Determinacion de Proteinas Plasmaticas

8/10/2019 Determinacion de Proteinas Plasmaticas...

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DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS 1

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA

SALUD

ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

Tema: Determinacin de protenas plasmticas

Docente: Minaya Galarreta Anglica

Alumnos: Jara Valero, Jhon Estiven

Condor Quispe, Banessa

Izquierdo Vasquez, Daniel

Ciclo: VI

Curso: Bioqumica II

LIMA PERU

2014
http://www.google.com.pe/url?sa=i&source=images&cd=&cad=rja&docid=tGY8lg0UeUT9oM&tbnid=QJxgA2KG-f265M:&ved=0CAgQjRwwAA&url=http://arquitecturaperu.pe/2013/03/07/universidad-alas-peruanas-facultad-de-ingenierias-y-arquitectura/&ei=WHxkUo3EIons8wT76oG4Dw&psig=AFQjCNGtXZbkkbI8vL4fpo1hSOKU1xTzIQ&ust=1382403544631946


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DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS

I. Marco terico:

El plasma contiene una mezcla compleja de protenas a una concentracin que oscilaentre 6,0 y 8,0 g/dl. Estas protenas plasmticas son un conjunto de protenas en solucin

coloidal en el plasma sanguneo. Su tamao es del orden de 0,1 a 0,001 micras, y pueden

ser simples o conjugadas, incorporando en su molcula carbohidratos y lpidos.

PROTEINAS TOTALES

El plasma contiene un gran nmero de protenas qumicamente diferentes, a cuyo

conjunto se le denomina protenas totales. La determinacin analtica de estas protenas

tiene sus limitaciones, ya que las variaciones de una fraccin proteica pueden estar

enmascaradas por cambios opuestos en otra. Las perturbaciones clnicas de las protenas

totales pueden clasificarse en dos grupos:

Disminucin de las protenas plasmticas

Las anormalidades que se presentan en las clnicas en cuanto al contenido de protenas

totales son en la mayora de los casos en sentido descendente (hipoproteinemia) con

niveles inferiores a 6,0g/dl.

La hipoproteinemia puede encontrarse en mltiples estados patolgicos. En el sndrome

nefrtico, en los casos de hemorragias severas o quemaduras extensas. En los estados de

hambre o de carencia por deficiente absorcin intestinal. Esta misma situacin se alcanza

en aquellos estados patolgicos en los cuales una gran parte del parnquima heptico seencuentra afectado1.

Elevacin de las protenas plasmticas

Puede darse una hiperproteinemia por deficiencia relativa de agua. Son debidas a

deshidratacin, como ocurre en los casos de diarrea severa, vmitos de repeticin, o a

causas artificiales, como la estasis venosa durante la extraccin sangunea.

DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES

En la prctica clnica son dos mtodos utilizados, con diferentes fundamentos

fisicoqumicos.

Tcnica colorimtrica de Biuret

Se basa en la propiedad que presentan los compuestos que poseen enlaces peptdicos de

reaccionar en medio alcalino con sales de cobre para formar un complejo, de estructura


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desconocida, entre el ion Cu++

y los grupos carbonilicos e iminicos del enlace peptdico. La

intensidad de color es proporcional al nmero de enlaces peptdicos que existan en la

muestra, y por tanto a la concentracin de protenas.

Este mtodo no es muy sensible; sin embargo, actualmente es el mtodo ms usado por

una simplicidad junto a una adecuada precisin. Los sueros hemolticos interfieren en ladeterminacin.

Reaccin:

Tcnica refracometrica

La estimacin de la concentracin proteica a partir de la medida del ndice de refraccin

es el mtodo ms rpido y directo, y de suficiente valor clnico cuando se utilizan sueros

transparentes y no pigmentados. El mtodo se basa en que el ndice de refraccin del

agua se incrementa de una manera casi directamente proporcional con el aumento de la

concentracin de soluto.

DETERMINACION DE ALBUMINA

Es el mayor componente proteico del suero. Su concentracin es de 4,0-5,0g/dl. Acta

como transportadora de una gran variedad de molculas endgenas y exgenas tales

como la bilirrubina, enzimas, hormonas, lpidos, iones y frmacos. El aumento de la

albumina es nicamente caracterstico de la deshidratacin.

