405.биоэкологические аспекты изучения и использования хищных грибов —гифомицетов

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНАИ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А. ТИМИРЯЗЕВА

На правах рукописи

ТЕПЛЯКОВА Тамара Владимировна

БИОЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ

ИЗУЧЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯХИЩНЫХ ГРИБОВ —ГИФОМИЦЕТОВ

03.00.16— экология

Авторефератдиссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

МОСКВА 1992

Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследователь-ском институте молекулярной биологии научно произведетвенного объединения «Вектор».

Научный консультант — Мацкевич Н. В., доктор биологи-ческих наук, профессор

Официальные оппоненты Горленко М. В., доктор биологи-ческих наук, член-корр РАН, Шильникова В. К, доктор био-логических наук, профессор; Бурова Л. Г., доктор биологиче-ских наук

Ведущая организация — Новосибирский аграрный универ-ситет, кафедра охраны природы ,-i

Защита диссертации состоится « ^1992 г в «//» часов на заседании специализированного сове-та Д 120 35 08 по присуждению ученой степени доктора на\кв Мослопскон сельскохозяйственной академии им К А Тими-рязева по адресу 127550, Москва 11 550, ул Тимирязевская,49, корп 17.

С диссертацией можно ознакомиться в научной баблиоте-ко академии

Автореферат разослан «с£Ч ^«-Ю-4CiAtX^ . 1992 г.

Ученый секретарьспециализированного совета —

канд Оиол на\к, доцентА. В. Чичев


• ' . - . ' В В Е Д Е Н И Е • " " ч

Актуальность проблемы..Увеличение масштабов сельскохозяйст-

венного ' производства и говышение объема применения химических

средств защиты растений приводят к распространению последних во

внешней среде. Ежегодно число отравлений лвдей в мире от пести-

цидов достигает, по данным Всемирной организации здравоохранения,

500 тысяч (Чесноков, 1990). Если загрязнение природы начинает

превосходить возможности ее очищения, человечество оказывается

' на грани "экологического кризиса" (Холл, 1972; Коммонер, 1974;

. Дубинин, 1977). В связи о этим биологическим методам защиты рас-

тений придается особое значение в экологизации сельского хозяйст-

. ва, проблемы которой обсуждались на Всесоюзной конференции "Эко-

логические проблемы охраны живой природы", состоявшейся в Москве

в 1990 году, . - ;-; ' V > / ';.•••"• ' ' ' , • •

. ... В основе новой стратегии борьбы о вредителями, возбудителя-

ми болезней и оорняками лежит интеграция разных.методов, которая

позволяет регулировать численность вредных объектов на хозяйот-

венно неощутимом уровне {Роберте, I9SI; Хейген, IS82; Бондаренко,

1988). В'таких экосистемах, как теплицы, биологические метода за-

,.шты должны доминировать, поскольку условия здесь благоприятны

как для растений, так и вредителей и возбудителей заболеваний. Их

быстрая адаптация к пестицидам приводит к повышению количества

обработок,, увеличению норм расхода химических препаратов, созда-

ет опасность сохранения остатков ядов в продукции, ухудшает сани-

тарно-гигиенические условия труда работглкоз, я^лязгея причиной

.гибели полезных насекомых и загрязнения остатком постгцкдов вод-

ных источников и грунтовых вод.

Особую опасность для растений огурца и томата представляют

гелловыв нематода, вызывавшие в результате ларазптирования опухо-

" ЦЕНТРАЛЬНАЯ.НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА.;folocK.сель:, охоз. акалвмии

им. К. А.

A


- 2 -

ли на корнях и потерю продукции до 50$ и выше (Шиабова, 1977; Са-

гитов, Перевертни, 1937).

Среди природных регуляторов численности нематод определенное

место занимают хищные грибы - гифомицеты, образующие на мицелии

различные приспособления для улавливания нематод и составляющие

оообую экологическую группу (Дурышша, Великанов, 1964). Наиболее

распространены и многочисленны в природе виды с сетчатыми ловуш-

ками рода Arthrobotrys Corda emend Mecht. (Люхтиева, 1979). Мно-

голетние попытки практического использования грибов-кематофагов

не всегда давали положительные результаты, поскольку недостаточно

были изучены закономерности их существования л распространения а

почве, условия и механизмы проявления хищничества, характер взаи-

моотношений с другими организмами, ."«ало внимания уделялось вопро- •

сам изменчивости, селекции, хранения штаммов хищных грибов - про-

дуцентов биопрепарата. Все имеющиеся до сих пор споообы получения

препаратов основаны на поверхностном выращивании и получении спо-

рово-мицелиального комплекоа грибов на сыпучих и твердых субстра-

тах, содержащих органические компоненты (Сопрунов, члгалин, 1963;

Шхтиева, 1969; Косовец, 1972, Desohipna . 1^39; Oayroi, iran-

Icowsici , 1979; кзцкевич и др., I9S0). Однако регламентированное

производство препарата в соответствии со стандартами, принятыми

в микробиологической промышленности, до сих пор не было создано.

Цель и задачи исследований. Основная цель исследований -

поиск штаммов хищных грибов-гифомицетов, перспективных для биоло-

гической защиты растений от галловых нематод, изучение их био-

акологических особенностей и разработка технологий получения и

применения препаратов в условиях защищенною грунта.

Основные задачи:

- поиск перспективных штаммов хищных грибов и изучькие их


биологических.особенностей при сапротрофном и биотрофном питании;

- изучение экологических особенностей хищных грибов и при-

способленности их популяций к обитанию в почве;

-выявление некоторых аспектов механизма хищничества грибов

рода Arthrobotrys; . .

- - изучение явления микофилии применительно к хищным грибам-

гифошцетам; •' ,• . '• • .

- разработка принципов и методов отбора, поддержания и

оценки перспективных штаммов хищных грибов; V

- разработка биотехнологии препаратов на основе хищных гри-

бов-ги$омицетов с экологических позиций; *

- испытание в защищенном грунте различных препаративных

форм хищных грибов против галловых нематод..

• ч _ Научная новизна. Впервые охарактеризованы биологические^ ооо- •

бенности и циклы развития ряда видов хищных грибов рода , Arthro-

botrys . при сапротрофном и биотрофном питании, включая характери-

стику их морфолого-культуральных и нематофаговых свойств.

Выявлены механизмы акта хищничества а процессов, обеспечива-

пщих фазу паразитизма: выработка и выделение привлекающих и пара-

лизующих ,нел1атоду веществ; способ внедрения гриба в нематоду пу-

тем перемещения оболочки гриба к плазмалемме клеток нематоды ч е -

рез кутикулу. "_ , __ _ •,. .. . . . ' . , . ;'

•На основе данных рентгеновского микроанализа и электронно-

микроскопических исследований высказано предположение о роли

кальция в сократительных структурах, участвующих в выделении

клейких веществ из ловушек и передвижении гриба через кутикулу

нематоды. ' • • • . [ . ' •

Впервые показано, что чиачо1шость популяцкв хшцных грибов,,

помещенных'в почву, стабилизируется за счет их способности не


- 4 -

только выживать, по и размножаться хламидоспорами. Обнаружена пе-

риодичность в формировании ловчих органов хищных грибов в природ-

ных делениях. Выявлены штаммовые различия по их отношению к фу«-

гнетазксу почвы.

Цол^чены новые сведения о роли явления ыикофилии в гшзьэдо-

ятельносп: хшцных грибов л разработаны способы обнаружения Е ОЧИ-

ст1сл штимлоз от грибов-мякофилов пра ах выделении из црирохных

1словий и хранении в коллекциях.

ЕЦделеи из природных уставил штамм * I хищного гриба Arthro-

I lor^ta Mecht. ( а . с . Y45i4j, I _ J O ) , nv.pvâKHU2 1МК>£ЕЛЬЬ.М

рода Cвpâlo^portun c^rdu ! О5ЛДД<Ш1ЙЙ, нардду с иемато—

свойствами, способностью ир ^дуцироьать ф11брвнолятачвс;'вв

topawiTu. Исолвдогашшмя лорфатого-ч^сш'х ? г^олсгс-Сисха и1 со- *

; zx occrtenHJSTefi этого штеьлла устало are но, что иотзш~<м прояуцои-

тсы гермонтов является не хкдаыЛ гр*:й, а г^иб-микофил.

>ссЕьрленствссаны методы селекции Й сохранэниь в i*ai.-,bKUiifflc

ИГЛИИХ ШТ&МИОВ ХЕЗЦШХ Г р ^ б С В . LiiJDUItmi ,t& L^TC—t.Uf. ' 1 Л 0 1 Г -

осоСош»ости, которые 1/ог;т а^чи'ть ooiraou дгь ссоы о.» лил

ггрие 1л>т> отбора л поддержания стабилькс-аги в.на ыолокснл

кзолгтов. Разработан экспрасо-ыетод ошнки юматофагсасВ з

rsocxji атаымоа хищных грибов.

Газработани способы получения 4°рм биопреп^ата на ссиово

(.порово-мицолиального комплекса в условиях твердо-фазной фврыеп-

тап^ш к на оонове мщ&яхя при глубинном культивировании. Изучены

возрастные изменения мицелия по ряду показателей, включая жизне-

способность и неыатофаговыи эффект. Впервые для контроля за р а з -

витием мицелия и оценки жидких питательных сред использован м е -

тод химического титрования.

