Analitikai módszerek komponensének - Vízvizsgálat · PDF filea szövetek közé idegen anyag kerül, az ún. bazofil sejtek termelni kezdik. Növeli a kapillárisok falának átjárhatóságát

Analitikai módszerek

élelmiszerek bizonyos allergén

komponensének

meghatározására

Szigeti Tamás János

Üzletfejlesztési igazgató

WESSLING Hungary Kft.

1047 Budapest, Fóti út 56.

www.wessling.hu

Élelmiszer-allergén Szakmai Nap 2010. március 4.

A pollenek provokálta allergiás reakciók évszázadok óta ismertek.

- Ókor: Ménész (méhek) Hippiász, Britannicus (virágpor), III. Richard

(urticaria + polirtikai trükkök), Hippocrates (asztma leírása),

Hérodotos (Kr. e. 490-427: pollen allergia);

- XIX. Század: ipari forradalom: higany, króm, nikkel, szerves vegyületek;

- 1900: típusos felső-légúti, tüdő, nyálkahártya, bőr-panaszok;

- 1920: pollen szenzibilizációhoz kapcsolódó élelmiszer allergia ismerete;

- XX. század vége: immunmechanizmusok megismerése;

Pollen-gyümölcs-zöldség-fűszer szindróma (provokáló faktorok)

Orális Allergia Szindróma: OAS (klinikai tünetekről)

Pollen szenzibilizáció + élelmiszer allergia OAS tünet-együttesében a

szezontól függetlenül is megjelenő intermittáló urticaria (profilin):

Egy felmérés adatai (Temesvári és mtsai. SOTE):

OAS mellett 77% élelmiszer allergia

Bevezetés – történet, pollen szenzibilizáció, OAS

Allergia típusa USA Egyesült Királyság

Allergiás rinhitisz

(orrfolyás)

35,9 millió (a teljes népesség

kb. 11%-a)

3,3 millió (a teljes

népesség kb. 5.5% -a)

Gyógyszer-allergia

Penicillin alkalmazása miatt

anafilaxiás reakciók miatt évente

kb. 400 haláleset

Nincs adat

Élelmiszer-allergia

általános

élelmiszerekre

3 év alatti gyermekek kb. 6%, a

teljes USA népesség 3,5-4%-a.

A gyermekek 5-7%-a, a

felnőtt populáció 1-2%-a

Élelmiszer-allergia

mogyoróra és

diófélékre

Kb. 3 millió ember, a teljes

népesség 1,1%-a

2001 és 2005 között

117%-kal nőtt. Kb. 26

ezer ember

Bevezetés – Egy angolszász tájékoztató adat

0

5

10

15

20

25

30

35

%

EU-12 EU-15 EU-27 A B D D-W D-E DK E F FIN GB GR I IRL N-IRL L NL P S UK Átlag

Országok

Teljes

Férfiak

Nők

15-39 év

40-59 év

Bevezetés – Európai adatok – EU Barometer 2003

Allergiában szenvedők aránya Európában (Teljes lakosság, férfiak, nők, korcsoportok)

OAS Nyír panel

■ zeller

■ mogyoró

■ dió

■ mandula

■ alma

■ meggy

■ kivi

■ sárgarépa

■ burgonya

■ szója

■ 12 fűkeverék*

OAS Fű keverék

panel

■ 12 fűkeverék*

■ mandula

■ meggy

■ őszibarack

■ burgonya

■ szója

■ földimogyoró

■ bab

■ borsó

■ rozsliszt

■ búzaliszt

■ szezámmag

OAS Parlagfű panel

■ zeller

■ paprika

■ paradicsom

■ sárgarépa

■ uborka

■ petrezselyem

■ görögdinnye

■ kivi

■ kamilla

■ 12 fűkeverék*

Semmelweis Egyetem Bőr- Nemikórtani és Bőronkológiai Klinika és Semmelweis Egyetem Központi Immunológiai

Laboratórium, Budapest

Temesvári Erzsébet, Németh Ilona, Pónyai Györgyi, Hidvégi Bernadett, Gergely Péter, Kárpáti Sarolta: Pollen-élelmiszer

keresztreakciók vizsgálata urticariás betegeknél. Bőrgyógyászati és Venerológiai Szemle 85. évf. 3. 136–142.

