来法 (1% BSA, 0.02% TX-100/PBS 使用)
Can Get Signal® immunostain(Solution B) 使用
Can Get Signal® immunostain(Solution A) 使用
Can Get Signal® immunostain(Solution B) 使用
ヒト脳腫瘍 (グリオブラストーマ) に発現する CD133 を、 パラフィン包埋切片をサンプルとして検出を行いまし
た。 1 次抗体には Rabbit polyclonal to CD133-Stem Cell Marker を用い、 1 次抗体の希釈は 1%BSA/PBS、
もしくは Can Get Signal ® immunostain (Solution B) にて行いました。 検出は Envision (Dako ChemMate) を用
い、 DAB 発色にて行いました。 その結果、 従来法で微弱なシグナルが、 Can Get Signal ® immunostain を
使用することで増強されることが分かりました。
※データは、 北海道大学大学院 医学研究科 分子細胞病理学分野 野田頭未歩先生、 笹井研先生よりご提供いただきました。
Drosophila 細胞株 [Schneider 2 (S2)] から、 2 次抗体として Alexa Fluor 488 標識
anti-mouse IgG を用いて、 alpha-tubulin の検出を行いました。 その結果、 従来法
ではややdiffuseであったチューブリン束のシグナルが鮮明に検出されました。また、
細胞内のバックグラウンドと思われるシグナルが減少傾向にありました。 特に、
Solution B の方がシグナルが若干強い印象を受けました。※データは、 京都大学 ・ 研究員様よりご提供いただきました。
Schneider 2 (S2) の alpha-tubulin 染色における従来法との比較実実施例 1
実施例 2 CD133 免疫染色における従来法との比較検討
数々の論文は信頼のあかし
Can Get Signal ® を用いた論文は国内外の多くのピアレビュー誌に掲載さ
れています。 Google 等を用いて確認してみてください。
検索“Can Get Signal”
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リアルタイムPCR関連試薬試薬
効果的なcDNA合成を行いたい
ReverTra Ace® qPCR RT Kit(Code No. FSQ-101)
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover (Code No. FSQ-301)
・ qPCRアッセイ用のcDNAを高効率で合成したい
・プレミックス試薬で効率良くcDNAを合成したい
・ゲノム除去機能+プレミックスでさらに簡便に
ReverTra Ace® qPCR RT シリーズ
cDNA合成試薬 (リアルタイムPCR用)
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)
優れた特異性(プライマーダイマーの低減)高いPCR効率(広いダイナミックレンジ)
難配列(高GC、2次構造)に対応長鎖ターゲットの増幅が可能(~2 kb)クルードサンプルに対応
・SYBR® Green I アッセイに問題を抱えている
・新しい解析法に応用したい
KOD SYBR® qPCR Mix
SYBR® Green I アッセイ
SYBR® Green I アッセイ
TaqMan® アッセイ
リアルタイムPCR試薬
THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix
高いコストパフォーマンス
Taq DNA Polymeraseを用いたリアルタイムPCR試薬です。
標準的な条件を用いて、 高い精度で解析が可能です。
KOD exo(-) DNA Polymeraseを用いて開発されたリアルタイムPCR
試薬です。 通常の試薬にない優れた性能を発揮します。
THUNDERBIRD® シリーズ
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効果的なリアルタイムPCR解析をしたい
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現在お使いの条件を変えずに、より効率良く、リーズナブルに!
現在の試薬や条件では解析困難なターゲットやサンプルの解析に!
