4
serum shift showed no effect. UVB radiation, 300 mJ per cm 2 , prior to the Ca 2+ /serum shift revealed after 3 h a disturbed reorganization of the keratin network in approximately one-third of the cells (Fig 3). In such cells keratin ®laments were condensed perinuclearly (arrows) and showed a whorl-like pattern. Desmosome formation appeared normal (not shown), but after 24 h intracellular desmoplakin staining was notably increased as compared with nonirradiated cells. Furthermore, 24 h after radiation almost one-third of the cells detached from the object slides. Thus, 300 mJ per cm 2 could provoke a phenotype in cultured keratinocytes that is similar to that of acantholytic and preacantholytic cells in the skin of HH patients. In HH keratinocytes, however, this effect was not more pronounced than in control keratinocytes. In conclusion, our data demonstrate that in HH keratinocytes the major desmosomal proteins are biochemically intact. They are capable of assembling into desmosomes as shown by Cooley et al (1996) and our own data (data not shown). At present we cannot totally exclude the possibility that additional, less prominent desmosomal proteins are required to stabilize desmosome main- tenance and interactions. Nevertheless our coimmunoprecipitation data under lower stringency conditions are not in favor of this possibility. The failure to establish a HH-speci®c response in monolayer cultures after stressing the keratinocytes with UVB radiation may be due to the applied cell culture system. This may, however, also argue that UVB radiation alone is unsuitable as a cellular stress factor to provoke HH keratinocytes in vitro. Note added in proof During the review process of our manuscript the molecular defect in Hailey±Hailey disease has been published (Hu et al, 2000). We are grateful to the patients for their willing to cooperate, and to referring physicians. Supported by grant No Ko 1536/2±2 from the German Research Council, DFG (BPK). Markus Bernards, Bernhard P. Korge Klinik und Poliklinik fu Èr Dermatologie und Venerologie, Universita Èt zu Ko Èln, Germany REFERENCES Burge SM, Garrod DR: An immunohistological study of desmosomes in Darier's disease and Hailey-Hailey disease. Br J Dermatol 124:242±251, 1991 Burge SM, Cederholm-Williams SA, Garrod DR, Ryan TJ: Cell adhesion in Hailey- Hailey disease and Darier's disease: immunocytological and explant-tissue- culture studies. Br J Dermatol 125:426±435, 1991 Butz S, Kemler R: Distinct cadherin-catenin complexes in Ca 2+ -dependent cell-cell adhesion. FEBS Lett 355:195±200, 1994 Cooley JE, Briggaman RA, Cronce DJ, Banes AJ, O'Keefe EJ: Hailey-Hailey disease keratinocytes: Normal assembly of cell-cell-junctions in vitro. J Invest Dermatol 107:877±881, 1996 De Dobbeleer G, Achten G: Disrupted desmosomes in induced lesions of familial benign chronic pemphigus. J Cutan Pathol 6:418±424, 1979 Gottlieb SK, Lutzner MA: Hailey-Hailey disease ± an electron microscopic study. J Invest Dermatol 54:368±376, 1970 Harada M, Hashimoto K, Fujiwara K: Immunohistochemical distribution of CD44 and desmoplakin I and II in Hailey-Hailey's disease and Darier's disease. J Dermatol 21:389±393, 1994 Hashimoto K, Fujiwara K, Harada M, Setoyama M, Eto H: Junctional proteins of keratinocytes in Grover's disease, Hailey-Hailey's disease and Darier's disease. J Dermatol 22:159±170, 1995 Hu Z, Bonifas JM, Beech J, et al: Mutations in ATP2C1, encoding a calcium pump, cause Hailey±Hailey disease. Nat Genet 24:61±65, 2000 Ikeda S, Welsh EA, Peluso AM, Leyden W, Duvic M, Woodley DT, Epstein EH Jr: Localization of the gene whose mutation underlie Hailey Hailey disease to chromosome 3q. Hum Mol Genet (England) 3:1147±1150, 1994 Kowalczyk AP, Palka HJ, Luu HH, Nilles LA, Anderson JE, Wheelock MJ, Green KJ: Posttranslational regulation of plakoglobin expression. J Biol Chem 269:31214±31223, 1994 Linse R, Richard G: Zur Histologie UV-induzierter Epidermisreaktionen. I: Mitteilung. Ein Beitrag zur Differenzierung von sunburn-Zellen. Dermatol Mon Schr 176:345±348, 1990a Linse R, Richard G: Zur Histologie UV-induzierter Epidermisreaktionen. II: Mitteilung. UV-Provokationstest zur Erfassung genotypischer Merkmalstra Èger von Pemphigus benignus chronicus familiaris Hailey-Hailey. Dermatol Mon Schr 176:345±348, 1990b Mathur M, Goodwin L, Cowin P: Interactions of the cytoplasmic domain of the desmosomal cadherin Dsg1 with plakoglobin. J Biol Chem 269:14075± 14080, 1994 Metze D, Hamm H, Schorat A, Luger T: Involvement of the adherens junction ± actin ®lament system in acantholytic dyskeratosis of Hailey-Hailey disease. J Cutan Pathol 23:211±222, 1996 Na Èthke IS, Hinck L, Swedlow JR, Papkoff J, Nelson WJ: De®ning interactions and distributions of cadherin and catenin complexes in polarized epithelial cells. J Cell Biol 125:1341±1352, 1994 O'Keefe EJ, Briggamann RA, Herman B: Calcium-induced assembly of adherens junctions in keratinocytes. J Cell Biol 105:807±817, 1987 Oursler JR, Labib RS, Ariss-Abdo L, Burke T, O'Keefe EJ, Anhalt GJ: Human autoantibodies against desmoplakins in Paraneoplastic Pemphigus. J Clin Invest 89:1775±1782, 1992 Overduin M, Harvey TS, Bagby S, Tong KI, Yau P, Takeichi M, Ikura M: Solution structure of the epithelial cadherin domain responsible for selective cell adhesion. Science 267:386±389, 1995 Ozawa M, Barbault H, Kemler R: The cytoplasmic domain of the cell adhesion molecule uvomorulin associates with three different species. EMBO J 8:1711± 1717, 1989 Pasdar M, Nelson WJ: Kinetics of desmosome assembly in Madin-Darby Canine Kidney epithelial cells: Temporal and spatial regulation of desmoplakin organization and stabilization upon cell-cell contact. I. Biochemical analysis. J Cell Biol 106:677±685, 1988 Richard G, Korge BP, Wright AR, Mazzanti C, Compton JG, Bale SJ: Hailey- Hailey disease maps to a 5 cM interval on chromosome 3q21-q24. J Invest Dermatol 105:357±360, 1995 Setoyama M, Choi KC, Hashimoto K, et al: Desmoplakin I and II in acantholytic dermatoses: preservation in pemphigus vulgaris and pemphigus erythematosus and dissolution in Hailey-Hailey's disease and Darier's disease. J Dermatol Sci 2:9±17, 1991a Setoyama M, Hashimoto K, Tashiro M: Immunohistolocalization of Desmoglein I (¢band 3 polypeptide) on acantholytic cells in Pemphigus vulgaris, Darier's disease and Hailey-Hailey's disease. J Dermatol 18:500±505, 1991b Shapiro L, Fannon AM, Kwong PD, et al: Structural basis of cell-cell adhesion by cadherins. Nature 374:327±337, 1995 Thies W, Merker H-J, Fassbinder K: Originalien zur Kasuistik des Pemphigus chronicus benignus (Hailey-Hailey) unter Beru È cksichtigung elektronenmikroskopischer Befunde. Hausarzt 6:244±251, 1972 Watt FM, Mattey DL, Garrod DR: Calcium-induced reorganization of desmosomal components in cultured human keratinocytes. J Cell Biol 99:2211±2215, 1984 A Homozygous Missense Mutation in the Cytoplasmic Tail of b4 Integrin, G931D, that Disrupts Hemidesmosome Assembly and Underlies Non-Herlitz Junctional Epidermolysis Bullosa Without Pyloric Atresia? To the Editor: Junctional epidermolysis bullosa (JEB) is caused by mutations in six different genes (ITGA6, ITGB4, COL17A1, LAMA3, LAMB3, or LAMC2). Mutations in ITGA6 or ITGB4 give rise to JEB associated with pyloric atresia (Vidal et al, 1995; Brown et al, 1996), whereas mutations in LAMA3, LAMB3, or LAMC2 may underlie either the Herlitz or the non-Herlitz forms of JEB (Pulkkinen et al, 1994a, b; Aberdam et al, 1994). Mutations in COL17A1 lead to non-Herlitz JEB (McGrath et al, 1995, 1996; Jonkman et al, 1996). Immunohistochemical analysis of skin biopsies from JEB patients using protein-speci®c antibodies is often able to provide clues to the candidate gene, which is particularly helpful in the investigation VOL. 114, NO. 5 MAY 2000 LETTERS TO THE EDITOR 1061

