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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrícolas, Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa:
Agronomía e Ingeniería Agroforestal PREINFORME: Laboratorio BioquímicaMetabólica-LBM
Nombres y Apellidos; Kevin Oñate Hernández Código: 1065629976Tutora: Lina Monsalve; curso 352001 Fecha: 13/10/2013
TUBOS TIPO DE ML GASTADOS DMUESTRA HCL 0,1N B ST 1 2 3 4
ACTIVIDAD UREÁSICA EN MUESTRAS DEORIGEN BIOLÓGICO
INTRODUCCIÓN
La ureasa es una enzima que cataliza la hidrolisis de ureaa dióxido de carbono y amoniaco dependiendo de laseacciones bioquímicas enzimáticas (RBE) en dichaseacciones las enzimas actúan sobre unas moléculas
denominadas sustratos las cuales se convierten enmoléculas diferentes llamadas productos. La ureasa seencuentra en varios tejidos vegetales lo cual puede serusada en el análisis de alimentos y forrajes para ladeterminación de urea por el método de Kjeldhal o poritulación del hidróxido de amonio producido por la
hidrolisis.Mentefacto ó diagrama conceptual
1.3.2 En Laboratorio 1. Pesamos 1.0g de harina, forraje o suelo (wm)2. En un tuvo centrifuga adicionamos la muestra previamen
pesada con 10ml de NaCl3. Agitamos4. Centrifugamos a 350 rpm(revoluciones por minuto)5. Cojamos el volumen sobrenadante y lo vertimos a una
proveta adicionándole 25ml de NaCl6. Agitamos durante 30 segundos7. Rotulamos el extracto de la muestra para actividad
ureasica.1.3.3.Diagrama de Flujo
FINALIZ
PESAJE DE LAMUESTRA(wm)
EXTRACCIÓN
mescla dereactivos
COLOR AZULVERDOSO
muestrapositiva (AU)
TITULACIÓN
adicionamosHCl
COLORROSADO-VIOLASEO
EQ: NH4OHneutralizadospor HCl
REGISTRAR DATOS
2. TABLA DE DATOS
1. MATERIALES Y MÉTODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos
Material / Equipo Características 3. RESULTADOS ESPERADOS:
En la extracción de la muestra se espera que se torne unTubos de ensayo congradilla
medianos tonalidad azul verdosa lo que nos indica que es unamuestra positiva para actividad ureasica. en caso contra
Pinzas para bureta Mango de paloErlenmeyer 125ML
pipetas 5 y 10 ml
Matraz aforado 100 ml
Baño termostato Control de temperatura
beaker 400 ml
bureta 25ml
es necesario volver a hacer la extracción. En el proceso de titulación al adicionar lentamente el HC
aparece un color rosado violáceo, lo cual indica que losequivalentes-gramo del hidróxido de amonio fueronneutralizados por los equivalentes- gramos de ácidoclorhídrico (HCl).
Se determinara en cuál de las muestras existentes sepresenta la mayor actividad ureasica. (suelo, forraje,harina.)
Soporte universal
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1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Fórmula Concentración
ureasa En buffer 0,1%fosfato De PH 7.0 Ureasa
GLOSARIO:
urea H2NCONH2 0.25 M es una enzima que cataliza la hidrólisis de urea a dióxido de
Cloruro demercurio
HgCl2 1% carbono y amoníaco. La reacción ocurre de la siguiente manera:(NH2)2CO + H2O→ CO2 + 2NH3
Ácidoclorhídrico HCl 0,1N En 1926, James Batcheller Sumner demostró que la ureasa es
indicador deTashiro
1.3 Procedimiento 1.3.1.En campo:
C15H14N3O2Na+ C16H18N3SCl
- 3H2O +C2H6O
una proteína. Es producida por bacteria, hongos yvarias plantas superiores.
solución buffer Un tampón, buffer, solución amortiguadora o solución reguladorla mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un ádébil y su base conjugada, es decir, sales hidrolíticamente activTienen la propiedad de mantener estable el pH de
Se recolectaron en una finca las muestras indicadas en elprotocolo.forraje:(250g) previamente picadoa un tamaño de 0.5 cmSuelo: (250 g) a 20cm de profundidad el cual fue secadoal aire.Concentrado: (50g) previamente molido.Todas estas muestras fueron sellados y rotulado con ladescripción del lugar donde se tomaron las muestras.
disolución fr ente a la adición de cantidades relativamente peque
de ácidos o bases fuertes.
