Προκαταρτική ταυτοποίησηΣυμβατικές μέθοδοι

Μαρία Φουστούκου

Ταξινόμηση, ονοματολογία, ταυτοποίηση μικροβίων

Ταξινόμηση είναι η κατάταξη των μικροβίων σεΟικογένειες και ΓένηΟνοματολογία είναι μέσο επικοινωνίας. Ταμικρόβια έχουν δύο ονόματα: το 1ο δηλώνει τογένος, το 2ο το είδος π.χ.Staphylococcus aureusΤαυτοποίηση είναι η χρήση των κριτηρίωνταξινόμησης για να ξεχωρίσουμε κάποιουςμικροοργανισμούς από κάποιους άλλους.

Ταυτοποίηση

Καθαρή καλλιέργειαΜορφολογία αποικίας και Gram χρώση– προκαταρτική ταυτοποίησηΒιοχημικές, αντιγονικές ιδιότητες, χαρακτηριστικά ανάπτυξης

2 ονόματα κλινικούς σκοπούςΜοlecular and genetic characteristicG+C, DNA homology, thermal stabilityεπιδημιολογικούς και δικαστικούς σκοπούς

Gram(+) μικρόβια

Gram(+) κόκκοικαταλάση +καταλάση -

Gram(+) βακτηρίδια

Καταλάση (+) Gram (+) κόκκοι

Γένη :Staphylococcus Micrococcus StomatoccusRothiaPlanococcus

Καταλάση (+) Gram (+) κόκκοι

Αποικίες κίτρινες, ήλευκές κοκκιώδειςστερεά κολλημένες στο άγαρ.Δεν τις ελέγχουμε. Διαφορετικά:

Slide Co +Latex Staph +

έλεγχος ευαισθησίας σε δίσκο Bacit ≥10 mm

Poly B<10 mm Poly B≥10 mm

Slide Co- LatexStaph-

Rothia mucilaginosa Micrococcus group

H.D.Isenberg, Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd ed., 2004

Bacitacin 0.04-U δίσκος ταυτοποίησης

Δοκιμή ευαισθησίας στη Bacitracin χρησιμοποιείταιπροκαταρτική ταυτοποίηση του Streptococcus pyogenesδιαχωρισμό των Staphylococci από Rothiamucilaginosus (Stomatococcus m.) καιMicrococcusΔιαχωρισμό των Pen=E Micrococcus και Rothiaαπό τους Pen=A κοαγκουλάση –αρνητικούςσταφυλοκόκκους

Bacitracin 0.04 U(συνέχεια)

Ελεγχος σε ΒΑ (αιματούχο) ή ΜΗ άγαρΖώνη αναστολής 6mm ΑντοχήΖώνη αναστολής ≥10mm ΕυαισθησίαΖώνη αναστολής 7-10mm ΕπανάληψηStreptococcus pyogenes = EStreptococcus agalactiae = ACoagulase negative staphylococci = ARothia, Micrococcus= E

QC S.Pyogenes≥12 S.aureus: 6

Σταφυλόκοκκοι

Κοαγκουλάση θετικοίStaphylococcus aureus , S. intermedius

Κοαγκουλάση αρνητικοίStaphylococcus epidermidis, S. warneri , S. haemolyticus, S. saprophyticus, S.hyicus

Κατά την ταυτοποίηση των Σταφυλοκόκκων εκτός από τημορφολογία των αποικιών και τη μικροσκοπική εικόνα(Gram) λαμβάνονται υπ’ όψη το ιστορικό του ασθενή καιη προέλευση του δείγματος