La hipoalbuminemia indica una falta de produccin por parte del hgado o una prdida a

travs de superficies daadas. Esto ltimo ocurre en la enfermedad renal, enteropata con

prdida de protenas y en las quemaduras1.
http://www.google.com.pe/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&docid=k6qU4rgTnh8gRM&tbnid=Gg21eWtqw5YGiM:&ved=0CAcQjRw&url=http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html&ei=JqcfVNbiO8-UgwSfuIDwDA&bvm=bv.75775273,d.eXY&psig=AFQjCNGzlU_imiw9KbHtqnXy0NOF-HOsng&ust=1411446832982316


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II. Objetivos:

Determinar los niveles de protenas totales y protenas de reserva (albuminas) en el suero

sanguneo por el mtodo de Biuret.

Manipular correctamente los equipos y materiales requeridos en la prctica.

Pronosticar posibles enfermedades. Comprender las tcnicas colorimtricas para de determinacin proteica de ambos puntos

a realizar.

III. Materiales y reactivos:

MATERIALES:

1: equipos y materiales.

espectrofotmetro centrifuga Bao maria regulado

a 37

Jeringas descartables

*15ml ligadura y

algodn

Tubos de prueba de

13x100mm

Micropipetas de 0 a

50ul pipetas de 1.5 y

10ml

Gradillas, bagueta

Reactivos.

a. Reactivo 1: agua destilada.


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IV. Procedimiento:

Antes de empezar cada una de las tcnicas necesitamos muestra (sangre):

Esta tcnica se realiza en tres tubos de prueba de 13 x 100 ml por cada determinacin,

estndar y reactivo:

Problema (P)= suero

Blanco (B)

Estndar (s)

1. Determinacin de protenas plasmticas totales (Mtodo de Biuret)

Se realiza utilizando iones cpricos que en medio alcalino reacciona con las protenas formando

compuestos de coordinacin de color violeta, cuyo pico de mxima absorcin es de 540 nm y su

intensidad es proporcional a la concentracin de protenas.

B x St

Agua destilada 50 L ---- ----

Suero ---- 50 L ----

Estndar de protenas [5 g/dL] ---- ---- 50 L

Reactivo EDTA/Cu (mL) 3,5 3,5 3,5

Incubar durante 15 minutos a 37 C y leer en el espectrofotmetro a 530 nm.

Calcular la concentracin de protenas totales y albumina en g/dL aplicando la siguiente

frmula:


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g/dL =

2. Determinacin de albumina

La albumina reacciona con el bromo cresolsulfonftaleina a pH 3,8 formando un compuesto

coloreado que absorbe a 625 nm. Preparar el siguiente sistema:

B St X

Suero estndar [2,7 g/dL] ---- 10 L ----

Suero ---- ---- 10 L

Reactivo BCF (mL) 3,5 3,5 3,5

Colocar los tubos en una gradilla a temperatura ambien durante 10 minutos y leer en el

espectrofotmetro a 625 nm.

Calcular la concentracin de protenas totales y albumina en g/dL aplicando la siguiente

misma frmula.

V. Resultados:

Para determinacin de protenas totales

Lectura de las absorbancias:

Estndar: 0,190 nm

Problema: 0,271 nm

g/dL

g/dL = 7,13 g/dL

Coloracin de cada tubo despus del proceso.

Blanco: color verde turquesa.

Problema: color azul violeta.

Estndar: color azul.


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Para determinacin de Albumina

Lectura de las absorbancias:

Estndar: 0,193 nm

Problema: 0,419 nm

g/dL

g/dL = 5,86 g/dL

Coloracin de cada tubo despus del proceso.

Blanco: amarillo.

Problema: verde.

Estndar: verde caa.

VI. DISCUSIONES:

En la prctica realizada no se pudo llegar a la conclusin si nuestro paciente estaba en

los valores normales, altos o bajos. Porque no tenamos los valores referencialesnormales de protenas plasmticas totales ni de los valores referenciales normales de

la albumina, esto produjo una discusin en el grupo ya que se quiso pronosticar

posibles enfermedades.