A Homozygous Missense Mutation in the Cytoplasmic Tail of beta4 Integrin, G931D, that Disrupts Hemidesmosome Assembly and Underlies Non-Herlitz Junctional Epidermolysis Bullosa Without

  • Upload
    john-a

  • View
    215

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: A Homozygous Missense Mutation in the Cytoplasmic Tail of beta4 Integrin, G931D, that Disrupts Hemidesmosome Assembly and Underlies Non-Herlitz Junctional Epidermolysis Bullosa Without

� ��� ���%� ��/ � � %% !�* :I� �������� )?? �H � � !�2 ���� ��� 3�2L<� ��� ���%� � $ �� � �%� � ) � � ������# � � �����"���� %�� � ����� � �/�� �� ����.���� �� � 8����� % �� ! ��� �� ��* ���!� ! ��� � ����� 0��� ��� / � !�� �� � � ����!� ���� �����&�� �����/ � � /���8��� ���� ��* � ���� %������ ��� �� ������ ��� ��/�� #�� �%� � 2> � �����! ������ � �������� ��������/�� ���#�� ��!� �� � �� !���� � /��� ���������� � ! ���*9���� ��� 2> � �%� � �������� ����� � 8����� % �� ! ���� ��!� � %�� �� #, !� ���� �* ���� )?? �H � � !�2 !��� ��$� � �� ���� �� !����� � � �����!�� � ���� �� ������� � ���� %�!��������! ��� �� �!��������! ! ��� �� �� ���� % �� ���� ���* ��� � �����!�� � �/ $ � ���� %% !� /�� �� �� �����! ����� �� !���� � �����!�� �*

