Alteraciones histológicas hepáticas

Investigación Clínica

ISSN: 0535-5133

[email protected]

Universidad del Zulia

Venezuela

Arrieta-Mendoza, Darwuin; Perez-Arevalo, Maria L.; Luengo, Amelia; Hernández, Juan P.; Lista-Alves,

Deisy; Mosquera, Jesús

Alteraciones histológicas hepáticas e incremento de proteínas séricas en pollos de engorde

alimentados con dietas suplementadas con Saccharomyces cerevisiae.

Investigación Clínica, vol. 48, núm. 4, 2007, pp. 431-443

Universidad del Zulia

Maracaibo, Venezuela

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=372937669004

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Alteraciones histológicas hepáticase incremento de proteínas séricas en pollosde engorde alimentados con dietassuplementadas con Saccharomycescerevisiae.

Darwuin Arrieta-Mendoza1, Maria L. Perez-Arevalo2, Amelia Luengo2,

Juan P. Hernández3, Deisy Lista-Alves1 y Jesús Mosquera4.

1Cátedra de Farmacología y Toxicología Veterinaria, Facultad de Ciencias Veterinarias,Universidad Central de Venezuela. Maracay, Venezuela.

2Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia.3Instituto de Investigaciones Biológicas, Facultad de Medicina, Universidad del Zulia.4Instituto de Investigaciones Clínicas “Dr. Américo Negrette”, Facultad de Medicina,Universidad del Zulia. Maracaibo, Venezuela. Correo electrónico: [email protected]

Palabras clave: Hígado, Saccharomyces cerevisiae, hepatotoxicidad, fibrosis,pollo.

Resumen. El presente estudio fue realizado para determinar el efecto delalimento suplementado con cultivo de Saccharomyces cerevisiae (SC), sobrela morfología hepática, las actividad sérica de la aspartatoaminotrasferasa(AST) y la alaninoaminotransferasa (ALT), la concentración de proteínas tota-les (PT), la albúmina, y las fracciones �, � y � de las globulinas, en pollos deengorde. Se utilizaron dos grupos de pollos Hubbar x Hubbar (n = 16 cadauno), que recibieron la dieta T1 (alimento comercial sin SC) y la dieta T2 (ali-mento comercial con 0,1% de SC) durante 42 días. Se obtuvieron muestras desuero sanguíneo y de hígado, para los estudios. No se observó cambios ma-croscópicos, ni variación significativa del peso hepático relativo. Microscópi-camente se evidenció mayor porcentaje (P < 0,05) de lesiones hepatotóxicascon proliferación/dilatación de conductos biliares y alto grado de vacuoliza-ción en pollos del grupo T2. La tinción tricrómica demostró mayor grado de fi-brosis perivascular en T2. La ultraestructura del T2 reveló células semejantes afibroblastos, abundantes fibras de colágeno, vacuolización y alteración de lamatriz citoplasmática de hepatocitos, ruptura celular y edema mitocondrial.A nivel sanguíneo, no se detectó diferencia en los valores de AST y ALT. Seapreció aumento de las PT, disminución de la albúmina y aumento de las glo-

Invest Clin 48(4): 431 - 443, 2007

Autor de correspondencia: Darwuin Arrieta-Mendoza. Cátedra de Farmacología y Toxicología Veterinaria, Fa-cultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Central de Venezuela, Apartado Postal Nº 4563/2101-A. Maracay,Venezuela. Telefax: 58-243-5506250/6440. Telf: 0414-966991. Correo electrónico: [email protected]

bulinas (��, � y �) a los 42 días de experimentación. Estos hallazgos indicanprobables alteraciones hepáticas por consumo del SC, existiendo el posibleriesgo de agravarlas, cuando se prolongue la exposición a esta dieta a las avesde corral.

Histological alterations in the liver and increased serumproteins in chickens fed with diet containing Saccharomycescerevisiae.Invest Clin 2007; 48(4): 431 - 443

Key words: Liver, Saccharomyces cerevisiae, hepatotoxicity, fibrosis, chicken.

