Upload
doankhanh
View
212
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
1
����������������
� ���������������
��������������������� ��� ����������������������� ��������
������������� ������������������ � �������
���������������������������������������� ������ !!"
# ��� �������� ���������������$��%���$�& ������� �����
' (�)& �����*��
Il cancro e’ una malattia genica, ovvero
insorge in conseguenza dell’accumulo
nella stessa cellula di alterazioni di
geni di diverse categorie
(oncogeni ed oncosoppressori)
����������� ���
�� � �� ������� � ������
� ���
����������������
� ����������������
����������� ���
�� � �� ������� � ������
�������� ��!��� ��"�� �� �#��� ��$�$� %��� &
%������'� %��� ��
� ����������������
����������� ���
�� � �� ������� � ������
�� �������� ��!�������� � ��� ���� �#���� �$�$� %��� &
����������������
� �%������� �$���( ����))������
�� �����*��
Modello di Progressione del Tumore Colorettale
APC
Iperprolife-razione
APCMet (p16)
Adenomatipo I
APCMet (p16)
K-RAS
Adenomatipo II
APCMet (p16)
K-RASDCC
Carcinomain situ
APCMet (p16)
K-RASDCCp53
Metastasi
���������� ���
� �+ �%�����$�%���� �,���'�� �( ���%�����( ��-����$���
� �����������+��������� ������������ ��� �������,
� -����������+���-������ ������ �������������������������,
� ����-$�����+�& �����-����������,
2
Nel 5-8% dei casi il cancro e’ anche una
malattia genetica (una prima alterazione
genica e’ presente nella linea
germinale dell’individuo)
� � ��� �� ���$�� ���-��������������� ��� �����������������������������
� � ��� �� �������. ����
�������������-���-�������� �������������� � ��� ������������-���/���
0 ��� ���$ ��-��$-�������������� �����+0 # ���,�+�� ��� �� ���$�� ���-��������,
� � '��( ���� .��)���)����)�������� ��
�������� ���-����� ���� ������-��� ����� ������������� ��������
� � ��� �� ����& �
����-����������� ���� ��������-��� ��������
�������/������� ������-��� ��������-��� � ��� � 1����������$����� � ��
2 �� ����-��� ������� �������������� ������ �������������
� � ��� �� �������' ������
� � '��( ��%� �)���)���( ����( ����� )�������� ��
2 �� ������������� ��� ����������������� ���������
. �� ����� ������ �������� ���������������������������������-���-�� �������
� � ��� �� ��. ����
���������������� � ��� �� ��3 � /��
����-��� �������������������%����������� � ��� �� ��4�� ��
����-��� ���������� ����� 2 ��� ��������$-�����+�2 �,
� � '��( ��%� �)���)����)��/������ ��
� � '��( �����'�������%�����������)��'��)���.�� �� ���%��� /�����
�
5 �������2 ���6 ������������������� ���� ��78 �(
5 �������2 ���������� ��97:7��-�� �������� ������(
5 �;������7����� ��-�< ���"7= � ������� �� ��8����(
5 ����������� �����������������;9!= � ����� �������������
5 ������������ ����� ���� ��������� ��� ���2 �
5 ��< ����!= � ������ �������6 ������������������ ���� 9�����77*������������������������� ������ 1����
Familial Adenomatous Polyposis (FAP)
Gene
Chromosome
Linked families
APC(clonato nel 1991)
5q21
> 90%
Gene Product
Cellular Localization
Function
cytoplasm
cell adhesion
E-cadherin
APC
GSK-3β
axin
P
P
proteasome
degradation
myc repressed
Tcf
grouchoCBP
P P
E-cadherin
myc activated
Tcf
grouchoCBP
APC
GSK-3β
axin
MutantAPC,ββββ-catenin,axin
P
The APC-ββββ-catenin pathwaynormal
celltumoral
cell
Modello di Progressione del Tumore Colorettale
APC
Iperprolife-razione
Adenomatipo I
Adenomatipo II
Carcinomain situ
Metastasi
3
���
� ��������%� �)���)��� �� .��( ���.�� �����( � ���� ����� �� �
))����� �������$�( ������'���������0%���� ��)��� �� �
��( ������1��������))���( � ���'���'� � � %� �2/�0�/" �� � �3�� �)��'�����'���1����'�.�� ��'�������� � ������������'�������������'�����
� ����( � ��� ��������� �( ����'������������ ��"��3���)���������� � �
�������� �( ����'��)���)��� ����������%� ��( ���.�� ���( �.������4�( ���.�� �������.������#5�����.����� %�( )����6&
�%7��)���)�� ������������%� �8������( ���.�� ��#5�����.��������( )��%�6&
Modello di Progressione del Tumore Colorettale
APC
Iperprolife-razione
Adenomatipo I
Adenomatipo II
Carcinomain situ
Metastasi
MYH
��� ��( �.����� ��� ������.������%�( )���� ��� ������.��������( )��%�
! ��( ����%������������)���'�%�
��)������ ��'����9 /4
������������������)-� > ��� ������ !!7
AMSTERDAM CRITERIAAMSTERDAM CRITERIA(AC I)(AC I)
11) At least three relatives with CRC, one of ) At least three relatives with CRC, one of whom must be a firstwhom must be a first--degree relative of degree relative of the other two. FAP must be excluded.the other two. FAP must be excluded.
2) At least two generations must be 2) At least two generations must be affected.affected.
3) At least one individual must be less 3) At least one individual must be less than 50 years old at diagnosisthan 50 years old at diagnosis..
Vasen et alVasen et al., Dis Colon Rectum ., Dis Colon Rectum 19911991
MECHANISM OF DNAMECHANISM OF DNA--MISMATCH REPAIR IN MISMATCH REPAIR IN E. COLIE. COLIHereditary Non Polyposis Colorectal Cancer (HNPCC)
Gene
Chromosome
Linked families
MSH2
2p21-22
60%
MSH1
3p21-23
30%
Gene Product
Cellular Localization
Function
nucleus
repair of DNAreplication errors
4
Mismatch Repair Genes(MMR)
hMSH2 on chromosome 2p
hMLH1 on chromosome 3p
hPMS1 on chromosome 2q
hPMS2 on chromosome 7q
hMSH6 on chromosome 2p
~
~
~
~
~
ICG Definition of HNPCC• Familial clustering of CRC and/or endometrial ca.• Associated cancer: ca. of the stomach, ovary, ureter/renal
pelvis, brain, small bowel, hepatobiliary tract and skin
• Development of cancer at an early stage
• Development of multiple cancers
• High history of MSI (MSI-H)
• Immunohistochemistry: loss of MLH1, MSH2 or MSH6 protein expression
• Germline mutation in MMR genes(MSH2, MLH1, MSH6, PMS1, PMS2)
Modello del Tumore Colorettale Sporadico
Modello di Tumore Colorettale Ereditario
APC APCMet (p16)
APCMet (p16)
K-RAS
APCMet (p16)
K-RASDCC
APCMet (p16)
K-RASDCCp53
Met (p16) Met (p16)K-RAS
Met (p16)K-RASDCC
Met (p16)K-RASDCCp53
Mutazione germinale in APC
Iperprolife-razione
Adenomatipo I
Adenomatipo II
Carcinomain situ
Metastasi
Adenomatipo I
Adenomatipo II
Carcinomain situ
Metastasi
Modello di Progressione del Tumore Colorettale
APC
Iperprolife-razione
APCMet (p16)
Adenomatipo I
APCMet (p16)
K-RAS
Adenomatipo II
Carcinomain situ
Metastasi
Growthfactor
P
P
P
P
PPP
GRBSOS RAS
OUT
Changes ingene expression
CyclicAMP
Nucleus
Cytoplasm
P
BRAF
MEK
ERK1 ERK2
Adenylatecyclase
Growthfactor
G-protein
G-protein-coupledreceptor
The RAS-RAF-MAPK signalling pathway
TyrosineKinase
receptor
P P
5
ANALISI DI K-RAS PER PCR-RFLP
ttggagctggtggcgtaggca sequenza wt
K-ras esone 1 5' 3'
ttggagctgatggcgtaggca sequenza mutata
ttggacctggtggcgtaggca Un primer modificato introduce un sitodi restrizione BstN I (in rosso)
PCR 5' 3'
ttggacctgatggcgtaggca Il sito di restrizione BstN I non si creaa causa della mutazione preesistente
Digestione con l’enzima di restrizione BstN I e separazione su gel di poliacrilammide al 7%.