� !�!����� �� ���� � ������� ���� �� �� � �����!�� ��� ��,� � ������ ��� ��� �� #�!� ��!���� ����!�* �� � �� !���#� % ��� �#���� ��� � ���� � �� ��/� #� 3� � �� ���'((;� ��� �� /� ���� ����� �� ��/��* +� �� � �� / !���������� .!��� �� ����#����� ���� ��������� � �� ����� ��� ������ ��� ��� �� � -��� � � ���#���" � ���� ����8� ���! ��� ��� ��!����* = $ ��� � �� �� !������� !������������ ��� � �/ � ������ �!� !������� �� �� �� %�$� % ��������#�����* �� %����� � ���#���� � ��8�� !�0! � ���� ������� � !����� � �%� � ��� ����� �� � �����!�� � /��� :I��������� ��� # �� � �� ����� � ! �� !����� ���� �* ���� ��� �/ $ � ��� ���� ���� :I� �������� ��� �� �������#� �� �! ������ ��� �� %�!�� � ��$� �� � �����!�� � ����*

(��� !���� ����# ������ �� � $� / ��! �� % �������!���� �� �� !���� � % !� �� ���� ������ � ��� �� ���# � ��#���� � ��� �� �� 2???�*

(� ��� �����)�� �� ��� ������ )�� ���� &��� �� ���������* �+ �� ��)����

��,����- %�������+ ', ���� �� .� �$"!/� � )��� ��� ����� 0�������

����* �1� 2��.3-

5����� � ������ � ������ 6* C�� C����� ��� 6�������� %�N� � ������� ��� I � ����

:��$ �����N� "� CN�� @ �����

��9���=3��

���� �5 @���� ��� +� ������������!�� ����� % � ���� � �� ���� �B���� �� ��� ���� �8���� � ��� �� * �� � �������� '2>�2>2�24' '(('

���� �5 3 � ����8&������� �+ @���� �� ���� �H� 3 �� ��� ��� �� ���� �8���� � ��� �� ��� ���� �B� ��� �� � �����!�����!�� ��� .�����8����� 8!����� ����� �* �� � �������� '24�>2;�>)4 '(('

���" � C �� � �� ������!� !��� ���8!�� ��� !��� . � �� 3�2L8� � �� �� ! ��8! ����� ���* 1��% 4��� )44�'(4�2?? '((>

3� � H� ��������� �+ 3��! �H ��� � +H �BC % �H� ���� �8���� � ��� �� � �����!�� �� =���� ��� �#�� % ! ��8! ��8,��!���� �� $���* � ����� ��������'?G�7GG�77' '((;

� �## � � @ +!�� � @� ������� � � ���� � �� ����! � � ���� % %�������# ���� !����! � �������* � ��� ������ ;�>'7�>2> '(G(

@���� # �C ���"� � 5+� ���� �8���� � ��� �� � �� � !��� ��!��!��! �����* ������ �������� 4>�);7�)G; '(G?

������ 5 ������� C 9�,�/��� C� ��������!� ��!�� ������#���� % 3�>>��� � �������� ��� �� ���� �8���� �B� ��� �� ��� ���� �B� ��� �� * ��������� 2'�)7(�)() '((>

������� C 9�,�/��� C ������ 5 � ����� 5 �� �� H��!����� ��� ��� %� �����!�� � �� @�$ �B� ��� �� ���� �8���� �B� ��� �� ��� ���� �B� ��� �� * ��������� 22�'4(�'G? '((4

�� Q ���%�� H5 � !� H �� ��� 5������� �� +�623' �!���� � !��!��� ���� !��� ���� ������ � ��� �� * ��� ���� 2>�;'�;4 2???

� �� � & ��� �+ 6 ��� +5 � �� � & ��$�! 5 &�� � �� ���� �� �� H���!���"���� % �� � � /�� ������� ��� ��� ���� � ���� � ��� �� �!����� )-* 5�� ��� ���� 2����+3 )�''>G�''4? '((>

C/��!"�� +6 6���� �H ��� �� =��� � �+ +�� ��� H� &� �!� 5H @� �CH� 6�������������� � ������� % ������#�� .�� ����* � ��� ���2;(�)'2'>�)'22) '((>

���� � ��!���� @� Q�� ������� :I8����"� �� � ���� ����� ����� �* �5��� �����* ��� � ����� "�� ��%% � �"� ���� $� ���#���8Q �� �* ���������� %��� 'G;�)>4�)>7 '((?�

���� � ��!���� @� Q�� ������� :I8����"� �� � ���� ����� ����� �* �5��� �����* :I86�$������� �� "�� ��%������ � ������!� � 5 ���������N� �$� 6 ������� # ������ !����!�� %��������� ���� �8���� �* �������� �� %���'G;�)>4�)>7 '((?#

5����� 5 @�/�� � 3/�� 6� �� ��!���� % �� !��������! ����� %�� � ������ !��� ��� ���' /��� ������#��* � ��� ��� 2;(�'>?G4�'>?7? '((>

5 �" � ���� � �!���� + ��� � �� �$�$ � �� % �� ��� � �� ,��!��� ��!��� 0��� �� ���� � �� �!��������! ���� ������ % ���� �8���� � ��� �� *� ��� ������ 2)�2''�222 '((;