Abstract. The aim of this study was to determine the effect of diet sup-plemented with Saccharomyces cerevisiae (SC), on the liver morphology, se-rum activities of aspartateaminotrasferase (AST) and alanineaminotransferase(ALT), and the serum concentration of total proteins, albumin and the differ-ent fractions (�, �� ) of globulin in chickens. Two groups of Hubbar x Hubbarstrain chickens (each = 16), were fed with a diet T1 (commercial food withoutSC) and T2 (commercial food with SC) for 42 days. Thereafter, animals weresacrificed and samples of blood and liver were obtained. Macroscopic featuresand relative weight of livers remained in the normal ranges in both groups.High percent of T2 chickens (p < 0.05) showed hepatic alterations with prolif-eration/dilation of biliary ducts and increased degree of vacuolization.Tricromic stain showed elevated perivascular fibrosis in T2. The ultrastructuralstudy showed fibroblast like cells, increased amount of collagen fibers, cyto-plasm vacuolization of hepatocytes and loss of cellular and mitochondrial in-tegrates. No significant differences were observed in the activities of AST andALT between groups. Increased concentrations of total proteins and ��, � and� globulins and decreased albumin were observed in the serum of T2 group.These findings may be related to a hepatotoxic effect of SC and chickenscould have the risk of further increased hepatic failure with a prolonged expo-sition to this diet.

Recibido: 06-09-2006. Aceptado: 15-02-2007.

INTRODUCCIÓN

La levadura de Saccharomyces cerevi-

siae (SC) es frecuentemente utilizada en laindustria de los alimentos destinados a con-sumo humano y en nutrición animal, desta-cando la cepa 1026 por sus beneficios zoo-técnicos (1). En avicultura existen frecuen-tes ensayos que incluyen el uso de SC en ladieta, principalmente como promotor de

crecimiento (2), probiótico (3) y adsorben-te de micotoxinas (4, 5). Varios de estosefectos son debidos a los componentes desu pared celular (6-8) a los que también seles atribuyen propiedades inmunomodula-doras (9, 10), principalmente por incre-mentar los niveles de anticuerpos en aves(11-13). Algunos de los mecanismos parainducir estos efectos aún no están claros(6, 14).

Investigación Clínica 48(4): 2007

432 Arrieta-Mendoza y col.

Recientemente se ha asociado la pre-sencia de anticuerpos anti-SC en algunaspatologías hepáticas en el humano, princi-palmente la cirrosis hepatobiliar primariaautoinmune (15), lo que ha incluido a estalevadura en la lista de los probables agentesrelacionados con la patogénesis de esta en-fermedad y otras alteraciones idiopáticasasociadas con trastornos gastrointestinales(16, 17). El uso de dietas con SC o de loscomponentes de su pared celular en aves decorral, ha sido dirigido para valorar los índi-ces productivos, inmunidad humoral, equili-brio en la microflora gastrointestinal, mor-fología de órganos y valores de química san-guínea entre otros parámetros (5, 10, 13,18, 19); sin embargo, existe escasa informa-ción acerca de los cambios adversos en lamorfología y la función hepática de estasaves. Por lo tanto, el propósito de esta in-vestigación fue evaluar la morfología hepá-tica, la actividad sérica de aspartato-amino-transferasa (AST) y alanino-aminotransfera-sa (ALT), así como, las proteínas totales, laalbúmina, y las fracciones séricas (�, � y �)de las globulinas en pollos de engorde ali-mentados con dietas con o sin SC durante42 días.