иракти-ческая ценность работы. Почучен высокоэффективный


" . . • ' - ' ' . - . - 5 - • • • . ' • "

йтамм хищного .гриба A.oligoapora ВКМР-3062Д ( а . с . 1688818,

19SI), снижающий численность нематод в почве на 86»2£. По резуль-

татам тоназшлогических исследований Иркутского мединститута mrasai

ЬКМр-3062Д не. обладает патогенншш свойствами для. теплокровных

животных и может быть использован в качестве продуцента биопрепа-

рата.. Разработаны методы поддержания этого штампа в процессе хра-

нения в получения препарата,

v Цредложены метода контроля и очистки культур от мигофильшх

На основе штамма БКМУ-ЗО62Д разработан регламент производот-•

ва препарата (официальное название - "нематофагин-Ей"),предназна-

ченного для биолабораторий. • \ •

• Получены исходные, данные для разработки оштво-проышпденвого

регла*«ганта производства биопрепарата на основе мицелия глубинюЭ

культуры. Положительные результаты нопытаний партий мицелиальной

массы хищных грабов, произведенных на Ьердшом заводе биопрепара-

тов ..подтвердили перспективность, экономичность и экологическую

. целесообразность этого способа.

Разработаны стратегии борьбы с галловыми нематодами овощных

' культур в защищенном грунте на основе использования разных препа-

ративных |орм хищных грибов; которые обобщены в соответствукинх

методичесжих рехомевдацаях.

: Положения, выносимые на з а щ и т у ; . . " . ' ,

- целесообразность отбора в природных условиях эффективных

штаммов хищных грибоа среда наиболее широко распространенных ви-

дов и.изучения условий г.х жизнедеятельности не тадько в культура,

но и в почве*; ,.» - • " ' • -

- наличие в яяклах развития хищных грибов салротрсфной и ,

СиотрофноЯ $аз развития, а такге жизненной форглы существования


- 6 -

в природе в виде хламидоспор;

- роль в акте хищничества химических соединений, а также

клеточных сократительных структур гриба, обеспечивающих выделение

на поверхность ловчих приспособлений и шщвлия токсических ве-

щеотв и проникновение гифы через к}тикулу ьематоды.;

- экологические связи хищных грибов с другими организмами

почвы;

- доказательства явлений микофилии в жизнедеятельности хищ-

ных грибов, а также возможности их контроля и очистки от грибов-

ЫИКОфИЛОВ ;

- экологическое обоснование Оиотехнологачаских возможностей

получения и применения хицных грибов в борьбе о галловыми немато-

дами в защищенном грунте.

Апробапия работы. 1шатериалы диссертационной работы были до-

ложены на Всесоюзных конференциях по Сиологичеоким методам защи-

ты растений (Новосибирск, 1962; Неринга, 1%3; Кишинев, IS84;

Минск, I9d4,ISSO; Рига, 1988; Велегож, ISo»,I9t(0; J-осква, 1Ь91),

советско-французском симпозиуме (Кишинев, 1Ьь2), а также совеща-

ниях для работников защиты растений различ"цх краев и областей

(Кемерово, Красноярск, Новосибирск). В 1Ькх> году материалы по

практическому использованию хищнкт грибов Сыш представлены на

выставке ИНВЕКС-68 и "Советские изобретатели" (ЧССР, города: Брно,

Прага, Кошица), а также на ЕЩНХ СССР в павильонех "оемледвлие" и

"Охрана природы".

Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 работы, в

том числе 2 авторских свидетельства «i монография. Эксперименталь-

ные данные, представленные в диссертации,получены лично соискате-

лем и в "соавторстве о сотрудниками, работавшими под йго руковод-

ством, и в процессе творческих контактов.


• . • / •'"•'• \ ' - , - ' . ' ; . , * : ' - \ , - 7 — ' . " ' •

•ч Структура и объем: диссертационной, работы. Дибсертация изло-

жена на 317; стр. машинописного текста, иллюстрирована 57 рисунка-

ми 0-85 оригинальными фотографиями, 30 таблицами и состоит и з . в в е -

дения , материалов и' методов, семи экспериментальных глав, заключе-

. ния ж выводов. Список литературы включает 385 наименований, в том

числе 160 наименований иностранных авторов. В Приложении предста-

влена научно-техническая документация-по регламенту получения.и

• применения нематофагина-ЕИ; а также акты испытаний препарата. ~. '

; ' , : ; : ' ii .':'- -ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИСОДЕДОВАНИЙ. ; .-,. ,. •• •'...-..' ,i.;! . .

. . / " Работа была начата в 1978 г . в Сибирсиом НИИ земледелия и '

химизации" сельского хозяйства СО ВАСХШШ (г.Новосибирск), затем

продолжалась во Всесоюзном НИИ биологических методов защиты р а с -

тений (г.КЕшшев, 1983-1986 г г . ) : и в настоящее время ведется во

Всесоюзном НИИ молекулярной биологии НПО "Вектор" (г.Новосибирск).

• • ." Объекта исследований - вида и штаммы хищных.грибов-ги$омице-

• ' тов,' выделенные в основном на территории Новосибирской области, а4 ' также насколько штаммов из Молдовы и Казахстана, относящиеся по

, классификации Н.А.Мехтиевои (1979) к родам : Arthrobotrye Corda '

emend Meoht., Daatylariopsis Kaoht,, Golovinia Meoht. '.

: '-.' *" Кроме того,''. объектами исследований были штамм Arthrobotrya

• .'oligoapora XIX 4/27, селекции ВИГИО:(Мацкевич, Удалова, 1970),.

"штаммы ВКМ1 2461Д (а.с,-1264393;* IS83) и ВКМг-ЗО62Д (а.с.1688818,

IS9I) того же вида,*, а также штамм * I Aiionga (з.с.74593, 1980),

/" Зйщннвгрибы выделяли методом З.Ф.Сопрунова (1958): образда

' почвы раскладывали на.поверхности голодного агара в чашки Петра •

• и добавляли лабораторную.культуру нематоды кикробофага•Panagrel- '

lua rcdlvivuo (L.) Guddey, культивируемую на толокне. При появ-

лииии ионииального спороиошенкя.яекато$аговне грибы.пересевали '


- 8 -

на питательную среду.

Хищные грибы культивировали на пвптокно-кукурузноы агаре

(Маикевич к др., 1969), среда Чапека, картофельно—глюкозном агара,

нсчвеяном агаре (ижельчеяяая в ступке плодородная почва - ISO т ,

агар - 20 г, вода - до I л ) .

При глубинном культивировании /сподьзовали пивное сусло,

разбавленное водой в 3 и 5 раз, среду Чапека (без агара), среду

& 19, содержащую мелассу и кукурузный экстракт.

Циклы развития и жизненные форм» хишшх грибов изучали на

питательных средах в поверхностной и глубинной культуре, в сус-

пензии немагод, а также в природных условиях (почве).

Нематофаговый аффект определял*! по показателям хзяцкостп

(среднее число ловчих приспособлений в саде зреная u*njpoci'cna пр*'.

увеличении 9x10) и активности (галкчество уьерщвяеиннх немагод, в

грсцентах) по методике Н.В.Мацкевич с соавторами (1969) z (..А.Агу-

лина (1969). В качестве тест-объектор использовали культуру *,г—

dixivua, л также паразЕтические нек^тоды „'eloiuogine inctbnit i

(Xofoid et rfhito) Chitvood, K.hapla Oliitwo^d.

Лля опе!1ки нематофаговой эффектгхьост. лспользоваяк т^л J » .

ьамк разработанную,новую методику, ссновакную па спосо01.остл XEL<-

шх гриСсв образовывать аттрактивные г токсэтескне соедкчекия.

Поддеряшаппнй (стабилиаирукщий.) отбор шташов-продуцонтов

в лабораторной культуре проводили по общепринятой и модифициро-

ванной набей методике клопового анализа, а такяа методом воспроиз-

ведения культур из фрагментов мицаяья (Теплякова, IS77; Тепляко-

ва и др., ISS3).

Лдя изучения способов длительного сохранения культур

грибов в коллекциях применяли лиофиллзацию, хранение под

ним маолом я в стерильной почве (Бе.тяьоай .' др., 19ь6).


' • • • • • "' - . Q «•

'Для изучения механизма хищничества использовали рэшшет с

бромной водой и водным раствором нврманганата калия на двойные

связи, а таюю гиотохшичесяую окраску Либермана-Бурхарда в моди-

фикации Шульца (Пиро, 1962). - .

- Содержание'в мицелии.и ловчих щшгспособлениях кремния, сэры,

фосфора, калия,,кальция определяли о помощью сканирующем мзкро-

скопа ISH-35 • о.рентгеновским детектором (Тешшкова и др., 1977;

Кононова. Теплякова,' I960; Тешшкова и др. ,1985) . При трансмис-

оиоиной.электронной микроскопии фиксацию-образцов проводили по

методу Сабатиш И ДР/ ( Sabatini et a l . ,1963; Caulfield, 1957).

]йатериал заливали в эпон-312 и алесь эпон-аралдат.Срэзн получали

на ультратоыах LKB "Heiohert". Дополнительное контрастированиэ

образцов, осуществляли по Рейнолыгсу (Reynolds , 1963) и проалат-

ривали под электронными микроскопами УЭМВ-1ОО-В (СССР) и Н-600-

(Hitachi, Япония)•при ускорявшем еапрязении 75 кв.

•" Для сканирующей южроскошга ооразод фшссировала 2 ч на холо-

де в 5^-ом растворе глутарового альдегида на ОД-моляр^оа кшсода-

латном буфере tpH-7,3), затем обрабатывали спиртом, ацетоном и

раствором амилацетата. После напыления золотей образцы просматри-

вали в сканирующем микроскопе Ш-2ДHitachi , Япоздш). Ери подго-

товке образцов для1 рентгеновского микроанализа, Здасахщю иатерка-

ла проводили жидким азотом по. разработанной нами мзгоддкз»

Токсические свойства культуральноЗ жидкости грибоэ-нематофа-

гов оценивали по методике Л.А.Курт (1973). В ряде других охзлоз

изучали проду1{ты матаболиауа хншых грибов, дт^Куидирупцие из

культуры гриба чераз ползкеирсницаемую.мембрану - езллофгн. Дей-

ствие содержимого клеток мотелкя- хящшх грибов на нвматод изуча-

ли пссло 1'.з!.!ельчония биомассы гркба с помощью стерильного пэска.

