Cromotografia
Universitatea Tehnic a Moldovei
Cromatografia
A efectuat : Studenta grupei FFT-131 Ioncu Carolina
A verificat: Confereniar Universitar,Doctor
Mihail Ghetiu
Chisinau,2014
Scopul lucrrii: A face cunotin cu metoda de identificare i
separare a substanelor - cromatografia. A efectua separarea unui
amestec de substane prin metoda cromatografiei pe hrtie.
Noiuni teoretice
Cromatografia reprezint o metod de separare a unui amestec de
substane, care const n deplasarea acestui amestec (faza mobil) pe o
faz staionar. Pentru a cromatografia un amestec sunt necesare dou
faze n contact, una mobil i alta staionar. Separarea este un proces
de echilibru, moleculele trecnd din faza mobil n cea staionar i
invers. n acest mod are loc micarea moleculelor amestecului de
separat odat cu curentul fazei mobile dc-a lungul fazei staionare.
In dependen de modul interaciunii fizico-chimice dintre faza
staionar i componentele de cromatografiat deosebim urmtoarele
tipuri de cromatografie:
Cromatografie de repartiie (se bazeaz pe solubilitatea diferit a
componentelor ntre cele dou faze)
Cromatografie de adsorbie (se bazeaz pe adsorbia selectiv a
componenilor lichidului sau gazului pe suprafaa fazei solide)
Cromatografie cu schimb de ioni (n calitate de faz staionar se
folosesc rini schimbtoare de ioni: cationi sau anionii)
In dependen de starea de agregare a fazei mobile se
deosebesc:
Cromatografie lichid (drept faz mobil servete un lichid)
Cromatografie gazoas (drept faz mobil servete un gaz inert) In
dependen de tehnica cromatografiei deosebim:
Cromatografie pe coloan
Cromatografie pe hrtie
Cromatografie n strat subire
Cromatografie cu schimbtori de ioni
Cromatografia pe hrtie este de tipul cromatografiei de repartiie
lichid-lichid, adic implic distribuirea componentelor de
cromatografiat ntre o faz lichid polar, care este de obicei, apa
adsorbit puternic pe fibra de celuloz a hrtiei (aceasta va
constitui faza staionar) i o faz mobil - solventul de eluare.
Tehnica cromatografiei pe hrtie este urmtoarea: pe o hrtie special,
la distana de 2-3 cm de la marginea de jos se traseaz o linie -
linia de start, pe care se picur din capilar o pictur de soluie de
cromatografiat. Dac sunt mai multe soluii, atunci distana dintre
picturi trebuie s nu fie mai mic de 3 cm. Hrtia se introduce ntr-o
camer cromatografic, n care se gsete eluantul. Nivelul solventului
trebuie s tic mai jos de linia startului. Camera se nchide.
Solventul se va mica ascendent, purtnd cu sine componentele
amestecului. Componentele care se absorb mai slab pe faza staionar
se vor deplasa cu o vitez mai marc i vor ridicate mai sus de
solvent, eluantul trebuie s umecteze hrtia pn la 1-0,5 cm de la
marginea de sus. In acest moment hrtia se scoate din camera
cromatografic i se traseaz linia de fini. Dac substanele sunt
colorate atunci pe plac se vor observa o serie de spoturi (pete),
aezate pe o linie perpendicular pe nivelul solventului; n cazul
substanelor incolore, pentru vizualizarea spoturilor se utilizeaz
diferite procedee de developare. Spoturile developate se vor
contura cu un creion simplu imediat ce sunt detectate. Pentru a
determina poziia spoturilor, se msoar distana de la linia startului
pn la centrul fiecrui spot (a) i distana de la linia startului pn
la linia finiului frontului de solvent (h). Raportul dintre aceste
mrimi vor exprima valoarea constantei cromatografice Rf pentru
substana dat. Rf=a/h
Cromatografia pe hrtie se utilizeaz mai des pentru analiza rapid
a amestecurilor, identificarea compuilor unui amestec, dar nu i
pentru separarea lor la scar preparativ. Pentru cromatografie se
folosete hrtie special Watman, fabricat din bumbac de anumit
compoziie i proprieti. Cel mai des se utilizeaz ei lianii:
alcoolii, acizii carboxilici, fenolii, esterii, bazele
heterociclice, eterii i cetonele.