MATERIALES Y MÉTODOS

AvesSe utilizaron 32 pollos híbridos (Hub-

bar x Hubbar), machos, de un día de edad,procedentes de una incubadora comercial,seleccionados y vacunados contra las enfer-medades de Marek (Virus de Herpes delPavo), Gumboro (cepa intermedia) y New-castle (Cepa La Sota) y revacunados a los 7y 16 días de edad contra Gumboro y New-castle. Las aves fueron pesadas y distribui-das en corrales de tres metros cuadradoscada uno, a razón de 5 aves/m2. El piso fuecubierto con concha de arroz previamentefumigada sobre la cual se ubicaron los co-rrales y donde permanecieron las aves du-

rante 42 días. Se comenzó en la primera se-mana con criadoras, agua y alimento admi-nistrados ad libitum. El experimento se rea-lizó en el Centro Experimental de Produc-ción Animal de la Facultad de Ciencias Ve-terinarias de la Universidad del Zulia, en elMunicipio La Cañada de Urdaneta, estadoZulia, Venezuela; zona clasificada comobosque seco tropical, con temperatura pro-medio de 30°C.

ProtocoloLas aves fueron separadas en dos gru-

pos de 16 animales cada uno (T1 y T2 ). Algrupo T1 se le alimentó diariamente duran-te 42 días, con una dieta comercial y al gru-po T2 con la misma dieta comercial suple-mentada con cultivo de SC. En el últimodía los animales de cada grupo fueron sacri-ficados para la obtención de sangre y tejidohepático. El cálculo del tamaño de la mues-tra se determinó mediante la distribuciónno central de F (20).

Alimento (dieta comercial)El alimento de la dieta control utiliza-

do para este experimento fue producido enuna fábrica de alimento comercial (Nutrien-tes de Occidente C.A, NUTRIDICA. Maracai-bo, Estado Zulia, Venezuela), a base demaíz, sorgo venezolano y harina de soya, li-bre de aflatoxinas (21). Se emplearon dostipos de alimentos balanceados en el ensa-yo: iniciador (proteína: 23,2%; grasa: 8,4%;fibra: 2,8%; energía metabolizable EM/kgMS: 3150 Kcal) que se ofreció a las avesdesde el día 1 hasta el día 21 y el alimentofinalizador (proteína: 19%; grasa: 10,5%; fi-bra: 2,9%; energía metabolizable EM/kgMS: 3000 Kcal) desde el día 22 al día 42 delexperimento. Estos alimentos fueron elabo-rados en función de los requerimientos dela línea genética de los pollos de engorde ysuplementados con aminoácidos, vitaminasy minerales bajo las formulaciones indica-das por el “National Research Council”

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Alteraciones hepáticas por Saccharomyces cerevisiae en pollos 433

(22). En los 2 tipos de alimento los valoreseataban calculados y en la energía metabo-lizable (EM/kg MS) los valores son tabula-dos. El cultivo de levaduras utilizado estuvocompuesto por células de la cepa 1026 deS. cerevisiae, liofilizado y microencapsuladoen �-glucano para protegerlo y preservar suviabilidad. La levadura fue estandarizada auna concentración mínima de 5 billones delevaduras vivas por gramo, según las especi-ficaciones descritas por entidades comer-ciales (Alltech® Corporate Headquarters,Kentucky, USA.). La dieta experimental coninclusión de esta levadura se hizo a razónde 0,1% del alimento balanceado según loreportado por otros autores (2).

Análisis sanguíneosLa obtención de sangre para valores de

química sanguínea se realizó mediante san-gría por un corte con bisturí en la regióncervical. La sangre se colectó en tubos deensayo estériles sin anticoagulante para de-terminar la actividad sérica de AST y ALT(21) y las concentraciones de las proteínasséricas. Para medir las proteínas totales seutilizó una metodología previamente descri-ta (23). Las concentraciones séricas de al-búmina y las fracciones de la globulina (glo-bulina-�1, globulina-�2, globulina-� y globu-lina-�), se determinaron mediante elec-troforesis (24).