* 12 fűkeverék: rozs, mezei komócsin, réti csenkesz, francia perje, borjúpázsit, tarackbúza, csomós ebír, angol perje, ecsetpázsit, pelyhes

selyemperje, csillagpázsit, puha rozsnok

4. számú melléklet együttes rendelethez - Allergén összetevők

Azon anyagok listája, amelyeket a kivételektől eltekintve jelölni kell, amikor

hivatkozás történik a 4. számú mellékletre

1. Glutént tartalmazó gabona (búza, rozs, árpa, zab, tönköly, kamut-búza vagy

ezek

hibrid változatai) és azokból készült termékek, kivéve

a) búzából készült glükózszirup, beleértve a dextrózt is(*),

b) búzából készült maltodextrin(*),

c) árpából készült glükózszirup,

d) gabonafélék, amelyből készült párlatot vagy mezőgazdasági eredetű etilalkoholt

szeszes italok vagy egyéb alkoholtartalmú italok készítéséhez használják.

2. Rákfélék és azokból készült termékek.

3. Tojás és abból készült termékek.

4. Halak és azokból készült termékek, kivéve

a) vitaminok vagy karotinoidok hordozójaként használt halenyv,

b) a sör és a bor derítéséhez használt halenyv és vizahólyag.

5. Földimogyoró és abból készült termékek.

19/2004. (II. 26.) FVM-ESzCsM-GKM rendelet


6. Szójabab és abból készült termékek, kivéve

a) finomított szójabab olaj és zsír(*),

b) szójababból származó természetes vegyes tokoferolok (E 306), természetes D-

alfa tokoferol, természetes D-alfa tokoferol-acetát, természetes D-alfa tokoferol

szukcinát,

c) a szójabab növényi olajából nyert fitoszterolok és fitoszterol észterek,

d) a szójabab növényi olajából nyert szterolokból előállított fitosztanol-észter.

7. Tej és abból készült termékek (beleértve a laktózt is), kivéve

a) tejsavó, amelyből készült párlatot vagy mezőgazdasági eredetű etilalkoholt

szeszes italok vagy egyéb alkoholtartalmú italok készítéséhez használják,

b) laktit.

8. Diófélék, azaz mandula (Amygdalus communis L.), mogyoró (Corylus avellana),

dió (Juglans regia), kesudió (Anacardium occidentale), pekándió [Carya illinoiesis

(Wangenh.) K. Koch], brazil dió (Bertholletia excelsa), pisztácia (Pistacia vera),

makadámia és queenslandi dió (Macadamia ternifolia) és azokból készült termékek,

kivéve

a) diófélék, amelyből készült párlatot vagy mezőgazdasági eredetű etilalkoholt

szeszes italok vagy egyéb alkoholtartalmú italok készítéséhez használják.



Azon anyagok listája, amelyeket a kivételektől eltekintve jelölni kell, amikor

hivatkozás történik a 4. számú mellékletre

9. Zeller és abból készült termékek.

10. Mustár és abból készült termékek.

11. Szezámmag és abból készült termékek.

12. Kén-dioxid és SO2-ben kifejezett szulfitok 10 mg/kg, illetve 10 mg/liter

koncentrációt

meghaladó mennyiségben.