お試し用サンプルとして、40回用のサンプルをご用意しています。
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詳細はこちら
- 8 -
リアルタイムPCR用マスターミックスミックスス
バッファーに改良を加えることにより、SYBR® Green I、 および
TaqMan® アッセイにおいて、低コピー数のターゲットの検出感度、
定量性が向上しました。
SYBR® Green I 検出系による反応特異性の比較 (Applied Biosystems 7900HT 使用 )
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 0 5 10 15 20 25 30 35
40 45
Cycles
融解曲線 増幅曲線
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix A社試薬
10-1
10-5希釈
10-1
10-5
プライマーダイマー
コピー数が少なくなるとプライマーダイマーが発生
プライマーダイマーが発生しやすいプライマーセットを用いて、各リアルタイム PCR 試薬による反応特異性の比較を行いました。HeLa 細胞 Total RNA から合成したcDNAを用いてヒト β-Actin 遺伝子 (188 bp) を増幅しました。
新規エンハンサーを採用し、ターゲットごとの PCR 効率のばらつ
きを最小限に抑えることにより、広いダイナミックレンジを実現して
います。
特長 1 高い特異性 (プライマーダイマーの低減) 特長 2 広いレンジでの検出が可能 ( 高効率 )
特長 4 様々な機器に対応特長 3 高い測定精度
Applied Biosystems
RocheDiagnositics
Bio-Rad/MJ
TaKaRa
BioFlux
ABI PRISM® 7000ABI PRISM® 7700Applied Biosystems® 7300Applied Biosystems® 7500 Applied Biosystems® 7500 FASTApplied Biosystems® 7900HTApplied Biosystems® StepOne™Applied Biosystems® StepOnePlus™
LightCycler® 1.x / 2.0LightCycler® NanoLightCycler® 480
iCycler iQ®
MiniOpticon™CFX96 Touch™
Mx3000PMx3005PMx4000Thermal Cycler Dice®
Line Gene
AgilentTechnologies
・ サンプル : HeLa 細胞Total RNA由来cDNAの2 0.5(=1.414)倍希釈系列(7水準, N = 4 )・ターゲット遺伝子:GAPDH・反応液量:20 µl・ 測定装置: Applied Biosystems 7900HT
SYBR® Green I 検出によるcDNA 2 0.5 倍希釈系列の検出
THUNDERBIRD®
qPCR Mix
A 社試薬
SYBR® Green I 検出系によるノロウイルス G1 cDNA の検出(Roche Diagnostics LightCycler 1.1 使用)
TaqMan® 検出系による GAPDH cDNA の定量(Roche Diagnostics LightCycler 1.1 使用)
B 社試薬
微妙なコピー数の差を、 精度よく検出することができます。
0Cycles
Ct値
Log鋳型量 (20.5倍 [1.414 倍 ] 希釈)
1.000 E+1
1.000 E-1
1.000
5 10 15 20 25 30 35
20.5
21.0
21.5
22.0
22.5
23.0
23.5
24.0
24.5
-1.00 -0.90 -0.80 -0.70 -0.60 -0.50 -0.40 -0.30 -0.20 -0.10 0.00
slope: 3.2587 相関係数: 0.9956
⊿Rn
100希釈
10-4
100希釈
10-4
広いレンジで高いPCR効率(等間隔)をキープ
*1 THUNDERBIRD® qPCR Mix (\ 29,000 → \16,400)とReverTra Ace® qPCR RT kit (\ 38,000 → \21,400)のセット販売品です。*2 THUNDERBIRD® qPCR Mix (\ 29,000 → \16,400)とReverTra Ace® qPCR RT Master Mix (\ 38,000 → \21,400)のセット販売品です。*3 THUNDERBIRD® qPCR Mix (\ 29,000 → \16400)とReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover (\ 40,000 → ¥22,600) のセット販売品です。
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◆ 高効率リアルタイムPCR用マスターミックス
THUNDERBIRD® qPCR Mix(サンダーバード)
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix 1.67ml×3 本[200 回用 , 50 µl 反応 ]
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(TaqManアッセイ用)
・THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix・ 50×ROX reference dye
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(SYBR® Green Iアッセイ用)
・THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix・ 50×ROX reference dye
QPS-101 ¥29,000 ¥17,400
¥17,400¥29,000QPS-201
(保存・輸送温度:-20℃)
(保存・輸送温度:-20℃)
評価用サンプルございます
評価用サンプルございます
品名 ( セット品) 包装 Code No. 通常価格キャンペーン
価格
THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix(200 回用 ) と
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(200 回用 ) とのセットTHUNDERBIRD® Probe qPCR / RT Set II*2 [ セット販売品 ] ¥37,800 ¥63,000QPS101/FSQ201
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(200 回用 ) と