Evaluación macroscópica y microscópicadel hígado

Una vez obtenida la muestra de san-gre, se realizó el sacrificio por dislocacióncervical para hacer la evaluación macroscó-pica y microscópica del hígado. Luego de lanecropsia se retiraron los hígados para cal-cular su peso relativo (5). También se toma-ron porciones de cada hígado colocándolosen formalina al 10% tamponada, para elanálisis histopatológico con hematoxilina yeosina (H&E). Los grados de severidad delas lesiones hepatotóxicas se clasificaron se-

gún Ortatatli y col. (25) de la siguiente ma-nera: normal; lesión hepatotóxica leve(LHTL): hepatocitos con vacuolas lipídicasy/o hídricas, núcleos conservados o con es-casa necrosis individual (ausencia de nú-cleos), sinusoides obliterados y escasos fo-cos inflamatorios con predominio de linfo-citos, con o sin fibrosis periportal/prolifera-ción y dilatación de conductos biliares(FP/PDCB); lesión hepatotóxica moderada(LHTM): mayor número de hepatocitos convacuolas lipídicas y/o hídricas con núcleosconservados y/o necrosis individual de he-patocitos (ausencia de núcleos), sinusoidesobliterados e incremento de focos inflama-torios con linfocitos con o sin FP/PDCB.También se cuantificó el número de hepato-citos con núcleos picnóticos o condensadospor mm2 de tejido.

La intensidad de la vacuolización hepá-tica en las muestras teñidas con H&E, seclasificó en 5 grados: ninguno/escasos he-patocitos vacuolados (+/–); hepatocitoscon escasas vacuolas (+); hepatocitos convarias vacuolas intracitoplasmáticas (++);núcleos con escasas áreas de citoplasma(+++); núcleos sin citoplasma rodeadospor espacios ópticamente vacíos (++++).La frecuencia de cada uno de estos gradosse determinó por mm2 de tejido. En aque-llas muestras que resultaron con lesioneshepatotóxicas en T2, se les realizó posterior-mente la tinción tri-crómica con el fin deidentificar incremento de tejido conectivofibroso en los espacios perivasculares de losvasos sanguíneos hepáticos. Los diferentesgrados histopatológicos se clasificaron deacuerdo a la intensidad y extensión del co-lor azul en los espacios perivasculares ob-servados. Así pues, la reacción azul parcial yde escasa intensidad representó el grado+/– y en la medida que el color azul cobrómayor intensidad y extensión se asignaronrespectivamente los grados +, ++ y +++.La frecuencia en que se presentaron los dis-tintos grados fue cuantificada según el nú-



mero de vasos sanguíneos con fibrosis peri-vascular por mm2 de tejido. Las muestrascon tinción tri-crómica de T2 fueron compa-radas con igual número de muestras toma-das al azar del grupo T1.

Microscopía electrónicaPara realizar la microscopía electróni-

ca se tomaron muestras de animales con-trol (T1) y animales alimentados con la die-ta T2 que presentaron lesiones hepáticas alestudio de microscopia de luz. Los estudiosde microscopia se realizaron con el objetode determinar las alteraciones ultraestruc-turales a nivel de mitocondrias, acumula-ción de fibras de colágeno y apoptosis. Sehicieron cortes de tejido hepático de apro-ximadamente 1 mm2, y se incluyeron englutaraldehído al 3% en buffer cacodilato desodio 0,1M a 4°C. Las muestras posterior-mente fueron deshidratadas post-fijadas enosmio e incluidas en Epon. Después de loscortes ultrafinos, las muestras fueron colo-readas con tetraoxido de plomo y citrato deuranilo. La observación se hizo en un mi-croscopio electrónico de transmisión a100.000 KV (JEM 1010, Japón).

Análisis estadísticoLos datos son presentados como la me-

dia ± desviación estándar, y se utilizaronlas siguientes pruebas estadísticas. Chi cua-

drado (frecuencia de lesiones hepáticas, va-cuolización, fibrosis perivascular) y pruebade Mann Whitney (peso hepático, actividadenzimática sérica, núcleos pícnoticos, pro-teínas séricas). Un valor de p < 0,05 fueconsiderado significativo.