=�N��� � ���!� � �/ ��/ H� 6���%% H = ��� &H� � 0���� ��� ��!���� ���������#����� % !��� ��� ��� !�� ��� !��� . � �� �����" � ���� ���� ! ���*� ��� ��� '24�')>'�')42 '((>

�BC % �H ���������� �+ � ���� �� 3��!���8����! � ��� �#�� % ��� � ��,��!���� �� � �����!�� �* � ��� ��� '?4�7?G�7'G '(7G

����� � H� ��#�# �� +����8+#� � ���� � �BC % �H +����� @H� ������������#�� � ������� � ��������� �� 6���� ������! 6 �������* � � �����7(�'GG4�'G72 '((2

�$ ����� 5 ���$ � �� ���#� � ��� C J�� 6 ��� �!�� 5 ���� 5� ����������!��� % �� ���� ���� !��� ��� ����� � �����#� %� � � !��$ ! ����� ���* %���� 2;G�)7;�)7( '((4

�"�/� 5 ���#���� � C �� � �� �� !��������! ����� % �� ! �� ��� ����� !�� �$������ ���!��� � /��� ��� ��%% � �� �� !� �* ���� � 7�'G''�'G'G '(7(

6����� 5 = ��� &H� C�� ��!� % � ���� ��� �#�� �� 5����8���#� 3���� C��� � ���� ���� ! ���� � ����� ��� ������� � ������� % � �������������"���� ��� ���#���"���� ��� ! ��8! �� !���!�* * ��!� ��!�� ��������*� ��� ��� '?;�;GG�;74 '(77

��!���� @ C�� �6 &����� +� 5�""���� 3 3���� H@ ��� �H� ���� �8���� � ��� �� ���� � � 4 !5 ��� �$�� � !����� )-2'8-2>- � ������������� '?4�)4G�);? '((4

� ����� 5 3�� C3 ������� C �� ��� � �������� ��� �� �!��������!� ����� �� �� � �$���� �� � ������� $������� ��� � ������� ���� ��������� ��������� �� ���� �8���� �B� ��� �� ��� ���� �B� ��� �� * � �������� %�2�(�'G '(('�

� ����� 5 ������� C ������ 5� ���������!���"���� % � ���� �� ��#��� ) ���� ���� � � �!��������! ! ��� �� 6 ������� $������� ���� �B���� �� ��� ���� �8���� �B� ��� �� * � �������� '7�4??�4?4 '(('#

������ � 9���� +5 C/�� 6� �� ��� ����!����� #���� % ! ��8! �� ��� ��� #�!��� ����* ������ )G>�)2G�))G '((4

��� � & 5 �� � �8H 9���#��� � C� ��������� � "�� C�������� � � 6 �������!����!�� # ������ ����� �8���� �� ��� � � ��N!���!������� � ���� ����������!� � � %��� * 5�����6� ;�2>>�24' '(G2

&��� 95 5��� � �� @���� ��� 3��!���8����! � � �����"���� % � ������!��� ��� �� !����� � ����� � �����!�� �* � ��� ��� ((�22''�22'4 '(7>

� 1���8���� 9��� �� 9��!�� �"� *�����!��� :!� �#�4 - ��� ; <6��%; �"!� %������ 1����������� �����&��! � . ������ (� �1����8 =� ��� !� >���������� ������!?�"��� 3����� �����!@

� �� ������

H��!����� ��� ������� #����� �H��� �� !��� � #� �������� �� ��.��%% � �� � � � ��7��! �7��# �4�8�� 4���" 4���" �4�� ��* 5������� �� �7��! � �7��# ��$ ��� � H�����!��� � /��� �����! ��� ��� �I���� �� �� '((41 ��/� �� �� '((;� /� � �� �������� �� 4���" 4���" � 4�� � ��� ��� ���

��� � �� � ����" � �� ��8� ����" %��� % H�� �6������ � �� ��

'((>� #1 +# ���� �� �� '((>�* 5������� �� �4�8�� � �� �

��8� ����" H�� �5!@���� �� �� '((4 '((;1 H����� �� �� '((;�*��������!� ��!�� �������� % ���� #���� � %�� H�� ���� ���

����� ��� ��8�� !�0! ����#�� � �� %� � �#� � ��$�� !�� � ��� !������� � � /��!� �� �����!������ � ��%�� �� �� ��$ ��������

I��* ''> =�* 4 5+J 2??? ������� �� ��� ����� ����

Page 2: A Homozygous Missense Mutation in the Cytoplasmic Tail of beta4 Integrin, G931D, that Disrupts Hemidesmosome Assembly and Underlies Non-Herlitz Junctional Epidermolysis Bullosa Without

% ��8� ����" H�� �5!@���� ��� ���� '((G�* + �����!���� %��% ��8� ����" H�� ��� $����� � �� � � � ����" � ������! # ����

��� �� ����0 � #� ������8����! � #���� �� ���� ������ ��� !�� ���� �������� ��� % � !����� � .��� ���� ��� � ���� ��� ���������� ������ � ��� &�%% '(72�* �� �� !���� ������� %

���� %�� % H�� ������� ��$�$ � ��� �� �������� � #�� �4�8�� ��� � � � � !�#������ % � ��� �� ������� ������� �� � ����! ��� ������� �� �� 4���" � � % ������� 4