Durante la prctica nos preguntamos sobre la diferencia de medios de temperatura (

t=37 y t amiente) que se somete a los tubos de protenas plasmticas totales y a los

tubos de albumina.


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DETERMINACION DE PROTEINAS PLASMATICAS1

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VIII. CUESTIONARIO:

1) Cules son las manifestaciones patolgicas cuando los niveles de protenas totales y

albumina estn por sobre o debajo de los niveles referenciales normales?

PROTEINAS PLASMATICAS TOTALESValores normales de protenas

plasmticas totales:

El rango normal de protenas

totales es de 6.0 a 8.3 g/dl

(gramos por decilitro).

pueden producir niveles

altos de protenas totales.

El descenso de los niveles de

de la enfermedad renal.

Enfermedades relacionadas con las protenas totales

Hiperproteinemia causada por deshidr

proteica, catabolismo proteico excesivo o perdidas excesivas (hemorragias).

ALBUMINA

El rango normal es de

3.4 a 5.4 gramos pordecilitro (g/dL).

El aumento en el nivel de

albmina en la sangre puede

deberse a:

Deshidratacin

Dieta rica en protena

Tener un torniquete

puesto por mucho

tiempo al sacar una

muestra de sangre

Otras afecciones bajo las cuales

se puede realizar este examenson:

Quemaduras (extensas)

Enfermedad de Wilson

Los niveles de albmina en suero por

debajo de lo normal pueden ser un

signo de:

Enfermedades renales.

Enfermedad heptica (por

ejemplo,hepatitis ocirrosis qu

e puede causarascitis).

La disminucin en los niveles de

albmina en la sangre pueden ocurrir

cuando el cuerpo no obtiene ni

absorbe suficientes nutrientes, como:

Despus de una ciruga para

bajar de peso

Enfermedad de Crohn

Dietas bajas en protenas.
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000785.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001154.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000255.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000286.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000249.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000249.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000286.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000255.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001154.htmhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000785.htm


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2) Se requiere de ayuno para realizar la determinacin de albumina y protenas totales

en sangre?

Para realizar este anlisis no se precisa estar en ayunas, pero para lograr una mayor exactitud en

resultados y evitar interferencias, muchos laboratorios clnicos solicitan al paciente, venir con un

ayuno aproximado de 8 horas.

Existen situaciones que pueden alterar los niveles de protenas totales:

Las protenas totales pueden estar aumentadas en el embarazo.

Los medicamentos que pueden elevar la concentracin de protenas son los esteroides

anabolizantes, los corticoides, los andrgenos, la hormona de crecimiento, la insulina y la

progesterona.

Hay otros medicamentos que pueden disminuir la concentracin de protenas totales,

como los estrgenos, los anticonceptivos y otros medicamentos hepatotxicos.

3) Por qu el reactivo de BCF est a pH 3.8 si el pH de la sangre es de 7.4?

La Albumina reacciona especficamente sin separacin previa con la forma anionica de la Bromo

Cresolsulfon Ftaleina (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en medio tamponado a pH

3.9, el aumento de la absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la

cantidad de Albumina presente en la muestra.

Entonces podemos deducir que el BCF alcaliniza a la Albumina cuyo pH es 8.0, para que esta

pueda interactuar libremente en el suero sanguneo.

4.- Por qu se usa EDTA para determinar?

El EDTA se une a los iones Na+ Y K+ formando as sales y junto al ion Cu+. La reaccin se basa en la

formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de

coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que

forma parte de los enlaces peptdicos presentando un mximo de absorcin a 540 nm.

Da positiva esta reaccin en todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos

consecutivos en sus molculas.


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IX. BIBLIOGRAFIA:

FUENTE:

(1)http://books.google.es/books?id=Y1Qm0nRmAtsC&pg=PA47&dq=determinacion+de+

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Jacobo Daz Portillo,Mara Teresa Fernndez del Barrio,Fernando Paredes Salido, Aspectos bsicos de bioqumica

clnica, Espaa 1997.

(2) http://books.google.es/books?id=Av4IIsyH-

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