RESULTADOS

Estudios del tejido hepáticoNo se apreciaron alteraciones macros-

cópicas en hígado ni en la vesícula biliar enlos grupos estudiados. El peso hepático re-lativo fue semejante en estos grupos (Ta-bla I). A nivel microscópico los análisis conH&E mostraron que el 12,5% de los anima-les del grupo T1 presentaron lesiones hepa-totóxicas leves mientras que el 50% del gru-po T2 presentó lesiones leves y moderadas(P < 0,05) (Tabla II). La intensidad de la

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TABLA IPESOS HEPÁTICOS RELATIVOS EN POLLOSDE ENGORDE TRATADOS CON ALIMENTO

SUPLEMENTADO O NO CON 0,1%Saccharomyces cerevisiae DURANTE 42 DÍAS

Tratamiento Peso hepático(g/100 g de peso vivo)

T1 (sin SC) 1,94 ± 0,02

T2 (con SC) 2,01 ± 0,05a

SC: Saccharomyces cerevisiae. aValores sin significan-cía estadística.

TABLA IIFRECUENCIA DE LESIONES HEPATOTÓXICAS EN HÍGADOS DE POLLOS DE ENGORDE TRATADOS

CON ALIMENTO SUPLEMENTADO O NO CON 0,1% Saccharomyces cerevisiae DURANTE 42 DÍAS

Histología T1

(sin SC)T2

(con SC)Número de muestrascon FP/PDCB en T2

Normal 14/16 8/16 0

% 87,5 50 -

LHTL 2/16 6/16 2

% 12,5 37,5 -

LHTM 0 2/16 1

% 0 12,5 -SC: Saccharomyces cerevisiae. LHTL: lesiones hepatotóxicas leves. LHTM: lesiones hepatotóxicas moderadas.FP/PDCB: fibrosis periportal/proliferación y dilatación de conductos biliares.

vacuolización del tejido hepático fue mayor,aunque no significante, en el grupo tratadocon alimento con SC. A este respecto, en elgrupo T1 (sin SC) fue más frecuente obser-var el grado +/– (ninguno o escasos hepa-tocitos vacuolados) comparado con el gru-po T2 (con SC) donde los grados ++ y++++ se presentaron en mayor frecuencia(Fig. 1). La diferencia entre los valores delnúmero de núcleos picnóticos en ambosgrupos no fue significativa (Fig. 2). La tin-ción tricrómica mostró fibrosis perivascularen ambos grupos (T1 y T2). El grupo T1 mos-tró fibrosis en grado de +/- y +, sin eviden-cia de los otros grados mientras que en elgrupo T2 mayormente se halló una intensi-dad de ++ y +++ (Fig. 3). La ultraestruc-tura del grupo T1 mostró hepatocitos quepresentaban frecuentemente núcleos conaspecto normal de la cromatina, y citoplas-ma sin alteraciones visibles. En el grupo T2

frecuentemente se observaron hepatocitoscon áreas de degeneración intracitoplasmá-

tica, vacuolización y mitocondrias edemati-zadas. Se observaron abundantes acúmulosde fibras de colágeno en el intersticio y pre-sencia de células parecidas a fibroblastos.Se evidenció la presencia de vacuolas lipídi-cas en el citoplasma del hepatocito y otrascélulas hepáticas. Tanto en el grupo T1

como el T2 se apreciaron células con morfo-logía sugerente de apoptosis (Fig. 4).

Valores sanguíneosLos valores de actividad de las enzimas

hepáticas en el suero se observan en la Ta-bla III. No se observó diferencia significativaen la actividad de estas enzimas en los gru-pos estudiados. En la evaluación de las con-centraciones de proteínas séricas (Fig. 5)se evidenció aumento de las proteínas tota-les (P = 0,04), de las globulinas �2

(P < 0,0001), � (P = 0,04) y � (P < 0,0001),con disminución de la albúmina sérica(P = 0,04) en los animales del grupo T2.



Fig. 1. Distribución del porcentaje de vacuolización hepática y su intensidad en pollos alimentadoscon la dieta T1 (sin S. cerevisiae) y la dieta T2 (con S. cerevisiae). En el diagrama de barras seobserva mayor presencia de altos grados de vacuolización en los animales alimentados con ladieta T2. Las microfotografías muestran secciones de tejidos hepáticos de animales con la die-ta T2 teñidos con hematoxilina y eosina mostrando un ejemplo de los diferentes grados devacuolización (400X).