13. Csillagfürt és abból készült termékek.

14. Puhatestűek és abból készült termékek.

(*) és az abból készült termékek, amennyiben az előállítási eljárás során várhatóan

nem növekszik az előállítás alapjául szolgáló termék EFSA által megállapított

allergizálóhatás-szintje


Pollen-élelmiszer keresztreakciók (OAS)

OAS Nyír panel

■ zeller

■ mogyoró

■ dió

■ mandula

■ alma

■ meggy

■ kivi

■ sárgarépa

■ burgonya

■ szója

■ 12 fűkeverék*

OAS Fű keverék

panel

■ 12 fűkeverék*

■ mandula

■ meggy

■ őszibarack

■ burgonya

■ szója

■ földimogyoró

■ bab

■ borsó

■ rozsliszt

■ búzaliszt

■ szezámmag

OAS Parlagfű panel

■ zeller

■ paprika

■ paradicsom

■ sárgarépa

■ uborka

■ petrezselyem

■ görögdinnye

■ kivi

■ kamilla

■ 12 fűkeverék*

* 12 fűkeverék: rozs, mezei komócsin, réti csenkesz, francia perje, borjúpázsit, tarackbúza,

csomós ebír, angol perje, ecsetpázsit, pelyhes selyemperje, csillagpázsit, puha rozsnok

Temesvári Erzsébet, Németh Ilona, Pónyai Györgyi, Hidvégi Bernadett, Gergely Péter, Kárpáti Sarolta Bőrgyógyászati és

Venerológiai Szemle 85. évf. 3. 136–142. (SOTE Bőr- Nemikórtani és Bőronkológiai Klinika és SOTE Központi

Immunológiai Laboratórium Budapest)

Kimutatási határ Új adatok eddig nem ismert öszetevőkről

Aggodalmak

Kockázatelemzés

Vizsgálati igények

Mérési bizonytalanság

Vizsgálati díjak

Úgy tűnik hogy mérni kell…

Évek

Felmerülő kérdések – nem biztos, hogy megválaszoljuk…

Tyihák Ernő professzor: Bio-Aréna, homeopátiás koncentrációk

Mérési bizonytalanság

Határértékek mennyire értelmezhetők az allergének esetében

Milyen mennyiségű mogyoró váltja ki az allergiás reakciókat?

Milyen szerepe van a profilin nevű fehérje-családnak az allergia kiváltásában?

Titrimetria

Sav-bázis titrálások

Fehérjetartalom (Kjeldahl – összegparaméter)

Vékonyréteg kromatográfia

Színezékek (természetes, mesterséges)

Folyadék-kromatográfia (HPLC-VIS, DAD, FLD LC-MS-MS, RID, LSD)

Színezékek(UV-VIS)

Hisztamin (UV-VIS)

Gázkromatográfia átlalában 2000 molekulatömegig (FID, ECD, MS, FPD)

Bizonyos gyógyszermaradékok

Immunkémiai-immunbiológiai módszerek

Immun assay

ELISA (Enzym Linked Immune Sorbent Assay)

SPR (Surface Plasmon Resonance – Felszíni plazmon rezonancia sp.)

OWLS (Optical Wave Leading Spectroscopy – Optikai hullámvezető

fénymódus spektroszkópia)

Egyéb enzimes módszerek kolorimetriás detektálással

Molekuláris biológiai vizsgálatok

RT-PCR (Real-Time Polimerase Chain Reaction)

Néhány laboratóriumi vizsgálati elv, módszer

Glutén:

Két fehérje keveréke: a gliadin + glutenin

Búza, rozs, árpa magjénak fehérjéi

Mérési lehetőségek:

ELISA

Immun assay

Gélkromatográfia

Gél-elektroforézis

Vékonyréteg-kromatográfia

SPRS (Surface plasmon rezonancy sp.)

OWLS (Optical wave leading sp.)

Mikroszkópos eljárás

Glutén-tesztek (gyorsmódszerek)

Glutén

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/71/Wheat_field.jpg

A gluténnel kapcsolatos analitikai lehetőségek feéldolgozására született egy

dolgozat: Főbb gabona allergének immunanalitikai kimutatása (Takács

Krisztina PhD értekezés – Corvinus Egyetem Budapest).

Meglepő eredménye a munkának, hogy a gabona-helyettesítő (pszeudo cereália)

növények – amarant, hajdina – vízoldható fehérjéi Ig reaktivitása egyes cöliákiás

betegszérumokkal. Ne felejtsük el, hogy e növények a gabona-érzékeny betegek

diétájának alapját képezik…

Guténmentes élelmiszer: olyan összetevőkből áll (vagy glutén-mentesítették),

amelyek nem tartalmaznak búzából, egyén Triticum fajokból (rozs, árpa), zabból

és keresztezett változataikból származó egy alkotót sem, és amelynek

kontaminációiból származó gluténtartalma nem haladja meg a 20 mg/kg-ot.