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(200 回用 ) とのセットTHUNDERBIRD® SYBR® qPCR / RT Set II*2 [ セット販売品 ] ¥37,800 ¥63,000QPS201/FSQ201
THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix(200 回用 ) と ReverTra Ace®
qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(200 回用 ) とのセット
THUNDERBIRD® Probe qPCR / RT Set III*3 [ セット販売品 ] ¥39,000 ¥65,000QPS101/FSQ301
QPS201 /FSQ301THUNDERBIRD® SYBR qPCR / RT Set III*3 [ セット販売品 ] ¥39,000 ¥65,000
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(200 回用 ) と ReverTra Ace®
qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(200 回用 ) とのセット
THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix(200 回用 ) と
ReverTra Ace® qPCR RT Kit (200 回用 ) とのセットTHUNDERBIRD® Probe qPCR / RT Set*1 [ セット販売品 ]
¥37,800 ¥63,000QPS101/FSQ101
THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(200 回用 ) と
ReverTra Ace® qPCR RT Kit (200 回用 ) とのセットTHUNDERBIRD® SYBR® qPCR / RT Set*1 [ セット販売品 ] ¥37,800 ¥63,000QPS201/FSQ101
- 9 -
リアルタイムPCR用マスターミックスミックスス
KOD SYBR® qPCR Mix 従来品(Taq 使用 )
増幅曲線解析
融解曲線解析
CCCGCCCGAGAGAGTGACTCTCACGAGAGCCGCGAGAGTCAGCTTGGCCAATCCGTG
CGGTCGGCGGCCGCTCCCTTTATAAGCCGACTCGCCCGGCAGCGCACCGGGTTGCGG
AGGGTGGGCCTGGGAGGGGTGGTGGCCATTTTTTGTCTAACCCTAACTGAGAAGGGCG
TAGGCGCCGTGCTTTTGCTCCCCGCGCGCTGTTTTTCTCGCTGACTT
ターゲット配列 (GC 含量 : 64%, 219 bp) :
Homo sapiens telomerase RNA (TR) gene, promoter and complete squence
テンプレート : ヒトゲノム DNA
プライマー (ChIP 法の論文より引用) :
上記赤字で示した配列を使用しました。
104
101copy104
101copy
同一のプライマーを
使用
M 1 2 3
1.9 kb
約 2 kb のターゲットまで定量可能
KOD SYBR® qPCR Mix 従来品(Taq 使用 )
104
100copy
104
100copy
増幅曲線解析
M: 1kb Ladder 1: KOD FX Neo 2: KOD FX 3: KOD –Plus- Ver.2
電気泳動解析
特長 2 難配列(GC リッチ、 2 次構造)に効果的特長 3 クルードサンプルを用いる解析が可能
特長 4 様々な機器に対応
特長 1 長鎖ターゲットの増幅が可能 ( ~ 2kb)
酵素
従来品 (Taq 使用) KOD SYBR® qPCR Mix
増幅長
GC 含量の高い
ターゲットの増幅
阻害物質の影響
Taq DNA Polymerase KOD DNA Polymerase[exo(-) mutant]
70 ~ 150 bp( 最大 : 300 bp)
70 bp ~ 2 kb
不得意GC 含量の
影響を受けにくい
受けやすい
(DNA の精製が必要)
受けにくい(クルードサンプルからの増幅に適している)
● 従来の試薬との特性比較
KOD SYBR® qPCR Mix は KOD DNA Polymerase の酵素特性 (高効率、クルード成分の阻害を受けにくい) を活かし、 SYBR® Green I アッセイの利便性と汎用性を更に高めることを目指しました。
■ KOD SYBR® qPCR Mix のコンセプト
融解曲線解析を用いるワンチューブ
マウスジェノタイピング (ABI 7500 使用)
Temperature(℃)
60 65 70 75 80 85 90 95
-0.200
0.000
0.200
0.400
0.600
0.800
1.000
1.200
KI/KI
WT/WT
WT/KI
融解曲線解析
Wild type 及び knock-in 特異的増幅産物の増幅長を変えることで増幅産物の Tm 値に差が生じるようにプライマーを設計し、 エンドポイントでの融解曲線解析を用いてジェノタイピング解析を行いました。 その結果、 ホモ、ヘテロともに良好な判定を行うことが可能でした。
ターゲット : ターゲティング部位 (Cre ER) 及び 前後の配列を含む領域 (WT:100 bp, KI: 341 bp)
鋳型 : マウステールライセート ( アルカリ溶解法)
THUNDERBIRD® シリーズ同様、 ROX 色素が別添付
になっており、 様々な機器に対応可能です。
CreERCreER knock-in (KI)
Wild type (WT) / 予測Tm値: 79℃
/ 予測Tm値: 84℃
100 bp
341 bp
共通 F PrimerWT用 Primer
Cre用Primer
*1 KOD SYBR® qPCR Mix (200 回用 ) [\32,000 → \18,080] と ReverTra Ace® qPCR RT kit [\ 38,000 → \21,400]のセット販売品です。*2 KOD SYBR® qPCR Mix (200 回用 ) [\32,000 → \18,080] と ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix [\ 38,000 → \21,400]のセット販売品です。*3 KOD SYBR® qPCR Mix (200 回用 ) [\32,000 → \18,080] と ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover [\ 40,000 → ¥22,600]のセット販売品です。
現在の試薬や条件では解析困難なターゲットやサンプルの解析に!