Καταλάση (+), Gram (+) κόκκοιεξετάσεις,αντιδραστήρια

Καταλάση: 3% Η2Ο2Κοαγκουλάση ελεύθερη: ελέγχεται σεσωληνάριο (μέθοδος αναφοράς)Κοαγκουλάση συνδεδεμένη: συγκόλληση σεπλάκαΟρνιθίνης αποκαρβοξυλίωσηΠυρρολιδονυλ-β-ναφθυλαμίνη (ΠΥΡ)Δίσκοι ταυτοποίησης:

polymyxin Β (300U), novobiocin (5 g), bacitracin (0.04U),vancomycin

Καταλάση (+), Gram (+) κόκκοιΣταφυλόκοκκοι-Κοαγκουλάση

Κοαγκουλάση ελεύθερη: ελέγχεται σεσωληνάριο με πλάσμα κουνελιούΚοαγκουλάση συνδεδεμένη ή παράγωνθρόμβου ή clumbing factor (C.F.) ελέγχεταισε πλάκα:

Συγκόλληση σε πλάκα:α) πλάσμα κουνελιούβ) εμπορικά κιτ latex Staph(C.F. + Πρωτεϊνη Α + αντιγόνα ελύτρου)

Σχόλια για κοαγκουλάση

Κοαγκουλάση σε πλάκαΔεν ελέγχουμε αποικίες που αναπτύχθηκανσε εκλεκτικά θρεπτικά υλικά (π.χ Chapman,MacConkey ) γιατί τα στελέχη αυτοσυγκολλόνταικαι το αποτέλεσμα είναι ψευδώς θετικό ήψευδώς αρνητικό.Διαβάζουμε τα ένθετα των εμπορικών kits (latex Staph) για τα ψευδώς θετικά ή ψευδώς αρνητικάαποτελέσματα.

Q.CQ.C:: 1) 1) S.aureusS.aureus, , 2) 2) S. S. epidermidisepidermidis

Καταλάση (+), Gram (+) κόκκοιΣταφυλόκοκκοιΣταφυλόκοκκοιΚοαγκουλάση (+) ή latex Staph. (+)

επιπολής λοιμώξειςεκτός τις μηαιμολυτικέςαποικίες τωνούρων

S.aureus

Διεισδυτικές ή και μη αιμολυτικέςαποικίες στα ούρα

κοαγκουλάση σε σωληνάριο (+)

Poly Β<10mmPoly B ≥10mm

S. intermedius

H.D.Isenberg sec.ed.

Καταλάση (+) gram (+) κόκκoι κοαγκουλάση (-)ΣοβαρέςΣοβαρές διεισδυτικέςδιεισδυτικές λοιμώξειςλοιμώξεις

Κοαγκουλάση (-) ή latex Staph (-)

Κοαγκουλάση σε σωληνάριο (-)

Bacit = A (προαιρετικό)

PYR(-) ήPYR(+) &/ή ornithine (–) ήPoly B≥10mm

PYR (+) &/ή ornithine (+) ήPoly B < 10mm

CoNS S. lugdunensis

Bacit ≥ 10mm

MicrococcusMicrococcusRothiaRothia

H.D.Isenberg, Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd ed., 2004

Καταλάση (+) gram (+) κόκκoι κοαγκουλάση (-)Επιπολής λοιμώξεις

Κοαγκουλάση σε πλάκα (-) ή latex Staph (-)

ούρα: έλεγχος NOVO σε MH

CoNS S. saprophyticus

>16mm ≤16mmCoNS

ΕπιπολήςΕπιπολής λοιμώξειςλοιμώξεις

sos έλεγχος NOVO μόνο γιαταυτοποίηση Co(-) στα ούρα.ΝΟVΟ σε αιματούχο aντοχή ≤12 mm

H.D.Isenberg, Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd ed., 2004

Κοαγκουλάση σε σωληνάριο (-)

Καταλάση (-) Gram (+) κόκκοι

Γένη:StreptococcusEnterococcusAerococcus, Gemella, Lactococcus,

Leuconostoc, Pediococcus - σπάνιαπαθογόνα για τον άνθρωπο

Καταλάση (-) Gram (+) κόκκοιStreptococcus

Γένος: StreptococcusS. pyogenes ( group A ) S. agalactiae ( group B [ GBS] )S. dysgalactiae (group C& G) S. pneumoniaeS. anginosus group, S. mitis group, S. salivarius

group, S. mutans group, S. bovis group = Viridansstreptococcal groups

ΣτρεπτόκοκκοιTαξινόμηση και ιδιότητες (I)