Csökkentett glutén tartalmú élelmiszer: a búzából búzából, egyéb Triticum

fajokból (rozs, árpa), zabból és keresztezett változataikból készült termék

speciális technológiával csökkentett gluténtartalma 200-100 mg/kg között mozog

(CX/NFSDU ALINORM 08/31/26 Appendix III.). Az analitikai módszerekkel

szembeni elvárás az, hogy a kimutatási határ legalább 10 ppm legyen a

végtermék szárazanyagtartalmára vonatkoztatva

Glutén

Ph Doctor 1975-óta a Stockholmi Egyetemen.

Később posztgaduális munka Hhelsinkiben,

majd a City of Hope National Medical Center in

California.

Hatékony kutatógárdát szervezett;

1979: Burman Institute Research Stockholm

1994: Tiszteletbeli orvos-doktor: Koppenhágai

Egyetem;

Az ELISA elvét 1971-ben publikálta Peter Perlmann-nal a Stockholmi

Egyetemen.

Eva Engvall

ELISA plate (48 vájulattal)

Y

ELISA plate – egy vájulat sémája

A polisztirol lemezhez antitesteket („Y”) kötnek

Y Y Y

Y Y

U U U U

ELISA plate – szendvics elrendezés

1. A minta kötődik

az antitesthez

2. Újabb

antitesteket adnak

az oldathoz

3. Enzimhez kötött

antitestet adnak az

oldathoz

Y Y U

ELISA plate – szendvics elrendezés

4. A hozzáadott

szubsztrát

optikailag mérhető

változást szenved

ELISA plate (48 vájulattal, pozitív mintákkal)

Rákfélék és halkészítmények - Parvalbumin

Az allergiát elsődlegesen kiváltó fehérjék

közül a parvalbumin a legfontosabb.

A parvalbumin kalciumkötő fehérje,

benne a Ca két alfa hélix között

hexagonális piramis-szerű ligandum-

kötéssel foglal helyet. Szerkezete ún. EF-

hand-motivumú (lásd a következő dián).

A fehérje viszonylag kicsi molekulatömegű: 9-11 kDa. A gyorsan összehúzódó

izmokban fordul elő gyakrabban.


ELISA, Immun assay

Gélkromatográfia, Gél-elektroforézis


SPRS (Surface plasmon rezonancy sp.), OWLS (Optical wave leading sp.)

Rákfélék és halkészítmények - Parvalbumin

EF-kézmotivumú fehérje – parvalbumin halakból


Üveglap Porózus réteg

Mikrofecskendő

Minta oldata a fecskendőben

Vékonyréteg-kromatográfia – a minta felvitele

Vékonyréteg-kromatográfia – Futtatás

Futtatókád

oldószerrel

Vékonyréteg-

kromatográfiás lemez

Felvitt minták


Std1 Std2 Std3 Minta1 Minta2 Minta3



Rf1

Rf2

Rf3

Start

Allergén komp.

Ismeretlen komp.

Oldószerfront




Vékonyréteg-kromatográfia – Értékelés

Relatív retenciós faktor az allergén komponensre (Minta3):

Relatív retenciós faktor az ismeretlen komponensre (Minta3):

RRfallergén = Rfallergén

Rfoldószerfront

Rf1

Rf3 = <1

RRfismeretlen = Rfismeretlen

Rfoldószerfront

Rf2

Rf3 = <1

Sikeres elválasztásról akkor beszélhetünk, ha:

RRfallergén RRfismeretlen

Vékonyréteg-kromatográfia – Értékelés (3. minta)

Rákfélék és halkészítmények - Hisztamin

A halak (ezen felül sajtok, fehérborok)

jelentős allergénje a hisztamin.