Hidrólisis: La hidrólisis es una reacción ácido - base que se produce al disdeterminadas sales en agua. La reacción tiene lugar entre unlos iones de la sal y el agua y, hay que tener en cuenta que se t
de una reacción de equilibrio.PH: El pH es una medida de acidez o alcalinidad de una disoluciópH indica la concentración de iones hidronio [H3O
+] presentedeterminadas sustancias
*Seleccionar 3 conceptos claves de la práctica y definirlosbrevemente*
BIBLIOGRAFIA
*Según muestra el ejemplo, relacionar 3 referencias de literatuutilizadas como consulta, de acuerdo a las normas APA
http://www.gaqsa.com/Muestro%20Forrajes.htm
http://www.unalmed.edu.co/~esgeocien/doc*
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CAPACIDAD AMORTIGUADORA (β ) Y POTENCIALMORTIGUADOR (p (β ) ) DE MUESTRAS BIOLOGICAS
INTRODUCCIÓN oluciones amortiguadoras son aquellas soluciones cuya
oncentración de hidrogeniones varia muy poco al añadirlescidos bases.
objeto de su empleo, tanto en técnicas de laboratorioomo en la finalidad funcional del plasma, es precisamente
mpedir o amortiguar las variaciones del pH, y por eso sueleecirse que sirven para mantener constante el pH.
entefacto ó diagrama conceptual
ACIDO DEBIL + SAL
Reguladores
de pH Ácidos fuertes
Absorben(ácidos
excesos de componentes minerales)
iones H- y H+
propiedades Soluciones buffer excluyen
Controlan(amortiguadoras)
metabolismo
acido base Lípidos y
ejemploscarbohidratos
Regulan metabolismohomeostático
Bicarbonatos Fosfatos Hemoglobina Aminoácido HCO3-) (HPO4=) (HbH) (proteínas)
MATERIALES Y MÉTODOS 1 Materiales e ui os re ueridos
1.3.2 En Laboratorio
Medida y rotulación de las muestras, titulación volumétrica conNaOH 0.1 N, técnica potenciometrica, registro de mL gastado;
de datos
.Diagrama de Flujo
Material / Equipo Características Espátula Metálica
Agitador De vidrio
Erlenmeyer. De 125ml.
Pipetas graduada De 10ml
Probeta graduada De 100ml.
PotenciómetroVaso de precipitado de
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Beaker 250mlDe 25 ml
BuretaMetálico con pinza para
Soporte universal. bureta
Equipo de titulación
2. TABLA DE DATOS
Ta bla de da tos
Datos potenciométricos para capacidad amortiguadora de muest ras biológicas
Valores evaluados
Muestras
Wm (g) Vm (ml) pH1 pH2 Conce ntra do
Ha rina
Forra je
Sa ngre
Orina
3. RESULTADOS ESPERADOS:
Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biolómediante técnicas potenciometricas.
Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biolómediante titulación volumétrica, en presencia de los indicaadecuados.
Realizar un análisis comparativo del potencial bufferanmuestras de origen biológico.
GLOSARIO:
Biocatalizador: es un catalizador de reacciones bioquímicas de los seres vivos. Se cons
biocatalizadores las enzimas, las hormonas y las vitaminas Desaminación: degradación de un aminoácido. Plasma: es la fracción líquida y acelular de la sangre, es
se obtiene al dejar a la sangre desprovista de células comglóbulos rojos y los glóbulos blancos. Está compuesto po90% de agua, un 7% de proteínas, y el 3% restante por glucosa, vitaminas, hormonas, oxígeno, gas carby nitrógeno, además de productos de desecho del metabocomo el ácido úrico.
