Electroforesis en gel de poliacrilamidaEs una de las tcnicas ms ampliamente usada para caracterizar mezclas complejas de protenas. La electroforesis en poliacrilamida es un mtodo conveniente, rpido y econmico a nivel de muestra pues se requieren slo cantidades del orden de microgramos de protena.Las protenas presentan una carga elctrica neta si se encuentran en un medio que tenga un pH diferente al de su punto isoelctrico y por eso tienen la propiedad de desplazarse cuando se someten a un campo elctrico. La velocidad de migracin es proporcional a la relacin entre las cargas de la protena y su masa. Cuanto mayor carga por unidad de masa ms rpida ser la migracin.

Aplicaciones. cidos nucleicosEn los cidos nucleicos la direccin de migracin es del electrodo negativo al positivo, y esto es debido a la carga negativa presente en el esqueletoazcar-fosfato. En los fragmentos deADNdobles, la velocidad de migracin es inversamente proporcional a su tamao. En fragmentos simples deADNyARN, dichas molculas tienden a plegarse de forma compleja y a migrar de forma ms complicada, segn la estructura terciaria formada tras el plegamiento. ProtenasLasprotenasno tienen una estructura predecible como los cidos nucleicos, y por tanto sus velocidades de migracin no son similares entre las protenas. Incluso puede que no migren ni al aplicar unafuerza electromotriz. En estos casos, las protenas se desnaturalizan mediante la adicin de undetergente. Los detergentes otorgan una carga neta negativa a la protena que les permite migrar a travs del gel de poliacrilamida en relacin directa a su masa, ya que la cantidad de cargas negativas que se unen a la protena depende del tamao de sta. Por otro lado, el agente reductor rompe los enlaces bisulfuros, separando a la protena en sus sub-unidades. La desnaturalizacin hace que pierdan su estructura terciaria y cuaternaria por tanto su velocidad de migracin es proporcional al tamao. As, los ms grandes se desplazan ms lentamente.

Riesgos por mal manejo El mal manejo del gel es muy txico Si no se tiene el poro correcto para separar molculas, puede haber riesgo de que otras molculas tambin pasen.

Electroforesis bidimensionalEs una tcnica de alta resolucin cuyo objetivo es la separacin de mezclas de protenas altamente complejas. Las protenas son separadas secuencialmente por dos criterios fsicos. Las protenas son separadas en un gel con gradiente de pH en condiciones desnaturalizantes de acuerdo con su punto isoelctrico. Tras esta separacin por carga las protenas son separadas de acuerdo con su masa molecular por electroforesis discontinua en gel de poliacrilamida. Tras la tincin del gel las protenas aparecen formando manchas circulares.

Aplicaciones Se emplea en estudios comparativos de patrones proteicos de diferentes individuos. Pueden compararse por ejemplo, los patrones de protenas de un individuo sano frente a un individuo enfermo o de un mismo individuo expuesto a diversas situaciones. Se utilizan para analizar los efectos de diferentes tratamientos con frmacos o la exposicin a sustancias txicas.

Riesgos de mal uso Malos resultados en tratamientos de sustancias txicas Mala separacin de molculas

CromatografaEs la tcnica para separar componentes de una mezcla, y su posterior anlisis, basadas en que las distintas sustancias que forman los componentes de una mezcla se dejan arrastrar a diferentes velocidades sobre un soporte. El soporte puede ser papel, un gas, otro lquido, etc. Es un mtodo fsico de separacin de componentes.

Aplicaciones Se utiliza para lograr la separacin de los componentes de una mezcla como para medir la proporcin de cada elemento en la mezcla.Riegos de mal uso. Mala lectura en UV Si no se pone suficiente muestra no se puede leer

InmunoblotEs una tcnica analtica usada para detectarprotenasespecficas en una muestra determinada. Mediante unaelectroforesis en gelse separan las protenas atendiendo al criterio que se desee:peso molecular,estructura, etc. Luego son transferidas a unamembrana adsorbente para poder buscar la protena de inters conanticuerposespecficos contra ella. Finalmente, se detecta launin antgeno-anticuerpoporactividad enzimtica,fluorescenciaentre otros mtodos. De esta forma se puede estudiar la presencia de la protena en el extracto y analizar su cantidad relativa respecto a otras protenas.

Aplicaciones Esta tcnica es hoy en da imprescindible en varios campos de labiologa, como labiologa molecular, labioqumica, labiotecnologao la inmunologa. Existe toda una industria especializada en la venta de anticuerpos contra decenas de miles de protenas diferentes.

Riesgo de mal uso Mal control de anticuerpos Non se identifica la protena por la mal lectura