Cromatografia pe hrtie
Modul de lucru
In camera cromatografic se introduce cu ajutorul pipetei, fr a
umecta suprafeele camerei solvent - alcool izopropilic. Stratul de
lichid n camer trebuie s ating nlimea de 2 cm. Din hrtie de filtru
se taie o fie mai scurt dect nlimea camerei cu 1 cm i mai ngust
dect diametru cu 0,4 cm. La distana de 3 cm de la marginea fiei se
traseaz cu creionul subire linia de start, pe care se noteaz 3
puncte. Distana ntre punctele i distanele de la marginile fiei
trebuie s fie maxime. Pe aceste puncte, cu ajutorul unui capilar de
sticl se plaseaz picturi (spoturi) de:
1. Tatrazina
2. Amestec
3. Albastru de metilen
Se evit contopirea spoturilor. Dup uscarea spoturilor, fia se
fixeaz de capacul camerei cromatografice cu o bucat de lipici i se
introduce n camer pe 1 or. Dup aceea, pe cromatogram se marcheaz
linia de fini i se contureaz spoturile care s-au evideniat. Se
calculeaz Rf acoloranilor cercetai.
3.Aparatajul necesar (cu explicaii)
1. Plci de sticl/plci din comer "Silufol"
2. Capilare
3. Camera cromatografic
4. Eluentul, ce const din solveni - heptan, cloroform,
nitrobenzen. (10:5:1)
5. Creion simplu
6. Reactivi
Reactivile folocite:
Tatrazin: Se folosete pentru colorarea buturilor, dulciurilor,
gemurilor, cerealelor, petelui conservat, mutarului, supelor
ambalate. De cele mai multe ori, acest aditiv alimentar este
folosit n combinaie cu ali aditivi alimentari, iar efectul nu poate
fi dect unul foarte nociv asupra sntii consumatorilor.
Albastru de metilen. Formula brut C16H18ClN3S sau n form de
cristalohidrat C16H18ClN3S.3H2O
Este o substan cristalin, solubil n ap, alcool, cloroform.
Cristalele au un luciu de bronz. Soluiile ei snt colorate n
albastru nchis. Este un colorant organic bazic tiazinic, care
confer esturilor de bumbac, ln i mtase o culoare albastr
intens.
5. Rezultatele msurrilor experimentale
Datele
a, mm
h, mm
Rf
Culoarea
D. de la linia de start pn la linia de fini
10,8
10,8
1
-
D. de la linia de start pn la primul spot (Tartrazin)
8,1
10,8
0,75
Galben
D. de la linia de start pn la al 2-lea spot (Amestec)
7,8
10,8
0,7222
Verde
D. de la linia de start pn la al 3-lea spot (Albastru de
metilen)
2,2
10,8
0,2037
Albastru
D. de la linia de start pn la 1-ul centru
6,9
10,8
0,6388
Verde
D. de la linia de start pn la al 2-lea centru
6,8; 1
10,8
0,6296;
0,0925
Verde
D. de la linia de start pn la al 3-lea centru
1,4
10,8
0,1296
Verde
6. Calcule n baza datelor experimentale
Rf=a/h
Rf1=8,1/10,8= 0,75 (Tartrazina)
Rf2= 7,8/10,8= 0,7222 (Amestec)
Rf3= 2,2/10,8= 0,2037 (Albastrul de metilen)
Rf3.1= 6,9/10,8= 0,6388 (Centru 1)
Rf3.2.1= 6,8/10,8= 0,6296 (Centru 2.1)
Rf3.2.2= 1/10,8=0,0925 (Centru 2.2)
Rf3.2.3= 1,4/10,8=0,1296 (Centru 3)
7. Concluzie
n urma efectuarii lucrarii de laborator am facut cunotina cu
cromatografia pe hrtie.
Cromatografia pe hrtie este de tipul cromatografiei de repartiie
lichid-lichid, adic implic distribuirea componentelor de
cromatografiat ntre o faz lichid polar, care este de obicei, apa
adsorbit puternic pe fibra de celuloz a hrtiei (aceasta va
constitui faza staionar) i o faz mobil - solventul de eluare.
Am rmas convins de faptul c aceast metod e rapid, exact, putem
astfel uor stabili prile componente ale unui amestec, tiind
proprietile substanelor amestecate.