BIBLIOGRAFIA
Granados , J (2010), Modulo Bioquímica Metabólica, Unidad 2,
2;ECAPMA; UNAD
Granados, J (2010), Protocolo Prácticas de laboratorio, Pág. 9-Bioquímica Metabólica, Unidad 2, cap. 2;ECAPMA; UNAD
Balanza Digital Muestras Biológicas
Concentrado, orina, sangreforra e
2 Reactivos a utilizar Reactivo Fórmula Concentración
Hidróxido de NaOH 0.1 Nsodio
0.1NAcido clorhídrico HCl
Fenolftaleína C20H14O4
Rojo de Metilo C15H15N3O2
Agua destilada H2O
Solución KH2PO4 + NaOH
Buffer fosfato
3 Procedimiento 3.1. En campo:
e realizará un análisis comparativo del potencial bufferantee muestras biológicas: 20ml de Leche; y se medirá laapacidad amortiguadora de muestras biológicas: 5g deoncentrado pulverizado, 5g de harina, 5g de forrajecado, 1ml de sangre y 20ml de orina.
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Reactivos (ml) Tubos de ensayo B
St
M
Fenol 5% 0,5 0,5 0,5 Agua destilada 1,0 0 0 Glucosa 100 ppm 0 1,0 0 FCN 0 0 2,0 H2SO4 1N 3,5 3,5 2,5
Se agita con cuidado x 20 seg, lleva a baño María por3min, sacar los tubos y agita 10 seg y dejar enfriar Materiales Equipos
Forrajes Pipeta de 5 y 10ml, Tubosde ensayoGradillas, Pinzas parabureta, Buretas de 25ml,Erlenmeyer de 125ml,
Matraz aforado de 100ml,Braker de 400ml, Soporteuniversal
Suelos Harinas
Reactivo Formula Concentración Cloruro de mercurio HgC12 1% Ácido clorhídrico HCI 0,1N Hidróxido de sodio NaOH 0.1N Ureasa 0.1N Fenol C6H6O 5%
Título de la práctica: Determinación de carbohidratos noestructurales (CNE), por el método del fenol-ácido sulfúrico
INTRODUCCION Es un método que determina la cantidad de carbohidratostotales, no estructurales, basándose en el contenido de
almidones hidrolizables y azúcares solubles.
Mentefacto conceptual
1.MATERIALES Y METODOS
1.1. Materiales y equipos requeridos
1.3,2, LABORATORIOS
1.3.2.2 Mezcla de reactivos
1.2 Reactivos a utilizar
1.3 Procedimiento
1.3.1 Toma de muestra La muestra de concentrado para animales se toman 50g,macerado, triturado o molido, empacado en bolsa negra yrotulada descripción y características de la muestra
1.3.2.3 Lectura espectrofotométrica Se alista el espectrofotómetro a una ƛ =485nm y calibraaparato con el tubo blanco, ajustando a 100% de Transmita(%T) y 0,000 de Absorbancia (A). Leer el % de Transmit
(T),de los tubos st y m, luego de este proceso, se convierte evalores a Absorbancia (A), mediante la ecuación : A =2- Log %2. TABLA DE DATOS 2.1 Datos Volumétrico 3. RESULTADOS ESPERADOS Que el elemento sea un patrón confiable para la cuantificaciócarbohidratos no estructurales, la cantidad de CNE en la musean los necesarios y así ejecutar medidas por esta técnica
4. GLOSARIO Carbohidrato: Compuesto químico formado por carhidrógeno y oxígeno, está presente en los alimentos en diferformas y porcentajes.