DISCUSIÓN

Los resultados de este estudio eviden-ciaron una frecuencia significativa de lesio-nes histopatológicas con incremento de laseveridad de fibrosis perivascular y mayorintensidad de vacuolización hepática en ani-males alimentados con 0,1% de SC en ladieta durante 42 días. Estos hallazgos noestuvieron relacionados con alteracioneshepáticas macroscópicas, lo que sugiere undaño inicial a nivel microscópico sin libera-ción significativa de enzimas hepáticas porla ingestión de esta levadura. Las conse-cuencias de un proceso inflamatorio conti-nuo y prolongado, induce consecutivamentedaño tisular con muerte de células y la con-comitante respuesta de remodelación y sus-titución por fibras colágenas que integranel tejido conectivo fibroso. Estudios previoshan demostrado que las patologías crónicas

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T1 T2

Fig. 2. Número de núcleos condensados o pic-nóticos en el tejido hepático de pollosalimentados con la dieta T1 (sin S. cere-

visiae) y la dieta T2 (con S. cerevisiae).

Fig. 3. Presencia de fibrosis perivascular hepática y su intensidad en pollos alimentados con la dietaT1 (control) y la dieta T2 (experimental). Se aprecia mayor número de vasos comprometidos yen mayor intensidad en los animales alimentados con la dieta T2. Las microfotografías mues-tran secciones de tejidos hepáticos de animales con la dieta T2 teñidos con la tinción de Mas-son (tricrómico). Las flechas señalan los sitios de fibrosis perivascular. A: ±; B: +; C: ++;D: +++ (400X).



Fig. 4. Hallazgos ultraestructurales en el tejido hepático de pollos alimentados con la dieta T2 (conS. cerevisiae). A) Se observa severa vacuolización de los hepatocitos con preservación de lamorfología mitocondrial (flechas), 3000X. B) Zona de destrucción celular y dispersión de or-ganelos, depositos de fibras de colágeno (flechas negras) y edema mitocondrial (flechas blan-cas), 4000 X. C) Se observa célula de Kupffer (asterisco) con abundante material fagocitado yuna célula con características morfológicas de apoptosis (flecha), 8000X. D) Fibroblasto (cé-lula de Ito), rodeado de fibras de colágeno (flechas), 15.000 X. E) Hepatocitos vacuolados se-parados por dos fibroblastos (flechas), 4000 X. F) Ampliación de un sector de la microfotogra-fía A, donde se observa una célula con características morfológicas de apoptosis (flecha),6000 X (aumento original).

TABLA IIIACTIVIDAD SÉRICA DE LA ASPARTATO-AMINOTRANSFERASA (AST)

Y ALANINO-AMINOTRANSFERASA (ALT) EN POLLOS DE ENGORDE TRATADOS CON ALIMENTOSUPLEMENTADO O NO CON 0,1% Saccharomyces cerevisiae DURANTE 42 DÍAS

Tratamiento Actividad enzimática (UI/L)

AST ALT

T1 (sin SC) 243,21 ± 4,96 4,97 ± 0,37

T2 (con SC) 227,18 ± 2,48b 5,35 ± 0,43b

SC: Saccharomyces cerevisiae. bValores sin significancía estadística. UI/L: Unidades Internacionales/litro.

del hígado en el pollo cursan con alteracio-nes microscópicas como fibrosis perivascu-lar, proliferación, dilatación de conductosbiliares (26, 27), y con frecuencia formacio-nes de fibras colágenas adyacentes a célulascon abundantes vacuolas de lípido, seme-jantes a fibroblastos (células de Ito), impor-tantes en la fibrogénesis tisular (28). Estopuede representar una respuesta común ala injuria hepática y puede relacionarse conlos presentes hallazgos de fibrosis perivas-cular, vacuolización celular, mitocondriasedematizadas y acumulación de fibras decolágeno como resultado del daño hepáticoprecedente.