Ταξινόμησησύμφωνα με την αιμόλυση στο αιματούχο άγαρ:αλφα-ατελής, βήτα-πλήρης, γάμμα-χωρίςαιμόλυσησύμφωνα με τις ορολογικές κατά Lancefieldομάδες A-H,K-V, όμως δεν έχουν όλοι οιστρεπτόκοκκοι το ειδικό αντιγόνο της ομάδαςστο κυτταρικό τους τοίχωμα

ΣτρεπτόκοκκοιTαξινόμηση και ιδιότητες (II)

Α S.pyogenes bacitracin β-αιμόλυσηB S.agalactiae CAMP β-αιμόλυσηC S.aginosus β , αD S.bovis α , γ- S.pneumoniae optochin + α- S.salivarius optochin - α

Streptococcus pneumoniae

Gram + κόκκος, λογχοειδής, σε ζεύγη (διπλόκοκκος) ήκοντές αλυσίδες

ΠνευμονιόκοκκοςΠνευμονιόκοκκος ήήπρασινίζωνπρασινίζων ΣτρεπτόκοκκοςΣτρεπτόκοκκος ??

Αποικίες του πνευμονιοκόκκου σεαιματούχο και σοκολατόχρωμο είναιμικρές, γκριζωπές, βλεννώδεις καιπεριβάλλονται από πράσινη ζώνη αλφα-αιμόλυσης.Η ανάπτυξή του ευνοείται από τηνπαρουσία CO2 5-10 %

Ταυτοποίηση Streptococcus pneumoniaeΟι αποικίες των πνευμονιοκόκκων και των α-

αιμολυτικών πρασινιζόντων στρεπτοκόκκων όταν είναινεαρές μοιάζουν.

Mετά 24-48 ώρες το κέντρο της αποικίας τωνπνευμονιοκόκκων κατεβαίνει, σχηματίζοντα «πιατάκια», ενώ των πρασινιζόντων όχι (παραμένουν επηρμένες)

ΠνευμονιόκοκκοςΠνευμονιόκοκκος ήήπρασινίζωνπρασινίζων ΣτρεπτόκοκκοςΣτρεπτόκοκκος ??

Οπτοχίνη:•S. pneumoniae=Ε, viridans strep.=A∆ιαλυτότητα στη χολή: •S.pneumoniae=Ε, viridans.strep =Α

Πνευμονιόκοκκος: ο μοναδικόςστρεπτόκοκκος ευαίσθητος στην οπτοχίνη

Δίσκος Οπτοχίνης διαμέτρου 6mm καιπεριεκτικότητας 5 mg

Καλλιεργούμε την αποικία σε αιματούχοτοποθετούμε δίσκο ΟπτοχίνηςΕπώαση τρυβλίων:

σε CO2 5% / 35oC/ 18-24 ώρες

Αξιολόγηση αποτελεσμάτωνΖώνη αναστολής≥14 mm: πνευμονιόκοκκοςΚαμία ζώνη αναστολής: πρασινίζοντεςστρεπτόκοκκοιΖώνη-αναστολής 9-13 mm: έλεγχος διαλυτότηταςστη χολή .

10% bile salts

Αλγόριθμος ταυτοποίησης S. pneumoniaeσε δείγματα από στείρες περιοχές (αίμα, ΕΝΥ)

Εμβολιασμός σε αιματούχο και/ή σοκολατόχρωμο

Αποικίες μικρές,γκριζωπές,υδαρείς, περιβαλόμενες απόπράσινη ζώνη α-αιμόλυσης

Δοκιμή ευαισθησίας στην οπτοχίνη (δίσκος 6mm,5μg)