5кстрса<ты й;:ологя'шски активных,веществ.патучата из мкцелля' и


- тп -

культуральной ЖИДКОСТИ О ПОМОЩЬЮ органических растворителей; хло-

роформа, хлориотого метилена, гексана.

Поведение хищных грибов в почве исследовали путем прямого

микроскопирования, а также о помощью мембранных кшер (Муромцев и

др., 1977). Взаимоотношения хищных грибов с почвенными антагони-

стами изучали методом О.Л.Рудакова (Ibdl). Изучение фунгистати-

ческого действия почвы на хищные грибы проводили по методике Дико

(Dix • 19Ь7). Характер отношений хищшх грибов о микогельминтами

определяли по методу Н.В.Ыацкевич и др. иУь2).

Наличие мшофильных грибов в культурах хищных гифомицетов

выявляли путем глазомерной ревизии колоний на наличие секторов

или пятен мицелия, отличающихся от основной культуры, с последую-

щим микроскопированнем и выявлением микофнла внутри или на повер-

хности гиф хищного гриба.

При разработке регламента получения препарата на основе хищ-

ных грибов для биолабораторий испытывали разные способы получе-

ния маточных культур. Б качестве субстратов использовали зерно,

подсолнечную лузгу, солому, торф, £ля подбора жидкой среды приглубинном культивировании проводили предварительное изучение вли-

яния источников азота и углерода на продуктивность хищных грибов

по методике В.Н.Максимова и др. (1%9, 1ЪсО).

Возрастные изменения хищного гриоа ВКМЬ-ЗОбЗД определяли пу-

тем прижизненной окраски мицелия глубинной культуры нейтральным

красным (Беккер, I9t>3). Для вышеназванного штамма была такжо раз-

работана оригинальная методика определения возрастной фазы на ос-

нове способности гриба образовывать ловушки в погруженной куль-

туре.

При цитокариологическтс исследованиях грибы культивировали

на предметных стеклах, фиксировали уксуснокислым алкогольм (1:3)


• • и окрашивали по методу Романовского-Лшза в нашей модификации :

\ (Ь5апкевич, Тепляков.а,.1974);•. у . .' ;-' : • .• - . .

Вегетационные и производственные опыты по испытанию препара-

тивных форм хшцных грибов проводили в условиях защищенного грунта

на растениях огурца и томата* .Оценку эффективности действия пре-

паратов, осуществляли по;показателям интенсивности поражения рас-

, тений мелойдогинозом и распространенности заволевания (Методичес-

кие указания по выявлений учету, мерам борьбы о галловыми нема-

• . .тодами и оценке нематодоустойчивых сортов овощных культур в защи-

щенном грунте, 1982), а также по урожаю овощей.

• •'Количество личинок нематод в почвенных* образцах определяли

вороночным методом Бермана (Кирьянова"и др«," 1969).

••••. • , : , • " ' Р Е З У Л Ь Т А Т Ы И С С З Д Е Д О В А Н Й Й •< " ••'/.•-

,-, л - I . Биологические особенности хищных грябов-гифомицатов

. . . . Г при сапротрофном я биотрофном питании • ,

, < • - Наибольшее количество•выделенных.нами штаммов относитоя к -

роду Arthrobotrye• Corda enmna Mecht. .'-• (Теплякова, 1977). Хищные

V. грибы этого рода характеризуются хорошим ростом на питательных

; •;; средах, наличием крупных грушевидных» конических, яйцевидных*

- двуклеточных конидийi, собранных в головки на простых или ветвя-

• ищхся- конидиеносцах» а -также ловчих приспособлений в виде петель,

к о л е ц и . и х с п л е т е н и й » ; * • • ' • » • \ \ ~ ' ' • . • ! ' • •->--i'•''•'/'•;•• •

]• '• • • • • Среди грибов этого рода наиболее распространен в природе вид

...•'. irthrobotryo oJlgospora Ргеэ/ (Сопрунов, 1958; Кондакова,- I960;

•:. ва1Гоп,.1£77;;;Мехтивва, 1979; ta t su i , IS85). Hai/и выделентеами

; 'J A.ollgos'pdra ВЮ№-ЗО62Д (а. с. 16Б8818, ТешякОва к др.,-1991),

'< его отлк°ктёльная особенность - способность • образования ловчих


— т ? —

iOE спонтанно (без присутствия аематсд) при рооти на ггаркзо-

средах.

По ср^гнены) о выделенными н^ми прадотаваталяш рода vr thro-

yj , и х-ьле видами других родов (, U u i ' v i n i a I u^toty la

ii.~.) -echt., Dactylariopaia tr >ct jpa, i (Lracha.) l-e-ht.)

3 5 р р у р сяо-

, нсматсх^£ГОЕоа эф^кч^шностыа г ст^Олшьностьх) морфоло-

тс-1,'ЗиагС1.нчйолах признаков.

Up«i ^чвитяи хшщых грибсЕ рода i r t n o b o t r y s ьа шхг^лельных

средах в гоьартсносткой и гл^гс5я1шол ^дьтУ1<- , в оуспвизи нематод,

п тли) s гхирод1шх условиях (по-ш1) в их жцзаанно»^ цикла сыявта-

IL. а г ( гу»тщ-1б онтогенетические форма!: jutiitimfi, конидии, ло^уь-ьи,

х ^ uiocnoj^ . UO^HO считать, что Гсигйальи взаимосвязан, 1/еяду со—

к

Iif t c^..puTjoif«ioM питаяяк (Счз i f J^TOS) ь-бявдд*>тся ь ^

С "гОГв1 Ou XHTUOiX Г1ЛбОЕ, SHDECi.bJ. ^KZ j ^^.a1 iIBaeiOi,. ^ Lp

jt" xi4 t nucvort- аьта npoiiucoiEi ; c j ; t ; o k a i i j b ая

i n I .. i . teOTt-oiiibfl cjoco5, mibitiVt ^ i u . ] .

rj- о n MU-OJIT его внедрения в льматоду о^еилахоя п-с^о уыер<4-

г.ч1Г° i астедкей ьа сапготрофный. JTC СШЮ доказано с па«!с«цью tai-

^^л.'rlгыкк'>cцeaтнoгo анализа Р.ш.^1хья-оада (х-37) и цэдтвьредено

1жи ца ультраструктураом уровне (Тепляковс, РясЗчикова, 1Ь91).

Наличие в онтогенеза гинуп"" гриоов хдслищоспор (аоглиодахся

структур) объясняет причину, по которой они практически ье ш д е -

.тягтся из гочвы обычными ыакробиологкчес!^!»^ методами с исполь-

Еованием питательных сред. Дня выделения хищных грибов солзатедьг-

но присутствие нематод-индуктора прорчсташш хлашдоспор.


Хищные грибы при салротрофноы питании могут усваивать разные

источники углерода и азота,' но наилучший рост в глубинной культу-

ре отмечен при использовании комплексных источников этих соедине-

ний - мелассы^ кукурузного экстракта. На основе последних и была

нодобрана питательная среда для глубинного культивирования штамма

ЕКМ^-ЗОбЗД, позволяющая получать 15 г/л биомассы по сухому веще-

ству. ; ,• -' ' '• •' ' ' _.

Разработанная нами методика определения неыатофаговой эф$эк-

тивности хиящых грибов позволяет учитывать их аттрактивную и ток-

сическую способности (Шатрова и др.," 1989) и избавляет от трудо-

емкого процесса подсчета улавливапцкх приспособлений ('Сопрунов,

1958; Акулин, 1969; Мапкевич, Удалова, 1970)» Суть методики сво-

дится к помещению высечки культуры одного диаметра (3 мм) в сус-

' пензию некатод, содержащую 100±10 особей P.redivivua и подсчета

живых нематод в свободном от гриба пространстве через I сутки.

Нематофаговнй эффект определяется.по формуле; ,

, где Нэ г нематофаговая эффективность,% -. ••

• J^ ,** число яивых нематод до внесения гриба

• Кт — число\живнх особей после внесения гриба через I.сутки

;:' Kg'г'Число гювых особей в контроле до внесения гриба

; K g — число живых особей в контроле после внесения гриба че-

• ' р е 3 - 1 ; с у т к и . ' " ;'.: ..'•..';', ' ' • • . ' * > . • _ ; ,•• •• • _ •.•'•.,.• '

• .• В случав глубинной культуры в суспензию некатод вносят 20 мг

мицелиальной массы*- Тестирование проводят на часовых или предмет-*

ных стеклах с пара$иновыми:колы'лмиюш в маленьких чшпках Петри.


- Г4 -

2. Экологические особенности хищных грибов и приспособ-

ленность их популяций к обиташш в почве

Методами прямого микроокопировавия и мембранных камер уста-

новлено, что при помещении в почву конидий или мицелия хищных

грибов рода Arthrobotrya на 2-3-и сутки формируются хламидоспо-

ра - визненная форма существования этих грибов в*природных усло-

виях.

Под влиянием конкурентной микрофлоры кошщии и минелий под-

варгаютоя деградации, тогда как хлаыидоспоры и ловушки разрушают-

ся значительно медленнее. Это объясняется тем, что хлаыидоспоры

ишют мощную меланизированную оболочку, а ловушки покрыты клейким

веществом с растворенными в нем токсинами (Ееккер, I97ii; Тепля-

кова, Рябчикова, IS»I).