Biogén amin, neuro-transzmitter és a

gyulladásos folyamato szabályozója. Ha

a szövetek közé idegen anyag kerül, az

ún. bazofil sejtek termelni kezdik. Növeli

a kapillárisok falának átjárhatóságát a

fehér vérsejtek és bizonyos fehérjék

számára, hogy a „betolakodó” ágenst

ártalmatlanítani lehessen. Mérési lehetőségek:

ELISA, Immun assay

Gélkromatográfia, Gél-elektroforézis

HPLC

SPRS (Surface plasmon rezonancy sp.), OWLS (Optical wave leading sp.)

1903 – Varsóban tartott előadás

Mihail Tswett botanikus – oszlopkromatográfia

Dt Komponens A Komponens B

Kolonna

Relatív retenciós idő

A folyadékkromatográfia (gázkromatográfia) elve

Idő (perc, másodperc)

A folyadékkromatográfia (gázkromatográfia) elve Jeln

agyság

Dt = tR1 – tR2

Minőségi azonosítás: retenció alapján

Mennyiségi meghatározás: jelnagyság alapján

t0

Tojás

A tojás allergén komponensei:

Ovomukoid, ovalbumin, ovotranszferrin,

lizozim enzim.

A tojás sárgájának elsődlegesen

allergén komponense az apovitillin

fehérje.

Bizonyos kutatások szerint a lizozim és

az ovotranszferrin az allergia fő okai,

mert – főként – a nehézfémeket

kelátokként megkötik.

A tojás sárgájának allergén fehérjéi: ,

apovillitin, livetin, vozvetin.

Vannak azonban olyanok, akik mind a sárgájára, mind a fehérjéjére allergiásak. A

tojásra allergiás egyének közül néhányukban a csirkehúsra és egyéb szárnyas

húsra irányuló allergia is kialakulhat.

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/0/02/Fried_egg%2C_sunny_side_up.jpg


ELISA

Immun assay

SPRS (Surface plasmon rezonancy spektroszkópia)

OWLS (Optical wave leading spektroszkópia)

Tojás

Tojás allergén fehérjéi Egyéb mintaalkotók

Immun-assay felület

Immun assay vizsgálat


Antitesteket tartalmazó reagens



Allergének mennyiségi és minőségi meghatározása

A


Földimogyoró (Arachis hypogea)

Földimogyoró (amerikai

mogyoró) magjának 40-50%-

a olaj)

Fehérjetartalma az összes

olajos-magvú között a

legnagyobb.

PUFA-tartalma csökkenti a 2-es típusú diabétesz esélyét.

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Koeh-163.jpg

Földimogyoró (Arachis hypogea)

A földimogyoró számtalan értékes bioaktív komponenst tartalmaz: többszörösen

telített zsírsav-származékok, tokloferolok, fitoszterolok, szkvalánok stb.

Clarke és munkatársai 89 allergén fehérjét találtal a földimogyoró extraktumában

(Clarke M. 1998.).

Alkalmazható módszerek:

Mivel a mogyoró allergén komponensei kémiailag nehezen identifikálhatók,

vizsgálatra alavetően az immunkémiai módszereken alapuló eljárások látszanak

célszerűeknek:

ELISA

Immun assay

SPRS (Surface plasmon rezonancy spektroszkópia)

OWLS (Optical wave leading spektroszkópia)

Y Y Y Y Y Y Y Y

Surface Plazmon Resonance Spectroscopy - SPRS

Dielektrikum Elektromágneses

hullámok

Fémlemez (arany) Rögzített antitestek

M i n t a t é r

Prizma

Y Y Y Y Y Y Y Y


Beeső fénysugár Visszavert fénysugár

Y Y Y Y Y Y Y Y

D


Beeső fénysugár

Szójabab – Glycine soya

A szójabab tekintélyes mennyiségű fitinsavat,

alfa-linolénsavat,genisteint és daidzeint (izo-

flavonok) tartalmaz.