Gram (+) διπλόκοκκοι ήGram (+) κόκκοι σεαλυσίδες

α-αιμολ.στελ.Opt 9-13mm

α-αιμολ.στελ.Opt ≤8mmViridansstrep

Οpt = AS.pn.= αρν

α-αιμολ.στελ.Opt ≥ 14 mmS. pneumoniae

Δοκιμασία διαλυτότηταςστη χολή

ΔιαύγασηS. pneumoniae

ΘολερότηταΌΧΙ S. pneumoniae

Χρώση Gram

Gram Gram ((--) ) ΜικρόβιαΜικρόβια

Τα Gram-αρνητικά μικρόβια είναι μία ετερογενήςομάδα που περιλαμβάνει πολλές οικογένειες, γένη και είδη πολλά από τα οποία προκαλούνσοβαρές λοιμώξεις και ενδοτοξικό σοκ . Η ταχεία και ακριβής ταυτοποίηση των Gram (-) βακτηριδίων και Gram (–) διπλοκόκκων παρέχειέγκαιρη και σωστή έναρξη της αντιμικροβιακήςαγωγής.

Gram (–) cocciGram (–) rods

Ταυτοποίηση Gram-αρνητικών μικροβίων

Αντιδραστήρια I1. Καταλάση 3 και 30%2. Ινδόλη (spot, Kovac’s, Ehrlich’s)3. Οξειδάση4. Polymymixin B (300U) ή colistin 10mg &

penicillin 10U5. MH agar6. Butyrate test (spot test –Remel )

Αντιδραστήρια (ιι)7. Aminolevulininic acid (ALA)8. Pyrrolidonyl-b- naphthylamide (PYR)9. Triple sugar iron agar (TSI) ή Kligler’s iron agar

(KIA)10. Ταχεία μέθοδος ουρίας11. Υλικό κινητικότητας12. Kit ταυτοποίησης Neisseria 13. Kit(s) enteric και αζυμωτικών και άλλων

απαιτητικών βακτηριδίων14. Δίσκοι 0/129 μg (δ.δ.Aeromonas,Vibrio,Plesiomonas)

Ταυτοποίηση Gram-αρνητικών μικροβίων

Καλλιέργεια Gram-αρνητικών μικροβίων

Κοινά θρεπτικά υλικά:Αιματούχο (ΒΑ)Σοκολατόχρωμο (CHOC)

Εκλεκτικά διαφορο-διαχωριστικά υλικά:MacConkeySSEMB

1. Καλλιέργεια δείγματος από στείρεςπεριοχές (αίμα, ΕΝΥ, αρθρικό κ.λ.π)

1η περίπτωσηΑιματούχο: ανάπτυξηΣοκολατόχρωμο: ανάπτυξηMacConkey: καμία ανάπτυξη

2η περίπτωσηΑνάπτυξη μόνο στο σοκολατόχρωμο

3η περίπτωσηΑνάπτυξη και στα τρία υλικά

1η και 2η περίπτωση

Αιματούχο (ΒΑ) +, Σοκ.+, MacConkey –Μορφολογία της αποικίαςGram-χρώση Gram αρνητικός κόκκος, ήGram αρνητικό βακτηρίδιοΟξειδάση από το Αιμ. ή το Σοκ.*Καταλάση test

* Για να αποφύγουμε την λάθος ταυτοποίηση η εξέτασηδεν παραλείπεται . Εξαιρούνται οι φανερά ερπύζουσεςκαι οι δορυφορικές αποικίες.

Ταυτοποίηση Gram-αρνητικών μικροβίωνπεριπτώσεις 1,2

Αξιολόγηση ανάπτυξης σε ΜacConkey (Ι)

Gram απο αιματούχο ή σοκολατόχρωμο

διπλόκοκκοι

Βακτηρίδιο ή κοκκοβακτηρίδιο

Neisseria Moraxella catarrhalis

MaC (–)

Ανάπτυξη-/+ σε αιματ.αεροβίως + 5% CO2

HaemophilusBrucellaPasteurellaΚάποια αζυμωτικά

MaC (+)