�5!@���� �� �� '((4 '((;�* ��������!� ������ ����� ������� DI !���� � � ����������� 4 ����#�� � �� ������� �#� �

5����!���� � ! �$ � H�� 22 '(((1 � $�� � H������ ; 2???1 �!! �� � %���#��!���� 9 #����� ' 2???*

� ����� � -� ��� �� ��* ������� ������� � ����� �� % � �����8�� C���� :��$ ����� �!�� % 5 ��!�� ;G +������!�� C���� 9����� 7)?�??'' H����* ������ �������O� �*����� 8�*�!*,�

���� � -��� �7������� �� ��!��� !��� �!��� ��! #�� ��$��!� "����������� ����� � ��; �!�����!��� ���4 ��� 9�" �� !���� % ����� !����� �� � � � 9� ��� ��#���� � � ���� % �� ���� �� �' + ) � : �� �� ��# � � /��� ��' ������ !��� �� '�1 �82? ������� DI!���� � �� +�1 @�) ����8�; ��� ���� �� )�1 )�' ����8�> ��� ���� �� ��1 @�) ����������� 4 � :�1 ��� ��G*2 ������� I !���� � �9 �� ��!��������#�� �* ����� �!��$��� � �; � �> ��� ���� �� / �� �� �� !��� �� ��!� / �� � ���� ����� !����* � �!��$��� � ��� �� ��� DI !���� � �������4 ��� ��� I !���� � �� �� ��� ���� �*

���� � %(� ! !���� �# �4 ��� ��$�!��! ���� �� ���!�� ; <6��%* � �� � %� ��� � �� ��� � 0��� �63�� ��/� 63� �����0!��������!�� % .� 24 % �7��# %�� ���� ���� ���6�� ��� 0$ � �� � �����$ ����� !������3��*�* �� ����� 0��� �3�@�� ��/� �� ��8������� � � ����� . #��� ��� �� �����0 � ��8��!�� %�� �� ���� ��B� �=+ �6�� �!�%������8� �����$ � � � !����� ���* � �� ����� %� RR6�BB 63� ����!� %�� �� ���� ��B�� ���! �=+ /�� ��. � /��� �� !���� �=+*+� ��/� �� �� �/ � 0��� ����!�� � �� �9�6����1�� ���1� ��� ���� % 63� ����!�� � 8$ ��� �/ #���� % 2GG #� ��� '74 #� �� �� ��8�� �� /� � �� ��� �� ����� �� � #��� % >;2 #��� � � �� ��� �� !�����* � �� ����� ��� � ��� !���!� ��� � -� �!��� % .� 24 � ������� � ���"���� @8�8+ ��������� �� ��!� ��� ���8��� 2G(2 /��!� ��#������ � �� �������! �!�� � ��8�� �@+3� %� ���!�� �@@3� � ������ �@()'�*

���� ������� �� ��� ����� ��� H�:�=+� �9 =I���@+�I� ���5+����@J

Page 3: A Homozygous Missense Mutation in the Cytoplasmic Tail of beta4 Integrin, G931D, that Disrupts Hemidesmosome Assembly and Underlies Non-Herlitz Junctional Epidermolysis Bullosa Without

� � ���� �� !������� � � ���#���� �������� �� ���� ��� �� �H����� �� �� '((;1 5!@���� ��� ���� '((G�* � ���� � ��� / �� � �� � ���� �� /��� ����!�� ��8� ����" H�� /����� �����!��� ��� /� ��/ � ����� ������������� %� ��� DI ���������� 4 #�� �� /�� / / � �#� � � � !� � ��"�������� �� ������� /����� �� �> ��� ���� � � *

+ ;78�8�� H���� � ��� /�� � % �� � %� ��� ��� �� % ��% 8���������8����! � ���� %��������* ��� � ! �� � ��� ��� / � !�������� � ��� � �� � ��$��� � ����$ �* �� ���� ��B� ������ ���!����!�� .�������� ��!��� � #���� �� �� #���� � !��� �� �� ������� ���� %�� �� �� % '2 � ���� ���$ ��� !�� %�� !������ ��� % � ���� �� � ������ #� �� �� % )? � ���� �������� ����� �#� �! % �.������ ��� ��#�! ����* �% � � $��! �� ���� �� ���� ������ % �������� ������ ������� � �� $��� �#���������� ��*

����������� ���!�� � ��# ��� ���� #���� � %������* ������������� � !��� ��!��!�� �� � ������� !!��� � �� �� � $ � % ������ ��!��� �� �� ��� �* � ������� � RR���8%%BB�� �� �� /�� !� ���� #� �$ �* � ��#���� � � �� �� � ��� ���� � / � � !� �� � �� ���# � ��� / � ���8������!* &�� ���� % �� ������ ��!��� ��#,�! �� � �� ���������! � ��� ���� � /�� ��� #� �$ �* 3�� !����# �/ � � ����� ��� �� ���� 0��� ��� ��� �� � ��� ���� �/ � � ����# �*

����K�� �! �! /�� � �%�� � ����� �� %��/�����!���� ����#�� �1 ��' ������ !��� ��� ��!��������#�� ��� �� �� �� '((2� '�4 ����82)? ��� #������ ������� ����� � ��6+@'� ��� ��!���� ����#����/���# �� �� '((?� 4� ����8�6+@' ����� �@ ��!��������#�� �������� �� �� '(()� 2)) ��� �82? ������� DI!���� � ��� ��!���� ����#�� � ��/���# �� �� '((?� @�) ����8��� ���� �; ��� ��!���� ����#�� ���� �# ���� �� '(('� )�' ����8�> ��� ���� ��� ��!���� ����#���3� ��!� �� �������� �� +�� � � 3+� 6'�4 ����8�)��� ���� ��� ��!���� ����#�� @�) ����������� 4 ��� ��!���� ����#�� �� ��8��# 3��/� � �/� ���� . :*C*� ��� ��G*2 ������� I !���� � ��� ��!���� ����#���3� ��!� �� ���������*