wt mut140bp111bp
Modello di Progressione del Tumore Colorettale
APC
Iperprolife-razione
APCMet (p16)
Adenomatipo I
APCMet (p16)
K-RAS
Adenomatipo II
APCMet (p16)
K-RASDCC
Carcinomain situ
Metastasi
Modello di Progressione del Tumore Colorettale
APC
Iperprolife-razione
APCMet (p16)
Adenomatipo I
APCMet (p16)
K-RAS
Adenomatipo II
APCMet (p16)
K-RASDCC
Carcinomain situ
APCMet (p16)
K-RASDCCp53
Metastasi
6
�-�-���
�����--��������--�������~50%�"-7:
���������
� ����������--�������~50%�9� ��
������������
� ����������--�������?"!=72 ��
����@ �����
���������� ������� =9� $�
/����� ���������
�������� �������� =�"0 �� A��
���������������
����������� ��������B=C ���� �����
���������
��� �����������~ 50%� D�1 ��
�//���������� ����� ������� ���� ����
4��������������� ������������� �� �7��� ��� �:�� )��7+ �; $��%�����%��� %� %�� '�����)( � �<
� ���-����������������� -��& �$�
+�, � � �� 4�� ��(���# 2 � �� !! E�**F�*B:B �9+ , ��������� ����� �� ����� 1���� !!B���!F�B!�7� �
9=�(�=2 ���� � G�D�12 � �� � G�. �7:�� �
:=��=��� �����
9= "=2 ���� � G�. �7:�� �
�# . + ,
� (�' �� ��;�
H ������$�0 ��-���+�,
K- R A S mut , TP53 mut , C h18 lo ss
18 %
C h 18 loss12 %
TP53 mut9 %
K- R A S mut , TP 53 mut
9 %K- R A S mut , Ch 18 loss
9 %
K- R A S mut14 %
no mut10 %
TP 53 mut , C h 18 loss
19 %
�/ββββ/%��� � )��7+ �; ������'
*�������
��������� ����� �� ����� 1 ���� !!B���!F�B!�7� �
��������% �/����������$����
�//��������& �������� ������ ������ �/�� (
COLON
K- R A S mut , C h 18 lo ss, TP53 mut
2 0 %C h 18 lo ss
12 %
T P53 mut11%
K- R A S mut , T P53 mut
7%
C h 18 lo ss, T P 53 mut
16 %no mut
7% K- R A S mut16 %
K- R A S mut , C h 18 loss
11%
�/ββββ/%��� � )��7+ �; ������'
RECTUM
K- R A S mut , Ch 18 loss
0 %
K- R AS mut , C h 18 lo ss, TP53 mut
10 %
Ch 18 loss14 %
TP53 mut7%
K- RA S mut , TP53 mut
10 %
K- R AS mut14 %
no mut17%
C h 18 loss, T P 53 mut
2 8 %
7"������
*������
Frattini et al, Clin Cancer Res, 2004
��������� ����� �� ����� 1 ���� !!B���!F�B!�7� �
7
��!
5 )������:�����1�/F�1 �/���2 12 ����>12 ����� �/�����-���������������� ������(
5 >1 2 ��6 ������������������� ���� ��� (
5 )��������� ����!����/��� �� ��>12 ���-����-����� ��������(
5 ���-����� >12 ��6 ������� � :� �� ��F��1�������/����� �� ��E��1 ������� � �������������E��1:�� �� ��� ��������(
��!