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/8/82/Soybean.USDA.jpg

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/4d/Soybean_flowers.png

Energia 1,866 kJ

(446 kcal) Lisine 2.706 g Szerine 2.357 g

Szénhidrátok 30.16 g Metionine 0.547 g Víz 8.54 g

Cukrok 7.33 g Fenil-alanine 2.122 g Vitamin A

ekviv. 1 μg

Élelmi rost 9.3 g Tirosine 1.539 g Vitamin B6 0.377 mg

Zsír 19.94 g Valin 2.029 g Vitamin B12 0 μg

Telített zsír 2.884 g Arginin 3.153 g Vitamin C 6.0 mg

1-szeresen

telítetlen zsír 4.404 g Histidin 1.097 g Vitamin K 47 μg

Többszörösen

telíítetlen zsír 11.255 g Alanin 1.915 g Kalcium 277 mg

Fehérje 36.49 g Aszparaginsav 5.112 g Vas 15.70 mg

Triptofán 0.591 g Glutaminsav 7.874 g Magnezium 280 mg

Treonin 1.766 g Glicin 1.880 g Foszfor 704 mg

Izoleucine 1.971 g Prolin 2.379 g Kálium 1797 mg

Leucin 3,309

Szójabab – 100 g szárított mag összetevő anyagai

Szója – pörkölt szójakészítmény

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/7e/Trader_joes_edamame.jpg

A vegyület antioxidáns hatású

izoflavonoid. Az aktívan műköső

izoflavonoidok között sok olyan

antioxidáns van, amely az állati és emberi

szervezetben kapcsolatba lép az

ösztrogén receptorokkal. Olyan hatásúak,

mintha a szervezetet valóban ösztrogén

hormonnal kezelnék. Hatása különösen a

hímneműegyedekre intenzív. A sejtek

életében apoptózist vált ki.

Szója – Genistein és diadzein izoflavonoidok

Geninstein

A diadzein egy még erősebb

fitoösztrogén vegyületté, equol-lá

képes a szervezetben átalakulni. Az

equol patkányokban DHT gátló hatást

mutat (DHT = dihidrotesztoszteron) ez

egy prosztata megnagyobbodást,

kopaszodást és más kellemetlen

tüneteket is előidézni képes

tesztoszteron származék hormon.

Magyarországon: Csáky István dr.

Diadzein

Szója – Fito-ösztrogének váza

Analitikai lehetőségek:

RT-PCR

ELISA

Kromatográfiás módszerek (HPLC)

PRIMER

Mennyiségi analitika - Taqman-próba kb. 75 oC-on

Fényforrás

FRET = Förster-féle rezonancia-energia transzport

Real-Time PCR reakció

PRIMER

Fényforrás



PRIMER

Fényforrás



20 oC

95 oC

55 oC

75 oC

Primerek

és a próba

Amplifikáció

20 oC

95 oC

55 oC

75 oC

Primerek

és a próba

Amplifikáció

20 oC

95 oC

55 oC

75 oC

Primerek

és a próba

Amplifikáció

Fluoreszcencia Fluoreszcencia


Tejtermékek

Tehéntej tápanyagtartalom 100 g-ban

Energia 60 kcal / 250 kJ

Szénhidrátok 5,2 g

Cukrok 5,2 g

Laktóz 5,2 g

Zsír 3,25 g

telített 1,9 g

egyszeresen telítetlen 0,8 g

többszörösen telítetlen 0,2 g

Fehérje 3,2 g

Víz 88 g

A-vitamin ekvivalens 28 μg

Tiamin (B1-vitamin) 0,04 mg

Riboflavin (B2-vitamin) 0,18 mg

B12-vitamin 0,44 μg

D-vitamin 40 NE

Kalcium 113 mg

Magnézium 10 mg

Kálium 143 mg

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/0/0e/Milk_glass.jpg

A tej összetevőinek aránya attól függ, hogy milyen állattól származik. 1 liter tehéntej

tápértéke 620 kalória. Átlagos összetétele: 87,9% víz és 12,1% szárazanyag.

Tejzsír, különválasztva vaj. A zsír a tejben emulgeálva található.