Для жизнедеятельности хищных гвфошщетов в вочве характерна

периодичность в формировании ловчих органов. Первый пик активнос-

ти (число ловушек) наблюдается на 3-й сутки, второй - на 14-е су-

тки* после интродукции кокидий в почву (см. рис.)» Появление пиков

не зависит от колебаний температуры воздуха и влажности почвы.

Максимум ловушек у всох штампов, помещенных в почву в виде кони-

дий, наблюдается на 14-е сутки. Б этот ае период продолжается к

формирование хлашдоспор.

Хотя в лабораторных условиях все исследованные штаммы прояв-

ляли высокий нематодаговый аффект и хороший роот на питательных

средах, наиболее активными по численности ловушек и хлашдоспор

оказались штаоды A.oligospora ВКМ1^-30о2Д и ВКМВ-.2461Д. У неакти-

вных в почве штаммов (4/27-33, К-9, Ш-<2) коаидаи быстро лизирова-

лнсь; мицелий,ловушки к хламидоопоры выявлялись в небольших коли-

чествах.


- Т5 -

' Коя-во ловушек на фильтре, иг.

I30

Сутки

•.•[ -.Ркс' Лйяаивка •чпсленности ловушек у некоторых штаммов •v

: " . ."v хищных грибов рода' Arthrobotrys • в почв& ' •-.,

; ; г ; - ' К - 9 ; , 2 ^ 1 Е ^ ; . 3 : - 4^27-33;4 ; ' -


- Г6 -

Высокий уровень численности хломидоспор через ыешй* после

помещения хищных грибов в почву свидетельствует и их приспособлен-

ности к существованию в этих условиях (Кожевин, 19Ь5, 1&аЭ).

Различия в проявлении жизнеспособности и нематофаговой эф-

фективности разных штаммов хищных грибов, помещаемых в почву,

свидетельствуют о необходимости скрининга штаммов но только в ла-

бораторных, но и природных условиях.

Характер взаимодействия хищных грибов о почвенными грибами

ИЗ рОДОВ Trichoderma, Rnizopus, Aapersiilua, Penlcillium, JUaa-

?ium как в условиях почвы, так и на питательных средах не одина-

1'СВ. Так, A.aiger, P.expaosum, Р.сЬг1иаьепиш, J.solanl ПрвКра—

1д ив развиваться в местах контакта с хищными грибами. В сравнении

с этим R.uigricana, T.iignorum, f.cjciopiura на»присутствие хищ-

ных грибов не реагировали и продолжали расти.

В местах соприкосновения культур виднн многочисленные хлами-

доспоры, а у некоторых штаммов и улавливапцио приспособления.

Если для штамма Кир—4 и 2д формирование спонтанных ловушек

отмечалось впервые, а кольца были немногочисленш, то у шта&ша

ЕККР-Хь2Д, которому это явление присуще, отмечалась массовость

их образования.

Через 2-3 недели на колониях A.amavori некоторые штаммы

хацных грибов разрастались в виде тонкого белого паутинистого ми-

целия, на котором формировались структуры, похожие на хламиде—

споры.

Представляет интерес поведение активного штамма ВКЫв<ЗО62Д,

ВОТОрыИ В совместной культуре С Trichoderma sp. В СуСПеНЗИП Н6-

иатод и почве образует большое число улавливахюк приспособлений,

несмотря на присутствие многочисленных спор гриба-антагониота.

Зто подтвердцает возможность совместного лепользовышя препаратов


на основе лшщых грибов и тркходер*в для задган овощных культур

от нематод и корневых гнилей (Гущин к др., 1982).

Существование oooooiV экологэтеокой шшм, в которой хвдныэ

грибы трофически связаны:с нематодами, делает их малоуазвидами а

для КЕКОгельмингов. Езди в лабораторных условиях нами было пока-

зано размножение нематод-мшофагов Aphelenohoides spk, Aph.sapro-

phillua franklin, Aph.besseyiChristie, Aphelenchus avenas Baatt-

«i-на культурах хищных грябов (Мавдсевя ,' Твшшкова а др., I98IJI,

то в условиях' iK>4sa их чисдешшеть под действием эффективных штам-

мов :грибов-нематофагов снижалась вдвое и больше (Шлапэтака, ГЛац-

кевяч,'Тегомкова, 1992). ." . • • . ' .

;*; 3. Некоторнв аспекты механизма хищничвотва гриОов-гифо-

мкцетов

; Установлено {Теянякова а др.» I9ffi), чяо мбель нематод

r . r e i i v i w a под ьоадайствяем xysirypaaiaoa яедкоета хиданх грж-

бов составляет не выше 24^, что согласуется с результатами а дру-

гих асследоьатеяёа (Сидорова,, 1967; ]Со-Ван-Кыу, 1968). В рвзуаь-

тате изучения действия метаболитов культуры хищных грабов A.oil-

•'goapora i двффувдируниш через в&яжофаа а прояаляззких токсячаскай

для наматод эффекту бкао ycraHoasew, чп хйвиа гряба лродудару-

»т то»;ожчесйае двии нематод веществ», одво »» оьойств аоторах-

. слабая раогворимость э вод© (Гущяя, Ивавов, Тэхшпсова, 1983). .'

Воэдействаеаа нв1«атод содержяааш ies«era^ глуб!шной культуры •: ...

втанамов Б1^?-246Д и ВКМР-3062Д показало, что ьнутряжяеточвке ме-

таболаты,трлбов вривхвка»г нематод p.redivivua и оказывав» та»-

же, как'.-и даффувдаруюиие через цадлофан *ютаболиты, токопавкв!

эффект.. Чераз 2-е суток содерхамое Евматода станоакяось

т ы м . -": г ' • > " . •* " ' . • • • • • ' • =


- Т8 -

Представление об участии в механизме хищничества нематофаго-

вых грибов токсинов, растворенных но в воде, а а клейкой веществе

типа латекса (Раджабова, 1971; Беккер, 1972) было подтверждено

нами о поыощыа сканирующей и трансьшссионной электронной шкроско-

шш (Теплякова и др., I9tt5; Теплякова, Рябчикова, 1991). в скани-

рующем иикроокопе на ловушках и мицелии видны многочисленные кап-

ли и НИТИ выделенных клейких веществ, на срезах ори исследовании

о помощью трансмиссионного электронного микроскопа эти вещества

представлены в виде глыбок или нитей на поверхности клеточкой

стенки.

Испытание экстрактов поверхностных и глубинных культур агсам-

ма ВКМВ-ЗО62Д, полученных о поыощыа органических растворителей -

хлороформа и хлористого метилена, показали их аттрактивный и ток-

сический эффекты, что также свидетельствует о присутствии как в

мицелии, так и в культуральной жидкости токсических метаболитов.

Изучение на ультратонких срезах механизма взаимодействия

ВК14У-ЗО62Д о нематодой f.redivivua , особи которой были добавлены

к недельной культуре хищного гриба на пептонно—кукурузном агаре,

показало, что ухе через 2,5 ч выявляется большое количество амор-

фного вещества средней электронной плотности ("клея"), формирую-

щегося в виде нитей или глыбчатых скоплений на поверхности лову-

шек и вегетативных гиф. Основная масса этого вещества связана о

ловушками, отложения его на вегетативных гифах незначительны, диа-

лиз образцов показывает, что предшественником этого вещества

("клея") является электронно-прозрачное содержимое вакуолей лову-

шек гриба.

Выброо "клея" ловушками, по-видимому, осуществляется черев

отверстия при слиянии плазмахеммы о оболочкой вакуоли, аналогично

процессу экструзии гранул секреторными клетками млекопитающих. В


пользу данного предположения свидетельствует отсутствие мелкихандоцитозных пузырьков и появление длинных нитей "клея" в среде,

- Через 2,5 ч на препаратах наблюдаются разные стадии.проник-новения гриба в нематоду/что свидетельствует о. значительной ско-рости втого процесса. Процесс проникновения гифы в нематоду не..связан с лизисом ее покровов, так как не наблвдаетоя растворения

- кутикулы, нет признаков выделения гидролитических ферментов. ~. Контахт гриба о поверхностью тела нематоды осуществляете*. ,

; при участки своеобразного мостика, названного нами "клещей нож-кой", образованной тонкогранулярным вешеством более высокой плот-ности, чем "алей", выделяемый ловушками.;Этот мостик образуетсвоеобразный овязупций слой между грибом и нематодой. На частисрезов в нем видны тонкие 5жбраллы, ориентированные верпендику- .

. жирно поверхности нематоды. На срезах проолеживаотоя также учаот-кх нарушения четкой границы между свяауппш веществом я кутику- .лой, где проиоходит олияние кутикулы » ввдалонного грибом вещеот-ва. В зовз контакта, в проотранотве под плазмалеммой гряба, обна-руживаются редкие мелкие гранулы о содержимым высокой и средней

( М Ю К Т р О В Н О Й П Л О Т Н О С Т И . . v ;.". ; ; ' 1 ( : , - ; ' ' V , ,:•-. ; . • ; : ' ; • • • ; ' _..\ : / •.•-

J. Начальные стадиж пенетрации кутикулы нематоды грибом, по-ви-

димому, происходят очень быстро. - Удалось зарегистрировать лишь .

