6. teknik inokulasi bakteri.docx

5/27/2018 6. teknik inokulasi bakteri.docx

1/14

PRAKTIKUM MIKROBIOLOGITEKNIK INOKULASI BAKTERI

Dosen Pembimbing: Drs. Adib Suyanto, M.Si

Disusun Oleh:

1. Anies Setyaningsih P071331130462. Anityas Limnandari P071331130473. Ari Widiah Yanti Sari P071331130484. Arzani P071331130495. Atikah Nuramalina P07133113050

KESEHATAN LINGKUNGAN

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES YOGYAKARTA

2013/2014


2/14

TEKNIK INOKULASI BAKTERI

Mata Kuliah : Mikrobiologi

Kompetensi : Teknik inokulasi bakteriWaktu untuk mencapai kompetensi : 120 menit

Semester : 1 (satu)

Tempat : Laboratorium Mikrobiologi

Hari dan Tanggal Praktikum : Rabu, 27 November 2013

Peserta Praktik : Kelompok ( 5 orang )

I. TUJUANDapat mengetahui cara penanaman bakteri pada media yang berbentuk cair

maupun padat

II. DASAR TEORIInokulasi atau penanaman bakteri adalah teknik memindahkan bakteri dari

medium yang lama ke medium yang baru dengan ketelitian yang cukup tinggi.

Inokulasi dilakukan dalam kondisi alat yang harus tetap steril. Ini diperuntukkan

agar tidak terjadi kontaminasi. Inokulasi biasanya menggunakan alat yang disebut

sebagai ose yang berfungsi menginokulasi mikroba serta memindahkan mikroba

dari media satu ke media yang lainnya.

Ada beberapa metode inokulasi mikroba antara lain :Metode gores

Teknik ini membutuhkan keterampilan untuk menggoreskan agar sempurna dan

agar menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulasi ini membutuhkan media agar

nutrien dalam cawan petri dengan jarum pindah. Diantara goresan-goresan itu akan

terdapat sel-sel yang terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni.

Metode tusuk

Metode tusuk yaitu digunakan dengan cara menusukkan ujung jarum ose yang

sudah terdapat bakteri didalamnya, kemudian dimasukkan ke dalam media.


3/14

Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah pekerjaan

memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat

ketelitian yang sangattinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi)

terlebih dahulu diusakan agarsemua alat yang ada dalam hubungannya dengan

medium agar tetap steril, hal ini agarmenghindari terjadinya kontaminasi

(Dwijoseputro, 1998).

Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman

bakteri (inokulasi) yaitu :

1. Menyiapkan ruanganRuang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar

tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan .dalam labotarium

pembuataanserum vaksin dan sebagainya. Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah

kotak kaca (encast ) udara yang lewat dalam kotak tersebut dilewatkan saringan

melalui suatu jalanagar tekena sinar ultraviolet (Pelczar, 1986).

2. Pemindahan dengan dengan pipetCara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan

untuk diambil1 ml contoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak 99 ml murni

(Pelczar, 1986).

3. Pemindahan dengan kawat inokulasikawat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel .ujungnya boleh lurus

jugaboleh berupa kolongan yang diameternya 1-3mm. Dalam melakukuan

penanaman bakterikawat ini terlebih dahulu dipijarkan sedangkan sisanya tungkai

cukup dilewatkan nyalaapi saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan lagi

dalam nyala (Pelczar, 1986).


4/14

III. ALATALAT1. Cawan petri2. Tabung reaksi3.

Ose tumpul

4. Ose tusuk5. Rak tabung reaksi kayu6. Lampu spiritus

IV. BAHAN1. Korek api2. Spidol3. Bakteri4. Media TSIA5. Media SIM6. Media SC7. Media MC8. Media BGLB

V. LANGKAH KERJA Media Padat

1. Menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan2. Masing-masing media padat, yakni :

a) Media TSIA- Mengambil ose tusuk lalu memanaskannya atau

menyeterilkannya sampai membara menggunakan nyala api

spirtus, kemudian membuka penutup kapas pada tabung yang

berisi bakteri pada media padat serta menyeterilkan mulut

tabung sebelum dan sesudah membuka tabung

- Mengambil bakteri menggunakan ose tusuk yang telahdiseterilkan, lalu menanamkan pada media TSIA dengan arah