Οξειδάση

ΒΑ - ΒΑ +

H.D.Isenberg, Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd ed., 2004

Gram-αρνητικοί διπλόκοκκοι

Οξειδάση θετικοί

Αιματούχοαποικίες«μετακινούμενες»Butyrate test +

Moraxellacatarrhalis

Αποικίες κίτρινες:σαπροφυτικέςναϊσσέρειες

οχιοχ

Αποικίες:•οχι Μ. catarrhalis•οχι κίτρινες

+-

καταλάση

Kits: rapid ID NHNeisseriaScreen…

Neisseria meningitidisN. lactamica, N. gonorrhoeaeΣαπροφυτικές ναϊσσέρειες

Οροομάδες Α,Β,C,Y, W-135

Gram(-) κοκκοβακτηρίδια

Σχόλια για τους Gram(-) διπλόκοκκους

Όλοι οι αερόβιοι Gram (–) διπλόκοκκοι είναιοξειδάση θετικοί.Σε περίπτωση αμφιβολίας: κόκκος ήκοκκοβακτηρίδιο?

Κάνουμε ανακαλλιέργεια σε άγαρ με δίσκοπενικιλλίνης 10UΚάνουμε Gram χρώση γύρω από τον δίσκο. Neisseria & Moraxella catarrhalis παραμένουνκόκκοι ενώ Μoraxella spp & Αcinetobacter είναιβακτηρίδια με νηματοειδείς μορφές.

sos

3η περίπτωση

Αιμ (+), Σοκ (+), MacConkey (+)ΟξειδάσηΙνδόλη **

α) ινδόλη spot: για αρνητικά βακτηρίδια πουαναπτύσσονται σε Β.Αβ) ινδόλη με Kovacs: για μικρόβια πουαναπτύσσονται φτωχά σε MACγ) ινδόλη σε σωληνάριο με Ehrlich’s για κίτρινεςαποικίες

** για να αποφύγουμε την λάθος ταυτοποίηση δενπαραλείπουμε την εξέταση

Ταυτοποίηση Gram-Αρνητικών Μικροβίων ΙΙ3η περίπτωση [Αιμ(+),Σοκ (+), ΜaC (+)]

Ανάπτυξη και σε MacConkey (+)

Οξειδάση

αρνητική θετική

θετική αρνητικήEnterobacteriaceaeΜερικά αζυμωτικάβακτηρίδια

AeromonasPlesiomonasΜερικά Vibrios

Χρωστική ?Ελεγx. TSI /KIA

ινδόλη

Ταξινόμηση Εντεροβακτηριακών (Ι)

Γένη :Salmonella ,Shigella, Escherichia,Yersinia,Klebsiella,Enterobacter,Citrobacter,Serratia,Hafnia ,Proteus, Providensia, Plesiomonas (P. shigelloides)

Ταυτοποίηση Εντεροβακτηριακών (Ι)κοινά χαρακτηριστικά

1. όλα είναι δυνητικά αναερόβια2. όλα ζυμώνουν την γλυκόζη *3. όλα είναι οξειδάση αρνητικά **4. ανάγουν τα νιτρικά σε νιτρώδη

Μedical Microbiology & Immunology 6th ed., 2000

****εκτός Plesiomonas shigelloides 99% & Serratia fecaria8%** P. shigeloides. 80%

Manual of Clinical Microbiology 9th ed., 2007

Ταυτοποίηση Εντεροβακτηριακών (Ι)κοινά χαρακτηριστικά

Αυτές οι 4 (?) αντιδράσεις διαχωρίζουν ταΕντεροβακτηριακά από τα αζυμωτικά, τοσημαντικότερο των οποίων είναι η P. aeruginosa.

Η P. aeruginosa δεν ζυμώνει την γλυκόζη, δενανάγει τα νιτρικά, είναι οξειδάση-θετική, και σεαντίθεση με τα εντεροβακτηριακά είναι αυστηράαερόβια.