моменты, когда клетки гриба частично находятся уже в теле немато-

ды. Анализ таких оревов свидетельствует о своеобразном раздвига-

нии гвфой клеток хутжку.ты нематода, вместе с которой проникает и

связующее вещество.В процессе проникаовенжя гряба происходит,

по-видимому ••; слияние его оболочка с аяаэмаявмюй клеток нематоды;

благодаря че.уу клетка гриба^ оказывается внутри хштоплазмы клетки

нематода^; Оболочке гриба,, очевидно^.врйнадлвжят важная роль в

процессе" проншаювения гриба через •кутикулу»: 06 этом свидетель-


- РО -

ствует появление в ней фибриллярных структур в зоне пенетрации.

BUG ЭТОЙ области фибрилл нет. осыиофильное вещество оболочки об-

разует тонкую сетку.

Кроме фибриллярных структур, сввдетельствуших о наличии

процессов, обеспечивающих иеханизмы движения микрорентгеновокш

анализом установлено повышенное содержание кальция в мицелии и

ловушках хщккх грибов, форшрушцихся в присутствии некатод (Теп-

лякоиа и др., 19в5). По сравнению с сапротрофным мицелием содвр-

яакие калысвд в ловчих кольцах увеличивается в 38 раз.

Осуществление двигателышг <£ункгай у хищных грибов может,

как и у JEHBCTHUX (Болдырев, IS77) ос>ществляться при ПОИОЩЕ оо-

1гатительного белка-актомиозина о участием кальция.

Н*ишчие иихрофнлаивнтов и повышенное содерхание кальция в

лсвушках СЕИдетельствуют о роли сократительных структур, которые

участвуют в активном я бистром выдавливании кнея на поверхность

колец а сероизщекии оболочки гриба к плагмадедше кдетос нематоды

хщ П1.ч>2£икьоввкии гриба чероз ее кутикулу.

Ъ нематоде гриб локализуется, как указано выше, внутри цито-

клазму, тс есть по сути является внутриклеточным паразитом. На

шпадышх этаоах в клетках нематоды заметных изменений не реги-

стрируется, затеи вачинавтея деструктивные изыенеаия: прооветле-

tice цитопдазматического иатрикса, разбухание митохондрий , разру-

грает. Эти изыенания захватывают все клетки нематода. Воа-

J^JT грнба нат зоны лизиса, что указывает на отсутотвие вцдаленик

SSK ГЕДрол^тЕческих феркентов. Переход гриба, к сшфотро<£ноыу пита-

ксп сезвршаотся без каких-либо дополнительных изь:енеш1й в лшзно-двЕтельноотг.

4. Явление микофилии в жиаведеятельности ХЕЩЫЕС

грибов-гкфомицетов

В колониях разных шташов хищных грибов на агаризовашшх


- 21 -

средах ПОЯВЛЯЕТСЯ сектора или пятна более светлого ИЛИ бодоа пу-

шистого шщелвл с одноклеточными конидиями размером 3-5 тки, наз-

ванными нами "шкроконщщями", формирующимися lia конусовидных ко-

шадианосцах или простых ответвлениях мицелия. Данное явление рас-

сматривалось сначала нами (Ыацкевич, Андреева и др., 1973; Тошш-

кова, Гущин, I9d3) как фактор выщешшния сапротрофной формы нвы*-

тофаговнх гриоов, потерявшей способность к хищничеству. Однако

при более детальном изучении этого явления было установлено при~

оутотвие в культурах *т*жкнх немааофагов шкофильных грибов.

Иногда гифы микофида обвивала мицелий гриба-нематофага лва.

находились в его юютках. Ьшсофкл аайшодаяся и при прорасташш

конидий. В атом случае гифы к кошщии хищного гриба вследствие

пара оптирования в HEX кшко^ила лишаются своего содержимого, что

подтверждается и при электронно-микроскопической псслвдоваяии

(Теплякова, Рябчикова, L9yl).

Полного уничтожения культур хнщнкх грлбов шткофильныАШ гри-

бами на происходит при хранении таюас смешанных культур даже в

течение ^-5 лет без пересевов. В то же время контроль на наличие

микроконидай не всегда дает Е^-'РШХНОСТЬ обпарухить микофил, так

как он гожет присутствовать а Ь1льтуре только в мицелиальной <1ор-

При пересевах долго хранившихся к;л.отур грибов-нв*»атофагов

кикофЕлыше грибы иногда получают преимущества в развитии и пол-

ностыз вытесняют хищные грибы.

Чаще всего выделенные микофшхьныэ грибы принадлежали к родам

Cephaloaporium, Yerticiiiiujo, РаесНощ'свз. Разделение хлвдого

гифоыицета и мдсофцда гриба происходило при определенных услови-

ях. При пересева на агаризованную среду могли возшкнуть, как

"ys-азцвалось выше, секторы шш пятна с исцеляем, отличаицнмся от


основной культуры морфологическими особенностями. Б других случа-

ях ыногократныа пасоажи на агаризованиых спадах не выявляли такте

изменений» но.а случае глубинного культивирования,наряду о нали-

чием характерных для гримов рода Arthrobotrye широких гиф мице-

лия, развитие получал и длительно маскировавшийся микофил.

, Соответственно, для обнаружения микофяльных грибов в культу-

рах хищных гифомидатов предлагаетоя проводить глубинное культиви-

рование, при котором может происходить размножение микофила одно-

клеточными конидиями или в виде тонкого мицелия, а также его фра-

гментов, в то время как для-хищных грибов в глубинной культуре

характерец только нитчатый рост. Необходимтакже мякроскопичеохий

контроль .культур, оообенно длительно хранившихся грабов-ыематофа-

гов,ва наличка хокидий в г и ф михофильных грибов. ,; г : .• • *

; Изучение морфологических и физиолого-биохимических особенно-

стей штамма Л.1 A.longa ( а . с . 74593, 1980), выделенного Н»яи В •

Новооибярско! облаоти я используемого в лаборатории антибиотиков

МГУ в качестве продуцента фибрянолитяческих ферментов показало» •'

что данный свойством обладает не хащкый гриб, а михофильный_граб

cepiiaioeporitiai ер. г •, цриоутствуоций в /его - клетках. •. •• . >' .• . -->. •- -

':"'.'.. При оцвЕша вновь ввделешшх из ХИЩН1Я гифомисетов микофиль-.

вше грибов показано,-что гриба обладают виоокой:протволитячвохой• .-

* , в'частности, фибринолитичвекой ахтявиостыв, что дозволяет, ре-,••-

хоыендовать проведение деяенавравлввного отбора среди та. штамов-

-продуцентов этих ферментов^ ••...-•.;•; ч t ; ;> 'o ' • ^"-V.v •..,-/••'.f;---

, На основания изучения харахтера взаимодействия аятивного ->' : "

нтамм&ВКи»-3062Д и некоторых штаммов эятоиопатогенных грибов «в .

тех я» родов,, что к микофилн ( Cephalosporiwi^. Jaecllofflyoee-Vyc--. :

тановяено» что,как в условиях культуры, так /t почве эятомопато- •

генные грибе могут размножаться .за' счет мипелня и конидий хшдних.


грнбйв-

Таким образом, микофилыше грибы могут не являтьоя спвцаалн-

зированными паразитами лзняны.с грибов. Это могут быть грибы разли-

чных экологических грушг, а тры числе и грибы энтоыопатогены, д м

которых клетки, хищных гнфомииетов при отсутствии насегомых явдя-

стоя источником дитаняд»

5. Принципы и метода отбора, поддержания и оценки

перспективных штаммов хищных грибов

На основании исследований микроморфадогических и наркологи-

ческих особенностей активного и относительно стабильного штамма

ВКМ1*-ли62Д (Теюшкова и др., I9S9) сделали вывод, что данный

штамм предотавляет ообой гомотип (Мацкевич, liitsO) и для сохране-

ния его исходных признаков к нему необходимо применять ыонокони-

диальный отбор по ооноввому морфологическому типу колоний с тща-

тельной выбраковкой всех отличающихся вариантов. Наличие у штам-

ыа ВКМР-3062Д спонтанных ловчих приспоооолений позволяет контро-

лировать его активность при рассеве. При этом предпочтение сле-

дует отдавать вариантам, у которых ловушки активно образуются

непосредственно на проростках конидий.

Селекционный штамм ВКМР-ЗД61Д (Удалова, Ыацкевич и др.,

ISd2) следует поддерживать также путем *оноконидиального отбора

активных вариантов, которые тестируют только в суспензии нематод,

так как данный штамм редко образует в культуре спонтанные ловуш-

ки. Однако, цоскольху основная масса конидий этого штамма форми-

руется из многоядерных гетерокариотических базальных клеток с

ядрами, различающимися по величине и форме (Андреева, Мацхевич,

1976; Теплякова, 1977) к нему может быть применен метод рассева

фрагментами мицелия. То же относится и к штамму XIX 4/27 - исход-


яому по отношению к.штамму ВКМ&-2461Д. , \

, ;: Пассирование.через питательные среды дало возможность уста-

новить, что среди изолятов штамма XII 4/27, полученных путем фра~

шентацга М Щ Й Л Я Я , могут быть отобраны,культуры, характеризующие-

ся высоко* лпцноотью, стабильно сохраняющиеся в течение несколь-

и о переоевов (Твплякова к др., 1989). -•••.• :

: Оценку ввделенных культур и штаммов-нрбдуцонтов необходимо ••

проводить не только в лабораторных условиях^ но и в условиях,поч-

ва на нематофаговую эффективность, устойчивость к фунгиотазиоу и

пряспособленность сущаствования в ней. ... . ' ,. • г; - "•' • .