Tejfehérje: kazein, és savófehérjék (pl. béta-laktoglobulin)

Tejcukor, laktóz (glükóz + galaktóz) diszacharid.

Vitaminok: B2, B6, B12 , D3 vitamin,

Ásványi anyagok: Ca, P és Se.

A laktóz elősegíti az ásványi anyagok (kalcium, magnézium, foszfor) felszívódását,

és a belőle képződő tejsav a vastagbélben gátolja a káros bélbaktériumok

elszaporodását.

Laktáz hiánya: tejcukor lebontását végző enzimek hánya hasmenés, rosszullét

Ezeknek az enzimeknek a mennyisége az elválasztás után csökken. Vannak olyan

emberek, amelyek különösen erre a típusra érzékenyek, ők laktózérzékenyek.

A laktózérzékenyek számára külön eljárással kell tejtermékeket előállítani, amelyben

a laktózt egy másik diszacharid, például szacharóz helyettesíti.

A tehéntej összetétele

A tehéntej legallergizálóbb

fehérjéje a béta-

laktoglobulin, ami az

anyatejben is kimutatható.

Az anyatej béta-

laktoglobulin

koncentrációjának

növekedésére akkor lehet

számítani, ha a kismama túl

sok tehéntejet fogyaszt.

Ekkor a szoptatott

csecsemőben klinikai

tünetek jelentkezhetnek,

melyek megszűnnek, ha az

édesanya az elfogyasztott

tej mennyiségét napi 2dl-re

csökkenti.

Tej – Béta-laktoglobulin

Analitika:

főként ELISA vagy gélkromatográfia

Dió – Juglans regians

Tajimi H. and Imagaway a dióban az alábbi allergéneket mutatták ki:

2S albumin

Vicillin-típusú fehérjét (vicillin = aminobenzil-penicillin)

Lipid Transzfer proteint (LTP)

Az LTP képződése a feltehetően a növényt ért külső támadás eredménye, pl.

gombafertőzés. Az LTP számos más, antifungális, antibiotikus fehérje képződése

közben keletkezik (Tari Irma Szegedi Tudomány Egyetem).

A dió további hatóanyagai:cseranyagok és a juglon

Dió – Juglans regia

Módszerek:

ELISA

Egyéb enzimes

HPLC Juglon

Zeller – Apium graveolens L.

Zeller – Apium graveolens L.

A zeller az egyik leggyakoribb allergiát előidéző növény (a listát a földimogyoró

vezeti). Érzékeny egyéneknél anafiélaxiás sokkot válthat ki.

Allergén-tartalma nem bomlik el főzés közben.

A legtöbb allergén anyagot a növény magja tartalmazza.

Gyökerében többek közuött kumarin-származékok is vannak, amelyek a szabad

gyökös reakciók visszaszorításában játszanak szerepet.

Vizsgálati módszerek:

Enzimes tesztek

PCR tesztek

Szulfittatralom meghatározása – desztillációs módszer

Élelmiszerek. Szulfitmeghatározás. 1. rész: Optimazált Monier-Williams-módszer

Bevezetés:

A szulfitokat az élelmiszerekben tartósítóanyagként használhatják. Az egészségre

gyakorolt esetleges káros hatás csökkentése céljából számos ország szabályozza

a szulfitok felhasználást élelmiszerekben. Ennek eredményeképpen a különféle

élelmiszerekben levő szulfit kimutatására és meghatározására több vizsgálati

módszert fejlesztettek ki.

1. Alkalmazási terület

Kéndioxid meghatározása desztillációs módszerrel. Olyan eljárás, amely legalább

10 mg/kg szulfittartalmú élelmiszerek vizsgálatára alkalmas. A módszer nem

alkalmazható egyéb, kéntartalmú illékony vegyületek jelenlétében. Nem

alkalmazható káposzta, szárított fokhagyma, szárított hagyma, gyömbér,

póréhagyma és szójafehérje esetében. Az izolált szójafehérje vizsgálata téves

pozitív eredményre vezethet.