zig-zag dari pangkal bawah sampai pangkal atas setelah

selesai lalu menusukkan ke dalam media sampai pangkal

sebanyak 2-3 kali kemudian menutup kembali tabung dengan


5/14

kapas serta menyeterilkan mulut tabung sebelum dan sesudah

membuka tabung

- Menyeterilkan kembali ose sampai membara menggunakannyala api spirtus

b) Media SIM- Mengambil ose tusuk lalu memanaskannya atau





- Mengambil bakteri menggunakan ose tusuk yang telahdiseterilkan, lalu menanamkan pada media SIM dengan arah

tegak lurus atau vertical ke atas dari pangkal bawah sampai

pangkal atas sebanyak 2-3 kali kemudian menutup kembali

tabung dengan kapas serta menyeterilkan mulut tabung

sebelum dan sesudah membuka tabung


c) Media SC- Mengambil ose tumpul lalu memanaskannya atau





- Mengambil bakteri menggunakan ose tumpul yang telahdiseterilkan, lalu menanamkan pada media SC dengan cara

mengarahkan zig-zag dari pangkal bawah hingga pangkal

yang atas kemudian menutup kembali tabung dengan kapas

serta menyeterilkan mulut tabung sebelum dan sesudah

membuka tabung


6/14


Media Cair1. Menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan2. Masing-masing media cair, yakni :

a) BLBG (Brilliant green lactosa broth)- Mengambil ose tumpul lalu memanaskannya atau



berisi bakteri pada media cair serta menyeterilkan mulut


- Mengambil bakteri dengan cara memiringkan tabung danmengarahkan ose tumpul dengan menyendal-nyendalkan

agar bakteri menempel seperti gelembung. Kemudian

menutup kembali tabung yang berisi bakteri cair dan

menyeterilkan mulut tabung terlebih dahulu dengan kapas

- Menanamkan bakteri ke dalam media cair BLBG dengancara menggoreskan pada dinding tabung yang ada cairanya

dan menutup kembali dengan kapas yang sebelumnya

menyeterilkan mulut tabung sebelum dan sesudah membuka

tabung


b) Mac Conkey- Sebelum menanam bakteri, terlebih dahulu memberi tanda 1

titik pada bawah petridisk yang berisi media MC

- Mengambil ose tumpul lalu memanaskannya ataumenyeterilkannya sampai membara menggunakan nyala api


berisi bakteri pada media cair serta menyeterilkan mulut



7/14

- Mengambil bakteri menggunakan ose tumpul danmemulaskannya tepat pada media MC yang telah diberi

tanda dengan spidol tadi dengan cara memutar searah jarum

jam, dan tunggu hingga kering kira-kira 5 menit

- Setelah mengering pulasan bakteri yang telah mengering tadidigoreskan dengan menggunakan ose tumpul dengan pola