◆ 高効率リアルタイムPCR用マスターミックス
KOD SYBR® qPCR Mix
品名 包装 Code No. 通常価格 キャンペーン価格
1.67ml×3 本[200 回用 , 50 µl 反応 ]
(1.67 ml × 3 本 ) × 5[1,000 回用 , 50 µl 反応 ]
QKD-201 ¥32,000 ¥19,200
¥88,200¥147,000QKD-201X5
(保存・輸送温度:-20℃)
(保存・輸送温度:-20℃)
評価用サンプルございます
品名 ( セット品) 包装 Code No. 通常価格キャンペーン
価格
KOD SYBR® qPCR/RT Set III *3 ¥40,680 ¥67,800QKD201/FSQ301
KOD SYBR® qPCR/RT Set *1 ¥39,480¥65,800QKD201/FSQ101
KOD SYBR® qPCR/RT Set II *2 ¥39,480¥65,800QKD201/FSQ201
KOD SYBR® qPCR Mix・ KOD SYBR® qPCR Mix
・ 50×ROX reference dye
KOD SYBR® qPCR Mix (200 回用) と ReverTra Ace® qPCR RT Kit(200 回用) とのセット
KOD SYBR® qPCR Mix (200 回用) と ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix (200 回用) とのセット
KOD SYBR® qPCR Mix (200 回用) と ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover (200 回用) とのセット
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- 10 -
リアルタイムPCR用cDNA合成キット成キットット40~50%OFF
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Toyobo テクニカルラインTEL 06-6348-3888( 9:00 ~ 12:00 13:00 ~ 17:00 [土、日、祝を除く ] )FAX 06-6348-3833(E-mai l ) tech_osaka@toyobo. jp
[http://www.toyobo.co. jp/bio] 2013.7.17
ライフサイエンス事業部(大阪)〒530-8230 大阪市北区堂島浜二丁目 2番 8 号TEL 06-6348-3786 FAX 06-6348-3833(E-mai l ) order_l i fesc ience@toyobo. jp
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● 幅広いダイナミックレンジを実現
● リアルタイム PCR 試薬との高い適合性
● わずか 15 分で逆転写反応完了
● no-RT Control を添付
(コントロール実験を容易に行えます)
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行いたい方に最適
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● ゲノム DNA (gDNA) 除去機能付き
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix の特長に加え、
● 除去反応後そのまま cDNA 合成
ゲノムDNAの影響
を
受けやすい実験に
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ゲノム DNA
由来の増幅
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RNAサンプルRNAサンプル
cDNA(gDNA-free)cDNA(gDNA-free)
そのままそのまま
リアルタイム PCRリアルタイム PCR
RNA サンプル
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gDNA除去反応A除去反応(DNAの分解)(DNAの分解)gDNA除去反応(DNAの分解)
cDNA合成cDNA合成cDNA合成
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ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix
ReverTra Ace® qPCR RT Kit
200 回用(10μl 反応)
200 回用(10μl 反応)
200 回用(10μl 反応)
・ 5×RT Master Mix ・ 5×RT Master Mix no-RT Control ・ Nuclease-free Water
・ 5×RT Buffer ・ Enzyme Mix ・ Primer Mix ・ Nuclease-free Water
FSQ-301 ¥40,000 ¥24,000
FSQ-201 ¥38,000 ¥22,800
FSQ-101 ¥38,000 ¥22,800
高効率逆転写酵素 『ReverTra Ace®』 を使用。 最適化された Primer Mix (Oligo dT と Random Primer)、及び Buffer 組成の改良により、RNA を偏りなく安定に逆転写することができます。 低コピー域の検出率が向上しており、 高い直線性を得ることができます。
高効率リアルタイムPCR用cDNA合成キット
◆ ReverTra Ace® qPCR RT Kit
TNF-α遺伝子 (レア発現) の検出における検出率の比較
Ct値平均
PCR成功率
31.56100%
31.9040%
32.40100%
32.7660%
33.0340%
HeLa 細胞の Total RNA 100ng を各社キットを用いて逆転写した後、 反応液の 2%を用いて、 SYBR® Green I アッセイ法によるリアルタイム PCR 解析を行いました。
Ct値
ReverTra Ace®
qPCR RT Kit A社キット B社キット C社キット D社キット
30.0
31.0
32.0
33.0
34.0 ×× × ×× ×× ×
×: 検出できず特長1 幅広いダイナミックレンジを実現
特長 3 レア遺伝子の検出に最適
特長 2 わずか 15 分で逆転写完了
評価用サンプルございます
評価用サンプルございます
(保存・輸送温度:-20℃)
品名 包装 Code No. 通常価格キャンペーン
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ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover ・ gDNA Remover ・ 4×DN Master Mix ・ 5×RT Master Mix Ⅱ ・ 5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control ・ Nuclease-free Water
評価用サンプルございます