Θρεπτικά υλικάMacConkey, EMB

Εκλεκτικά, διαφορο-διαχωριστικά υλικάΗ διαφορο-διαχωριστική τους ικανότηταστηρίζεται στη ζύμωση της λακτόζης η οποίαείναι το σημαντικότερο μεταβολικό κριτήριο πουχρησιμοποιείται στην ταυτοποίηση τωνεντεροβακτηριακών.Η εκλεκτική τους δράση στηρίζεται στηναναστολή ανάπτυξης των Gram(+) μικροβίωναπό τα χολικά άλατα και τις χρωστικές πουπεριέχουν.

Ταυτοποίηση Εντεροβακτηριακών (ΙΙ)ΜacConkey agar: ζύμωση λακτόζης

Ζύμωση ΓένηΝαιαποικίες κόκκινες / ροζ

Escherichia ( lactose +), /Klebsiella, Enterobacter

Όχιαποικίες άχρωμες

Shiggella, Salmonella, Escherichia (lactose -) , Yersinia , Proteus,Providencia, Morganella

Βραδέως ζυμούντα Serratia, Citrobacter

Medical microbiology & Immunology 6th ed., 2000

Μορφολογία αποικίας των πλέον κοινώνεντεροβακτηριακών σε MacConcey & αιματούχο

Γένος, είδος MacConkey Αιματούχο.Salmonella, Shigella άχρωμες, επίπεδες λείες 2-3mm

E.coli lactose (+) κόκκινες, ιζήματα χολής λείες 2-3mm

E. coli lactose (-) άχρωμες λείες 2-3mm

Yersinia enterocolitica άχρωμες <1mm λείες<1mm

Klebsiella pneumoniae ρόζ, βλεννώδεις, 3-4μμ βλεννώδεις 3-4mm

Enterobacter ρόζ βλεν. όχι όσο Klebs. λείες 3-4mm

P. vulgaris, P. mirabilis άχρωμες, επίπεδες 2-3μμ ερπυσμός

Άλλοι Proteus, Providencia,Morganella

άχρωμες, επίπεδες, δενερπύζουν, 2-3μμ

επίπεδες, δενερπύζουν, 2-3mm

Manual of Clinical Microbiology 9th ed., 2007

Triple Sugar Iron Agar (TSI)Kligler Iron Agar (KIA)

TSI (τριπλοσακχαρούχο σιδηρούχο άγαρ):περιέχει τα σάκχαρα glucose, lactose, sucrose,και ferrous sulfate (δ.phenol red, δ.H2S)KIA: περιέχει δύο σάκχαρα glucose, lactose καιferrous sulfate (δ.phenol red, δ.H2S)

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗΖύμωση γλυκόζης: κίτρινη στήλη, ± αερίουΖύμωση λακτόζης: κίτρινη λοξή επιφάνειαΠαραγωγή H2S : μαύρισμα στήλης

QC: E.coli, S.flexneri, Salmonella H2S(+)

TSI

TSI, KliglerΑντιδράσειςστη

Γένη

Λοξήεπιφάνεια

Στήλη Αέριο Η2S

Όξινη(κίτρινο)

Όξινη(κιτρινο)

+ - Escherichia, Enterobacter,Klebsiella

Αλκαλική(κόκκινο)

Όξινη(κιτρινο)

- - Singella, Serratia

Αλκαλική(κοκκινο)

Όξινη(κιτρινο)

+ + Salmonella, Proteus

Αλκαλική(κοκκινο)

Όξινη(κιτρινο)

- +/- Salmonella typhi

αλκαλική αλκαλική - - Pseudomonas

Medical microbiology & Immunology 6th ed., 2000

Προκαταρτική ταυτοποίηση (1,2) Σαλμονέλλαςτύφου: δείγματα από στείρες περιοχές & κόπρανα