. Сопоставление" ряда штаммов позволяло установить, что наи-

большей нематофаговой эффективность», учитаваемой на.14-а оутяи

о ваысщьв мембранных ааиер,.обладает штамм ВКМР-ЗО62Д, который .•;

образовал 920 ловушек. В сравнения с ним штамм БКМ£-246ХД я XIX

4/27-33 в тех ае условиях образовали 546 а 51 ловушку соответст-'

веняо (см. рис). Штамм ЕКМг-3032Д характеризуется я большей '

устойчивостью ж фунгистатичности почвы. Относительно большое ко-

личество хаамвдоспор, характервхх для «ото штамма, сввдетельст- *

аует о его лучшей адаптация х условиям почвы и праятаемостж в

» « . , . - • • • .;; •' • . . • ; • ? . . . .•-. ; .••. . v - - 4 '

: • . . ' • ; • . ••••'> '

; ;- ' " .

Для длительного хранения активных штаммов можно рекоыеядо-

вать способ лиофалязапии и хранения в стерильной почвеi Повшюние

нематод аховой эффежгавности культур после хранения в почве возмо-

жно связало о наличием большого количэотва хламвдоспбр,формирую-

явхоя в этих условкях из клеток мицзлия и коЕИдий. Способность .

хлажвдоснор формировать многочисленные ловчие приспособленая объ-;

ясняет и усиление нематофагсвоЗ эффективностикультур после даж-

тедьаого хранения в холодильнике, где набдадается активное обра-

эование хламидоспор. Вовиожно, в этом случае происходит как ut


- ?5 -

условий, в которых гриб существует толь-

ко s виде хламидоспор.

6. Разработка биотехнологии препаратов на основе

грибов-гифомицетов с экологических позиций

С учетом имэщегося оборудования и сырьевых ресурсов в раз-

ных регионах страны нами разработан технологический регламент ао-

лучения в условиях биолаборатории препарата "нематофагин Ш", про-

дуцентами которого служат штаммы ВКМЗ*-ЗО62Д и ВШЕ-2461Д (Техно-

логический регламент на производство иематофагяна-Б1, Ы., 1ЬУО).

Согласно этому регламент} процесс производства нематофаги-

на-ЕИ осуществляется поверхностным способом. В качестве посевно-

го материала использует поверхностные или глубишша маточных ку-

льтуры, в качестве субстратов - подсолнечную лузгу, торф, солому,

биоперегной я другие. Препарат может быть получен за 12—15 суток,

срок его хранения составляет не менее 0,5 г. при комнатной темпе-

ратуре и до I г. в условиях полаженной температуры. Яейств>П4ИМ

началом препарата являются споры и шцелин.

На основании екологичеегаэс исследований, свидетельствующих

о приживаемости в почве хшцнкх грибов, вносимых в нее не только

в виде конидий, но и мицелия, было выдвинуто продподоаенше о воз-

можности получения препарата хищных грисов на основе мицелия глу-

бинной культуры.

Экспериментально установлено, что в развитии хищных грибов

на примере шташа ВКЦ»-306ЭД при глубинном культивировании наблр-

дается 2 этапа развития, которые легко различаются по морфологи-

ческим особенностям мицелия. Каждый этап соответств>ет определен-

ному физиологическому состоянию культуры.

Разработан, экопрасс-метод определения динамики развития три-


ба, позволяющий оценивать пригодность различных питательных сред

для биотехнологии препаратов на оонове хиаиых гифошщетов.1 Метод;

Ьонованный на химическом титровании и определении вещеотв-восста-\

новиталей в средах, подтвердил полученные ранее данные об оптима-j

льных овойствах оредн.Л 19 (см. выше),как наиболее доступной по. |.

составу и экономически выгодной для производства препарата. • ;

Оценка жизнеспособности и ншатофаговой эффективности сухих, :'

пастоойразных и жидких препаративных форм на оонове глубинного . j

шшелия показала, что.лучшей сохранностью обладают сухие провара- t

тивные формы, хранящиеся. при пониженной температуре.' Хорошую жиз-

неспособность в нематофаговый эффект после 5 мес хранения показа-

ли образцы, полученные с помощью каолина. Через 6 сут в суспензии ,

'нематод наблвдалась 100^-ная гибель, на 4-6 сут появилооь опороно-^

ш е н и е . • , ' - •;'• ; • , , ' ,' ..' •- "" . .; • :

. '- • " t

- Заслуживает внимания относительно длительный срок хранения ..

мицелия глубинного культивирования в условиях холодильника (до 5

мео> и при хомнатной температуре (1-2 мес). •/ "' ';.'.' •;••-'.

> В условиях промышленного производства получение жидкой формы-

препарата целесообразно .не только о экономической, но и экологи- .;

ческой точки зрения, так как исключаются затраты энергии на про- '.

Песо сушки и уменьшается выбрею отходов в окружающую ореду.'

. 7 . Испытание в защищенном грунте различных препаративных

.•..-. . форм хидннх грибов против галловых нематод ••..*: *.\ \- ,'

чИоянтания различных препаративных форм хищных'-грибов.1 дали;.;

возможность eawnaTb.заключение об их эффективности^в отношения .j"

галловых нематод. Интенсивность поражения растений снижалась - - в -'

. 1,5-3 раза в зависимости от дозы, срока применения и качества -.

препарата. Обяая чиолевнооть лематод-,в' почве под действием препа-


- Г? -

рата уменьшалась на 4б-86#, галловых нематод втрое и больше (Шта-

потено, Мацкевич, Теплякова, 1ЪЭ2). Урожайность огурца при этом

повышалась не манее, чем на и,Ь кг/м .

Большое практическое значение имеют шташовые особенности

хищных грибов - продуцентов биопрепарата. При равных дозах препа-

рат на основе штамма ШМр-3062Д превзошел по снижению интенсивно-

сти поражения растений огурца галловыми нематодами препарат на

основе штамма ШМР-2461Д на 0,4 балла и на <&,ti-35,4£ по снижению

общей численности нематод в почве (см. табл.).Таблица

Влияние препарата хищник грибов на общую численностьнематод в почве

Вариант

(Средняя .Числон- {Числен^{Снижение численности.числен- }ность не-,ность не-, номатод ( в %)Юность но-|Матод по | гатод по } 1:матод в .отношению!отношешш.по отноше-jno отноше-{ 1 г м З - -J.JK чистому.к чистому шло к чис-|нию к чио-t mi- ^ f к о н т р о л ю , контролю тому кон- .тому кон-: ши \ %г {с гетеро- тролю тролю с г е -| . ,(1осом, % } |терофосом

Препаратна основештаммаВКМР-2461Д

Препаратна основештаммаВКМВ-ЗО64Д

Контроль(чистый)

Контроль(с гетерофо-сом)

71,3 40,ь &3,5 59,4 46,5

24,2 13,й Id,I oo,2 ol,9

176,8 IuO.u iJl.d О

133,4 ?5,с 100,L U4.2 О

иптималышми дозами сухого биопрепарата на отходах сальско-


хозяйственного производства ЯВЛЯЕТСЯ I0G-I50 г/м^, что согласует-

,оя с резуяьтаташ испытаний аналогичного препарата хвдаых грибов

во Франции (Cayrol , 1983). ' :

Дробное внесение препарата не уменьшает дозы при первом, оо-

новном внесении, которое необходимо проводить не менее, чем за 3

неделя до высадки рассады. •

Зйидкая форма препарата ва основе мицелия глубинной культуры

оказалась эффективной для уничтожения нематод в почве- При ее

внесении в дозе 2 кг на I м^ общее количество нематод в почве

снижается в 13 раз по сравнению с контролем и в 3 раза по сравне-

нию с формой препарата на основе соломы и торфа. Это свидетельст-

вует о перспективности предлагаемой нами мипелиальной формы, вы-

пуск которой может быть налажен на заводах, выпускающих биологи-

ческие средства защиты растений. . . >

,. , Эффект последействия препарата на основе хищных грибов поз-

воляет эффективно использовать его в нескольких культурооборотах

овощных культур защищенного грунта. Снижение количества препара-

та в борьбе с галловыми,нематодами при одновременно высокой эф- -

фективности его применения может быть достигнуто и при внесении

препарата в сосуда о рассадой. За время роста рассады хищный •'

гриб адаптируется к почвенным условиям, происходит его размноже-

ние за счет хламидослор. ' ••"...*. > . - ; •. .

;'/•. Особенности выращивания растений в каждом конкретном хозяй-.

стае Ссостав грунта, сроки а вады прсфишктаческях работ, плодо-

смен, способы получения рассады ж др.•); должна быть учтены при

планирований технологии получения и применения препарата на. ооно- ;

в е х и щ н ы х , г р и б о в . ' • '•.•.,' .••',-: '.-• • - Я ' \- ' '• •.. .. "••• • • •••


.! „

ютроч'лчосков ухудьеш t J ! "иогич^кой слтуацим вызывает

заыеы/ хотя б«! • условиях защищенного грунта широ-

ко прашкяегасс в заците 1 астсь. л пестицидов.

Развитие и совер^енствов^шие отологических методов Оорьбы о

водителями и возбудителями баловней растений рассматривался как

один из ЕСПЫИОБ охрани огрузагце.. среды, чгто относится и к мик-

^ооиологкческочу методу защити ^етишы о^ нематод при

хз-лдшх грпбов-ГЕ^о^шцетов, изучо u*a которцх всо Оатьшв

р^ется.