En vista que los daños estructuralesencontrados solo estuvieron acompañados

de una disminución de la producción de al-búmina sérica, se podría interpretar que lalevadura indujo daño hepático funcionalcon la concentración de SC usada en la die-ta durante el periodo experimental. No obs-tante las aves sometidas a esta dieta no pre-sentaron cambios significativos en las me-dias de los índices productivos evaluados alos 42 días (resultados no puiblicados), loque indica que los efectos hepáticos obser-vados, aparentemente fueron leves sin cau-sar alteraciones importantes en los paráme-tros productivos durante el periodo de vidaaproximado (42 días) de los pollos de en-gorde. Sin embargo, la intensidad de estedaño podría agravarse, en aquellas aves decorral (reproductoras pesadas, gallinas po-nedoras, pavos) suplementadas con SC enla dieta, donde los ciclos productivos tienenun periodo de tiempo mayor al de los pollosde engorde y el uso del SC sería más pro-longado y sus efectos podrían tener conse-cuencias más severas.

La actividad sérica de AST en aves esconsiderada un indicador sensible de dañoo disfunción hepatocelular (29, 30), debi-do a que la necrosis u otra alteración queaumente la permeabilidad celular, podríacausar liberación e incremento inmediatode esta enzima en el suero (31). En el pre-sente estudio la actividad de las enzimasALT y AST se encontró similar al grupocontrol, lo que sugiere que no hubo sufi-ciente daño celular hepático para incre-mentar estas enzimas, sin embargo, sihubo alteraciones en los niveles de proteí-nas totales y albúmina sérica. Estos resul-tados difieren de los reportados por Stan-ley y col. (5) en donde pollos que recibie-ron dietas con 0,1% de SC durante 28 días,no presentaron variación significativa en laactividad enzimática sérica de AST, proteí-nas totales y albúmina sérica, pero reporta-ron variación significativa en la actividadde ALT. A este respecto, trabajos con die-tas suplementadas con componentes de la

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0

1

2

3

4

Proteínas Totales

Albumina

Globulina �1

Globulina � 2

Globulina �

Globulina �

T1 T2 T1 T2 T1 T2 T1 T2 T1 T2 T1 T2

*

**

**

*

* p = 0,04 p <0,0001

*

**

g/d

L

Fig. 5. Valores de varias proteínas en el suerode pollos alimentados con la dieta T1

(sin S. cerevisiae) y la dieta T2 (con S.

cerevisiae). Se aprecia incremento sig-nificativo en las proteínas totales y lasglobulinas �2, � y �, así mismo se obser-va disminución significativa de la albú-mina sérica en el grupo T2.

pared celular de SC durante 35 días, tam-poco detectaron variación significativa enlos valores de proteínas totales, albúmina yactividad sérica de AST y ALT (6).

Algunos autores reportan que en casosde daño hepático crónico pueden producir-se daños o ruptura hepatocelulares sutiles,pudiendo resultar en valores normales en laactividad sérica de AST y en algunos casosdisminución de los mismos (32), en estoscasos es común encontrar en aves hallazgosde fibrosis hepática con valores normales deAST, disminución de albúmina y otras pro-teínas (33). Estos hallazgos pudiesen estaren relación con los presentes resultados, endonde la fibrosis perivascular fue acompa-ñada de disminución de la albúmina y pue-de representar el comienzo de una situa-ción que pudiese agravarse más con la cro-nicidad de la exposición a la levadura (tra-tamiento por más de 42 días).

Otros parámetros hepáticos analizadosfueron el peso relativo del órgano y la fre-cuencia de núcleos condensados (picnóti-cos) estos últimos sugerentes de apoptosis.Los resultados de los pesos hepáticos relati-vos del presente estudio coinciden con losde Stanley y col. (5), quienes utilizaron lamisma concentración (0,1%) de SC en ladieta de pollos de engorde. Así mismo otrosautores reportaron pesos hepáticos simila-res entre pollos de engorde sometidos a va-rios tipos de dietas suplementadas con SC(3). La comparación del número de núcleospicnóticos entre los dos grupos no presentódiferencia significativa, lo cual sugiere quela apoptosis no fue el mecanismo celular in-volucrado en la hepatotoxicidad detectadaen aves que recibieron la dieta experimen-tal. La presencia de células con núcleo con-densado o picnótico, puede estar en rela-ción con la presencia de células con morfo-logía de apoptosis observadas en el tejidohepático con el microscopio electrónico(núcleos condensados, condensación cito-plasmática, disminución del tamaño celu-