����� �!��$��� � �; � �> ��� ���� /�� ��� ��#������������������ � /� � !���� � /��� ���� �� !���� ����� ����� !���� �� �����* � �!��$��� � �� !��� ���'� �� �� �� ����6+@' ����� �� ��/�� /�� ��� �����0!����� � ��! � #�� �� !���� � / � � �� ���� � ���� �� ��� ������ �� �; � �> ��� ������# ����* � !������ �� �������� ��� ����� %� ��� �� ��� DI!���� � ������� 4 ��� I !���� � ��� �) ��� ���� ����#�� �/�� �� � ��! � �� �� � � ��� ��*

:���� � ���! �=+ .���!� � %�� �� ���� ��B� � ���� ���#�� �� !���� �������� /�� � �%�� � �� � �!��# � �� $������6������ � �� �� '((G1 5 �� �� �� �� '((7�* ��� K� ����$����� .�� % �7��! ��� �7��# �@ ����� :;;42(8:;;4>'� �� / ���� �4�8�� 4���" 4���" 4�� � ����� ��� �4� / � �����0 � #� ���� ��� !���� � �!��� �63�� %��/ � #�� � ����� . �������� ����� !�%������8� �����$ � � � !��8��� ���* ���� ����� � $ �� � � � ����� . #���� �� �� 63�����!� �������� .� 24 % �7��# #�� ��� /� � �� 63�����!� /�� ����. � /��� !���� �=+ ����!���$ % ���"���� � -� �! $������ �� ��* ��#� -� �� ��� !� ��!� 8��� � -� �!��� % �� 63� ����!� � ������� � � ��"����@8�8+ ��������� �� ��!� ��� ������ 2G(2 �� ��* ������!� ��� ��������� !�$ ��� � ���!�� � ���� �@@3� � � �������!�!�� �@+3� ��� �� � ������ � @()'�*

���� ������� !� �� � � �$ � ���1� !�� ��� * � .!��� �� ����#����� ���� �� ������� �� � � �� � ���������� / � ��!� �%� ���� �7��# � -� �! $������ �� � ���! �=+ %�� 4? ������� ���4? H���� � ����� !�����* �� 63� ����!� #���� � �����%�/��� ���� � 4�833+@@3++@+33+3+338+��8)� ��� � 8$ �� ���� � 4�8333@�3�@33��33338+3�38)� /�� ��8� �� � /��� ���1�* = $�� �! %� @()'� /�� %��� �� ��� %�� !���� �=+ �� ��* 9���� � ������� �!� ���� #� � � �8

���� . �������� %��� � $�� �! %� �� ����� �������� �� �7��! �4�8�� 4���" 4���" 4�� � ����' � �4�*

3����!���� �� ���� �� ��� ����� %���� !����� �� /��� ��8� ����" H��* �� ��� �������� ������� % ���� /�� �� � !��� ���� ����� �� ���� /��!� �� �� � �� %� -� ���� �� H�� /��������! ��� ��� �5 �� �� �� �� '((7�* �/ $ � �� ���� �� ���� �������� ������ ������� � ����� ���� ���$ % ��� �����!������* �� �� !���� ������� �� �� ���� �� ���� ��� ���� ����� �� ������� �� �7��# @()'� ��� � ���� �� H��/����� ��� ����� % �����! ��� ��� ��� �� ������� ����!�� ����� ��8� ����" H�� �� �� � � �� � �� ���� �� !��� ����� !���" � ��� ���� �� ��� # !��� � #� �������� �� �� � � � �!���� ��� DI !���� � ������� 4 � �> ��� ����*

(� �����)���, ��������� ��- �- %��'��� )�� ����+� ��5" ��'�+,- 7��

���+, &�� ��������+ ���� ', ����;;�+ )�� %���<� 0������� )��� ���

����, �) �+�����* %���� �+ ������ �) ����* ', � ���� )��� ��� ����,

�) 5����� �+ (��)��� �) ����* �+ ', ����� )��� ���� 0�������* ���0�

2=.3 �+ 7�� %����� 7������� 1�� %�- 7�����> 5������-

5����� �� C����� ����� � ������ �����"� �C������� �/���# � ��� ���� =����� ������� �������

H�� +* 5!@������ ����� �� % � �������

C���� :��$ ����� �!�� % 5 ��!�� 9����� H������ ����� �� % � �������

������� :��$ ����� �!�� % 5 ��!�� +��� H������ ����� �� % � �������

C � :��$ ����� �!�� % 5 ��!�� ��� H�����:��� % ������ �� @������ �!�� % ����� �%�����!�

�!�� % �!� �! =���� :��$ ����� +�!�� H������ ����� �� % 3 �� ��� 5� !���� 6������ ��* H��B� ������� % � ������� �� @��B� C���B� 3�� � ��� �� �����B