С чачдыи д?(е" з проиаг_:! . ic ОВО^ЙЕОДСТВС возрастает pwv™b

иного гпнта, где DIS^/^Г г i отллч л«-сл п.-сокой ст'.б.и'ьао-

CTJMCcntx л aci от.'ч^с „tx ivroroj. (ик IKO cirчтоприлулые

к& Taib't! >шя р^ст. .i»:, ..J .• :к арс^»?а.аи z воабудителвИ

и UJ3II,IICT IUOOXCSP -с.ь Ci отчч^тл1 »СьЗ£ S^JISITJ TOI_ 1'чиых

улыур от fj i Am** орг и ucîu

I его п > «. ) 1 i ui.rjjoâjt.ut на пе"атод JC

a, I'-oo), HJ аалсаль.1и н. ояо

..Tai.1lH4GCrIJC J0H3X, ЧТО ~f .Ucrt -bCTBJLIC iiH ТОЛЬКО О .ВС КОСЛОПО-

латизьо, но и оа-.ьаой э*одог леско». рол^ в утпл^зец^л огромной

Cue 'ассы нематод, птаулих в поиьз л чл^иа широко распространенных

( Gray, lbt£; »ritach and Ьуьы , c-dd).

Пркспосойлвнность гопу.-яи.'*. л.дннх гри(5ов к существованию в

природных условлях за счет хлахядоспор и способность продуциро-

вать биологически активнее матаоаглты обусловллзают ироцессы хищ-

ничества и определяют усго!члвость этих грлбов к иочвонному tlya-


. . . . . = • , ; > : ; • . ' ' •-.. '• \ - з о - , • .•/ / : : • " • '• . • • • : . ' /

гиотаэиеу,' грибам-антагонистам и микогельминтам! . . " .

j • Знание биоэкологических особенностей хищных грибов делает '

возможным разработку стратегии производства и применения их пре-

паративных форм-в практика защиты растений от вредонооннх фито- .

гельминтов. Эта стратегия включает необходимость. наличия стабиль-

но-активных штампов-продуцентов, знание особенностей их.поддержа-

ния и сохранения, питательных потребностей и оптимальных условий

культивирования. * ' ' , : • , •

• Направление борьбы с фстондматодами о'использованием хищных

грис5ов-гифомицетов долаио складываться из реальных условий (нали-

чиянеобходимого количества биопрепаратаj организационных и агро- •

техничеоюсс возможностей хозяйства и др.)» которые могут быть ин-

дивидуальными в к&дцом конкретном случае.'. ', • » ; « .-'.' ..

",,.( •Полученные в,настоящем исследовании результаты можно пред-

ставить^ в виде следующих, выводов. ."•' ' v' '•*'

",;";-1» Из природных популяций выделено'свыше 70 штаммов ХИЩНЫХ :

Грйбов-гифомицвтов, ОТНОСЯЩИХСЯ К родам Arthrobotrys Corda emeni ;

Meoht., Daotylariopeia Meoht., Golovinia Meoht. Из ШОС при spo-

'вврке на нематофаговую эффективность отобрав и рекомендован'для—

Производства штамм Arthrobotryaoligospora BKJ№-3062fi ( a . c , ;

I6888I8, 1991), отличащийся от других штаммов этого вида отаби- .

льно-активными свойствами в способностью формировать улавливающие

приспособления спонтанно., ; \ ;•'"•; ; ' . - . . ' "•"-, , '.,* •' ,

•.: .2.'Проведены биоэкологичйские исследования ряда штаммов'хищ-.

них Грибов, относящихся к роду*; Arthrobotryai '", •'•-._ .'" .; . • , - '_

•' •;' • 2.1.. * Установлено* что хищные •• грибьг яри внесении' в почву не •• •

только выживают в ней, но и^размножаются за счет хламидоспор^.ко—";

торыв являются «язвенной формой существоваяия этих грибов в ;при-' -."

рода. ': '. •- -'•••• '••- * ' ' *'. " v с ; - . у У : ; - Ч г ; \ О " - : : ' . . - ; . : : ' ••


- ЗТ -

4.2. Обнаружена периодичность в формировании ловчих колец

хищных грибов и разница между штаммами по их нематофаговой эффек-

•ьтности и устойчивости к фуигистазису почвы.

•J.J. Тропические связи пагоду хищными грибами и нематодами

определяют в условиях почвы их устойчивость к грибам-антагонио-

там, в том числе и рода Trichouarma , широко применяемого в за—

дите растений, а также нематофаговый эффект в отношении АШКО-^

гельминтов, которые в культуре могут питаться их мицелием и кони-

диями.

3. Изучены циклы развития хищных грибов рода Arthrobotrys

при сапротрофном и биотрофном гатании, а электронномикроокошгчео-

кими исследованиями в сочотаь.ш с рентгеновским микроанализом вы-

явлены некоторые аопекты механизма хищничества.

3,1. остановлено, что большую роль в ывханиаме хищничеотва

играют аттрактивные вещества и токсины, слабо растворимые в воде,

а в теле нематоды гриб проходит биотрофную и сапротрофную стадии

развития.

3.<;. Впервые показано, что проникновение хищного гифомицета

в тело нематоды происходит путем раздвигания гифальным отростком

клеток кутикулы о участием в этом процесса фибриллярных структур

оболочки гриба.

3.3. наличие микрофнламентов и повь-анное содержание кальция

в ловчих приспособлениях свидетельствуют о их роли в механизмах

клеточных сокращений, направленных на выделение токсических клей-

ких веществ и на перемещение оболочки гриба х плазмалемме клеток

нематоды.

4. Изучение явления шгеофилии позволило разработать методы

обнаружения очистки культур Het атофаговых грибов от грибов-мико-

. Iij or>~ • л*роскопического контроля и пассирования через не-


матод, рекомендуется обязательное проведение глубинного культиви-

рования, провоцирующего размножение шкофияьных грибов, находя-,

шизеся в клетках хищных гнфомицетов. :

5. Данными цито—кариалогяческих исследований и усовершенст-

вованием методов оценки Обоснованы и разработаны приемы отбора к

длительного подаеркания активных свойств штаммов - продуцентов

биопрепарата.

6 .1 . ШвокогидналыщЯ • отбор в сочетании о приемами хранения

при помощи лиофшгазакии пли в стерильной почве обеспечивают ста-

бильность культур.

5.2. Для сщеаки.неыатсфаговой эффективности предложены про-

стые методики, основанные на взаимодействии нематод с метаболита-

ми эавдннх грибов. • . * ,

6. Обоснованы о экологических позиций пути создания препара-

тивных фора хищных грибов на основе поверхностной и глубжнной

культур: , ' '. .

- твердо-фазная ферментация, при которой используется отходы

производства (сояозаа, подсолнечная лузга и другие продукты бвокон-

версшО предназначена дяя биолабораторий при тешшчных комбинатах

и станциях заидты растенжй; •

- глубинная культура» которая может быть использована для

получения препарата в врог«ышдашшх масштабах на заводах, выпуска-

ицше биологичесяиа ерэдетва зашиты растений.

6 . 1 . Разработан для биолабораторий технологический регламент

производства препарата ("нематофагин-ЕЯ") на основе спорово-шде-

лиального комплекса эффективных-штагдаов БКИ?-Э362Д и НШР-2461Д.

6.2. Получены леходные данные для разработки регламента по-

лучения биопрепарата на основе *зэделия глубинной культуры. Для

контроля за развитием гриба и оценки зкидгапс питательных сред раз-


~а.ботан метод, основанный ua "oaartecitoM титровании.

7. Лроведено испытание различных Гфепаративкых форм хищных

грибов на галловых и других почвенных нематодах в условиях лабо-

раторных и вегетационных опытов, а также производственной культу-

"ры огурца и томата в защищенном грунте.

Установлено, что интенсивность поражения растений мелоцдого-

позом может снижаться в 1,5-2 раза в зависимости от дозы и каче-

ства препарата.

Оощая численность нематод в почве под действием препарата

хищных грибов уменьшается на 46-<зо£, число галловых нематод -

втрое и больше.

.~авболее ол^шгалышмя *азс/ш оттого препарата, полученного

«а отходах сатьскохозяйспенгого производства, являщся ICO-IEO

./ч" , яшсою (миделиальной магск) - *.кгУм".

3. Ча осаованяи проведонгаа лспнтакгй разрайотаиа стратегия

:~имслеикя препсратов хишгасс грнбс^ з 7сх.-овнях защищенного грунта

цютап галловых кемотод, зораз^д^ис оЕсгцае растения.

Lo тьме диссертации onju. п-ог ITJ слодуищиа работк

1. п. с. ft 74a94J, Ouwi-. TOwM (.rtliroDotrya longa UscbtJ t -

продуцент [ибринохитлческах SiAirthTCB ЦЧлЗ.Аядреешсо, i'.A. *«акси-

УОЕ»1, Т.п.О^рейрчкова, л.а.Силавз, 1.С.]»лркова, С.л.Гаврилов,

п.С.к'урааова л Т.В.Теплякова): ^^лмево Лв.0Ь.76 № -i6Cd4Q7.j у -.

u7.u7.dO, Бол. й 25.

2. А.С. » Kbfidie, СССР, ктамм Arthroboti"jB oligoopora

/гоч. для получения препарата против галловьсх нематод Оэпля-

кова 1.В., .яцкевич ri.B., и£.трсза Г.Л. :* н хяенина Л.Л.): заявле-

но .u.Cffi.cc S «CJ4I32, ОП><5л.1-7Л1.Ь1, сод. .'* 41.


. 3. Мацкевич H.B., ТеошюваТ.В., Приходько B.C.. Стабилиза-

ция нематофоговых свойств хищных грибов" при их развитии в культу-

ре // Микробиологические методы,борьбы о вредителями;раотений. ~

Новосибирск. - 1980;/-Вып.2. - С-25-29. ,•• ;. •„ , . ; . . . :

;

• ^ ,4 . Гулий B.Bi,: Теплякова Т.В., Иванов Г.М. Микроорганизмы,

полезные для биометода. - Новосибирск : Наука, Сибирское.отдёле-

н и о , I S 8 I . - 2 7 0 о . . . „ , ; ; : . - ; " • . ; . • • • .