menggaris urut ke bawah yang semakin lama semakin

pendek dan selalu mengarah kesebelah kanan sebanyak 4 kali

putaran


8/14

VI. HASIL PENGAMATAN & GAMBAR KERJAA. Media Padat

- Media TSIA

NO. PROSES KERJA PENGAMATAN GAMBAR KERJA

1. Mengambil ose tusuk lalu

memanaskannya atau

menyeterilkannya sampai

membara menggunakan nyala

api spirtus, kemudianmembuka penutup kapas pada

tabung yang berisi bakteri

pada media padat serta

menyeterilkan mulut tabung

sebelum dan sesudah

membuka tabung

Ose dan mulut tabung reaksi

telah dipanaskan sebelum

dan sesudah digunakan agar

tetap steril

2. Mengambil bakteri

menggunakan ose tusuk yang

telah diseterilkan, lalu

menanamkan pada media

TSIA dengan arah zig-zag dari

pangkal bawah sampai

pangkal atas setelah selesai

lalu menusukkan ke dalam

media sampai pangkalsebanyak 2-3 kali

Bakteri telah diambil dan

telah ditanamkan pada

media TSIA dengan arah

zig-zag dari pangkal bawah

sampai pangkal atas setelah

selesai lalu menusukkan ke

dalam media sampai

pangkal sebanyak 2-3 kali


9/14

3. Menutup kembali tabung

dengan kapas serta


sebelum dan sesudahmembuka tabung

Mulut tabung telah

diseterilkan dan telah

ditutup dengan kapas

- Media SIM


1. Mengambil ose tusuk lalu

memanaskannya atau



api spirtus, kemudian

membuka penutup kapas pada


pada media padat sertamenyeterilkan mulut tabung

sebelum dan sesudah

membuka tabung




tetap steril


menggunakan ose tusuk yang

telah diseterilkan, lalu

menanamkan pada media SIM

yang ditusukkan dengan arah

tegak lurus atau vertikal ke

atas dari pangkal bawah

sampai pangkal atas sebanyak

2-3 kali kemudian menutup

kembali tabung dengan kapas

serta menyeterilkan mulut

tabung sebelum dan sesudah

membuka tabung



media SIM yang ditusukkan

dengan arah tegak lurus atau

vertikal ke atas dari pangkal

bawah sampai pangkal atas

sebanyak 2-3 kali


10/14

- Media SC


1. Mengambil ose tumpul lalu

memanaskannya atau






pada media padat sertamenyeterilkan mulut tabung

sebelum dan sesudah

membuka tabung




tetap steril


menggunakan ose tumpul

yang telah diseterilkan, lalu

menanamkan pada media SC

dengan cara mengarahkan zig-

zag dari pangkal bawah

hingga pangkal yang atas

kemudian menutup kembali

tabung dengan kapas serta


sebelum dan sesudah

membuka tabung



media SC yang digoreskan

dengan cara mengarahkan

zig-zag dari pangkal bawah

hingga pangkal yang atas


11/14

B. Media Cair- Media BGLB



memanaskannya atau






pada media cair serta


sebelum dan sesudah

membuka tabung




tetap steril

2. Mengambil bakteri dengan

cara memiringkan tabung dan

mengarahkan ose tumpul

dengan menyendal-

nyendalkan agar bakteri

menempel seperti gelembung.

Kemudian menutup kembali

tabung yang berisi bakteri cair

dan menyeterilkan mulut

tabung terlebih dahulu dengan

kapas


menempel pada ose denganmenyendal-nyendalkan

yang berbentuk gelembung

gelembung

3. Menutup kembali tabung

dengan kapas serta


sebelum dan sesudah

membuka tabung

Mulut tabung telah

diseterilkan dan telah

ditutup dengan kapas


12/14

4. Menanamkan bakteri ke dalam

media cair BLBG dengan cara

menggoreskan pada dinding

tabung yang ada cairanya danmenutup kembali dengan

kapas yang sebelumnya


sebelum dan sesudah

membuka tabung kemudian

menutupnya kembali dengan

kapas

Bakteri telah ditanam pada

media BGLB dengan cara

menggoreskan pada dinding

tabung yang ada cairanyadan telah disterilkan serta

ditutup kembali

menggunakan kapas

- Media MC


1. Sebelum menanam bakteri,

terlebih dahulu memberi tanda

1 titik pada bawah petridisk

yang berisi media MC

Petridish yang berisi media

MC telah diberi tanda


memanaskannya atau


membara menggunakan nyalaapi spirtus, kemudian



pada media cair serta


sebelum dan sesudah

membuka tabung




tetap steril


13/14


menggunakan ose tumpul dan

memulaskannya tepat pada

media MC yang telah diberitanda dengan spidol tadi

dengan cara memutar searah

jarum jam, dan tunggu hingga

kering kira-kira 5 menit


menempel pada ose dan

telah dibiarkan selama 5

menit hingga mengering

4. Setelah mengering pulasan

bakteri yang telah mengering

tadi digoreskan dengan


dengan pola menggaris urut ke

bawah yang semakin lama

semakin pendek dan selalu

mengarah kesebelah kanan

sebanyak 4 kali putaran

Pulasan bakteri telah

digoreskan dengan


dengan pola menggaris urutke bawah yang semakin

lama semakin pendek dan

selalu mengarah kesebelah

kanan sebanyak 4 kali

putaran


14/14

VII. PEMBAHASANDalam pengambilan bakteri, harus dilakukan secara aseptis dalam

keadaan alat yang steril, artinya tidak ada kontaminasi bakteri selain dari

sumber yang akan digunakan . Seperti alat-alat yang digunakan harus sudahsteril, penyeterilan pada mulut tabung hingga ose, dan pemberian tanda agar

memudahkan untuk menanam bakteri pada media.

VIII.KESIMPULANDari praktikum yang telah dilakukan dapat diketahui bahwa,

Mahasiswa dapat mengetahui cara penanaman bakteri pada media yang

berbentuk cair maupun padat

Yogyakarta, 1 Desember 2013

Dosen Pembimbing

(Drs. Adib Suyanto, M.Si)

Praktikan

(Kelompok 2)

1. Anies Setyaningsih2. Anityas Limnandari3. Ari Widiah Yanti Sari4. Arzani5. Atikah Nuramalina

Documents

6. teknik inokulasi bakteri.docx