��������B 5 ��!�� �!�� �� �����B ������� ���� :*C*

��9���=3��

+# ���� � @������ 589 I����� H �� ��� � ����"B� ,��!����� ��� ������� #����� ������ � � �������� �� �� � � �4�� �3 %� �� ����� 2 ��#���� % ��! ��<������� ��+5==84�* ������ ���� ;�2((�)?> '((>

��/� �+ @�� �@ ��# �� I+ � ��������� @@ ������ @ 3���� � 3��� �&@� � % !��$ ��� ���� �;�> .�� ���� �� �� ���� % ���� ��� /���,��!����� ��� ������� #����� ��� �����! ��� ���* � ����� ��������'?G�)7>�)(' '((;

������� � +����� 5 �#����� � �� ��� 9���� � ������ � % ���� � %� �������!���� ����8#�� � �� � �#��� "� ����#�� � ����! � #� ���#� ����� ��#����� ! �� ��� � !�����!� � /��� ���� ��8���� $���� �����%������*� ����� �������� '??�)'?�)'4 '(()

�� �� J =����"�/� J : ����� H �/���# C� � ���0!���� % � � /� ��� ������ ��� �� ��'� � ��,� ���� �� !���� ���� !��� �� %����� � � ��� ���� �* � ��� ��� '';�'>(G�'4?; '((2

����� � � &�%% C� @ � ����" � ������! # ���� ��� ������� #�����* ������������ ''7�)G4�)7> '(72

H����� 59 H�� 53H5� � � � C �� ��� @ � ����" � ������! # ���� ��� ������� #�����* ���� � '7?8�� #����� � ������� ����� � � �������84 � 0!� �!�* ���� �������� ')2�'>4�'4? '((;

5 �� �� H� 6������ � � 5!5����� H� �� ��� 6����! ��� ���8,��!����� ��� �������#����� ������ � 5������� �� �� ��� ���� �> � � ��7��#3 �� �/ ��� ��� ����� ��� /��� ���� ��� �� * �� � �������� ')(�7;2�7G' '((7

5!@���� H+ @�����!� � 3�������� +5 �� ��� 5������� �� �� '7?8��� #������ ������� ����� � ��6+@2� � ������ �#��� � ��� ������ !���� �� �4�8��3 �� � � ����" � ������! # ���� ��� ������� #�����* ���������� ''�7)�7; '((4

5!@���� H+ ������� � @�����!� � �� ��� + ��"���� � � ��� ������� �� �� � � �!���� �� '7?8��� #����� � ������� ����� � ��6+@2� �� � %�����/��� � � ����" � ������! # ���� ��� ������� #�����* � ����� ��������'?;�GG'�GG> '((;

5!@���� H+ ���� �+H� �� �� % ���������!� ������ �� �� �������� % �� ��8� ���� %��� % ,��!����� ��� ������� #�����* � �������� %� '>�;7�G4 '((G

�/���# C C��� �# !� H ������ � 5���� �5 C�� � � ���" �+ 9���� &&��� � ��� ������ ���-� * * 3����!� ��"���� % � ��,� !������ ����� �� �� � ��%% � ������� ���� � %� ! ����� %��� % ���� ���* �))�������>4�2?G�22? '((?

6������ � � 3�������� +5 +�� �� � ������� � �����$��� C :��� H�5������� �� �� �2 !���� � � �4�� �3 % �������<�������84 �� �� ,��!����� %��� % ��� ������� #�����* ������ ���� ;�2()�2(7 '((>�

I��* ''> =�* 4 5+J 2??? ������� �� ��� ����� ����

Page 4: A Homozygous Missense Mutation in the Cytoplasmic Tail of beta4 Integrin, G931D, that Disrupts Hemidesmosome Assembly and Underlies Non-Herlitz Junctional Epidermolysis Bullosa Without

6������ � � 3�������� +5 @ � !� �� &����� �& ���� �� �� 6��� ��/5� :��� H� + ��"���� ��� �� ������� �� �� �) !���� � � %������� 4 �4���"3 �� � ����" ,��!����� ��� ������� #�����* ������2>�)4G�);? '((>#

6������ � � C���" C D� J ��!�� �8��� ���� � :��� H� @ ���! �����"����% �� ��� ���� # �� > � � ��7��#3� � ��"���� ����! 8��� ������� �� ����� �� /��� �����! ��� ���* 4�' ����� G;�72)�7)) '((G

��� �# �� + 3���#�� H H���� � � �� ��� �� ���� �;<�> !��� . �� �!���" � ��� ��� ���� � ���� ����� � ��,� �� �� ��� ���� ! ��8#�� � ��� �#��� ��� ���* � ��� ��� '')�(?G�('G '(('

I���� 9 +# ���� � 3�������� +5 :��� H ����� H86 5 � ��""� @�5������� �� �� � � %� �� ��� ���� �> ��#���� �� ���!��� � /���,��!����� ��� ������� #����� /��� �����! ��� ���* ������ ���� '?�22(�2)> '((4