Szulfittartalom – MSZ EN 1988-1:1999 Desztilláció


3. A módszer elve.

Az élelmiszerben lévő szabad szulfitok, illetve reprodukálható mennyiségű kötött

szulfitok (mint pl. karbonil addiciós termékek) mennyiségét mérjük. A vizsgálati

anyagot sósavval melegítjük visszafolyós hűtő alkalmazásával a szulfitok kén-

dioxiddá alakítása céljából. Az oldat felszíne alatt bevezetett nitrogénárammal a

képződő kén-dioxidot áthajtjuk egy hűtőn, majd elnyeletjük a hűtőhöz csatlakozó

gázelnyeletőben levő hidrogén-peroxid-oldatban, amelyben a kén-dioxid kénsavvá

oxidálódik. A képződő kénsavat nátrium-hidroxid mérőoldattal megtitráljuk. A

szulfittartalom arányos a képződött kénsav menyiségével.



7.2. Ismételhetőség

Ugyanazzal a módszerrel ugyanabban a laboratóriumban, azonos vizsgálóval,

azonos eszközökkel, rövid időkülönbséggel egymástól független

meghatározásokkal az abszolút különbség csak az esetek 5%-ában nagyobb, mint:

Kukoricamálé: x-átlag: 9,2 mg/kg r = 3,7 ,g/kg

Gyümölcslé: x-átlag: 8,1 mg/kg r = 3,8 mg/kg

Tengeri élelmiszer: x-átlag: 10,4 mg/kg r = 4,1 mg/kg


A vizsgálat a szedőben összegyűjtött

folyadék kénsav-tartalmának

titrálásával végződik.

SO2 + H2O = H2SO3

H2SO3 + H2O2 = H2SO4 + H2O

H2SO4 + 2NaOH = Na2SO4 + 2H2O

Monier-Williams készülék


Immunkromatográfiás mintaelőkészítés



Mosás Eluálás



Néhány mérési adat – WESSLING 2006-2010.

Mérési adatainkból

Mérési adataink össefoglalója 2006-2010 február

Összes <LOQ >LOQ

Szulfit 79 30 49

Béta-laktoglobulin 24 15 9

Mogyoró 9 7 2

Gliadin 8 7 1

Glutén 110 78 32

Hisztamin 10 8 2

Tej 24 15 9

Összesen 264 160 104

Gabona-feldolgozási termékek mg/kg 24

Édesipari termékek mg/kg 26

Sütőipari termékek mg/kg 26

Tejtermékek, tejalapú termékek mg/kg 29

Élelmiszerek, alapanyagaik mg/kg 30





Édesipari termékek mg/kg 42




Tartósított élelmiszerek mg/kg 94







Savanyú tejkészítmények mg/kg 38530


Glutén mérési eredmények 2006-2010 március 3-ig (>0)

Sós és édes snackek mg/kg 11





Glutén 10

Glutén 110/27 db (10 mg/kg LOQ)

0

50

100

150

200

250

mg/kg

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25

Minták >10 mg/kg LOQ (2 extrém mintát kihagytam)

0

500

1000

1500

2000

2500

mg/kg

1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43 46 49 52 55 58 61 64 67 70 73 76 79

Minták - szulfid

Szulfid SO2-ben kifejezve összesen 79 db

0

500

1000

1500

2000

2500

mg/kg

1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49

Minták - szulfid

Szulfid SO2-ben kifejezve 79/49 db (5 mg/kg LOQ)

Fagylalt, jégkrém és parfé µg/kg 0

Tartósított élelmiszerek µg/kg 0


Élelmiszerek, alapanyagaik µg/kg 0

Sós és édes snackek µg/kg 0






Gyümölcs, zöldség és termékeik µg/kg 0









Édesipari termékek µg/kg 243050



Édesipari termékek µg/kg 1665900


Tejfehérje 24/9 db (2000 mg/kg LOQ)

Köszönöm a megtisztelő figyelmet!



Documents

Analitikai módszerek komponensének - Vízvizsgálat · PDF filea szövetek közé idegen anyag kerül, az ún. bazofil sejtek termelni kezdik. Növeli a kapillárisok falának átjárhatóságát