•••' , 5 . Теплякова Т . В . , Ьйшегов С В . Морфологические и цитологи-

ческие, оообеннооти фаа,развития гриба Artbrobotryв o l igospora

Free, при глубинном культивировании / / Гиикроорганизмы в защите •'

растений. - Н о в о с и б и р с к . : - 1 9 8 1 . - С . al~84i: • . . '

. '. . . 6 . Мацкевич Н.В.,,Теплякова Т.В. , Шестеперов А.А; Характер:

поведения нематод-микофагов на различных по активности и возрас-

ту культурах хищных грибов / / Микроорганизмы в зашита растений. -;•

Новосибирск.".^ I S 8 I . , - с . 7 7 - e i . ;. • • • ; . ; , . ' • -У,:.',--'.

'•;•-'. ' 7 . Тешшкова Т . В . , Гущин Ф.Л. Изменчивость хищных грибов.//

Использование микроорганизмов в.сельском хозяйстве и промышленно-

сти. - Новосибирск.^- 1982. - С. 65-90. , . ; ; '/ , . ; •

.; ..'• ' 8 . Теплякова Т . В . , Гущин Ф.Л., - Бадин Д.Ш Испытание препа-

рата хищных грибов против галловой нематода / А г р о б и о л о г и ч е с к а я

задата растений в Сибири. - Новосибирск. - 1982. - С.',31-35..- .

' ' 9. Гущин Ф.Л.,'Иванов Г.И. t > Теплякова Т.В. Токсико'обрааую- -

дая способность хшдаого гриба Arthrobotrya o l igoepora Рг . / / Си-

бирский BUCTH.c.rXw науки. - Новосибирск. - 1983. - & 2,' -,С. • IC0-

I C 2 . " . . . • : 1 , - • • . ; . ' • . . , • • • ' • : ; ' . . ' - . '•••; - . \ ; ч - . ; " ' - . ' : У / ' ' ' . - . - . . . ' . • ; . S . . - •.'-- .'

. : 10. Теплякова Т.В., .Гущин.Ф.Л. Изменчивость хищных грибов •.

рода- Arthrobotrys •• по типу спороношения / / Интегрированная защита

растений от вредных организмов. - Новосибирск. —1903. - , С , , И 2 - .

1 2 4 . • .- v - • . • • " . ' . • • ' ' • •"' "• •'.' '••':'.•• ч ' \ . • •


- 3 5 ~

I I . Тешшкова Т.В* Возмо-ьосте и состояние биологической

борьбы с галловыми нематодами р заиленном грунте J/ йиологичео-

клл метод защиты* растений от, г.редлтелеи и болеадеИ и охрана окру-

жающей среды. - Кишинев, - ' i - o l . - С. 4«2-45.

12.Теш1якова 1.Ь. Пути использования хищных грибов-гифошще-

тов в борьбе с галловы&ш негатодами // Биологический матод защи-

ты растений. - UIHCK. - Ibd4. - 0. 122,

. 3 . Гущин v.Ji., Теплякова Т.В. Взаимодействие хищных грибов

с некоторыми антагонистами почвенной микофлоры // 1!нтегрированная

зацдта растений о™ болезней и врвдитолек в Сибири. - йовос55бирск.

- ii«o5. - С. 15d-bl .

14. Теплякова Г.В., «зккар ^ . 3 . , Сухоруков А.А. Исследование

ловчих качец хлщного гриб«. Arti.robotrys oligoapora, штамма XIX

1/ 7 методами рентгеновского андллза и электронной микроскопии //

-жроорганизАш в защите растений. - Кишинев. - Штиинца. - ±Уво. -

(-. 24-о1.

1о. .шологическая защита овошкых ку!ьтур в защищенном грун-

те // -етодические рекомендации. - Ь, - 1ъаЗ. - У! С.

1о. Культивирование л пр-и пение грибов против вредна елей

и болезней в защищенном rpjHTe // • етодические рекомендащш. -

Кишинев. - Ibk-5. - tt> с,

17. Тешшкова Т.В., Гущин *.JI. Ирс'иемы в использовании хищ-

ных грибов-гифомицетов против галловых нематод // Лнформ.окт.ШС

..ОБЕ, Л., 1900. - * 12. - С. о*.-Ь5.

18. Максимова Р.А,, Шаркова Т . С , Теплякова Т.В. Физиологи-

ческие особенности хищного гриба rtrthrot>otrya longa, штамма J6 I

при образовании протеолитических «рерментов о фибрцнолитичвскш.]

действием // естественные враги насекомых-фитофагов. - Кишинев.

• - илилнца. - 19о6, - С.


- :• •; "• - з е - . . •' ' ' '• ч - ' ' •

. 19» ТешигеоваТ.В. Микробиологические средства зашиты расте-

ний от $ютодаразитичбских нематод / / Биологическая регуляция чис-

ленности вредных организмов. - Ы.: Агроцромиадат. - 1966. -

С. 178-Ш?. - '

.; , 20. Шаркова Т.С., Максимова Р.А., Тепяякова Т.В.' Фяэиологп-" ;

ческие особенности Arthrobotrys longa Mecht. в связи с образо-

ванием' фЕбринолитических ферментов J/ Микология и фитопатология* •

- 1 9 8 8 . - Т.22, & 2. - C.I49-I52. . . ' . '

• 21. Кальвит Т.К., Теплякова Т.В., Шоргашова Л.П. Особенноо-

ти развития энтомопатоге!шых и хищных грибов в почве // Пхюйлеш

создания в применения микробиологических средств защиты растений. :

- М..- I9S9. - С. 207.

22. Теплякова Т.В., Шорникова Л.П. Скрининг штаммов хшашес

грибов-гифомицетов // Тез.докл. I I симпозиума стран - членов СЭВ

по шкробнш пестицидам. - Ы. - 1990..- С. 202.

• .' 23. Тешшкова Т.В., Степанова Е.В., Кальвиш Т.К. Селекция

я поддержание активных а стабильных штампов нематофаговше гря<5ов

// Микробйодогачесвив исследования в Западной Сибири. -Новоси-

бирск. - Наука. - Сибирское отделение. - 1989, - C.7I-74.

."-' 24. Шатрова ГЛ.» Кодухарь Г .Г,, Тэплякова Т.В., Ыахскевич •

й.В., Гладкова И.А., Ротару С.П. Бвделешгз и отбор стабильных и

высокоэфф8ктивнюс штаммов нематофаговых грибов // Микробиологи-

ческий метод защиты растений от вредителей, болезней и сорняков.

- Кишинев; - Штиинца; -1989 . - С . 3-12.

•25.-Таплякова Т.В;, Зелепкэв В.Н., Солодкий В.В., Зодоиас

СИ. Возмояяости получения.Ерепарата хищных грибов на основе ми-

целия // Тез;докл. I I Симпозиума стргн-членов СЭВ по микробввм

пестицидам. - М. - 1990. - С. _147. " ', •. ^ •

26. Шатрова Г Л . . Теплякова Т.В;,;Кояухарь Г.Г. Получение


слопрвнарата i сматофагошд на ч.~!оз<з ^г^6-* Р°да .rthrobotrye

// Гез.дскл. I I Симпозиума с-А~„» -члшюв СЗЗ но млкройщм аести-

Цтам. .'«. - I9H). - С. I4b.

-7. Мацкевич И.в,, Косовец B.C., Иосселиани Д.А., Карпштян

Д.А., Пряходько В.П., Удалова j . E . , Теилякова Т.З. Характсраота-

vu немзтофаговых свойств бдопг&парата хищных грабов, полученного

опитко-промшыешшм способом // Utuwmrna и фитопатология. - T.24,v

Я I . - 1990. - С. 22-i.6.

23. Налспяла Л.Н., 5^а1р..влч ! ! .В., Кожухарь Г,Г., Тепдякова

Т.В. йикрие гпа.ш-'ыих способов хранения aa жианедвятельность нв-

матс4агопьа эапсих грлсов // !.-п-1логия к <£итоиатология. - 1990. -

Т.С4, 3 : . - С. JI2-3T4.

ZZ. . плл ов . ?..>,, .i1* 1,п ;„а Г,И. л*сзниз гглЛа - i лфсмшты

// .-«-«ита растекиа. - 11. - I&9I, -

л/. Чаты и Т.К., Г'лпкко i -".3., .Cj пп.оал Л.П. Ыанедояталь-

/о- ь jii.-4,rcraToroWiHx ! i оьит^1 u^tbJt г^лб^п в цочьа / / 'Дп-оло-

„ ш и 4ктггатил^гик. - *bjt.. - Г. .$, & 6. - С. 403-501.

CI. i^wiuTi на Х.'.А., 'ijp uLxin j '«3., Тицллксза Т.В. (^иЫи'.телъ-

нал kat-ui4TtirKCTпса всчдойстьш! x.saumx гр^оов и квматкцидов на по-

ЧВеЯНЫО нематода// i.^\,a raraJitoXo^tca Utvunioa. - 1992. -

32. tSaokevio K.V. , Tepljaiov» T.V, Conneotion ot morphologi-

cal and physiological variabi l i ty o£ some imperfect fungi in their

microevolution / / International jympoeiuai " involution and. Environ-

ment " ( Brno, 17-22 , VIII ,ГэсЯ ) Abstracts of commuiUcations . -

t-raha , 1981,- p. 224 .


О'>ьем 2". п л Заказ 1ь29 Тлрал 100

1ип«'"ри-5-1 я V\o ковскои с х академии им К A TJ'MI рязева1С7С50 Москва И 550 THV, p а е ^ к з я ^л , 44


Documents

405.биоэкологические аспекты изучения и использования хищных грибов —гифомицетов