�� �:��� *������ �# 9�� � >�����!� '��!� ������

� �� ������

+ � ! �� H� ��� � #� ��� � �� �� � ��� � �� ���#����� �� %���8� �� ��� � �����!�� !����� � ����� � %�� �� ���� %34G<��; ��! ���� � �� �� '(((�* � ���� % �� � �����!�� � �!���� � I ��� �� �� % !������ � � ���� /��� �� !����������� !������� ���/ � �� .� ���� % �� !����� � �� ������� '(* 3 ��� ��� � ���� � �� �� !���!��� � ��%% � ����� ��� ��� ������ '? �/ $ �* & � ! ���� ��� ���#���� � ���8� ����� � �����!�� !����� � %�� ��! /��� �� ��� � � ��!#�!������ �� �� � �� �� ����� #� ��� � �� ��- � !��� �� !����� !������� �� �� ����� ��� ! ��� / � �������� � ����� ������ �;' � %�� � ������� �� �� �#����� � ��%% � ����� / /��� ��� �#���� ���� ��� �����$ ���!� � ��� ��� ����* 6������ ��� � �����!�� � / � ����� � ����� � ���0 � ���!� % ����� �!��# � %� �� ���#����� �� % ���8� �� !���� � �����!�� !����� � �&������� �� �� '(7G�* ��� K� �� ���� % � 'G*48�8�� �#�� /�� � �$ � ��� ��!�#�� � %� G � �� � 0� � � �����8!�� 8�95 �@�#!8��� S'?G>>�?'(� /��� 4 : � � �� ������ �'? �� � � �� � ����� � 5���� �� 5���� �� @ ������ ���

'?� ����#���!�<������!��!� �'??? : � � �� � ��!����� ' ��� � �� ��� ����!�� 2*4�� � � �� ����� ��!��1 @�#!<��� ����� �/��" ������ �� >�3* �� ��� ���� /�� �� � � ����� � %���� � ���� /��� �!��� � ��� %�! �� !�� ��� �� ! � ��� ��������" ��?*24M<?*'M �������8���+1 ��!�! �� +���!�/�� �/��" ������%� '? ���* 3 ��� / � � � � �� � � ����� % 4� '?> ! ��� � � !�2

� ��!�� � !����� K���� �� � 0� � � �����!�� 8�95 ����� 8� �� � /��� '? �� � � �� �@9 ��� '?�'? 5 !�� ���.��* ����!����� � ���� !������ ?*?G �5 !��!��� � !�! �������� ��� � � ������ ����% ����� % ��� ��� ����� � �����!�� !����� � �� ������ �� �� '(7?1 H �� � �� �� '((?�* +� !�K� �!� ! ��� / � ��#!����� � #� ��������"���� �?*'24M<?*?4M �������8���+� ��� � � � �� )� '?> ! ��� � � !�2 �� � / !����� K����*

5����!���� � ! �$ � =$ �# � 2> '(((1 �!! �� � %� ��#��!����9 #����� 27 2???*

� ����� � -� ��� �� ��* ����� 5�N�� � ������� %�N� �� �������� ��N������������ '22 3�8)?'2 � �� �/��" �����*

���� � *!��������� �� � �##��� �!�� �# �� ����� ��������!� ������ #��� $!���� �!��!�� ��� ����K�� �! �! ����� ������ �� ����8���8� ����� ����#�� ��6)> �+C�� � $ �� � �� ���#����8� �� % � / ��8�����" � � ����� � �/�� ��!����� � �� ������� �#��� /����� ; � �%� � � $���� % �� !��!��� !�! ������� �� �� � ���� � '*2 �5* �� ���#���"���� % ��� ��� ����!��� !��� ��� ��! ���! �� #��� �� ����!�� � %������ % !��� ���8� ���� � ��� �! ��������� ��� ����!��� � /����� �� ��� ��� %��� �� ��� �� � #� �8!��� ����������� ���35+ � ���� ��%� %�� �* C �� � 5�. 6���� ������� 9� �#��� @ ������ ��� � ���� �� ) ����)� �������� ��� ��#�����1����#�� � / � ���� � �� ��##��� ������� �� .���! ������ ����� %#�!��$����8 .�� �� � ����� ���) �+����� �� �� '((>��* � ��# � ���%�! 8 .�� � ��� ��� �� !�� � ! ��� / � ��!�#�� � /��� �� � �� !��$ ����#�� � ���� � 0.���� ��� � �� �#���"����* �.�� ���� % ��� ���!�� # !���� � � �� � ��-���������$ ���! �������� !������� ������������! .���� ��� / � � �� !������* ��� �$��!��� .�� ������ � �����!�� � !����� � ��� � �/ !��!��� � ���� !��!��� !������� %�) � /�� ��� �� � #� / �� �� #�� ��������* ����#��� % /�� ! �� ����� �/ � ��# � /��� ����8��$��!��� ����#�� ��J4 � ���� ��%� %�� 9* &��� �� ���� 3��! � � � ��!� 9��� ���� :*C*�* � ����! ��%% � ����8��� !��!��� !�! ������� /�� ���� � � '*2 �5 �� � 0� � � �����!�� 8�95 �C�95 � ���� C�95� � � '*7 �5 �� ����� � �� � &�������B5 ���� � �&5��* 6��� � ! ��� / � � �� � � %�� ��������� ��/��%�!��� ' � # %� !��!��� � $���� ����� C�95� � 0� � � �����!�� 8�95 !����� � ���� /����� ����� � ������ /��� �@9 � !�� ���.���*�� 6�! �� �8�������� % �� �����#�� /�� �� � � $����� ��������� �����% � % �� ��� ���*

���4 ������� �� ��� ����� ��� H�:�=+� �9 =I���@+�I� ���5+����@J