5 ���-������>12 ��6 �������� ��1������������� ������ �� �����-���� ���� ����� ��� ��������� ������������ ������2 ��������(
5 �;����@ �������� 6 �������� �����/��/��������� ������ ����7*9��� �����. ����� �!�(
5 ���� �������-��������6 ���C7**) �+?*!= � �������,�������� ���������������� ��� ��������������������7(
5 �������>12 ��6 � ��� ��� ��� �� ������� ����� ����� ��+"7= ,���. ��+B7= ,������� +�B= ,��������� +� = ,
��!
>12 ��� ����� ���� ���� �G ��������� ����� +:!�B!= ,�� ������$ ���� �� ��������� ����� +�-�� �!= ,��
>12 ��� ����� ����� ���� ����������� ����� /���0 # ����-����
>12 ��� ����� ���� ��$ ���� �G ��������� ���������$�� � �-������ ������� �/����0 �����
>12 ������ �� ��� � �%��� � ���� ���� � ����� ���� �G��������� �����
4��& �/����
�
�
�
�
���
41>
� 3 �1 2 �
3 H .
������ ������%-������
�$����2 ��
# ������
�$�-����
�
)1D
2 �$����$�����
4��& �/����
4�-����
G-protein-coupledreceptor
�7���� /�!/� *���� ���� � )��7+ �;
. $�����D��������-��
� �
�2 �I����
>12 �
�)D)1D�
D�1�����>12 ������� �����$ �%�������
1�J���-��� � ����# ����� !! EB�9F*:B�(�
��� ����
�$�-����
)%����������
�
�
�
�
�
�
'�
.D�
. D
���� ����
�" !�
8
�" !� �" !�
)4�1 ��� �����%-����� ������� 7!= ��/���������� �����
����D�$�' 2 �������)�� ' ������� !! �:9F 79� �B
)4�1 ������%-������ �� ��� ���� ��& ���� -��������
����� ���������� ���� ��& �� 4�/��������� 7���������� ����I�)4�1 ������ �
)4�1 �� 1# 2 ��� ������� ������ � �-�� ��� �������������� �������
4����� ���� ��� ��( � �� ������1��� !!:�*F �"9� �9 (�
�" !��� ��� � %� %��
��� -���� & �� # � �������� �����-��� � ��/��������� �
��$���� ����# )'�� !!BE:7!F *�:*�
9A*�-���� & �� �� �����-��� � ��/����������� )4�1��������$-�����$ �����2 . ���� �� -��I��
������ ����� ����� !!BE:!BF�B*"�7!!�
)4�1�� ����� /�� ���A���������� # � ����/��� H � 2� � ���7A79�������� # � ����/��� ' �-�� � ��-���� & �� ���-��� � ��/����
����������)4�1�� ����� & ��� /�� ��:!�������� �� ���
� . ���� �� �����������- ��& �� �������� �/�)4�1 ��%-������ ��
���� �$ �0 ��� ����%�� ������-��� +� ��� � ���� !!BE�������� � ���� !!B,
� 7= ��/�)4�1 ��������+�� ���� �$ �0 �,�-���� ���/��/������%�� ������-��� +����������� !!7,
� )4�1 ��������� �$ �0 � � �-� � �F�+2 I�� ����� !!BE������ � ��� !!BED����� � ��� !!�,
$-� �/�/�%���� ��� ��
������ �� ���/������ ����� ������
$-� �/�-��� ��$ ���� $����
� ��� � �/��� � ��������� ���$ ���$��� � A�����������
���%�� ����//����$ � ���������
� )4�1 �����������$ ��� 0 ����� � � -�� �� ���%�� ������-���+����� � ���� !!7E���6��� � ���� !!�,
� D�1���� ����� ��/�� ���%�� ����������� +��6��� � ���� !!�,
� ���%�� ����� � � ������ ��$ � -���� & �� � ����������������
���������& �� )4�1 ������%-�������+� ��� � ���� !!BE�������� � ���� !!B,
�=*
������ ����D:�2 (�2 ���& ��� � � ����������������/�� ������� �������� ���%�� ��-���� /������ �� ���(�. ���-������� �/�� ����� ���� & ��� ���� ����� �� � ���� ����& ��� ����/����� �/��� ��� & �� � ����� �� �� �����(
� �� ���� � ����� ����� !!BE:!BF77B