Δ. στείρες.περιοχές 3η περίπτωση κόπρανα

BA: γκρι,γυαλιστερέςδιαφανείς ή όχι>1μμMaC:άχρωμες 2-3μμ

S.S: αχρωμες1-2μμMaC: άχρωμες, γυαλ., 2-3μμ

BA Xpώση Gramgram- βακτηρίδιο

1. Βιοχ.ταυτοπ.κ/α ΤSI / ΚIA

Κινητικ.+Ουρία -Ινδόλη -

2.Ορολογική ταυτοπ.Αντιοοροί Vi & D

Anti-Vi +S. typhi Anti-D +

Υποπτο για S.typhi CDC,WHO,USAID

Ταυτοποίηση Salmonella,ShigellaΠρακτικές οδηγίες Ι

Σε κάθε θετική Αιμοκαλλιέργεια γίνεται αντιβιόγραμμα καιδεν περιμένουμε την βιοχημική ή ορολογικήταυτοποίηση.Από μία αποικία γίνεται ο εμβολιασμός ΚIA/ΤSΙ, και ηανακαλλιέργεια σε μη εκλεκτικό υλικό.Με ίσιο κρίκο αγγίζουμε ελαφρά μόνο το κέντρο τηςαποικίας.Δεν παίρνουμε όλη την αποικία , δεν την σύρουμεεπάνω στην επιφάνεια του άγαρ γιατί υπάρχει κίνδυνοςεπιμόλυνσης

CDC,WHO,USAID 2003

Πρακτικές οδηγίες ΙΙ

Εάν η αποικία δεν είναι «καθαρή», ανακαλλιεργείται καιμετά εμβολιάζεται το ΚIA/ΤSI.Δοκιμή κινητικότητας : η επιφάνεια του άγαρ πρέπει ναείναι στεγνή. Η υγρή επιφάνεια μπορεί να δώσει ψευδώςθετικό αποτέλεσμα. Η δοκιμή μπορεί να γίνει από τιςαποικίες του ΚIA/ΤSΙ.Από μία καθαρή αποικία μπορούμε να εμβολιάσουμεσυγχρόνως το άγαρ κινητικότητας και το ΚIA/TSΙ. Πρώτατην κινητικότητα μετά την στήλη και τέλος τη λοξήεπιφάνεια του ΚIA/ΤSΙ.

CDC,WHO,USAID 2003

Πρακτικές οδηγίες ΙΙΙ

Μετά τον εμβολιασμό του άγαρ κινητικότητας δενπαίρνουμε δεύτερη αποικία για να εμβολιάσουμε τοΚIA / ΤSI. Μπορεί να είναι άλλο μικρόβιο.Οι ορολογικές δοκιμασίες πρέπει να γίνονται με αποικίεςαπό την επιφάνεια KIA, TSI, heart-infusion agar (HIA) ήάλλων μη εκλεκτικών υλικών.Οι ορολογικές δοκιμασίες δεν πρέπει να γίνονται απόαποικίες που αναπτύχθηκαν σε εκλεκτικά θρεπτικά υλικάMaC, SS,DCA,XLD,EMB. Τα εκλεκτικά υλικά μπορείνα δώσουν ψευδώς αρνητικές ορολογικές δοκιμές.

CDC,WHO,USAID 2003

ΟξειδάσηΟξειδάση

Κάνουμε οξειδάση από το Αιματ., το Σοκολ. ,ΜΗ.Δεν κάνουμε οξειδάση από MacConkey, EMB.

ΑξιολόγησηΟξειδάση θετική: Ναϊσσέρειες, Ψευδομονάδες, Καμπυλοβακτηρίδια, Αερομονάδες, Παστερέλλες, ΜοραξέλλεςΟξειδάση αρνητική: Εντεροβακτηριακά (όλα?)

PΥR (L-Pyrrolidonyl-b-Naphthylamide)πυρρολινοδάση

Streptococcus pyogenes +Enterococcus +E.coli –Staphylococcus lugdunensis +Citrobacteur freundii +Salmonella (H2S+) -

Αναερόβια

GNB- BacteroidesFusobacteriumPrevotellaPorphyromonasSelenomonas

GNC - Veillonella