Hidrólisis: Es una reacción química entre una molécula de aotra molécula, en la cual la molécula de agua se divide yátomos pasan a formar parte de otra especie química.Bibliografía
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TITULO DE LA PRACTICA: Actividad de Catalasa(ACAT)en muestras de origen Biológico
INTRODUCCIONEstando libres lo radicales se asocian al desarrollo de
enfermedades, en el organismo un radical originado, elperóxido de hidrogeno que puede metabolizarse a travésde la enzima catalasa, al transformarse en agua y oxígeno,que es participe en proceso de respiración vegetal , perotambién muy importante en los organismos vegetales yanimalMentefacto conceptual
1.MATERIALES Y METODOS1.1Materiales y Equipos requeridos
EFCAT(extracto de f ruta para catalasa), ó ECCAT (extracto deconcentrado para catalasa), seguidamente, poner en baño dehielo1.3.2. LABORATORIOS
2. TABLA DE DATOS
Tubo Tipo de muestra HCl 0,1N gastado (ml)B
1
2
3
45
6
3. RESULTADOS ESPERADOScuantificar la actividad catalasa en distintas muestras, de formindirecta usando la enzima de muestras biológicas
BIBLIOGRAFÍA
Materiales Equipos Concentrado Montaje de titulación (soporte
universal, bureta, pinzas,Erlenmeyer); pipetagraduadaProbeta graduada beaker de
400Ml; tubos de ensayo congradilla
Frutas Sangre Verduras
Orina
1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Formula Concentración
Peróxido de hidrogeno H2O2 0,06M Ácido sulfúrico H2SO4 2N Permanganato de potasio KMnO4 0,01M Extractos de catalasa ECAT
1.3 Procedimiento1.3.1 Toma de muestraLas frutas, verduras ó concentrados se pesan 2g de
muestra picada ó pulverizada y se ubican en un tubo decentrifuga, se adiciona 10mL de solución fría de bufferfosfato 0,05M, pH=6,8-7,0, agitar, con agitador de vidrio(3min) y centrifugar a 2500rpm, durante 5min Sacar elsobrenadante, pasarlo a una probeta, medir su volumen,registrarlo como Vs y tomar 5 mL de éste y poner en untubo de ensayo tapar, rotular como: EVCAT(extracto deverdura para catalasa )
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Tubos Materiales (ml) Tubos de ensayo B St M
Reactivo Formula Concentración cido tricloroacetico Cl3-C-COOH 10N
Agua destilada H2O Albumina 5% 0,5 Reactivo de Biuret FNNP
TITULO DE LA PRACTICA: Determinación de NitrógenoNo proteico (NNP)INTRODUCCION
El 90 % del nitrógeno total (NT) se presenta en el
contenido del líquido ruminal, se encuentra en formainsoluble. El 10 % de éste corresponde a nitrógenoamoniacal (NNP), y el remanente, es una mezcla entreaminoácidos libres y péptidos.
Mentefacto conceptual
1. MATERIALES Y MÉTODOS1.1 Materiales y Equipos requeridos
Materiales Equipos
Suelo Montaje de titulación (soporte
1.3.2. LABORATORIOS
2. TABLA DE DATOS
3. RESULTADOS ESPERADOSCuantificar el Nitrógeno en el filtrado, por métodoespectrofotométrico de BiuretL owrya) Realizar la Mezcla de reactivos
forraje
Sangre
Harinas
1.2 Reactivos a utilizar
1.3 Procedimiento1.3.1 Toma de muestra
universal, bureta, pinzas,Erlenmeyer); pipetagraduada Probeta graduadabeaker de 400Ml; tubos deensayo con gradilla
Alistar 3 tubos de ensayo, rotularlos así: B: blanco; st: estánm: muestra.
GLOSARIONitrógeno no proteico: Se denomina así a los compuestonitrógeno que pueden ser convertidos en proteínas por algorganismos vivos.
Amoniaco: Es un compuesto químico cuya molécula consisun átomo de nitrógeno (N) y tres átomos de hidrógeno (Hacuerdo con la fórmula NH3.Péptidos: Son un tipo de moléculas f ormadas por la unióvarios aminoácidos mediante enlaces peptídicos.
Albumina: Es una proteína que se encuentra en gran propoen el plasma sanguíneo, siendo la proteína de la sangre, y laabundante en el ser humano, esta se sintetiza en el hígado.
BIBLIOGRAFIASe toma la muestra de sangre animal se debe recolectar5mL envasados en un tubo vacutainer, el cual contieneanticoagulante, almacenar en refrigeración a 4°C (Baño dehielo); luego Rotular indicando la descripción del animal alcual se le tomó la muestra.
http://www.ucam.edu/estudios/grados/nutricion-presencial/
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