lar). El resto del examen histopatológico re-veló mayor intensidad de vacuolización he-pática, con una frecuencia significativa delesiones hepatotóxicas y fibrosis perivascu-lar, dichos hallazgos indican un probableefecto de la dieta con SC sobre el tejido he-pático.

Durante este estudio se encontró unaumento significativo de las proteínas séri-cas totales en las aves del grupo experimen-tal, sin embargo también se encontró unadisminución de los niveles de albúmina.Este último hallazgo pudiese estar relacio-nado con la alteración en la función hepáti-ca que involucra la síntesis de albúminacomo efecto de la dieta con SC. A este res-pecto, se ha reportado disminución de lasíntesis de proteínas (principalmente albú-mina) debido a patologías hepáticas (29).El incremento de las proteínas totales enlos animales alimentados con la dieta másSC puede estar relacionado con el aumentode la producción de otras fracciones protei-cas séricas como lo son las � y �-globulinasencontradas incrementadas en este grupode animales. La fracción de la �-globulina essintetizada principalmente por células ori-ginadas por el linfocito B (34).

El hallazgo de niveles elevados de�-globulina en pollos suplementados con SCcoincide con otros reportes del incrementosignificativo de inmunoglobulinas (Ig) séri-cas en aves sometidas a este tipo de dietas(2, 10) o con los componentes de la paredcelular de esta levadura (9, 13, 35). Otrosautores demostraron incremento significa-tivo de IgG en suero y de IgA en bilis de pa-vos sometidos a dietas con componentes dela pared celular del S. cerevisiae (36). Asímismo, está demostrado que parte de lasestructuras de la pared celular del Saccha-romyces, tiene una potente actividad anti-génica (37). El significado del aumento delcontenido de �-globulina sérica en este es-tudio, pudiera ser debido a un incrementoen la producción de anticuerpos contra an-



tígenos de SC que pudiesen reaccionar conestructuras celulares orgánicas medianteuna reacción cruzada y producir patologíahepática o en otros órganos (16, 38). A esterespecto, se ha reportado que en el pollo,30 a 75% de la IgA producida en la pared in-testinal, puede llegar por la sangre de lavena porta al hígado (34), sin embargo,existen escasos estudios en aves que puedanidentificar patologías autoinmunes en po-llos asociadas con la presencia de anticuer-pos contra antígenos de SC, a diferencia dereportes de patología en humanos, tantohepática (15, 39- 41), como en el tractogastrointestinal (42, 43).

Los resultados provenientes de este es-tudio, sugieren que el consumo de SC en ladieta puede ser un riesgo de hepatotoxicidadpara los pollos de engorde, al inducir altera-ciones histológicas y funcionales del órgano.Además la ingestión de esta levadura estuvorelacionada con aumento de la concentra-ción de �-globulina sérica, que pudiese estarasociada a fenómenos de autoinmunidad. Serequieren estudios dirigidos a determinar, sila prolongación del tiempo de administra-ción del SC en la dieta, pudiese determinarincremento en las lesiones reportadas yagravamiento de la disfunción hepática, asícomo determinar si el aumento de las �-glo-bulinas puede estar relacionado con la pre-sencia de anticuerpos anti-SC y su posiblepapel en la inducción de autoinmunidad.

AGRADECIMIENTO

Al Consejo de Desarrollo Científico yHumanístico de la Universidad del Zulia. Ala Unidad de Diálisis y Trasplante Renal delHospital Universitario de Maracaibo por suasistencia técnica. Al Profesor Jorge SotoBracho, Médico Veterinario Patólogo, delLaboratorio de Diagnóstico Veterinario, porsu participación en la descripción histopa-tológica.

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Alteraciones histológicas hepáticas